專利名稱：一種冰結(jié)構(gòu)蛋白的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種冰結(jié)構(gòu)蛋白的制造方法，屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
冰結(jié)構(gòu)蛋白能以非依數(shù)性地降低水溶液的冰點而對熔點影響甚微，導(dǎo)致水溶液的熔點和 冰點之間出現(xiàn)差值，即冰結(jié)構(gòu)蛋白具有熱滯活性；且冰結(jié)構(gòu)蛋白還能夠特異性地與冰晶結(jié)合， 吸附到冰晶表面的冰結(jié)構(gòu)蛋白，阻止了吸附位置處冰晶的生長，冰晶表面被蝕刻得凹凸不平， 導(dǎo)致冰晶新的生長半徑較原來小，阻止冷凍食品體系中冰晶長大，即冰結(jié)構(gòu)蛋白具有抑制冰 晶重結(jié)晶功能?；诖?，冰結(jié)構(gòu)蛋白可用于冷凍食品體系，控制冰晶重結(jié)晶，減小冰晶對食 品體系造成的破壞，具有廣闊的應(yīng)用前景。
女貞葉在全國分布廣泛，來源豐富。它能耐受-12'C的低溫，在越冬期間保持長青。越冬 女貞葉，經(jīng)受冷應(yīng)激，會產(chǎn)生冰結(jié)構(gòu)蛋白以抵抗外界的寒冷。且女貞葉中不含毒副成分，由 其提取出的天然冰結(jié)構(gòu)蛋白可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于開發(fā)一種女貞葉冰結(jié)構(gòu)蛋白的制造方法，最大限度地降低成本、簡化 工藝，為冰結(jié)構(gòu)的廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 本發(fā)明的技術(shù)方案
女貞葉，經(jīng)冷藏，與Tris-HCl緩沖液及碎冰混合勻漿，再經(jīng)沸水浴滅酶，冰水浴冷卻， 冷凍離心，收集上清液；再將上清液加入預(yù)冷丙酮(上清液丙酮=1: 4)混合，-20°(:過夜， 沉淀，再冷凍離心，收集沉淀，冷凍干燥，得到冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉。工藝為
(1) 冷藏用清水洗凈女貞葉，勿干燥，帶水置于4"C冰箱中冷藏4周，誘導(dǎo)產(chǎn)生冰結(jié) 構(gòu)蛋白；
(2) 勻漿將冷藏女貞葉投入pH7.4、 20mmol/L Tris-HCl緩沖液(Vc lmg/1)，其中女貞 葉質(zhì)量/緩沖液體積比為2/5，然后加入碎冰，混合勻漿；
(3) 滅酶勻漿后，經(jīng)八層紗布過濾，將濾液沸水浴15min，使酶失活，再經(jīng)冰水浴冷
卻；
(4) 冷凍離心于溫度4。C、離心力10,000 g條件下，離心15min，收集上清液。
(5) 沉淀上清液按照l: 4 (上清液丙酮)比例加入預(yù)冷丙酮中，混合，-20°(:過夜，
沉淀；
(6) 冷凍離心、干燥于溫度4。C、離心力10,000 g條件下，離心30min，收集沉淀，
3經(jīng)冷凍干燥得冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉產(chǎn)品。
本發(fā)明制備的冰結(jié)構(gòu)蛋白為純天然產(chǎn)品，不含有任何有毒有害物質(zhì)，可以廣泛應(yīng)用于農(nóng) 業(yè)、食品、醫(yī)藥等行業(yè)。
本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點
本發(fā)明制造過程簡單，成本低廉，簡單易行，所得冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉天然、無毒，為冰 結(jié)構(gòu)蛋白的廣泛應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。


圖1為一種冰結(jié)構(gòu)蛋白制造方法工藝流程圖。
圖2為冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉的聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)圖。 圖3為部分熔融重凍結(jié)的冰結(jié)構(gòu)蛋白的DSC曲線。
具體實施方式
實施例一
用清水洗凈女貞葉，置于4'C冰箱中冷藏4周。稱取女貞葉100g，投入250mLpH7.4、 20mmol/LTris-HCl緩沖液(Vclmg/1)，再加入碎冰，混合勻漿；八層紗布過濾，將濾液沸水 浴15min，再經(jīng)冰水浴冷卻，于溫度4'C、離心力IO，OOO g條件下離心15min，收集上清液； 然后，按照l: 4 (上清液丙酮)比例加入預(yù)冷丙酮，混合，-201:過夜，沉淀，于溫度4。C、 離心力10,000 g條件下，離心30min，收集沉淀，冷凍干燥，得到冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉。
將上述冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉經(jīng)SDS-PAGE分析，如圖2，泳道M為低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白，泳 道l為制造出的冰結(jié)構(gòu)蛋白，分子量約為66Kda。經(jīng)差示掃描量熱儀測定其熱滯活性，如圖 3，所得到的冰結(jié)構(gòu)蛋白的熱滯活性為0.678'C，較通常植物中冰結(jié)構(gòu)蛋白的熱滯活性高。
權(quán)利要求
1、一種冰結(jié)構(gòu)蛋白的制造方法，其特征是以女貞葉為基體，經(jīng)過冷藏后，與Tris-HCl緩沖液及碎冰混合勻漿，再經(jīng)沸水浴滅酶，冰水浴冷卻，冷凍離心，收集上清液；再將上清液加入預(yù)冷丙酮(上清液∶丙酮＝1∶4)混合，-20℃過夜，沉淀，再冷凍離心，收集沉淀，冷凍干燥，得到冰結(jié)構(gòu)蛋白粉。工藝為(1)冷藏用清水洗凈女貞葉，勿干燥，帶水置于4℃冰箱中冷藏4周，誘導(dǎo)產(chǎn)生冰結(jié)構(gòu)蛋白；(2)勻漿將冷藏女貞葉投入pH7.4、20mmol/L Tris-HCl緩沖液(Vc 1mg/l)，其中女貞葉質(zhì)量/緩沖液體積比為2/5，然后加入碎冰，混合勻漿；(3)滅酶勻漿后，經(jīng)八層紗布過濾，將濾液沸水浴15min，使酶失活，再經(jīng)冰水浴冷卻；(4)冷凍離心于溫度4℃、離心力10,000g條件下，離心30min，收集上清液。(5)沉淀冷卻液按照1∶4(上清液∶丙酮)比例加入預(yù)冷丙酮中，混合，-20℃過夜，沉淀；(6)冷凍離心、干燥于溫度4℃、離心力10,000g條件下，離心30min，收集沉淀，經(jīng)冷凍干燥得冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉產(chǎn)品。
2、 一種用權(quán)利要求l所述制造方法得到的冰結(jié)構(gòu)蛋白，其特征是分子量為66Kda，熱滯 活性為0.678°C。
3、 一種用權(quán)利要求l所述制造方法得到的冰結(jié)構(gòu)蛋白，其特征是純天然、不含有毒有害 物質(zhì)，可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥等行業(yè)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種冰結(jié)構(gòu)蛋白的制造方法，屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以女貞葉為基體，經(jīng)過冷藏，與Tris-HCl緩沖液及碎冰混合勻漿，再經(jīng)沸水浴滅酶、冰水浴冷卻、冷凍離心取上清液；再將上清液加入預(yù)冷丙酮，低溫過夜沉淀，再經(jīng)冷凍離心和冷凍干燥等工藝過程，制造冰結(jié)構(gòu)蛋白凍干粉。本發(fā)明工藝過程簡單，成本低廉，簡單易行。制造出的冰結(jié)構(gòu)蛋白分子量為66Kda，熱滯活性為0.678℃，為純天然產(chǎn)品，不含有任何有毒有害物質(zhì)，可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥等行業(yè)。
文檔編號C07K1/14GK101684144SQ20081015719
公開日2010年3月31日 申請日期2008年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月26日
發(fā)明者任士賢, 廖祥儒, 賈春利, 黃衛(wèi)寧 申請人:江南大學(xué)