專利名稱：：用于防治植物病害的補骨脂酚的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種化合物，特別是涉及一種用于防治植物真菌病害的補骨脂酚。技術背景植物病害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大敵，據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)統(tǒng)計，每年因植物遭受病害造成的減產(chǎn)平均損失為總產(chǎn)量的10%15%。目前防治植物病害的主要手段為化學殺菌劑。但由于化學農(nóng)藥潛在的對人類健康的危害、對環(huán)境的污染、對非靶標生物的影響、植物病原菌抗性的發(fā)展及人類健康、環(huán)保意識的增強，使得化學農(nóng)藥的發(fā)展受到了來自各方面的限制。研制開發(fā)與推廣應用安全、高效的生物農(nóng)藥己成為現(xiàn)代農(nóng)藥的主流，由于植物殺菌劑來源于自然，具有對人、畜安全，不污染環(huán)境，不易引起抗藥性，在自然環(huán)境中易于降解等優(yōu)點，因此研究與開發(fā)安全性高的植物源農(nóng)藥，具有廣闊的社會應用前景。天然有效成分補骨脂酚(Bakuchiol)以及化學合成的類似物，對蘋果腐爛病菌、蘋果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌、水稻紋枯病菌、黃瓜枯萎病菌、小麥赤霉病菌、黃瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等多種常見植物病害具有很好的抑菌活性。補骨脂酚新功能的發(fā)現(xiàn)，可以為具有自主知識產(chǎn)權的植物源生物農(nóng)藥的開發(fā)提供理論依據(jù)。同時，補骨脂酚作為先導化合物創(chuàng)制新藥可以把植物農(nóng)藥和化學農(nóng)藥的優(yōu)點集于一身，是國內(nèi)外農(nóng)藥創(chuàng)制的熱點之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種用于防治植物真菌病害的補骨脂酚，該化合物可作為殺菌劑用于防治多種植物病害，如蘋果腐爛病菌、蘋果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌、水稻紋枯病菌、黃瓜枯萎病菌、小麥赤霉病菌、黃瓜炭疽病菌和辣椒疫霉病菌等。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的用于防治植物病害的補骨脂酚，該化合物是將5kg補骨脂種子粉碎，用70%乙醇在室溫條件下浸提4次，合并提取液，減壓旋轉蒸發(fā)后得浸膏1200g;將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g;四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱，用氯仿和乙酸乙酯進行梯度洗脫，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脫物；氯仿洗脫物再經(jīng)硅膠柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脫，流份1一25為石油醚和乙酸乙酯洗脫物，經(jīng)反復純化得到補骨脂酚。如上所述的用于防治植物病害的補骨脂酚，該補骨脂酚為油狀液體，254nm下顯紫色熒光，EI-MS給出分子離子峰[M-H]+為m/z=255.2;13C—NMR(CDCl3)d:23.35(C-1)，135.88(C-2)，126.45(C-3)，23.22(C-4)，42.51(C-5)，41.27(C陽6)，127.36(C陽7)，124.80(C-8)，130.92(C-9)，131.281(010)，115.34(C-11)，154.59(C-12)，115.34(C-13)，131.28(C-14),25.67(C-15),145.95(C-16)，111.86(C-17),17.62(C-18);NMR(CDCl3)dppm:1.67(3H，H-1)，5.11(1H，J=8.1Hz,H-3)，1.95(2H，H-4)，1.49(2H，H-5)，6.05(1H，J=16.5Hz，H-7)，6.25(1H，J=16.9Hz，H-8)，7.25(1H，J=7.5，H-IO)，6.77(1H，J=8.4Hz，H-ll)，16.77(1H，H-13)，17.25(1H，H-14)，1.19(3H，H-15)，5.86(1H，H-16)，5.02(2H，J=4.2，9.9Hz，H-17)，1.58(3H，H-18);補骨脂酚結構式HO本發(fā)明的優(yōu)點與效果是1.補骨脂酚是天然有效成分，本身作為農(nóng)用殺菌劑具有高效、低毒、低殘留、不易產(chǎn)生抗藥性等特點。2.藥效高。補骨脂酚、福美胂、銀泰、甲基托布津、多菌靈5種原藥對蘋果腐爛病菌菌絲生長的抑制作用EC5。分別為6.12、8.93、26.18、9.16、10.47mg/L。可見，補骨脂酚的抑菌活性高于防治蘋果腐爛病菌的其它藥劑。3.殺菌譜廣。補骨脂酚對蘋果腐爛病菌、蘋果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌、水稻紋枯病菌、黃瓜枯萎病菌、小麥赤霉病菌、黃瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等多種常見植物病害均具有很好的抑制活性。具體實施方式本發(fā)明的化合物補骨脂酚是將5kg補骨脂種子粉碎，用70%乙醇在室溫條件下浸提，固液比為l:5g/mL，提取4次，每次3小時，合并提取液，減壓旋轉蒸發(fā)后得浸膏1200g。將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g。四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱(100-200目，700g，6.0X80cm)，用氯仿乙酸乙酯(l:0，20:1，10:1，5:l)梯度洗脫，流速2.5mL/min，每50mL為l流份，通過薄層層析檢測，合并具有相同Rf值的流份，得到A、B、C、D四部分，A(流份9-52)為氯仿洗脫物。A經(jīng)硅膠柱(200-300目，70g，2.5X40cm)，用石油醚乙酸乙酯(7:1-1:l)梯度洗脫，流速1.5mL/min，每10mL為1流份，流份1—25為石油醚乙酸乙酯(7:1)洗脫物，經(jīng)反復純化得到補骨脂酚(24mg)。實例1:用丙酮或二甲基亞砜將補骨脂酚溶解配成10g/L的粗提物母液。加入適量粗提物母液于5(TC的PDA培養(yǎng)基中，充分混勻，配成粗提物終濃度分別為0.12mg/L、0.6mg/L、3mg/L、15mg/L、75mg/L的含藥培養(yǎng)基，以等體積的丙酮或二甲基亞砜加入到PDA培養(yǎng)基中作對照，然后倒入直徑90mm培養(yǎng)皿內(nèi)制成平板，備用。用直徑6mm的打孔器從事先在PDA平板上28'C下培養(yǎng)7-12d的各供試病菌菌落邊緣處切取菌餅，并移植于上述含不同濃度的粗提物平板和對照平板中央，每次處理重復3次，置28"C下培養(yǎng)7-12d，測量菌落直徑。每菌落取相交垂直線方向測其直徑，以其均值減去菌餅直徑即得菌落凈生長直徑(CK)，相對抑制率(％)=(對照凈生長量一處理凈生長量)/對照凈生長量XIOO。根據(jù)病菌抑制率等有關指標，采用相應的數(shù)據(jù)分析軟件，計算出EC5Q值及EC9。值限。補骨脂酚對幾種常見植物病原菌菌絲生長的抑制作用。蘋果蘋果水稻水稻黃瓜黃瓜小麥辣椒抑制腐爛輪紋稻瘟紋枯炭疽枯萎赤霉疫霉作用病菌病菌病菌病菌病菌病菌病菌病菌EC506.127.2210.6635.3050.2018.124.6641.00(mg/L)EC卯204.50182.1346.30201.10166.0691.0132.25209.10Cmg/L)實例2:試驗方法同實例l，補骨脂酚、福美胂、銀泰、甲基托布津、多菌靈6種原藥對蘋果腐爛病菌菌絲生長的抑制作用如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本發(fā)明的化合物補骨脂酚，對蘋果腐爛病菌(W/^mfl/f)，蘋果輪紋病菌(尸一fl/os/ora/H'n.co/fl)，水禾舀禾舀瘟病菌(i^/7'cw/fln'flo，fle)，水禾舀紋枯病菌(朋&o"om'flso/flm'Xw/m)，黃瓜枯萎病菌(Fwsfln'Mwio平jwww)，小麥赤霉病菌(G她ere/Zfl2eae)，黃瓜炭疽病菌(Co//etoWc/iMmorWcw/flre),辣椒疫霉病菌(尸一op/^/ion2c"戶'a')等多種植物病原菌具有很好的抑制活性。權利要求1.用于防治植物病害的補骨脂酚，其特征在于該化合物是將5kg補骨脂種子粉碎，用70％乙醇在室溫條件下浸提4次，合并提取液，減壓旋轉蒸發(fā)后得浸膏1200g；將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g；四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱，用氯仿和乙酸乙酯進行梯度洗脫，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脫物；氯仿洗脫物再經(jīng)硅膠柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脫，流份1-25為石油醚和乙酸乙酯洗脫物，經(jīng)反復純化得到補骨脂酚。2.根據(jù)權利要求1所述的用于防治植物病害的補骨脂酚，其特征在于，該補骨脂酚為油狀液體，254nm下顯紫色熒光，EI-MS給出分子離子峰[M-H]+為m/z=255.2;13C—NMR(CDCl3)d:23.35(C-1)，135.88(C-2)，126.45(C-3)，23.22(C-4)，42.51(C-5)，41.27(C-6)，127.36(C-7)，124.80(C-8)，130.92(C-9)，131.281(C-10)，115.34(C-11)，154.59(C-12)，115.34(C-13)，131.28(C-14)，25.67(C-15)，145.95(C-16)，111.86(C-17)，17.62(C-18);NMR(CDCl3)dppm:L67(3H，H-l)，5.11(1H，J=8.1Hz，H-3)，1.95(2H，H-4)，1.49(2H，H-5)，6.05(1H，J=16.5Hz，H-7)，6.25(1H，J=16.9Hz，H-8),7.25(1H，J=7,5，H-IO)，6.77(1H，J=8.4Hz，H-ll)，16.77(1H，H-13)，17.25(1H，H-14)，1.19(3H，H-15)，5.86(1H，H-16),5.02(2H，J=4.2，9.9Hz，H-17)，1.58(3H，H-18);補骨脂酚結構式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>全文摘要用于防治植物病害的補骨脂酚，涉及一種化合物，該化合物是將5kg補骨脂種子粉碎，用70％乙醇在室溫條件下浸提4次，合并提取液，減壓旋轉蒸發(fā)后得浸膏1200g；將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分、四氯化碳部分、氯仿部分、正丁醇部分、水部分；四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱，用氯仿和乙酸乙酯進行梯度洗脫，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脫物；氯仿洗脫物再經(jīng)硅膠柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脫，流份1-25為石油醚和乙酸乙酯洗脫物，經(jīng)反復純化得到補骨脂酚。本發(fā)明的化合物對多種植物病原菌具有很好的抑制活性。文檔編號C07C39/00GK101219932SQ20081001022公開日2008年7月16日申請日期2008年1月25日優(yōu)先權日2008年1月25日發(fā)明者關麗杰,李海燕,蔡麗麗,雙邵,紅邵申請人:沈陽化工學院