專利名稱：：表面螯合金屬離子的磁性二氧化硅微球制備方法及其用途的制作方法表面^^厲離子的磁性二氣4I^^!備方法及其用途駄領(lǐng)域本發(fā)明屬于材^l域，^tMU用于M^IF菌中分離六ll^^l白的材料。生!^SI^^是在^8i^fi^K^R&Jb^1^,以細(xì)龐、細(xì)菌、核酸和蛋白JWi物體為Jgffl^的H^^離^,^*1^^￡^&#^卜M^用下i^ffii^H^,對目旨iwj^fim、富集、分awi化，早期的工作i^i中于^K4^ietiWil^t上，^ss過在i^E體中g(shù)^，性^m鄰附，^m聚丙iftKK、鷓:z^gZ^^l^l^中'這flW纖大小分布均勻M^tl^勻纖，艦了不同生纖鵬的可重現(xiàn)性和可皿。生iW分離^l^準(zhǔn)分離^9比有一定^,首5fc^離nga常非常簡單，只涉及幾個鵬步驟.所有,鄉(xiāng)m^在單^t離織中發(fā)生，不窬要昂貴wi[相色譜系厲、離(浙、過^s微其它設(shè)備。分離過程可以在含有懸浮圏傳物M^粗,品iA^行，,對青況下(例如細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的提取)甚至可以整^lfla分離步驟，從而縮短ftt分離時間。磁分離技術(shù)對細(xì)胞、蛋白質(zhì)和核^it^通常是非雜和的。與離鵬心和親和色譜相比，磁分離技術(shù)具WS低的剪切力，^W地麟被分離細(xì)胞的活力和生物肝的生物活性》目前，生繊分離技術(shù)正賊為生##翔究的~^重醉段。鄉(xiāng)胞生物學(xué)領(lǐng)域中，職*面被的不同蛋白質(zhì)，表面結(jié)辦#體的^^艦來分離富##^類梨的細(xì)胞。在蛋白^f^i內(nèi)，職蛋白質(zhì)表面雖或iim鲺翻的差異，利用金屬l^離'麟，說蛋白;itt行分離、宮集和純化，在肝生物糊究中，經(jīng)職及繊的分離^l化，基于麟的核^l肪法具有高效艦和易于自靴鰣點(diǎn)，正在逐步靴微的赫卿法,nay^于核酸,取、純化、序列測定w增等過程中。,髙w^m^wmM^散自珠法、單，、^^、大^穩(wěn)定鐵氣化^Wt、天^8^t、磁性轉(zhuǎn)化法。傳統(tǒng)皿淀富集，*^^可^1^,用a^^離細(xì)iii8RS液中的蛋白質(zhì)，幾乎不霱要^5fe^，與其lfc^相比，4辦^tt^^l^'要從^Jt、培養(yǎng)J^m、血糖、駄中分離蛋白質(zhì)，用^fr、分析，,*^為固《體》1^豕腚的髓在于^M結(jié)絲力學(xué)和簡單的分離'15^^,在蛋白鵬化中，為了得到髙銷合容酺鵬大孔如Jl^3,5,,并用^1|^的酶，生棘鄉(xiāng)的j^蛋白(I講)可WmW^iJB^M:,鍵合l^的,不會因L^^而改變a1^#^^#是20H^鄉(xiāng)的一^^ft告基因fitilM瞧餘，其主要jta&^用飾鵬^s祀蛋白iim因的3端或5^H^某種織^ii^，MJlJifi,^3feSBa^蛋誠，鋭fi^ll白質(zhì)可KUiifilfe飾^^爐在固:ISII贗上&^ffia^^而Jlff純化，目前常用的蛋白純tt^ffiiGST,His^fef^。最常用6tl^l^5mS酸*即His磁,^^由610"1i^MlSKm暨于蛋白的^^s糊,His職與其它^^相比有很多明顯微:d^繊離子如鎳、f6W^度繊ffl4和親和力:鵬誠離子的結(jié)合不S3^劑很索、胍的糊:娜和多樣fl^餅(10025ftiraol/Lol/L咪哇，低pH,Ktool/Lol/LEOTA)。目前己有各種商品化介質(zhì)(Ni-WA—Agarose,Ni—IM-Agarose)提供，另夕卜，抗His織的單滅多抗也被應(yīng)用于His融合蛋白,化。金厲^#1^色潘(Irnnol/LobilizedMetalionAffinityChrooatography,I艦C)最早是由Porath于l975年提出的.Porath認(rèn)為，某些蛋白質(zhì)與S^厲離子之間的親和力可以作^31代色^m7Jt中蛋白質(zhì)分離與純化WMi,力。具有錢特性的蛋白質(zhì)^^m氛ii^半fifeftp^^w片段，可以與其產(chǎn)生一辨異tt^和力的金屬離子主要是過鵬^JR離子ZrAOAOf、Hg"、Co》、W等。Porath以劇織為基質(zhì)，環(huán)諷氣丙烷為^！1，亞MS二乙酸(IDA)為ES合成了一系列分別S^Cif、Sf、Ni&、fc，新色譜TO，并用該系歹WW4對血淸蛋白分別進(jìn)行了分離純化，例如，專利號為20071004,、發(fā)明名稱為《一種褒面圏定金厲離子的磁性自及其帶洛:^i應(yīng)用》專利中，采用(2,3—環(huán)氧丙氧基)丙基三乙l^^和亞自二乙酸(IDA)對其進(jìn)行表面化學(xué),，進(jìn)而固定金屬離子衝獲得該固定金厲離子的sitt,作為微吸附劑。在常見的絡(luò)合劑中艦臟配位，與金厲離子之間的作用力比較弱，銀容易引起彌離子KM問題，關(guān)，N'-三傻甲基)乙烯:iM孤JiSSS&，與^H離子,用力娜由于其僅^Ni^蛋白jr作用，所以和蛋白質(zhì)的作用力x^弱，
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要,fl^問邇在于MLfciilt性高分f^,備方法的缺點(diǎn)摁供一鄉(xiāng)it^i、工2BT行、^HW便、賄ffl)IHiit臓面3^yil離^m二氧化硅鵬制備灘。本發(fā)明ff5解決的技術(shù)問麗在于^一種表面M^鵬離子KHi性:^化硅,的新用途。解決±^問,^1的^;5^該鑭備:!&^#驟如下將"h^a&H甲ffiSWi銨與甲^SyRit妙1:1220ftjAi鵬口繊內(nèi)，用#器以1000轉(zhuǎn)/^JW均勻，將PeClHftO與FeCk6fW，ft比為"3溶解于二^K中，R^W^為13(H4S0g/L的水m在23nL/ninIi氣微下將此溶液以45ri7h滴加泰JJ^i^中，800轉(zhuǎn)/^^1#46小時，再3taAJI*為25%跳+7^^甲織化銨與^1^為2S^K的戯妙1:O.卜O丄以800轉(zhuǎn)/W^g^2小時，在混，中，有四氧ltHl^^Pt形成。將十^^H甲基溴化銨與正JW乙鼸,量比為1:11.5的iB^ZJI緩働fl入，以800轉(zhuǎn)/##1鵬，群pH至8，以23mL/h滴加正職乙麟畢后l小時，停止氮?dú)庾觯l(xiāng)轉(zhuǎn)/^，常溫常壓下老化5無a^中加入乙醇，十^X三甲基溴化銨與乙醇的質(zhì)量比為1:22.5,以2000轉(zhuǎn)/辦萬心40分鐘，去掉JiM液，沉淀鵬乙醇中回流12小時，回流乙醇用S^b^三￥基謝七銨與，的|1比為1:20~幼計(jì)》,M^溫，離心分離，去掉JlM亮黃色溶液。纖色沉淀用乙酵、水、丙敝替洗滌，放入真^m箱內(nèi)601C殘1224小時，制備,ftz:氣化硅,a2、磁性:r^化硅,的環(huán)氣皿繊性ilaili^^甲苯^l量比為1:IOHIOO加AH口纖，用,^mm率為60Hz的超聲處理10，，在23mL/minffe氣旨下，再JRA與該混雜麵量比為1:25的3-縮水甘油^RX丙基三甲氧^^800轉(zhuǎn)/^ffi拌，11(TC回流12小吋，用外*#11淀物分離，依細(xì)二甲基甲繊、彌、脈乙醇、*^3次，MA真空^H^I內(nèi)e0lC預(yù)1224小時，制備戯面鍵辨7鰱的磁性二氧ttilii^3、磁性:m^^^^將b^^K與^jmSSfl^eog/l的ifem;!K^^llft比為i:15,潘臺溶解inA兩口自內(nèi)，用IS8^il以iooo轉(zhuǎn)/^MSS^，使棘沐至&再JtaA與該泡^y^比為i:wo,性:JRifc^i^80o轉(zhuǎn)/^ma^，并;Wfe至8(rc反應(yīng)24小時。反m^畢，用外^m鐵:f^分離，用0.51101/1乙8^:淀10^后，棄去乙酸，用二ifc^滌沉淀3次，4^ft^^feAII空T^內(nèi)601C偉1224小時，帝條成L"^冬銀靴的磁tt^條眺將澳誠與鵬微為60g/L的纖;!l^MM量比為h15幼m^W加入兩口自內(nèi)，^^#以1000$|/^|^^均勻，調(diào)節(jié)沐至9,再JtaA與m^iElli:比為1:100200的L-^冬IP^fc的iift:ifl化e^,24小時。碰完畢，用外IP^^臓敝離,用0*Snol/Lft化鈉水,洗滌沉淀610次，再用二次水610次，放入真空干燥箱內(nèi)60C1224小時,W^H^t的磁性:^t化鏈麟，4、金屬離子的齡繊基化的磁性二氣化硅微球與賺為0,2mol/L的Coa',按貭量比為1:100150加入,內(nèi)，4S溫下用動^IS以咖轉(zhuǎn)/辦攙摔72小時，用夕h!P^I鄉(xiāng)淀敝離，用二fc!lC洗繊6m次，在真空^^箱內(nèi)601Cfli1224小時,翻烙戯面齢KHS性:^ttffi麟，在本發(fā)明mW4Kfc^^工藝步驟l中，十5^^三甲S^化銨與甲苯的iJt^Jt量比為l:1218,FeCl2，與FeCU'6ty)的^S比為1:3溶解于二次水中，配^^雌為140150g/Lfi^C輒飾到戰(zhàn)混賴中，再M(fèi)A質(zhì)t^jS為2漲tUK,"t^^H甲基溴化銨與質(zhì)fllfoS為25%旨》^1量比為i:(USM).2。在混賴中，將+^^S三甲S^化銨與正縫酸乙W^IUt比為1:L21,5的正繊乙Htto入，在產(chǎn)物中加入乙醇,十A^三甲繊化餃與乙醇的ttSSI量比為l:2.12.4,沉淀物用譜臓12小時，回流乙醇用量^+六烷基三甲基溴化銨與乙醇的質(zhì)量fc匕為l:2Q24計(jì)，制備,性Z1載化硅微哮。在iStt二諷維麟的環(huán)煞靴工藝步驟2中，織性Z^化^^球與甲苯按ftM量fc匕為i:10201080加ah口繊內(nèi)濯合。在磁性二諷化掛m^Sto:藝歩驟3中，將L-天冬氨酸與^濃度為60g/L的fte^a水溶液按ttii質(zhì)量比為i:1618^^fttaA兩口l^,再;taX與^i^Wfc&Kft比為h120i幼的表面鍵輛縫的ftfc^toiw，鑭備成Li#iWfcifcmto^球.將渙ZJl與4m&ft^6(^/L的Nam水ii^tt^lUtfcb為l:1520#溶觶加入兩口鵷內(nèi)，再加入與^i^glftti^Jfti:比為]U120180的L-天冬教靴fl^^fWfc^^,在^S離TMi^工藝頻4中，Jffi^Hs的tttt::m化硅IW與濃度為0,2啦1/L的CoCl,',^tt^M量比為l:1幼15Q加，杯內(nèi)，絲發(fā)明miittriw^m:藝步驟i中，+7^1三甲1化銨與甲苯的最*比為h15，F(xiàn)eClHWf與Pea6ft0的jil比為1:3溶解于二^C中,RtM^A^為i40g/L的水瀋齔勵n到±^漏，中，再inAiu^K為m駄，十:^HH甲絲化銨與Jga^為25ift!KJRmil量比為l:0*17,鄉(xiāng)賴中；將+7^^甲S^fc銨與I0i^ZaSftm8Wt比為1;1.25的正繊乙II^KlQA;ft^中加入乙醇，十六,三甲S^t銨與乙醇的J^t量比為1:2,25;沉淀物用乙鵬流12小時，+7^三甲翻^^與乙醇的§||*比為h22.5,鵬成磁性二氣化硅微球，在磁性二氧化硅鵬的環(huán),化工藝歩驟2中，^it^w^m^與甲^a^iis比為i:服o加ah口繊內(nèi)混合，在磁性:z^fcaW^4fcXX^驟3中，將L-天冬氣酸與#,為60g/L的Ma水溶,最ttMl:比為i:18混^^P加入兩口,內(nèi)，再加入與該混合溶液最頓量比為h150的表面鍵合環(huán)條的離I^條鵬，審恪成L-天錄靴^tt:imtta^將溴i酸與鵬總為60g/L的Na^Mia^質(zhì)i比為l;1S潘絲解MA兩口鵬內(nèi)，再加入與該棍合^MmS比為1:150的L-天冬氯酸化6!8性二氧化娃,。在金厲離子的,工，驟4中，^M性zm化硅,與濃度為0.2nl/L的CoClWW)最佳拔廣量比為1:120加入燒杯內(nèi)。，制備的表面,金屬離子的磁性二氣化硅微,，桿菌中分離六聚組氮酸標(biāo)簽蛋白中的用途。本發(fā)明采用了溶M^S^備了以四氧ftS^W^為核，以正繊乙酯作1為殼《:^化敏微球,以此,^^環(huán)氣,偶SIM3-縮氷甘油1W基丙SH甲^Si^、l—天冬氣酸w^溴乙^i^后形成的配體為絡(luò)合劑，截m屬鈷離子，翻恪自面l^^屬離子ttM性:^il^,。本發(fā)明自了Li#S酸和澳乙,l^tW性:^化娃旨，可以為金厲離子li^個配位點(diǎn)，不僅保與蛋白質(zhì)貭。翻,較強(qiáng),合力^i使鈷離子M，而且與蛋白贗上B^氣m^^Wii^^鋮的結(jié)^Mt,從而使表ffil^l離子,性:^化^im^聚組氣l1^蛋白有根swii^tt和易于實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的分離wi化，本發(fā)明與現(xiàn)有e^膝m相比，具有設(shè)^#、,簡單、誠^fc^^a細(xì)本發(fā)明腳條表面螯合金屬離子的^ttrm化硅微球可用于分離六皿氨^s蛋白*-圖i^y^施例i^#表面^^1離子的《^4{^^的￥別,屈線-圖2是,例lti^^M^^Jg離子的Stti^Wfc^^的娜電子繊鏡照片e圖3是實(shí)施例i銅搭的，^jj離子fltiattz^tti^w^g描電子顯微鏡照片。圖4是^M例imw細(xì)i^JS離子的afe^4k^^xps光電予麟圖。圖5是實(shí)MMim的表面^^a離^rt性i化硅,xps光電子s^N元素的化學(xué)位移譜圖。圖6是例i銀洛的表面^^Ji離子的磁性:im化硅1SWt!全自動x—射線衍射團(tuán)譜a圖7是以實(shí)例i制備的表面螯^r屬離子的磁性z^WM自測得的電泳照片。圖s是實(shí)例i的磁性^^m化^^io^ffi螯合^ii離子的磁ttzm化硅,分離蛋白的電泳照片。圖9是不同釁褻M^金腐離子的自:zWtft1^,化分fifS白的電i^片。圖10Sffl環(huán),丙m3-縮水甘油l^丙SH甲^sa^分別修飾^IM性二氧化硅微球純化分析蛋白的電泳照片。圖11六聚組鱖m^蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線a具體實(shí)施例方式.7結(jié)合附圖和^1^^本發(fā)明進(jìn)一##細(xì)說明，鮮發(fā)明不限于這Hi施例。麯例i本^i^出了麵^kl離子^ifcm^imi搖雄，其工繼驟如下1.制^Htt:i^條,取7.娜2g十^6H甲^fc銨與100.0g甲苯MX到四口繊內(nèi)，基三甲M^銨與甲^JH:比為i:15，用^l以woo轉(zhuǎn)/^W^;將0.329gPea卿與0,987gFeCh働港解于9,4397g二次水中配制^St為140g/L的;!K^,FeCla，與FeClj柳ltt比為1:3,在23ttL/斑inft氣微下將ii^K以4M/h滴JnaJtJ^i糊中，800轉(zhuǎn)/^^#46小時；再toAHjB^為2mL,+7^三甲^銨與*^為25^K的蹄比為l-0,17，柳轉(zhuǎn)/^IWta^2小時，左混糊中有四載4tHl5felft3W^成;以23A/h^Wra入碰酸乙酯9.79mU"h^^甲^a化銨與B^乙酷按質(zhì)量比為h1.25,卿轉(zhuǎn)/^#反應(yīng)，用lSi:調(diào)節(jié)沐至8,以2W7h滴加正翻乙iiWn完畢后i小時，停止掇氣做咖轉(zhuǎn)/^tti拌，aa常sr老化5天;ffiJ^W0XZ^限銀十^^H甲^^條與ZJf的繊比為U.25，以2000轉(zhuǎn)/賴離心40鎌戰(zhàn)液，Mlt被164g乙醇中回流12小時，回流乙酵用量按十六^三甲^Mfc銨與i酵的質(zhì)量比為l:22.5計(jì)；分離ffitS物，#*掉上験黃^^,黑felK淀用乙酵、水、丙,交替繊，^A真空T^內(nèi)60"12~24小時，制備鵬性^m化硅麟。2.,二氧化14',的環(huán)《1基化取鵬二輟化掛鵬o,lg、甲苯i05g加AH口繊，磁性:;mifctt徼球與甲苯的貭量比為h1050，用,^W^W6QHz下超聲處理10，,在23raL/MnN汽W下，再加入3—^甘油ll^丙SH甲f^^42g,3—,甘油,基丙基三甲ft^^與該混^W量比為l:25,800轉(zhuǎn)/##}^#,1!01C回流12小時，用夕OT^將沉淀物分離，依細(xì)二甲基甲職、丙酮、無水乙醇、水洗滌3次，^AA空^f^if內(nèi)60"錫！224小時，翻潘戯面鍵執(zhí)*4二氣化娃微球。3.磁性:i^爐微^^fc取L^e^(il2^66g、！^S^拳的lfa^水繊47.88&L"^4ftK與^^H^60g/L的Ifa8OQb7ld^Uia:比為l:18^fSliaA^口皿內(nèi)，用wm以i咖轉(zhuǎn)/^w^駒，aa^wtewifl^沐至8:再她表面鍵^fHHI^fcm化a^(X戰(zhàn)表面鑣合環(huán)縫KHttt^fWWim球與^1^比為1:150,800轉(zhuǎn)/:JHWK并加艇8CTC鵬24小時te憲畢，用^Wli^^K^分離，用0.&1/1乙^&^淀10，，用二feK洗沉淀3次，鵬滌emateA^空fla^內(nèi)6oic德i224小時，ii^成Li4M^ft的磁te4t化硅，；將漠乙酸2.T7g、W^CiK^Wg/L的Ntfft，液50.02g混^g柳AM口繊內(nèi)，溴乙酸與^^6C^/L的織水^W雌比為1:18,^1以l卿轉(zhuǎn)/^MIW購，iffW糊對比例使沐至9;再加入L-天雒^MHtti:ifW^1^纖g,Li^j^的離:rm化硅,與該^8F^iKfi比為l:150,^24小時SJ^完畢，用夕Wi^^繊物分離，用0.501/1氣化鵬^^繊沉淀610次，再用二姊繊610次，41^:^\^空::[:^內(nèi)60t預(yù)1224小時，審J^l^k的離二氧化硅微，4.金屬離子的，^Sifc9W4:i^化lii^0.2g與爐為0.2rool/L的CbCL'TO的水,2紐toA,內(nèi)，^t的^fc^ifc^W與濃度為0.anol/L的CoClf6恥的質(zhì)量比為l:120;室細(xì)磁力38^以咖轉(zhuǎn)/^#1#72小時后，用夕f^^^淀齢離，用二絲,沉淀610次，^Ut淀在真空fliffi內(nèi)60'CT#12~24小時,制備賺面螯合金厲離子的磁性:^化硅微球a上述第峰的表面螯合金屬離子的磁性:^化鏈^可用于在:桿菌中分離六聚組氨酸織蛋白。實(shí)施例2在^^litt^^4fc^球工藝歩驟l中，取7.繊g十^^H甲H^化銨與87.47g甲苯加入到四口,內(nèi)，十^^三甲基溴化銨與甲苯的Si:比為1:12,用器以1000轉(zhuǎn)/##|#^勻；將0.3(BgFea'4lfc0與0,916gPeCk投W溶解于9.4397g二fefc中配制^Jg為I30g/L的水液液，M:k4W)與FeClWHdO質(zhì)量比為1:3，在23raL/mir^氣做下以45ttL/h將jfc^i滴加到戰(zhàn)M^中，腳轉(zhuǎn)/^##^46小時；再加A^ftt^t為25%氣水1.l&ii，十六^H甲l^fc銨與IIBlEffi^29J^Kfiya:比為1,0,1，800轉(zhuǎn)/^^UW2小時，在11#*中，有EMMtHf^lWm膝以23ni/hMttnABM乙酯6.miL,十7^^H甲S^化銨與正,ZimM比為1:1，800轉(zhuǎn)/^#&^用氟水鄉(xiāng)沐至8，正繊ZJgSI加完畢后l小時，停it^氣餅800轉(zhuǎn)/^8拌，鄉(xiāng)常壓下靴5天;！E^中JnA譜14幼g,十A^H甲^^化銨與乙酵的質(zhì)驚比為1s2，以漏轉(zhuǎn)/辨離心40辦,銷JJlgt,MS被145.8g乙酵中醜12小時，鵬Z:瞎用量按"h^^H甲^^化銨與乙賻的J!SJt比為1:如計(jì)離'0^離繊，去攤Jd^Eftfem黑色iEttffl乙酵、水、Pfll^替麟將繊的TO^AUCTi箱內(nèi)6(TC賴1224小時，翁潘^tttrlMfc^L在離二諷to^^I環(huán)^fcl藝灘2中，取磁性zm腿鵬O.1g、甲苯ioogtoAH口鵬，磁性:zlWfc^^甲糊l8m比為i:woo,用fi^繊麵率為馳的超聲艦10她在2M7ndnN汽微下，再加入3,水甘油^I丙基三甲^J^4.Og,3邀糊imS兩基三甲l^^與該棍維^S量比為1:25,該工藝步驟中的其它^S與實(shí)施例1相同。衝衞m^面鍵^F教基a^ttzm條鰣。在Wiz:親艦'^^fcl藝娜3中，取L-天錄酸166g、#總為60g/L的N禱水,孰9gL-天絲酸與鵬雌為60g/L的Nam7j^液的質(zhì)量比為b15^加入兩口^內(nèi)，用^#器以1000轉(zhuǎn)/^11#,,i!M調(diào)節(jié)兩者的相，,液pH至8;再加Aa面鑲合ifmSWIi性1化硅微球0.425紐，表面鍵辨縫的鵬化硅^該濯鋪*比為1:則，柳轉(zhuǎn)/##,并iU^8(TC,24小時；M^完畢，用夕f"SP^I^fe^離，用0.5mol/L乙^g^l淀10辦，用二脈洗沉淀3次，將繊的沉tt&A真空千麟內(nèi)6CTCf燥1224小時，制備成L-天冬鲺敝的磁ttl^a化硅,；將溴乙酸2.77g、體積濃度為60g/L的駄瓜水溶液41,55g混鋪解加入兩口繊內(nèi)，溴乙酸與#度為60g/L的Nam水溶液的質(zhì)量比為h15,用lg^器以1000轉(zhuǎn)/^ftWN^]，WWW者IW比例使沐保持至9:再加入L-天冬^ttSOIi二氣艦,0眉2g，天^M化的離m化硅麟與繊^I^S比為1:微。紅藝歩驟中的其它歩驟與鄉(xiāng)例i相亂制t^^t,性:ift化纖球。在金屬離子的螯合工藝歩4中，^!^MHi性二氧化自球0.2g與濃度為OH/L的Cba柳20g駄,內(nèi)'^fc的磁性1化娃麟與濃度為0.2ffiol/L的Cba柳的質(zhì)量fcKl1:100。虹怨聽中的其它步鵬^jl相同.制備自面,的,z:fwtemsu麯例3在制絲1^^^:^l中，取7.2892g+^|^甲^81化銨與145.784g甲苯加入到四口繊內(nèi)，十^SH甲i^fc銨與甲^W質(zhì)量比為1:20,用*器以1000轉(zhuǎn)/^均勻；將0.354gFeCL4IW與1.06"FeCls'溶解于9.4397g二Jfe^中配M^fot為I60g/L的水自，F(xiàn)eClr4ftD與FeCl3，質(zhì)量比為1:3，在2M/Bin&氣做下將jlfc^以4^5mL/h滴加到UiM^I中，800轉(zhuǎn)/^W^SW小時；再加AMKft^2Si^K2.28taL,十A^S三甲MHfc^與^a^為2em^的雌比為1:0.2,卿轉(zhuǎn)/#*|#^2小時,在混合物中，有四氣tt3鐵納米顆粒形成；以23nL/h緩慢加入正硅酸乙酯U,76o^i"^mH甲SM化銨與i0^乙^MS比為1:1.5，800轉(zhuǎn)/^m拌腿，用氨水肺pH至8，以23iC/h滴加正繊乙S^畢后l小時，停止氮?dú)庾?00轉(zhuǎn)/^tWW,^^常壓下靴5天^t!中JtaA乙醇18.223g,十^^三甲基溴化銨與乙醉的質(zhì)量比為1:2.5,以2000轉(zhuǎn)/，離心40，,去掉±^液，繊被1S123g禱中回流12小時，回流乙酵用鵬+^^H甲基渙化銨與乙醇的膽比為1:25計(jì)；冷卻MS溫，離A汾離，去掉上層亮黃色溶液,屨色沉淀用乙醇、水、丙酮交替洗滌，將^fe滌的傷3fe^A真空^BI箱內(nèi)60C1224小時，審洛^itt二氣化硅鰣。在磁性::^fc^^wmi藝步驟2中，取磁性1tt^麟(Ug、甲苯noginAH口織，磁性:;^化^l^與甲苯的質(zhì)量比為i:noo,用超聲清洗機(jī)在頻率為60te下超W4S10辦；在2M7niinN汽微下，再M(fèi)A3-縮水佑由,基丙基三甲1^4.4g,3-縮水糊imS丙SH甲^i^與該混合溶,量比為1:25,紅藝歩驟中的其它歩驟與實(shí)施例1相同》制備職面鍵合環(huán),的磁性二氧化硅微球。^i性:zm4fciii^llita:藝步驟3中，取L-天冬氨酸2.66g、糊濃度為60g/L的!Wft水溶液53.2g，L"^冬氛酸與^feS為叨癥的^m水溶^^量比為i:20混^g解她兩口繊內(nèi)，用wm以iooo轉(zhuǎn)/:iHW^駒，艦調(diào)節(jié)兩者的相皿ft^液pH至8;再加A^面鍵^f親基的磁性二氧化硅微球轉(zhuǎn)/^,并加縫80"腿24小時iSJS^畢，用夕1^#^淀分離，用0.5mol/L乙^MI10辨，用二JfcWS^縱3次，將織的Wfe^AS空^^f內(nèi)6(rc，1224小時，f^成l-^4ta6tti的i3^m化^t豕將澳乙酸2.77g、柳g/L的Nam^Fi[胡.4g混^WtaA兩口娜內(nèi),漠乙酸與M^為60g/L的N^2f^8^Ml:比為1:20,用^NI以1000轉(zhuǎn)/i^ws^,'mM者m比,沐至9;再jQAl-天^a^waiezm化掛麟仏29lg,L"^4^^flffiti:^4lai^^與該漏^SiEJ5ti比為1:卿,該工，驟中em它步ll^實(shí)施例l相同。^^^k的,:^/Wii^,^gJi離預(yù)齡工怨4中，fl^Sfti的離;z^fcW^o,2g^S為0.2roi/L的coa，30g:taAi^內(nèi)，3Wfc的磁性:i^化tt^與濃度為0*2tol/L的CoClrW的質(zhì)i比為1:150。紅藝歩驟中W^它步,魏例1相同，制備i^面^"金屬離子的iitt:^Wfc桂,，為了確定本發(fā)明^fltl工^驟，發(fā)明A^fiT:feSt的^^W究試驗(yàn)，各種^if況如下i、不同偶s^樹表面i^i離子的,:^4tai^MfcAmaa^蛋白性能的影響在本發(fā)明^SI例i的^ttrlWfc^^的環(huán)fWb工藝步驟2中，將等摩爾的3~縮水甘油《^丙基三甲輛^^和環(huán)飆親丙旨偶聯(lián)劑分別加入等量的磁性:2^bft,，并在甲苯里,，分勢賜，m^F^的,il^^,后續(xù)工藝步驟與實(shí)例i憲全相同，得至PW表面齡金屬離子fl^t性rm化確微球，1^#到兩種表顧螯合金屬離子的磁性二執(zhí)化桂微球純化分析蛋白的電泳照片見圖io。在衝10中，泳道1為蛋白織的電泳m,腿2為l^ll液然鄉(xiāng)^i^蛋白的電泳照片，泳道3為|^3~€水"^11^肉基三甲氧基為偶聯(lián)劑^#表面螯合扁離子的継:i^t^^^t化蛋白后^l^殘留蛋白的電泳照片，泳道4為3,水甘油lP^丙基三甲^ffi^為偶^RJ,表面,金屬離子,性二氧化硅微球處理含六聚組flB際簽蛋白，ftM,洗脫液中蛋白的電泳照片.腿7為I^M環(huán)親氣丙嫁為偶KM^^面螯合^S離子的磁性rft化硅微球純,白后^自留蛋白的電泳照片，泳邀8為環(huán)載氯丙烷為偶聯(lián)劑fftl表面螯合金屬離子的磁性二氣化娃徼球iba含六聚組氨酸標(biāo)簽蛋白凝,后微^繊中蛋白的電icM^,由國10看出，WJfM[^^ii^l^l備S^M齢^iS離子fiHifc^Wfcii^^目^ll白5^^離，用3"^JcH16^PISH甲wsi^i偶i^RWi^的表面M^ii離子的iitt二諷nyii^能^^M^,分離六聚組^白》2、錢酸乙,表面m^M離子fitSffifc^爐HW6餘離^J^螢白性能的彩響鵬不MBi^za^用形jaatttzm^t，而是將四氧te,^feJti[繊合3"#^丙絵甲1^,^K它工fSNi被例i完全相,,^#^由3-^水tiiAiP^丙^s甲^ia^為ffi^w^M^i離子^^1^JIWMi表面m^i離子的^S^W^析蛋白的電泳m見圖w,在圖io中，泳道5為mg^M^Mn^^ffi^^ii離子,ffiSWB化蛋白后！W^留蛋白的電M片，歉敏6為本實(shí)驗(yàn),下ff^^1^合金屬離子的^t性^M:a^ma氟^^蛋白iyiwRB微^fe^液中蛋白的電泳照片s職,5Wdte照片可瞎出，直驗(yàn)四氣itE鐵納米mi:鍵合3-縮水甘油i^S丙基三甲^^il^潘的表面^^ll離子的磁性微球皿有效分離六聚組氣酸蛋白，為了驗(yàn)證本發(fā)明,益效果，發(fā)明ASW本發(fā)明^liMl泰1#*^屬離子的離zm化^^,艦vsm,nm儀、xps光電子ffita、全自動x—射線衍射儀、纖電子顯微鏡、離電鏡、就分析儀、朦預(yù)tottw其斷了表征；利稱,*^^了表面^^離子的,1化硅^分離六標(biāo)簽蛋白性能'各種mit況如下觀察物品表面螯合金屬離子的磁性二氧^^,實(shí)驗(yàn)儀器；振^品《^型號為ratt^O0:高^t^電子顯m^號為JEM-30Kh光電子Hm型號為PHI-5400型；全自動X-繊衍射鵬號為D/fe^3c;環(huán)境掃描電子邋微HS號為Quanta200;元素分析儀原收分計(jì)型號為TAS9秘(G)。1、觀察fe^電鏡、掃描電子顯i^OT^f表面iWM性:^化硅m^f觀察，觀瀾結(jié)果見圖2、圖3,由閣2、圖3可見，謝電繊柳繊電子顯^ffi察表面,繊性:ifWW^3^MaW,銪構(gòu)織，2、鵬按VSMWIP^儀、xps光電子tim、全自動X—lt^f射儀、^*分析儀、嚴(yán)預(yù)totem,蹄分H9^t^^w^Ji離子的鵬:imama湖試。3、觀騸結(jié)果用VSK^^l^S^^面^^Ji離^Hi^:^R化Sl^mB圖L由圖i可見，表面驗(yàn)頓離子ewirm^^w艦，^kia，繊為14967ei^/g,用XPS光電子l^t瀾試的光電子,國見國4，由圖4可見，Co，齢在表面iP^Ji離子,ttll諷化娃,上。各元素的賴腿l,表i表||#^離子《性:^1化《^鵬光電子鯔元素頓積(ets~eV/s)濃度Si2p284070,33921.36Cls3,0,29627.26Ols128827o，ni禍,19Nts33400.477LTOPe2fj21娜2.957I，Co2p220833.,1,57由表1可見，0^^飾Si、C、0、N、Fe、O)等元素，表明表面S^屬離子的Mtt:zlj^kai^含有翻恪該^^成分。表面螯^JI離子Wfi^mftMt球xps光電子麟N元素的4t^fi:移譜圖見圖5。由圖5可見，N元素蜂在399.ev,說明N元素以,形式存在。用全自動x—瘌幾衍射儀瀾定褒顴f^S離子的fifc氧化^l^的X—射線衍射圖^^圖6。由國6可見，X—l!l^衍射圖譜20在18.2°、30.613°、35,6恥°、43.420°、53.949^57,214嘩處出現(xiàn)了F感fi^lffi強(qiáng)衍,，在22.70T敏出現(xiàn)了SiftW^lE強(qiáng)衍射蜂，i^m射信號與立方晶系FeA的《m)、(220)、(311〉、(柳)、(422)、(511)等點(diǎn)陣面0鵬，65"3107]相一致，在2170(f附近出現(xiàn)了s說無定型i^iE衍,。用元素分析iS[MW試，得到的磁性::^化硅微^^面M^fel離子的目二氧化硅微球的，^lU測試結(jié)果賺2表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>由表2可見,^wm^Ji離子fitHa4:im^l^l^l^iai^i比，c、H、N的^MMM高，說明,二氧化硅,已被相應(yīng)的有,分M^,分別配制100iiL胸賺(鵬MJ為40、80、120、160的Co1l子^Wa用原TWfc^ytS^tfi^析，瀾得Co，^S與吸，S^準(zhǔn)曲線，并*1#準(zhǔn)曲線得翁該M^JS離子fitHS性rm4fc^i^f^c^離:^a見表3a表3原子吸ifefaitt^ffiii^a離子的離二靴a^附CQ，矜量<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>圖7是以實(shí)例i翻搭的表W^屬離子Wli性:iW^E自得的龜,片6在圖7中，鄉(xiāng)1為蛋白^^暢照片，腿2為餘^M氣K^M白的裂自電泳照片，嫩邀3為表面螯M屬離子的fi^W純化蛋白后^^^留蛋白的電泳MJt,,4為表面,金羼離子的lltt,Aia^^m^fe簽蛋白,鵬'^^E^中蛋白的柳照片。由圖7可見，表面t^屬離子的lttt二親化硅微球能夠^mife^擇性分離六聚組t^^蛋白e磁性zm化硅和表面M金屬離子的,:^化硅微球分離蛋白的電泳照片見,8，在圖8中，鵬l為蛋白縫的電泳照片；泳道2為斬聚組鲺1^S白S^的電多皿；M3為磁性二諷化^^k3itA^[m^S白自,^液中蛋白的電泳照片*.泳道4、s為表a^^金屬離子的磁ft^化^^^^iii^匿白裂Amgimwi中蛋白的^瓶片；,e為^^1^1化蛋白后1^霣蛋白的輸照片；泳逮7、8為褒面螯^U離^^tr^^ia^t化蛋白^i^l菌蛋白的電iJI片，由圖8可見，a^2ii^第6idiw對比可知，^1中^^|^白^:^化^^i^，但自i^的第3,中未見明顯的蛋白i^,說明^a氨ftg白和1ifcffi^i^^l"1"M,性的TO,可以:4W^,從自上絲，耐賴ffi^細(xì)離子WWirm^(^而言，六l^Ci^S白的結(jié)合l^tt的，只有i!MJfefffiftW湘被糊蛋白與表面^^il離鄰礅性zJWfc^fc^間麟和作用，不鬨用置的表面^^厲離子的,:ifWWim^純化分析蛋白的電泳M^見圖9，在圉分中，,i為蛋白,的電Wh自2為^A皿lil^1六l^^^g白^II^SW^中蛋白的電泳照片；泳道4為4呢表面薑合金屬離子的磁性:^R化硅徵球ifcatA聚^ll酸,蛋白l5W^,^ife液中蛋白的^照片，由圖9可見，WPSOT^^厲離子Witt^lWtffit^用量增加，純化得到fi^聚組^^蛋白量1feit加，用2呢、4崦表顧,金厲離子的磁性二氧化桂徼鵬化蛋白，解機(jī)白的量分別為22.26ug、必.52iig。4、用表衝t^H離子的aft:^4^,AUdl桿菌中分離六^MM^合蛋白ACttWfmW^ifBL21腿3)-藏lla,sW^麟，接入M)iL含(W,AMP'的LB^f^E中，3012^,,將過夜雉tWft子職5mL種子液:柳iLLB#1^擴(kuò):#，3510,180轉(zhuǎn)/辨,23小時,至光密度為0.40.6;加入異丙*"*4)"81代判,^^6賜tig/mL,湖轉(zhuǎn)/辨，301C離心3小時,收菌體。按細(xì)胞《#^與^|^糊比10:1,用1^飾(100,1幾NaftPQ,、10咖1/LTris、10鵬1/L棍合，調(diào)pH至8.0)皿菌體，加入溶菌酶至終濃度為l呵/mL,冰浴下超]*|,離心去,胞碎片，》^±淸液《取表面m^s離TOitttzm化硅麟i呢,用iii緩械^ii兩遍,磁性分離，去攛上清液,加入姑聚組氮酸織蛋白的1M^200PU^0M賺300uL室溫?fù)u^H育1小時，磁粉離，U:^ffl于電泳分析見國7的M3,圖8的腿7、腿8,在沉淀物中加入li^M沖液lfiL(50iiiiol/LWTO，300鵬1/L鄉(xiāng)100ia(50,1/LNaHWo鄉(xiāng)鵬1/L!faCl,250鵬1/L味唑，沐saMaaj^5燃處清，該mh賺含有^nsiram白，斷電泳分析見圖7Wlldi4、圖8ft^道4和,5、圖96^道3和,4。用Bradford糊錢白繊取5iaWAiffitffl6M白祥品按m^SKl成條嫌(fflg/ttd)為0、0.I、0,4、0*7、1.1、1.4^ft^ftJtaA200wLBradford成樹，反應(yīng)S，'用fi^t于59Sml8^值，六KMiOt蛋白^KK中螢白^4與吸ita的關(guān)系，4,標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1K表4六jfiMio^白!i^i液中蛋白^ft與ie^度的^吸光值平均00.3270.3160.3215o,iO.娜0.350.35250.40.4360,4480.4420.70.5180.557O.S375i.i0.6710.659O.鄉(xiāng)1.40.7450.7460,7頓取^袞面,Wiite::mt^^，斜成3艦^JIM氣麟白，各取^!Lh清液，分別觀機(jī)六聚組鄉(xiāng)蛋白縫見表5a表5MJJI液4^^(mutl白^M名稱吸艦離Hg組純化的量yg/呢0,鵬5a3570.U鵬11.l淑0.34850.0868718,鵬33由表5可見，^ffl本發(fā)明實(shí)施例i制備的i卿表面,的iitfcimfts,用于從大腸桿菌中分離六離貧酸的量為li,1365iig。20權(quán)利要求1、一種表面螯合金屬離子的磁性二氧化硅微球制備方法，其特征在于該制備方法步驟如下(1)制備磁性二氧化硅微球?qū)⑹榛谆寤@與甲苯按質(zhì)量比為1∶12～20加入到四口燒瓶內(nèi)，用攪拌器以1000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌均勻，將FeCl2·4H2O與FeCl3·6H2O按質(zhì)量比為1∶3溶解于二次水中，配制成濃度為130～150g/L的水溶液，在2～3mL/minN2氣保護(hù)下將此溶液以4～5mL/h滴加到上述混合物中，800轉(zhuǎn)/分鐘持續(xù)攪拌4～6小時，再加入質(zhì)量濃度為25％氨水，十六烷基三甲基溴化銨與質(zhì)量濃度為25％氨水的質(zhì)量比為1∶0.1～0.2，以800轉(zhuǎn)/分鐘持續(xù)攪拌2小時，在混合物中，有四氧化三鐵納米顆粒形成；將十六烷基三甲基溴化銨與正硅酸乙酯按質(zhì)量比為1∶1～1.5的正硅酸乙酯緩慢加入，以800轉(zhuǎn)/分鐘攪拌反應(yīng)，調(diào)節(jié)pH至8，以2～3mL/h滴加正硅酸乙酯完畢后1小時，停止氮?dú)獗Ｗo(hù)，800轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，常溫常壓下老化5天，在產(chǎn)物中加入乙醇，十六烷基三甲基溴化銨與乙醇的質(zhì)量比為1∶2～2.5，以2000轉(zhuǎn)/分鐘離心40分鐘，去掉上層液，沉淀物在乙醇中回流12小時，回流乙醇用量按十六烷基三甲基溴化銨與乙醇的質(zhì)量比為1∶20～25計(jì)；冷卻至室溫，離心分離，去掉上層亮黃色溶液；黑色沉淀用乙醇、水、丙酮交替洗滌，放入真空干燥箱內(nèi)60℃干燥12～24小時，制備成磁性二氧化硅微球；(2)磁性二氧化硅微球的環(huán)氧基化將磁性二氧化硅微球與甲苯按質(zhì)量比為1∶1000～1100加入三口燒瓶，用超聲清洗機(jī)頻率為60Hz的超聲處理10分鐘，在2～3mL/minN2氣保護(hù)下，再加入與該混合溶液質(zhì)量比為1∶25的3-縮水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷800轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，110℃回流12小時，用外部磁鐵將沉淀物分離，依次用二甲基甲酰胺、丙酮、無水乙醇、水洗滌3次，放入真空干燥箱內(nèi)60℃干燥12～24小時，制備成表面鍵合環(huán)氧基的磁性二氧化硅微球；(3)磁性二氧化硅微球羧基化將L-天冬氨酸與體積濃度為60g/L的Na2CO3水溶液按質(zhì)量比為1∶15～20混合溶解加入兩口燒瓶內(nèi)，用攪拌器以1000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌均勻，通過調(diào)節(jié)兩者的相對量使溶液pH至8；再加入與該混合溶液質(zhì)量比為1∶100～200的表面鍵合環(huán)氧基的磁性二氧化硅微球，800轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，并加熱至80℃反應(yīng)24小時；反應(yīng)完畢，用外部磁鐵將沉淀分離，用0.5mol/L乙酸浸泡沉淀10分鐘后，棄去乙酸，用二次水洗滌沉淀3次，將洗滌的沉淀放入真空干燥箱內(nèi)60℃干燥12～24小時，制備成L-天冬氨酸化的磁性二氧化硅微球；將溴乙酸與體積濃度為60/L的Na2CO3水溶液按質(zhì)量比為1∶15～20混合溶解加入兩口燒瓶內(nèi)，用攪拌器以1000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至9，再加入與該混合溶液質(zhì)量比為1∶100～200的L-天冬氨酸化的磁性二氧化硅微球，室溫?cái)嚢?4小時；反應(yīng)完畢，用外部磁鐵將沉淀物分離，用0.5mol/L氯化鈉水溶液洗滌沉淀6～10次，再用二次水洗滌6～10次，放入真空干燥箱內(nèi)60℃干燥12～24小時，制備得羧基化的磁性二氧化硅微球；(4)金屬離子的螯合將羧基化的磁性二氧化硅微球與濃度為0.2mol/L的CoCl2·6H2O按質(zhì)量比為1∶100～150加入燒杯內(nèi)，在室溫下用磁力攪拌器以100轉(zhuǎn)/分鐘攪拌72小時，用外部磁鐵將沉淀物分離，用二次水洗沉淀6～10次，在真空干燥箱內(nèi)60℃干燥12～24小時，制備成表面鏊合的磁性二氧化硅微球。2、娜權(quán)鵬求i臓觫M^JS離子的磁tem^W^雄，其特征在于-在審鵬性:z^化amip:藝步驟(i)中，十^S三甲基漠化銨與甲苯的質(zhì)量比其中為l:1218,FeCl,4ftO與FeClv6HyO的質(zhì)量比為h3溶解于二次水中，其中ffi^^jft為140150g/L的水溶瓶滴加到J^混，中，再lBA質(zhì)SlfeS為25%iUk,十^l三甲基澳化銨與Jft^S度為25%^的自比其中為l:(X150.2:在混娜中，將十^^三甲麟化銨與正硅酸乙ffi^織比其中為1:L2L5的IE^酸乙lS^1ftto入，^^中加入乙醉,十A^i三甲基漠化銨與乙酵的質(zhì)量比其中為1:2.12.4，沉淀物用乙醇回流12小時，回流乙醇用量按十六Mlt三甲S^化銨與乙醇的質(zhì)量比為1:2024計(jì)，港格j^S性Zm化硅微球；在磁性二氣化娃辦的環(huán)氣靴工藝步驟(2)中，鵬性二氣化硅微球與甲苯按質(zhì)量比其中為l:102010K)加入三口燒瓶內(nèi)混合；在Wfez:m化硅l^eitiifta:，驟《3)中，將L^5，酸與i^i濃度為eog/L的NewCa維^Hfi比其中為1:1618泡^^解加入兩口繊內(nèi)，再JtaA與該混合溶艦量比其中為l:120180fi^臓合環(huán)縫^l性二覯化硅鵬，律條成l-天冬lo^k的磁性二氣^^徼球?qū)逡宜崤c^mfeS為eog/l的^Htt^中為l:1520潘^g觶iOAM口自內(nèi)，再ftlX與^i^ftJil比其中為l:120180的L-天^IOfi^的磁性:m化硅麟4^離子&^工藝步驟(4)中，fimaitt^iitem4fc^i^與繊為0,2mol/L的CoCl^貼其中^8Wl比為1:120150ftLAJgtf內(nèi)，3、娜權(quán)承展求i^W^^^M離子^Hi:^^Wm攤，^e在于在maM^m^ifiwa:藝歩i1(i)中，tA^s三甲基iWfc銨與甲苯的MfiW^中為"15,FeCMBW與FeCl3mO的m比為l:3溶iff二脈中，KI"J^iM^為i40g/L的^m濾;taSU^濯^i中，再加AJti^度為28^K,"H^H甲i^|化銨與JM^為2ffl6Syc膽戰(zhàn)中為1:0.17,在M^J中；將十^6三甲^gl化銨與iE^Z^中SEllS比為1:L25的正硅酸z^BfWra入豕tf^中:taAZA"b^!H甲^fc銨與z^的雌比其中為i:2.25;沉淀物用乙醉回流12小時，十7^H甲Sgl化銨與Z^的鵬比其中為l:22.5，制備自性:^化硅il^;在磁性二氧雌鵬的環(huán)^mX藝步騍(2)中，^ifciR化掛m^甲苯質(zhì)量比其中為h1050加A^口皿內(nèi)泡合在磁性^LWSI!^mi藝歩衝3沖,將1"^冬氨酸與#^為60g/L的Na孤水溶液^^Jtft比為l:18濕^#解加入兩口娜內(nèi)，再加入與i^i合溶#1比為1:150tt^面鍵^WaWt:rft化M^,制備成L-天冬^m6Wtzm化硅,將溴乙酸與fl^濃度為60g/L的N^Ca水溶液其中按貭量比為l:18混，解;taA兩口,內(nèi)，再加入與該濯^#*||量比其中為1:150的L-天^1UK化的磁性:^化硅,；fefe屬離子的^"工藝步驟(4)中，將羧m的fi^二氧4t^微球與,為0.2mol/L的CoCk,其中按質(zhì)量比為1:120加AJK杯內(nèi)n4、表面,金屬離子的磁性z:mi^微球在;^桿菌中分離六IKa氨酸旨蛋白中的用途。全文摘要一種表面螯合金屬離子的磁性二氧化硅微球制備方法，由制備磁性二氧化硅微球、磁性二氧化硅微球的環(huán)氧基化、磁性二氧化硅微球羧基化、金屬離子的螯合工藝步驟組成。本發(fā)明與現(xiàn)有的制備方法相比，具有設(shè)計(jì)合理、操作簡單、金屬螯合量大等優(yōu)點(diǎn)。采用本發(fā)明制備的表面螯合金屬離子的磁性二氧化硅微球中含有鈷離子，具有與修飾微球間較強(qiáng)的結(jié)合力不易使鈷離子泄漏，而且與蛋白質(zhì)上的組氨酸具有較高選擇性和合適的結(jié)合強(qiáng)度，使表面螯合金屬離子的磁性二氧化硅微球?qū)α劢M氨酸標(biāo)簽蛋白有很高的選擇性和易于實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的分離和純化。采用本發(fā)明所制備表面鰲合金屬離子的磁性二氧化硅微球可用于分離六聚組氨酸標(biāo)簽蛋白。文檔編號C07K1/13GK101323454SQ20081015047公開日2008年12月17日申請日期2008年7月28日優(yōu)先權(quán)日2008年7月28日發(fā)明者馮國棟,崔亞麗,柳楊,磊楊,胡道道申請人:陜西師范大學(xué)