專(zhuān)利名稱：：二(嘧啶核苷5’-)多磷酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的高效率的制備方法。
背景技術(shù)：
：下述式(I)表示的二(嘧啶核苷5，-)多磷酸中，例如由于P、P、二(尿苷5，-)四磷酸(Up4U)或其鹽具有促進(jìn)排痰的作用，因此是作為祛痰藥或肺炎治療藥有待于開(kāi)發(fā)的化合物，P、2，-脫氧胞苷5，-)P、尿苷5，-)四磷酸(dCp4U)或其鹽是P2Y2和/或P2Y4。票呤受體的選擇性激動(dòng)劑，因此是作為慢性支氣管炎、副鼻腔炎等的治療藥有待于開(kāi)發(fā)的化合物。e2『6hh匕$式中，W和W表示氫原子或羥基，B'和BZ表示嘧咬石威基，W和R2以及Bi和BZ各自可以相同也可以不同，n表示1~4的整數(shù)。作為上述二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的合成方法，例如當(dāng)為Up4U時(shí)，以尿苷5，-單磷酸(UMP)作為起始原料，使用氯磷酸二苯酯(DPC)等活化劑和焦磷酸(PPi)等磷酸化劑來(lái)合成，但目標(biāo)化合物的合成收率極低、為約10°/。，根本無(wú)法成為實(shí)際應(yīng)用的方法(專(zhuān)利文獻(xiàn)l)。因此，作為改善這些方法的嘗試，正在研究經(jīng)由核苷5，-環(huán)狀三磷酸的方法。具體而言，有人報(bào)道了使尿苷5，-環(huán)狀三磷酸與UMP反應(yīng)制備Up4U的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)l)、使腺苷5，-環(huán)狀三磷酸與腺苷5，-單磷酸G=to6士6反應(yīng)制備P、P氣二(腺苷5，-)四磷酸的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)2)。專(zhuān)利文獻(xiàn)l:W099/5155非專(zhuān)利文獻(xiàn)l:Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,11(2001)，157-160非專(zhuān)利文獻(xiàn)2:OrganicLetters,第8巻，No.lO，2075-2077(2006)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所要解決的課題有報(bào)道稱，使尿苷5，-環(huán)狀三磷酸與UMP反應(yīng)制備Up4U的方法可以以32。/。的收率合成Up4U(非專(zhuān)利文獻(xiàn)l)。但是，在該反應(yīng)條件下要求高達(dá)40。C的反應(yīng)溫度，在該加熱條件下生成大量的除目標(biāo)物以外的副產(chǎn)物，因此存在著非常難以純化的問(wèn)題。特別是在加熱下進(jìn)行如dCp4U等非對(duì)稱型的二(嘧。定核苷5，-)多磷酸的合成時(shí)，同時(shí)還副生結(jié)構(gòu)與目標(biāo)物酷似的對(duì)照型Up4U，在各種純化條件下幾乎都不能分離。由此可知在核苦5，-環(huán)狀三磷酸與核苷5，-單磷酸的反應(yīng)中，在不會(huì)使副產(chǎn)物增加的室溫左右的溫度下實(shí)施反應(yīng)至關(guān)重要。但是，在室溫左右實(shí)施該反應(yīng)時(shí)，如后述實(shí)施例中詳述的那樣，無(wú)法重現(xiàn)該收率，所得Up4U的合成收率極低，為10°/。以下。另一方面，在報(bào)道了使腺苷5，-環(huán)狀三磷酸與腺苷5，-單磷獲應(yīng)得到P、P氣二(腺香5，-)四磷酸的方法的文獻(xiàn)中，暗示了該方法可適用于各種二(核香5，-)多磷酸的主旨，但是用于合成二(嘧啶核苷5，-)多磷酸時(shí)的具體數(shù)據(jù)則完全沒(méi)有顯示。另外，該方法使用保護(hù)了羥基和氨基的核苷酸作為原料化合物，因此在合成目標(biāo)化合物之后必需將該保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)，結(jié)果，使操作變得復(fù)雜，同時(shí)也成為收率下降的原因之一。另外，反應(yīng)中使用的試劑類(lèi)必須大大過(guò)剩地使用，在成本上也不利。更重要的是，在我們進(jìn)行的將該方法應(yīng)用于合成二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的追加試驗(yàn)中，如后述所示，存在著目標(biāo)化合物的合成收率低、絕對(duì)不能滿足要求的問(wèn)題。4解決課題的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明人等為了解決上述問(wèn)題反復(fù)進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)使嘧啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸和嘧啶核苷酸在特定的金屬鹽、特別是4美鹽的存在下反應(yīng)，即使在室溫下，與公知的方法相比也可以顯著提高目標(biāo)物二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的合成收率，從而完成了本發(fā)明。因此本
發(fā)明內(nèi)容如下?！?〕二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的制備方法，其特征在于使用縮合劑將嘧咬核苷5，-三磷酸轉(zhuǎn)化成嘧咬核苷5，-環(huán)狀三磷酸，接著在選自鎂、錳和鐵的金屬鹽的存在下，使得到的嘧咬核苦5，-環(huán)狀三磷酸與嘧啶核苷酸反應(yīng)?！?〕上述〔1〕所述的制備方法，其中二(嗜啶核苷5，-)多磷酸為下述式(I)表示的化合物(I)式中，W和I^表示氫原子或羥基，Bt和B"表示嘧啶堿基，1^和112以及B^口bZ各自可以相同也可以不同，n表示l4的整數(shù)。〔3〕上述〔1〕所述的制備方法，其中縮合劑為碳化二亞胺類(lèi)?！?〕上述〔1〕所述的制備方法，其中金屬鹽為鎂鹽?！?〕上述〔1〕所述的制備方法，該方法在1530。C的溫度條件下反應(yīng)?！?〕上述〔1〕所述的制備方法，該方法是使用尿普5，-三磷酸(UTP)和尿苷5，-單磷酸(UMP)來(lái)制備P',pt二(尿苷5，-)四磷酸(Up4U)?！?〕上述〔1〕所述的制備方法，該方法是使用尿苦5，-三磷酸(UTP)和尿苷5，-二磷酸(UDP)來(lái)制備P',pS-二(尿苷5，-)五磷酸(Up5U)?！?〕上述〔1〕所述的制備方法，該方法是使用尿苷5，-三磷酸(UTP)和2，-脫氧胞苷5，-單磷酸(dCMP)來(lái)制備P、2，-脫氧胞苦5，-)P、尿普5，-)四磷酸(dCp4U)。〔9〕上述〔1〕所述的制備方法，該方法是使用2，-脫氧胞苷5，-三磷酸(dCTP)和尿苷5，-單磷酸(UMP)來(lái)制備P、2，-脫氧胞苷5，-)P、尿苷5，-)四磷酸(dCp4U)。發(fā)明效果本發(fā)明的合成方法，其最大優(yōu)點(diǎn)在于將嘧啶核苷5，-三磷酸轉(zhuǎn)化成嘧啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸之后，使得到的嘧啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸與嗜啶核苷酸反應(yīng)時(shí)，在選自鎂、錳和鐵的金屬鹽、特別是鎂鹽的存在下進(jìn)行反應(yīng)。即，根據(jù)以往的方法，在嘧咬核苦5，-環(huán)狀三磷酸與嘧啶核苷酸的反應(yīng)中，釆用完全不存在金屬鹽(非專(zhuān)利文獻(xiàn)l)或在鋅鹽的存在下進(jìn)行反應(yīng)的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)2)。但是，在本發(fā)明人等的研究中明確在經(jīng)由核苷5，-環(huán)狀三磷酸的二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的合成中，在不存在金屬鹽的非專(zhuān)利文獻(xiàn)l的方法中，二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的合成收率極低，且反應(yīng)溫度還較高、達(dá)到40。C，生成大量的目標(biāo)物以外的副產(chǎn)物，因此還存在純化極其困難的問(wèn)題。另外，在鋅鹽的存在下反應(yīng)的非專(zhuān)利文獻(xiàn)2的方法雖然是適于合成P、P氣二(腺苷5，-)四磷酸的方法，但在本發(fā)明人等的研究中可知該方法不適于合成二(嘧啶核苷5，-)多磷酸，其合成收率未必高。在這樣的狀況下，在非專(zhuān)利文獻(xiàn)2中，本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)被指出不比鋅鹽有效的鎂鹽，完全意外地在二(嗜啶核苦5，-)多磷酸的合成中極其有效。即，根據(jù)本發(fā)明的方法，以非保護(hù)的核苷酸類(lèi)作為起始原料，利用不需進(jìn)行保護(hù)、脫保護(hù)步驟的簡(jiǎn)便操作方法，可以以遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于現(xiàn)有方法的合成收率(50.5~94.3%)合成目標(biāo)化合物，并且由于6反應(yīng)溫度為室溫左右和溫和的反應(yīng)條件，因此具有副產(chǎn)物也少、純化容易的優(yōu)點(diǎn)，是適合于工業(yè)上大量合成二(嘧啶核香5，-)多磷酸的方法。實(shí)施發(fā)明的最佳方式如上所述，本發(fā)明方法如下使用縮合劑將嘧啶核苷5，-三磷酸轉(zhuǎn)化成嘧啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸，接著在選自鎂、錳及鐵的金屬鹽的存在下，使得到的嘧啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸與嘧"定核苦酸反應(yīng)，合成二(嘧啶核苷5，-)多磷酸。作為用于將嘧啶核苷5，-三磷酸轉(zhuǎn)化成嘧啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸的縮合劑，可以使用二環(huán)己基碳化二亞胺(DCQ、水溶性碳化二亞胺(WSC)、二異丙基碳化二亞胺(DIPC)等碳化二亞胺類(lèi)；羰基二咪唑(CDI)、氯磷酸二苯酯(DPC)等磷酰卣化物；曱苯磺酰氯等磺酰卣化物等公知的縮合劑，特別優(yōu)選碳化二亞胺類(lèi)。反應(yīng)根據(jù)所使用的縮合劑而不同，例如可以通過(guò)在二曱基曱酰胺(DMF)、二曱基乙酰胺(DMA)、曱酰胺(FA)、吡啶、二嚼烷、二曱基亞石風(fēng)等的單獨(dú)或混合溶劑中，相對(duì)于1摩爾的嘧啶核苷5，-三磷酸(NTP)使用15摩爾的縮合劑，在0。C50。C、優(yōu)選1530。C下反應(yīng)110小時(shí)左右來(lái)實(shí)施。更具體而言，使用DIPC作為縮合劑時(shí)，可以通過(guò)在DMF中，相對(duì)于1摩爾的NTP使用15摩爾、優(yōu)選1.21.4摩爾的DIPC,在0。C50。C、優(yōu)選2030。C下反應(yīng)35小時(shí)左右來(lái)實(shí)施。如此操作而得到的嘧啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸，不用分離、接著在選自鎂、錳和鐵的金屬鹽的存在下與嘧啶核苷酸反應(yīng)，合成二(嘧啶核苷5'-)多磷酸。作為反應(yīng)中共存的金屬鹽，只要是選自鎂、錳和鐵的金屬鹽即可，沒(méi)有特別限定。具體可以例示氟化鎂、氯化鎂、溴化鎂、碘化鎂、氯化錳、氯化鐵等金屬卣化物；鎂、錳、鐵的硫酸、硝酸、磷酸、高氯酸、四氟硼酸鹽等金屬無(wú)機(jī)酸鹽；鎂、錳、鐵的三氟曱磺酸、曱磺酸、曱苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、硬脂酸、枸櫞酸鹽等金屬有機(jī)酸鹽等。上述金屬鹽中，從合成收率及容易操作的角度考慮，優(yōu)選鎂鹽，特別優(yōu)選氯化鎂。需要說(shuō)明的是，所使用的金屬鹽可以是無(wú)水物也可以是水合物。反應(yīng)可以如下實(shí)施相對(duì)于l摩爾的嗜啶核苷5，-環(huán)狀三磷酸，添加15摩爾、優(yōu)選1.01.3摩爾的嘧啶核香酸和15摩爾、優(yōu)選1.01.3摩爾的金屬鹽，在010(TC、優(yōu)選153(TC下反應(yīng)124小時(shí)左右。反應(yīng)后，對(duì)于合成目標(biāo)物的二(嘧吱核苷5，-)多磷酸，可以適當(dāng)組合通常的核苷酸的分離純化中所使用的方法(例如，重結(jié)晶法、離子交換柱層析法、吸附柱層析法、活性炭柱層析法等)進(jìn)行分離純化，根據(jù)需要還可以制成鹽的形式。例如，作為離子交換柱層析法中使用的離子交換樹(shù)脂，可以使用堿性陰離子交換樹(shù)脂(例如7》六一，4卜IRA402〔口一厶&/、一^社制〕、夕、74才歹PA-312、夕？7*4才^SA-11A〔三菱化學(xué)社制〕)、弱堿性陰離子交換樹(shù)脂(例如，7乂A—，吖卜IRA67〔口一厶&"一7社制〕、夕？7M才》WA-30〔三菱化學(xué)社制〕)、強(qiáng)酸性離子交換樹(shù)脂(例如，夕'M7行才》PK-216〔三菱化學(xué)社制〕)或弱堿性陰離子交換樹(shù)脂(例如，夕'47*4才》WK-30〔三菱化學(xué)社制〕)等。作為活性炭，可以使用成形為破碎狀或粒狀的色譜用活性炭，例如可以使用和光純藥工業(yè)社、二村化學(xué)工業(yè)社制等的市售品。另外，重結(jié)晶法可如下進(jìn)行向得到的已純化的二(嘧啶核苷5，-)多磷酸或其鹽中加入親水性有機(jī)溶劑，使晶體析出。使用的親水性有機(jī)溶劑可以例示曱醇、乙醇等碳原子數(shù)為6以下的醇類(lèi)；丙酮等酮類(lèi)；二嗯烷等醚類(lèi)；乙腈等腈類(lèi)；二曱基曱酰胺等酰胺類(lèi)等，特別是可以列舉醇類(lèi)、優(yōu)選乙醇。上述本發(fā)明方法可適用于二(嘧咬核苷5，-)多磷酸、具體例如有上述式(I)表示的二(嘧啶核苷5，-)多磷酸的制備，并不限于特定化合物的制備。例如可適用于(1)使用尿苦5，-三磷酸(UTP)和尿苦5，-單磷酸(UMP)的P^P氣二(尿苷5，-)四磷酸(Up4U)的合成；(2)使用尿普5，-三磷酸(UTP)和尿苷5，-二磷酸(UDP)的P^p5-二(尿苷5，-)五磷酸(Up5U)的合成；P)使用尿苷S，-三磷酸(UTP)和2，-脫氧胞苷S，-單磷酸(dCMP)的P'-(2，-脫氧胞苷5，-)p4-(尿苷5，-)四磷酸(dCp4U)的合成；(4)使用2，-脫氧胞苷5，-三磷酸(dCTP)和尿苦5，-單磷酸(UMP)的pLp，-脫氧胞苦5'-)p4-(尿苷5，-)四磷酸(dCp4U)的合成等。實(shí)施例以下，給出實(shí)施例來(lái)具體說(shuō)明本發(fā)明，-f旦本發(fā)明并不受這些實(shí)施例的任何限定。實(shí)施例l:金屬鹽對(duì)P、P乞二(尿苷5，-)四磷酸(Up4U)的合成收率的效果(1)尿普5，-環(huán)狀三磷酸(cUTP)二曱基曱酰胺溶液的制備將5.00g(9.10mmol)尿苷5，-三磷酸(UTP)三鈉溶解于去離子水中，制成50mL溶液，使之通過(guò)強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱(pK216-質(zhì)子型、27cc),與洗滌液合并，用8.7mL(37mmol)三丁胺進(jìn)行中和。減壓下濃縮該溶液，之后將殘余物用20mL二嗯烷共沸4次。將殘余物溶解于50mL二曱基甲酰胺中，制成0.15M的UTP三丁胺鹽二甲基曱酰胺溶液。向該溶液中加入1535(10.0mmol)二異丙基碳化二亞胺，在室溫下攪拌3小時(shí)，制成0.15M的cUTP三丁胺鹽二曱基甲酰胺溶液。(2)尿苷5，-單磷酸(UMP)三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液的制備向4.4mL(9.0mmol)2.05M的UMP水溶液中加入4.4mL(19mmol)三丁胺進(jìn)行濃縮。殘余物用20mL二噁烷共沸6次，之后溶解于50mL二曱基曱酰胺中，制成0.18M的UMP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液。(3)研究金屬鹽在cUTP與UMP的反應(yīng)中的效果向上述(1)的500(75.0^mo1)0.15M的cUTP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液中加入上述(2)的500〃L(90.0〃mo1)0.18M的UMP三丁胺鹽二曱基甲酰胺溶液和表1所示的各種金屬鹽的200//L(90.0Amol)0.45M的二曱基甲酰胺溶液，在室溫(25。C)下反應(yīng)1小時(shí)。用HPLC(262nm)分析反應(yīng)液，求出目標(biāo)物Up4U的合成收率。其結(jié)果見(jiàn)表l。項(xiàng)目號(hào)金屬鹽(1.2當(dāng)量)cUTP(當(dāng)量)UMP(當(dāng)量)Up4U合成收率(％)1無(wú)水MgCb80.2%2MgCl2-6H2084.0%3Mg(OTf)267.9%4MnCl2-4H2011.272.2%FeCl364.9%6Zn(OTf)224.7%7ZnCl219.1%8一3.8%OTf:三氟甲磺酸由表l的結(jié)果可知在由cUTP和UMP合成Up4U的反應(yīng)中，在金屬鹽未共存的情況下合成收率為3.8°/。(非專(zhuān)利文獻(xiàn)l的方法項(xiàng)目號(hào)8);在鋅鹽共存的情況下合成收率為19.1~24.7%(非專(zhuān)利文獻(xiàn)2的方法項(xiàng)目號(hào)6~7),相對(duì)于此，在選自鐵、錳和鎂的金屬鹽共存的情況下，合成收率顯著提高，達(dá)到60%以上；特別是在鎂鹽共存的情況下，可以達(dá)到80%以上的合成收率(項(xiàng)目號(hào)1~5)。實(shí)施例2:Up4U-鈉鹽的合成(1)UTP三丁胺鹽二曱基甲酰胺溶液將l.OOg(1.82mmol)UTP三鈉鹽溶解于13mL去離子水中，使之通過(guò)強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱(pK216-質(zhì)子型、10cc),與洗滌液合并，用1.75mL(7.35mmol)三丁胺進(jìn)行中和。減壓下濃縮該溶液，之后將殘余物用10mL二噁烷共沸4次。將殘余物溶解于10mL二曱基曱酰胺中，制成0.13310M的UTP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液。(2)UMP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液向1.06mL(2.18mmol)2.05M的UMP水溶液中加入1.06mL(4.46mmol)三丁胺進(jìn)行濃縮。殘余物用IOmL二嗨烷共沸4次，之后溶解于10mL二甲基曱酰胺中，制成0.184M的UMP三丁胺鹽二曱基甲酰胺溶液。(3)Up4U的合成向上述(1)的UTP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液中加入364〃L(2.37mmol)二異丙基碳化二亞胺，在室溫下攪拌3小時(shí)。向其中加入上述(2)的0.18M的UMP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液和將207.5mg(2.179mmol)無(wú)水氯化鎂溶解于4.9mL二曱基曱酰胺中的溶液，在室溫下攪拌255分鐘。所得溶液用HPLC(262nm)進(jìn)行分析，結(jié)果可知由UTP以84.2。/。的合成收率生成了目標(biāo)物Up4U。(4)Up4U的純化、分離向上述(3)的反應(yīng)溶液中加入6.5mL去離子水，減壓下濃縮。向殘余物中加入25mL去離子水，濾去生成的沉淀，之后合并濾液、洗液，使之通過(guò)強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱(pK216-質(zhì)子型、20cc)。合并通過(guò)液、洗液，用三乙胺調(diào)節(jié)至pH7.5。使該溶液吸附在陰離子交換柱(IRA67-氯化物離子型、40cc)上，用0.15N的鹽酸、去離子水依次清洗，之后將目標(biāo)物用0.3-0.4M的碳酸氫銨水溶液進(jìn)行洗脫。減壓下濃縮含有目標(biāo)物的餾分，之后將殘余物用去離子水進(jìn)行共沸，冷凍干燥。將所得殘余物溶解于去離子水中，之后使之通過(guò)強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱(pK216-鈉型、40cc)，合并洗脫液、洗滌液，減壓下濃縮。將殘余物溶解于去離子水中，之后加入乙醇進(jìn)行冷卻。過(guò)濾收集析出的晶體，得到1.08g(1.23mmol、67.7%)Up4U-鈉鹽。實(shí)施例3:P^P、二(尿苷5，-)五磷酸(Up5U)的合成加入500〃L(75.0pmol)0.15M的cUTP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液、584〃L(90.0,mo1)0.154M的尿苦5，-二磷酸(UDP)三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液、200//L(卯.0〃mo1)0.45M的無(wú)水氯化鎂二曱基甲酰胺溶液，在室溫下攪拌72小時(shí)。所得溶液用HPLC(262nm)進(jìn)行分析，結(jié)果可知由UTP以50.5Q/。的合成收率生成目標(biāo)物Up5U。實(shí)施例4:以2，-脫氧胞苷5，-三磷酸(dCTP)作為起始原料的P、2，-脫氧胞苷5，-)P、(尿苷5，-)四磷酸(dCp4U)的合成向166(16.7/miol)0.144M的dCTP三丁胺鹽二甲基曱酰胺溶液中加入3.4^L(^mol)二異丙基碳化二亞胺，在室溫下攪拌3小時(shí)。加入0.18M的UMP三丁胺鹽二曱基曱酰胺溶液、0.45M的無(wú)水氯化鎂或氯化鋅二曱基曱酰胺溶液，使達(dá)到表2所示的當(dāng)量數(shù)，在室溫下攪拌l小時(shí)。所得反應(yīng)液用HPLC(272nm)進(jìn)行分析，求出目標(biāo)物dCp4U的合成收率。其結(jié)果見(jiàn)表2。項(xiàng)目號(hào)dCTP(當(dāng)量數(shù))UMP(當(dāng)量數(shù))金屬鹽(當(dāng)量數(shù))dCp4U合成收率(％)11.2無(wú)水MgCb1.266.0%22.4無(wú)水MgCl22.477.2%13.4無(wú)水MgCl29.3681.0%41.2ZnCl21.29.580/053.4ZnCl29.3635.0%由表2可知通過(guò)在1.22.4當(dāng)量的氯化鎂存在下，使1.22.4當(dāng)量的UMP與1當(dāng)量的dCTP反應(yīng)l小時(shí)，由dCTP以66.077.2Q/o的高合成收率生成dCp4U。另一方面，在氯化鋅的存在下，僅以10°/。以下的低收率合成了目標(biāo)化合物，即使增加氯化鋅的當(dāng)量數(shù)，收率提高也不明顯。12實(shí)施例5:以尿苦5，-三磷酸(UTP)作為起始原料的P-(2，-脫氧胞苷5'-)p4-(尿苷5，-)四磷酸(dCp4U)的合成將0.15M的cUTP三丁胺鹽二甲基曱酰胺溶液、0.15M的2，-脫氧胞苷5，-單磷酸(dCMP)三丁胺鹽曱酰胺溶液、0.45M的氯化鎂六水合物二曱基甲酰胺溶液按照表3所示的量比進(jìn)行混合，用二曱基曱酰胺進(jìn)行調(diào)整，使總量達(dá)到lmL。在室溫下攪拌l小時(shí)，之后將所得溶液用HPLC(272nm)進(jìn)行分析，求出目標(biāo)物dCp4U的合成收率。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*:根據(jù)dCMP計(jì)算的dCp4U的合成收率由表3可知通過(guò)使dCMP和cUTP在氯化鎂存在下反應(yīng)l小時(shí)，由dCMP定量地生成dCp4U。另外，還確認(rèn)到在氯化4美未共存時(shí)，收率顯著下降。權(quán)利要求1.二(嘧啶核苷5’-)多磷酸的制備方法，其特征在于使用縮合劑將嘧啶核苷5’-三磷酸轉(zhuǎn)化成嘧啶核苷5’-環(huán)狀三磷酸，接著在選自鎂、錳和鐵的金屬鹽的存在下，使得到的嘧啶核苷5’-環(huán)狀三磷酸與嘧啶核苷酸反應(yīng)。2.權(quán)利要求l所述的制備方法，其中二(嘧啶核苷5，-)多磷酸為下述式(I)表示的化合物式中，1^和112表示氫原子或羥基；81和82表示嘧。定堿基，1^和112以及B1和82各自可以相同也可以不同；n表示1~4的整數(shù)。3.權(quán)利要求l所述的制備方法，其中縮合劑為碳化二亞胺類(lèi)。4.權(quán)利要求l所述的制備方法，其中金屬鹽為鎂鹽。5.權(quán)利要求l所述的制備方法，該方法是在1530。C的溫度條件下反應(yīng)。6.權(quán)利要求l所述的制備方法，該方法是使用尿苷5，-三磷酸和尿苦5，-單磷酸來(lái)制備P)氣二(尿苷5，-)四磷酸。7.權(quán)利要求l所述的制備方法，該方法是使用尿苷5，-三磷酸和尿苷5，-二磷酸來(lái)制備pi,pS-二(尿苷5，-)五磷酸。8.權(quán)利要求l所述的制備方法，該方法是使用尿苷5，-三磷酸和2，-脫氧胞苷5，-單磷酸來(lái)制備P、2，-脫氧胞苷5，-)P氣(尿苷5，-)四磷酸。9.權(quán)利要求l所述的制備方法，該方法是使用2，-脫氧胞苷5，-三磷酸和尿苷5，-單磷酸來(lái)制備P、2，-脫氧胞苷5，-)P、尿苷5，-)四磷酸。全文摘要使用縮合劑將嘧啶核苷5’-三磷酸轉(zhuǎn)化成嘧啶核苷5’-環(huán)狀三磷酸，接著在選自鎂、錳和鐵的金屬鹽的存在下，使得到的嘧啶核苷5’-環(huán)狀三磷酸與嘧啶核苷酸反應(yīng)，合成二(嘧啶核苷5’-)多磷酸。根據(jù)該方法，可以使用非保護(hù)的嘧啶核苷5’-磷酸類(lèi)作為原料，可以以50％以上的合成收率獲得目標(biāo)物二(嘧啶核苷5’-)多磷酸，因此作為二(嘧啶核苷5’-)多磷酸的大量合成方法是適合的方法。文檔編號(hào)C07H19/10GK101495497SQ20078002864公開(kāi)日2009年7月29日申請(qǐng)日期2007年7月25日優(yōu)先權(quán)日2006年7月26日發(fā)明者向后悟,大澤和臣,山田浩平,巖井優(yōu)子,早川弘之申請(qǐng)人:Yamasa醬油株式會(huì)社