專利名稱：二色桌片參中新的抗腫瘤化合物Intercedenside C的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種從海洋動物二色桌片參中分離到的新的抗腫瘤化合物Intercedenside C。
表1 Intercedenside C的1H和13C核磁共振數(shù)據(jù)甙元部分 糖部分碳原子序號碳化學(xué)位移 氫化學(xué)位移(J)碳原子序號 碳化學(xué)位移 氫化學(xué)位移(J)1 35.4 1.30(1H，α，m)，1.386(1H，β，m) Xyl11 104.7 4.67(1H，d，6.6)2 26.8 1.82(1H，β，m)，1.979(1H，α，m) 2 81.64.13(1H，m)3 88.8 3.17(1H，dd，42，12) 3 75.04.27(1H，m)4 39.3 4 75.95.06(1H，td，4.8，9.6)5 48.7 0.88(1H，m)5 64.03.72(1H，α，m)，4.77(1H，β，dd，4.8，12)6 22.9 1.89(2H，m) Glc1 104.7 5.14(1H，d，7.8)7 119.7 5.62(1H，s)2 75.23.96(1H，m)8 147.43 80.24.15(1H，m)9 47.7 3.40(1H，d，14.4) 4 68.94.08(1H，m)10 35.8 5 76.23.70(1H，m)11 22.3 1.49(1H，m)，1.77(1H，m) 6 60.84.30(1H，m)，4.39(1H，m)12 25.4 1.97(1H，m)，2.64(1H，m)Xy121 104.3 4.96(1H，d，7.8)13 59.3 2 73.43.90(1H，m)14 47.6 3 86.74.0915 43.1 1.79(1H，m)，2.52(1H，dd，7.8，9.0)4 68.73.94(1H，m)16 83.5 6.07(1H，dd，7.2，8.4，9.0)5 66.13.53(1H，m)，4.07(1H，m)17 86.7 3-MeGlc 1 104.9 5.18(1H，d，7.8)18 178.32 74.63.89(1H，m)19 24.0 1.11(3H，s)3 87.33.65(1H，m)20 85.9 4 70.43.91(1H，m)21 27.9 1.70(3H，s)5 77.73.88(1H，m)22 132.4 6.15(1H，d，16.2) 6 61.84.06(1H，m)，4.41(1H，m)23 122.5 6.55(1H，dd，10.8，16.2) OCH360.63.79(3H，s)24 125.3 5.74(1H，d，10.8)25 134.526 17.8 1.45(3H，s)27 25.5 1.58(3H，s)30 17.1 1.00(3H，s)31 28.5 1.12(3H，s)32 30.7 1.46(3H，s)OAC170.5OAC 21.15(3H，s)Xy1木糖，Glc葡萄糖，J值偶合常數(shù)本發(fā)明還提供了從二色桌片參提取分離Intercedenside C的方法，其步驟如下(1)提取將新鮮二色桌片參洗凈、切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡提取7天，濾出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天。合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫。收集50％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂甙提取物。
(2)分離上述總皂甙提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水(8～5∶1～4∶1)混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含Intercedenside C的流份，再經(jīng)C18反相柱層析，以甲醇∶水(5～10∶5～0)進行梯度洗脫，薄層層析檢測，得Intercedenside C純品。
本發(fā)明對Intercedenside C進行了體外抗腫瘤試驗，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗所用的細胞株為國際通用的腫瘤細胞株，即A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(腎癌)U-87-MG(神經(jīng)母細胞癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)KB-VIN(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(腸癌)試驗方法為國際通用的SRB法根據(jù)細胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞以90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥10μl/孔。每個濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調(diào)零孔。腫瘤細胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10％冷TCA固定細胞，4℃放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定OD值。試驗結(jié)果見表2
表2.Intercedenside C對腫瘤細胞的抑制作用腫瘤細胞株 A-549 MCF-7 IA-9 CAKI-1 U-87-MG PC-3 KB KB-VIN SK-MEL-2 HCT-8IC50(μg/ml) 1.41.8 0.96 1.0 3.3 2.2 3.03.7 2.2 1.9IC50表示本發(fā)明化合物的半數(shù)有效抑制濃度上述實驗結(jié)果表明，Intercedenside C對10種不同的腫瘤細胞株均顯示明顯的抑制作用。
本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，為開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。
權(quán)利要求
1.一種抑制腫瘤的化合物Intercedenside C，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
2.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物Intercedenside C的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將新鮮二色桌片參用乙醇浸泡提取，提取液減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫；收集50％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂甙提取物；(2)分離上述總皂甙提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含Intercedenside C的流份，再經(jīng)C18反相柱層析，以甲醇∶水梯度洗脫，薄層層析檢測，得Intercedenside C純品。
3.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物Intercedenside C用于制備抗腫瘤藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種從二色桌片參中分離的抗癌化合物Intercedenside C，分子式C
文檔編號A61K31/585GK1428350SQ0215502
公開日2003年7月9日 申請日期2002年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月19日
發(fā)明者易楊華, 鄒崢嶸, 吳厚銘, 吳久鴻, 李玲, 劉寶姝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)