專利名稱：發(fā)光生物標記的制作方法
發(fā)光生物標記本發(fā)明涉及能夠發(fā)出可檢測的發(fā)光信號的新型化合物，本發(fā)明涉及其在用 于檢測和/或量化物理、化學或生物，尤其是酶促現(xiàn)象的方法中的應用，本發(fā) 明還涉及能夠實施該方法的試劑盒。眾多用于生物化學或細胞生物學中的檢測方法依賴于光信號的產(chǎn)生，例如 熒光信號。因此，描述了多種用于在體外檢測各種酶活性的顯色、熒光或發(fā)光試驗。 這些試驗中的大多數(shù)都依賴于使用供體/受體或供體/淬滅劑對進行熒光共振能量轉移(FRET)或者依賴于使用前熒光體(pro-fluorophore entities)。令人遺憾地，這一適合于體外分析的檢測方法通常證實不能用于體內(nèi)分析。因此，對于體內(nèi)應用，需要提供近紅外激發(fā)。對于不重疊激發(fā)的供體/受 體或供體/淬滅劑對的選擇因此尤其更為有限(Funovics Anal. Bioanal.Chem.， 2003， 377:956-963)?？紤]到不必激發(fā)近紅外區(qū)的熒光供體，已經(jīng)提出了使用生物發(fā)光或化學發(fā) 光化合物，也就是說其發(fā)光產(chǎn)生于化學或生物反應的結尾(Laxman"a/.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 2002， 99:16551-16555)?；瘜W發(fā)光化合物、其制備及其應用已經(jīng)被知曉很長時間了 。這些所謂的"高 能，，分子含有足夠產(chǎn)生電子激發(fā)態(tài)的羰基的能量，這是造成所觀察到的化學發(fā) 光現(xiàn)象的原因。作為化學發(fā)光化合物的代表，可以提及衍生自二氧環(huán)丁烷(dk)xetane)的 化合物和尤其是l， 2-二氧環(huán)丁垸的衍生物。這些化合物是熱不穩(wěn)定的并且可 以在很大的溫度范圍內(nèi)被分解同時發(fā)出光信號。通常，這些化合物具有下述通 式<formula>formula see original document page 9</formula>其中，每個取代基R對應于一烴基，其可選擇地包括一個或多個雜原子， 和兩個相鄰的R基團或一個與Ar-X-W相鄰的R和其它兩個R基團中的一個 或Ar可以相連，X可以表示O、 S或NH和W可以表示可離去基團，在適宜 的時候帶電荷。已經(jīng)合成了多種1， 2-二氧環(huán)丁烷的衍生物，在這些衍生物中，包括在3 位上連接的螺環(huán)金剛垸基的化合物已經(jīng)被用于化學發(fā)光底物。所述衍生物尤其 在文獻WO 96/24849， WO 90/07511和US 5,330,900中進行了描述。這些l， 2-二氧環(huán)丁烷的衍生物可以包括一個酶識別位點和可以被識別該位點的酶所 活化以產(chǎn)生發(fā)光信號。最近，也開發(fā)了其它的二氧環(huán)丁垸衍生物，這在日本專利2002-02038，歐 洲專利1 342 724和美國專利2004/0077018中進行了描述，其中使用各種基團 來穩(wěn)定二氧環(huán)丁垸環(huán)。這些化合物的化學發(fā)光反應的原理是基于在酚鹽官能團和位于苯酚的芳 香環(huán)對位上的拉緊的(strained) 二氧環(huán)丁烷的環(huán)之間的電子交換(C正EL，化 學誘導電子交換發(fā)光)(Matsumoto， J. Photochem. Photobiol. C: Photochem. Rev,, 2004,5:27-53)。包括酚鹽的不穩(wěn)定化合物的產(chǎn)生導致了拉緊的1 ， 2-二氧環(huán)丁 烷基團斷裂，被R取代基所穩(wěn)定，隨后通過CIEEL現(xiàn)象與酚鹽進行電子交換， 導致出現(xiàn)活化酯，其通過發(fā)射發(fā)光信號回到基態(tài)。酚自身以及其羧酸酯是在堿性溶液中產(chǎn)生酚的負氧離子(氧陰離子)所最 常使用的前體。然而，由1， 2-二氧環(huán)丁烷也已經(jīng)合成了此類型的其它衍生物， 其中其氧原子被巰基，胺基或碳所代替(Matsumoto, J. Photochem. Photobiol. C: Photochem, Rev" 2004, 5:27-53; Sabelle ef "/., J Am Chem Soc, 2002, 124(17); 4874-4880; Matsumoto ef al.， Tetrahedron Lett, 2004, 45: 3779-82; WO 96/24849; WO 00/44719)。然而，后面的衍生物具有基本上更低的量子產(chǎn)率并且不能應 用于實踐中。至于本發(fā)明，其針對于提供衍生自l， 2-二氧環(huán)丁烷的新化合物，所述化 合物能夠直接或者通過分子內(nèi)熒光共振能量轉移(FRET)產(chǎn)生能夠穿過生物組織層的厚度而被檢測的發(fā)光信號。本發(fā)明的另一個目的是提供衍生自1， 2-二氧環(huán)丁烷的化合物，其可以被 任何化學、物理或生物現(xiàn)象和尤其是酶活性所活化。因此本發(fā)明具有表達由該 活化所產(chǎn)生的信息的優(yōu)勢，例如表達在酶活性中水解類型的信息，其表達為酚鹽或托布津(thiophenate)的出現(xiàn)，和賦予衍生物與其本來就有的光譜特性不 同的光譜特性。本發(fā)明的另一個目的是提供衍生自1， 2-二氧環(huán)丁烷的化合物，其能夠在 體內(nèi)給藥以便可以被用于醫(yī)學成像方法中。因此，本發(fā)明者出乎意料地發(fā)現(xiàn)了可以將可被物理、化學或生物現(xiàn)象和尤 其是酶活性所活化的活性分支(reactive branch)與諸如前面所述的1， 2-二氧 環(huán)丁烷類骨架相結合，而不會不利于發(fā)射光信號。由于分子內(nèi)重排，根據(jù)本發(fā)明的所述活性分支保證了光信號活化所需的電 子的轉移。因此，根據(jù)本發(fā)明的第一主題，本發(fā)明涉及一種通式(I)化合物S陽B匿A其中-s表示不穩(wěn)定結構，其可以被物理、化學或生物現(xiàn)象所活化，-B是活性分支，其化學結構是使得不穩(wěn)定結構S的活化導致其以適宜的形式分子內(nèi)重排以釋放分子A—;-A是通式(IIa)的生色團O—O ——X—Ar R3其中-符號O表示與B的共價鍵；-a) RP &和R3相互獨立地表示如下所定義的基，例如氫原子、垸基、 烷氧基、芳基、羥基、氧代基團、氨基、甲硅烷基、鹵素原子；b) R2和R3可以形成氧代基團；c) 如下所定義，Ri和R2可以相連以便形成與二氧環(huán)丁烷環(huán)相稠合的環(huán)；d) 如下所定義，R2和R3或者R!和Ar可以相連以便與帶有它們的二氧環(huán)丁烷體的碳形成螺環(huán)；-Ar尤其表示如下所定義的亞芳基，和 -X表示O， NH或S，和本發(fā)明涉及通式(I)化合物的衍生物，例如鹽、酯或者通過將通式(I)化 合物與至少一種意欲用于目的產(chǎn)物的基團進行官能化所獲得的衍生物。 根據(jù)另一個主題，本發(fā)明涉及一種通式(Va)化合物o一o其中-S表示不穩(wěn)定的結構和X、 Ar、 R" R2，、 R3、 115和1^如下所定義。根據(jù)本發(fā)明的另一主題，本發(fā)明涉及一種化合物，其通過將根據(jù)本發(fā)明的 化合物與至少一種結構基團進行官能化而得到，例如所述結構基團有利于以一 特定的細胞或組織為目標。根據(jù)本發(fā)明的還一主題，本發(fā)明涉及至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物在用于 檢測和/或量化物理、化學或生物現(xiàn)象的目的中的應用，其中S表示可以被所 述現(xiàn)象所活化的不穩(wěn)定結構。根據(jù)本發(fā)明的再一個主題，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和尤其是通式(Va)化 合物在制備意欲實施體內(nèi)診斷方法的藥物組合物中的應用。根據(jù)本發(fā)明的再一主題，本發(fā)明涉及用于檢測和/或量化生物體，尤其是 酶的試劑盒，其包括通式(I)化合物，和尤其是通式(Va)化合物，其中S 表示可以被待檢測和/或量化的所述生物體所活化的不穩(wěn)定結構。根據(jù)本發(fā)明的還一主題，本發(fā)明涉及一種用于檢測和/或量化生物體，尤 其是酶的方法，其包括至少下述步驟.--將至少有效量的至少一種通式(I)化合物，和尤其是通式(Va)化合物與假定含有所述生物體的介質相接觸，所述化合物中的S表示可以被待檢測和 /或量化的所述生物體，尤其是酶所活化的不穩(wěn)定結構；禾口 -測量所產(chǎn)生的發(fā)光信號。根據(jù)本發(fā)明的再一主題，本發(fā)明涉及一種尤其是用于醫(yī)療成像目的的體內(nèi) 診斷方法，其包括利用通式(I)化合物，和尤其是通式(Va)化合物檢測和/ 或量化生物體，尤其是酶，所述化合物中的S表示可以被待檢測和/或量化的 所述生物體所活化的不穩(wěn)定結構。定義在本發(fā)明的定義中，短語"烷基"被理解為指含有1 20個碳原子，優(yōu)選2 12個碳原子和更優(yōu)選3 6個碳原子和尤其是4個碳原子的飽和或不飽和，線 性，分支或環(huán)狀，稠合或未稠合的烴類基團，其能夠被下述基團所取代。作為實例，該定義中包括的基團例如甲基、乙基、異丙基、正丁基、叔丁 基、叔丁基甲基、正丙基、戊基、正己基、2-乙基丁基、庚基、辛基、壬基、 癸基、十一烷基、十二烷基、十四烷基、十五垸基、十六烷基、十七垸基、十 八垸基、十九烷基或二十碳(icosanyl)基團。在本發(fā)明的定義中，短語"環(huán)垸基"被理解為指具有4 10個碳原子的烷撐 基環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基或者環(huán)庚基的環(huán)。短語"多環(huán)垸基"被理解為指具有4 20個碳原子，尤其是6 12個碳原子 的多環(huán)烷撐基，其可選擇地被1 10個取代基所取代，所述取代基獨立地選自C, Cu)的烷基，尤其是C2 C6的烷基，C, Cu)的烷氧基，尤其是C2 C6 的垸氧基，Q Cu)的垸基氨基，尤其是C2 C6的烷基氨基，C, C,q的硫代 垸基，尤其是C2 C6的硫代烷基，鹵素原子和d Cu)的鹵代垸基，尤其是 C2 C6的鹵代垸基。作為適于實施本發(fā)明的多環(huán)基團的實例，可以提及金剛垸基或雙環(huán)[2.2.1〗庚基。在本發(fā)明的定義中，短語"烷氧基"被理解為指-OR基團，其中烷基部分是 如上所定義的飽和或不飽和，線性，分支或環(huán)狀的，稠合或不稠合的烴類基團。作為實例，可以提及甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基，正丁氧基，異丁 氧基，仲丁氧基，正戊氧基，異戊氧基，仲戊氧基，叔戊氧基，己氧基，甲氧 基乙氧基，甲氧基丙氧基，乙氧基乙氧基，乙氧基丙氧基等。在本發(fā)明的定義中，短語"?；?被理解為指飽和或不飽和，線性，分支或 環(huán)狀的，稠合或未稠合的烴類基團，其包括CK)官能團和具有1 20個碳原 子，尤其是2 12個碳原子和優(yōu)選3 6個碳原子和更尤其是4個碳原子，例 如甲?；?，乙?；?，琥珀?；郊柞；?，l-萘甲酰基或2-萘甲?；?。前述基團的烴類鏈可以被一個或多個選自O,N和S的雜原子所間斷以形 成例如雜烷基，該雜烷基例如烷基醚，烷基酯基或雜環(huán)。在本發(fā)明的定義中，短語"雜環(huán)基"被理解為是指，例如但不限于，呋喃基， 苯硫基，吡咯基，噁唑基，異噁唑基，噻唑基，異噻唑基，咪唑基，吡唑基， 呋吖基(forazanyl)，吡喃基，吡啶基，pyridadinyl基，嘧啶基或pyradinyl基。 在本發(fā)明的定義中，短語"芳基"被理解為指包括1 5個芳環(huán)的芳環(huán)體系， 其可選擇地稠合，其具有6 30個碳原子，可選擇地6 10個碳原子，可選擇 地包括一個或多個選自0， N和S的雜原子。作為適于實施本發(fā)明的芳基的實例，可以提及苯基，萘基，蒽基和所有包 括一個或多個選自0， N和S的雜原子的芳環(huán)，例如吡啶，噻吩，吡咯，呋喃， 喹啉。在本發(fā)明的定義中，短語"亞芳基"被理解為指如上所定義的二價芳基。 作為可以被用于取代前述基團的取代基的實例，可以提及如上所定義的羥 基、氧代基團、硫代基團、氨基、鹵素原子、烷基、羧基、酰基、酰胺基(amidc) radical)、烷氧基、垸基氨基或二垸基氨基、硫代烷基、鹵代烷基，例如全氟 垸基、烷基甲硅烷基、二烷基甲硅烷基或三烷基甲硅垸基、烷基硅氧基、二烷 基硅氧基或三烷基硅氧基、芳基。在本發(fā)明的定義中，短語"鹵素原子"被理解為指F、 Cl、 Br或I原子。本發(fā)明所使用的鹵素原子有益地是氟或氯。在本發(fā)明的定義中，短語"鹵代烷基"被理解為指被一個或多個如前所定義 的鹵素原子所取代的如前所定義的垸基，和特別地，作為非限制性實例是全氟 甲基。1， 2-二氧環(huán)丁烷衍生物根據(jù)本發(fā)明的化合物具有如下的通式(I):S-B-A和包括其衍生物，例如鹽，酯或帶有結構要素的官能化衍生物，尤其是用于靶 向目的?；钚苑种在根據(jù)本發(fā)明化合物的通式(I)中，B不同于一簡單的化學鍵，和其代 表烴類活性分支，其化學結構是如此的，以使得通過化學、物理或生物現(xiàn)象活 化不穩(wěn)定結構S而引起B(yǎng)以適當?shù)男问竭M行分子內(nèi)重排以釋放分子A;有益地，B表示d Cs，尤其是C2 C6和特別是C3 C4烷基，可選擇地 被C6 d4，尤其是C6 Cu)亞芳基和/或被一個或多個選自O， N和S的雜原子所間斷，和可選擇地被一個或多個如前所定義的取代基所取代，該取代基尤 其選自羥基，氧代基團，氨基，鹵素原子，烷基，烷氧基，羧基，烷基氨基， 二烷基氨基，芳基和芳氧基。有益地，所述垸基包括兩個碳原子。所述亞芳基也可以被一個或多個如前所定義的取代基所取代。根據(jù)一個實施方式的變化，所述亞芳基選自亞苯基或萘基。在亞苯基中， 該基團中兩個鍵的位置可以是鄰位、間位或對位。有益地，其在鄰位上。根據(jù)一個實施方式，活性分支B可以選自--亞芐基；-□-N(CH3)-(CH2)2-N(CH3)-C(O)-0基團，其中口和O分別表示與不穩(wěn)定結構 S和生色團A的共價鍵；或者-由通式(III)所表示的衍生物其中-口和O分別表示與不穩(wěn)定結構S和生色團A的共價鍵；-j是0 2的整數(shù)，和有益地是l;-R4是位于口-(CH2)j-基團的鄰位、間位或對位上的C, C20，尤其是C2 d2和特別是C3 C6的烴類鏈，，在適宜的時候，其被一個或多個雜原子和/或-CO和/或-N (烷基)-基團所間斷和尤其是選自-(012\-0， -(CH2)rC(O)-0，-(^2-0-(:(0)-風013)-(^^2)2->1(0^)-(:(0)-0基團，其中k是i或2，和有益地□——(CH2). R<-&和116相互獨立地是氫原子或者是飽和或不飽和，線性、分支或環(huán)狀的 C! C2Q，尤其是C2 d2和特別是C3 C6的選自烷基、烷氧基、烷基氨基或 二垸基氨基、硫代垸基的烴類鏈，或者是C6 C3Q，尤其是C6 Cu)的選自芳 基、芳氧基、芳基氨基和硫代芳基的芳環(huán)，尤其如前所定義。根據(jù)一個具體實施方式
，取代基Rs和R6相互獨立地選自-氫原子，被如前所定義的一個或多個取代基所取代或者不被取代的、分 支或不分支的C, C6烷基、C2 C6烯基、C3 Q炔基、C3 C6環(huán)垸基，和所 述取代基尤其選自鹵素原子、烷基、烷氧基、諸如芐氧基或芐基的芳基；和-C3 C8 ，尤其是C4 C7環(huán)狀、脂肪族、芳香族或包括一個或多個選自O，N和S的雜原子的雜芳香烴類鏈，其可選擇地被一個或多個如前所定義的取代基所取代和尤其是選自鹵素原子、烷基、烷氧基和芳基，例如芐氧基、芐基、 苯基或萘基。根據(jù)一個具體實施方式
，當R4選自-(CH2)k-C(O)-0和-CH2-O-C(O)-N(CH3)-(CH2)2-N(CH3)-C(O)-0時，R4在口-(CH2)j腸基團的對位上，j = k = 1禾B R5 = & = H。根據(jù)另一個具體實施方式
，R4可以表示-(CH2)k-0，其位于口-(CH2)」-基團的 鄰位，禾^ = 1^=1禾口115 = 1^ = -0-0 3。有益地，活性分支B可以如美國專利6,271,345所定義，其內(nèi)容在此被引入作為參考。根據(jù)一個具體實施方式
，B的分子內(nèi)重排導致內(nèi)酰胺或內(nèi)酯的形成。在根據(jù)本發(fā)明的l， 2-二氧環(huán)丁烷所獲得的化合物的通式(0中，生色團 A由通式(IIa)表示<formula>formula see original document page 15</formula>其巾-符號O表示與B的共價鍵；-a) Rp R2和R3相互獨立地表示氫原子、羥基、氨基、硫基、鹵素原子、 Q C2Q，尤其是C2 d2，和特別是C3 CV烴類鏈，C6 C3。，尤其是C6 do生色團A ——X—Ar的選自芳基和雜芳基的芳環(huán)，其在適宜的時候被取代，所述烴類鏈選自烷氧基、 垸基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、醚基、烯基、炔基、烷基氨基、二烷基氨 基、烷基硅甲烷基，二垸基硅甲垸基或三垸基硅甲垸基、烷基硅氧基，二烷基 硅氧基或三烷基硅氧基、硫代烷基、鹵代烷基； b) R2和R3可以一起形成氧代基團；C) R!和R2可以相連以便形成與二氧環(huán)丁垸環(huán)稠合的C4 Cs環(huán)，適宜的 時候，其被一個或多個選自O， N和S的雜原子所間斷，和可以被一個或多個如前a)所定義的Rp R2和R3基團所取代；d)R2和R3或者R,和Ar可以相連以便與帶有其的二氧環(huán)丁烷體的碳形成 C4 C2()，尤其是C6 d。螺環(huán)；該環(huán)可以是單環(huán)或多環(huán)、飽和或不飽和的、芳 香的、稠合或未稠合的，和在適宜的時候，插入一個或多個選自O， N和S的 雜原子和可選擇地被一個或多個如前a)中所定義的Rp R2和R3基團所取代；-Ar表示C6 C3。，尤其是Q Cu)亞芳基，可選擇地被一個或多個取代基 所取代，所述取代基尤其選自羥基、鹵素原子、氧代基團、氨基、垸基氨基、 二烷基氨基、硫代基團、垸基硅甲烷基，二垸基硅甲烷基或三烷基硅甲烷基、 垸基硅氧基，二烷基硅氧基或三烷基硅氧基、垸基、烷氧基、硫代烷基、羧基、 甲?；③セ?、烷基酮基、鹵代烷基、芳基、芳基酯基、芳基酮基、芳基 氨基、二芳基氨基；和-X可以表示O， NH或S，有益地，X可以表示O。不穩(wěn)定結構S活化和活性分支B的分子內(nèi)重排以后所生成的化合物A'是 不穩(wěn)定的和當利用化學發(fā)光反應發(fā)射光信號時反應。根據(jù)一個具體實施方式
，&可以是熒光基團或垸基，如前所定義，所述 烷基被熒光基團所取代。根據(jù)另一個實施方式，Ar可以被本身是熒光的基團，或者能夠將熒光特 性賦予整個結構的基團或者能夠改變其熒光特性的基團所取代。根據(jù)另一個具體實施方式
，Ar和&和/或R2和R3可以結合以形成環(huán)狀或 多環(huán)或稠合螺環(huán)的烷基，其可以.--或者是在環(huán)上或側鏈上包括至少一個雙鍵或至少一個叁鍵，和可選擇地 包括一個或多個選自O， N和S的雜原子；-或者是被連接到取代或未取代的芳環(huán)上或與該芳環(huán)稠合。當Ar和R,不結合在一起時，Ar可以是芳基，例如苯基，萘基或蒽基，在適宜的時候，被尤其是如前所定義的基團所取代和R,可以如前所定義。在專利申請US 2004/0077018中更詳細地描述了這樣的化合物，本申請引入其內(nèi)容作為參考。根據(jù)另一個實施方式，R2和R3結合在一起以在帶有其的二氧環(huán)丁烷環(huán)螺環(huán)位置的碳上形成金剛垸基基團，在適宜的時候，被尤其如下所定義的Rs和R9基團所取代。根據(jù)另一個實施方式，&和R2可以結合到一起以與二氧環(huán)丁烷環(huán)稠合形 成一個環(huán)，和可選擇地包括一個或多個選自O， N和S的雜原子。有益地， R,和R2形成與二氧環(huán)丁烷稠合的氧代環(huán)戊垸。專利申請EP 1 342 724尤其描 述了這樣的化合物，其內(nèi)容也在此被引入作為參考。根據(jù)另一個實施方式，R!和R2可以結合到一起以形成一個與二氧環(huán)丁烷 稠合的多環(huán)體系。日本專利申請2004-262817描述了這樣的化合物，其內(nèi)容在此被引入作為參考。根據(jù)一個具體實施方式
的變化，生色團A由通式(lib)所表示其中-O表示與B的共價鍵，和-R,是如前所定義。有益地，R!可以選自烷基、熒光基團和被熒光基團取 代的烷基。所述垸基是如前所定義。有益地，R！可以是飽和的或不飽和的、 線性、分支或環(huán)狀的Ci C6烷基或Ci Q烷氧基'可選擇地包括一個或多個 選自O， N和S的雜原子，和可選擇地被取代。R可以被如前所定義的基團所取代。有益地，R^是C! C3烷基或d C3烷氧基，優(yōu)選甲基或甲氧基。-Rs和R9相互獨立地是氫原子或電活性基團； -X表示O， NH或S。有益地，X表示O;和-Ar表示如前所定義的亞芳基，或者通式(IVa)的基團:<formula>formula see original document page 18</formula>其中-A表示與X的共價鍵和*表示與二氧環(huán)丁烷環(huán)的共價鍵。A和+可以位于鄰 位、間位或對位。有益地，^和*可以位于間位的位置。-Rn)表示氫原子，電活性基團或熒光基團。有益地，該電活性基團可以能 夠改變Ar基團的熒光特性以形成，例如垸基硅甲烷基，二烷基硅甲烷基或三 烷基硅甲烷基、N02基團、蒽基、萘基(例如，參見Matsumoto箏，Tetrahedron Lett, 2002, 43: 8955 58)。-Ru選自氫原子或代表芳基，例如C6 Cu)的芳基，其與亞苯基，尤其是 苯基稠合以形成萘。在本發(fā)明的定義中，短語"電活性基團"被理解為指電子受體基團或電子供 體基團。根據(jù)一個具體的變化，生色團A是如此的，以使得基團R8或R9或Ru)中 的至少一個基團是電活性基團，該電活性基團促進根據(jù)本發(fā)明的通式(I)化 合物在水溶液中溶解。作為促進通式(I)化合物在水溶液中溶解的基團的實例，可以提及銨、 膦、锍、羧酸、磺酸、三氟甲基磺?；⒓谆酋；?、氰基和羥基。根據(jù)另一個實施方式，R8和R9相互獨立地是電活性基團，其選自羥基、鹵素原子、氰基、酰胺基、烷氧基、鹵代烷基、苯基、垸氧基苯基。根據(jù)又一個實施方式變化，RH)是氫原子或電活性基團，所述電活性基團 有益地選自鹵素原子，尤其是氯或者氟原子、氰基、硝基、單取代或雙取代酰胺、烷基、垸氧基、三垸基銨基、烷基胺基、烷基氨基甲酰基、酯基、烷基 亞磺酰胺基、三氟甲基、垸基硅甲烷基，二烷基硅甲垸基或三烷基硅甲烷基、 烷基硅氧基，二烷基硅氧基或三烷基硅氧基、烷基胺基磺?；⑼榛酋；⑼榛蛎鸦?、鹵代烷基、C6 Cu)基團，其選自芳氧基、芳氨基、芳基氨基甲?；⒎蓟鶃喕酋０坊?、芳基、雜芳基、三芳基硅甲烷基、烷基芳基硅甲烷基、 三芳基硅氧基、芳基胺基磺?；⒎蓟酋；头蓟蛎鸦?。根據(jù)一個具體實施方式
，有益地，R8， R9和R^是氫原子。根據(jù)另一個具體實施方式
，A或Rm可以是熒光基團以通過分子內(nèi)FRET 改變根據(jù)本發(fā)明的發(fā)光化合物的發(fā)射波長。例如，這些熒光基團可以非限制性地選自苯基及其衍生物、萘及其衍生物 例如5-二甲氨基萘-l-磺酸和羥基萘、蒽及其衍生物例如9， 10-二苯基蒽和9-甲基蒽、芘及其衍生物例如N- (l-芘)碘代乙酰胺和羥基芘、聯(lián)苯基及其衍 生物、吖啶及其衍生物例如羥基吖啶和9-甲基吖啶、香豆素及其衍生物例如 7-二垸基氨基-4-甲基香豆素和4-溴甲基-7-甲氧基香豆素、氧雜蒽及其衍生物、 肽菁及其衍生物、芪及其衍生物例如6， 6'-二溴芪和羥基芪、呋喃及其衍生物、 噁唑及其衍生物、噁二唑及其衍生物、硝基苯并噁二唑及其衍生物例如羥基硝 基苯并噁二唑、苯并噻唑及其衍生物、熒光素及其衍生物例如5-碘代乙酰胺熒 光素和熒光素-5-馬來酰亞胺、羅丹明及其衍生物例如四甲基羅丹明，四乙基 羅丹明和對甲氨基酚、氟硼熒BODIPY及其衍生物，曙紅及其衍生物、赤蘚 紅及其衍生物例如羥基赤蘚紅和5-碘代乙酰胺赤蘚紅、試鹵靈及其衍生物例如 羥基試鹵靈、喹啉及其衍生物例如6-羥基喹啉和6-氨基喹啉、咔唑及其衍生 物例如N-甲基咔唑、熒光花菁及其衍生物羥基花菁、羰花菁及其衍生物例如 苯基羰花菁、吡啶鹽及其衍生物例如4- (4-二垸基二胺苯乙烯基)-N-甲基吡 啶碘酸鹽、鑭系熒光復合體及其衍生物、熒光蛋白例如綠色熒光蛋白(GFP) 和其突變體和量子點。有益地，R,和Rn)可以有益地選自熒光發(fā)光波長為400 900nm的分子， 尤其是500 900nm，和更尤其是600 900nm，例如羅丹明和其衍生物， BODIPY和其衍生物，花菁和其衍生物或者量子點。根據(jù)另一個具體實施方式
，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以是通式(Va):<formula>formula see original document page 20</formula>其中.--S表示不穩(wěn)定結構，和X、 Ar、 Rp R2、 R3、 Rs和R^如前所定義。有益地，R2和R3相連以與帶有其的二氧環(huán)丁垸環(huán)的碳形成金剛烷基螺環(huán)，在適宜的時候，其被如上所定義的基團所取代，尤其被例如Rs和R9的基團所 取代。有益地，Rp Rs和R6是甲氧基。根據(jù)另一個具體實施方式
，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以是通式(Vb):<formula>formula see original document page 20</formula>-S表示不穩(wěn)定結構，和Ar、 R,、 R2、 R3、 R5、 &、 R,q和R,,如前所定義。有益地，R2和R3被稠合以與帶有其的二氧環(huán)丁垸環(huán)的碳形成金剛垸基螺環(huán)，在適宜的時候，其被如上所定義的基團所取代，尤其被例如Rs和R9的基 團所取代。有益地，Rp Rs和R6是甲氧基。其中:有益地，R!g和Ru是氫原子，或者Ru)是氫原子和Rn與亞苯基形成亞萘基。根據(jù)另一個具體實施方式
，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以是通式(VC):其中S表示不穩(wěn)定結構，和Ar、 R" R5、 &、 R8、 R9、 Rc和R^如前所定義。 根據(jù)另一個具體實施方式
，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以由通式(Vc)所表示，其中R「R「Rk)-Ru-H和1^=115 = 1^=-0-<^13。 不穩(wěn)定結構S在根據(jù)本發(fā)明的化合物的通式(I)中，s表示可以被化學、物理或生物現(xiàn)象或生物體所活化的不穩(wěn)定結構。短語"物理現(xiàn)象"在本發(fā)明的定義中被理解為表示諸如溫度變化或壓力變化。短語"化學現(xiàn)象"在本發(fā)明的定義中被理解為表示涉及改變環(huán)境的化學特性的化學個體的現(xiàn)象，例如，通過增加或減少質子的pH改變，通過增加或減 少鹽含量的鹽度改變，氧化還原電勢的變化，化學基團的出現(xiàn)或消失，例如，諸如r， ^的離子和諸如<^2+的堿土金屬離子。當s表示可以被化學現(xiàn)象所活化的不穩(wěn)定結構時，有益地，s可以是例如銨、酰胺、胺、酯、二氫化硅(silylane)、硫醇、氨基甲酸酯或者碳酸根。 短語"生物現(xiàn)象"在本發(fā)明的定義中被理解為表示涉及生物體活動的現(xiàn)象，例如，以諸如水解形式轉移氨基的酶促活動或者異構化作用。因此，在利用生物現(xiàn)象活化根據(jù)本發(fā)明的化合物時，化合物受到生物體的作用。作為說明能夠活化根據(jù)本發(fā)明的化合物的生物體，非限制性地可以提及酶，核酶和抗體酶。作為能夠活化根據(jù)本發(fā)明的化合物的酶的實例，可以提及轉移酶，例如轉 氨酶；水解酶，例如酯酶(例如堿性磷酸脂酶)，葡糖苷酶，蛋白酶(例如胰蛋白酶，金屬蛋白酶或caspase酶)；異構酶。當S是可以被生物體所活化的結構時，有益地，S可以是通式(VI):P-L-口其中-口表示與B的共價鍵；-P表示可以被所述生物體識別的底物；和-L表示氧、硫、硝基基團、羰基或-CO-Q-官能團，其Q是O、 S或NH。根據(jù)一個實施方式，S可以表示在酶的作用，和尤其是在水解酶的作用下 導致的不穩(wěn)定結構。有益地，當S表示在蛋白酶類水解酶作用下的不穩(wěn)定結構時，L表示 -CO-Q，其中Q是NH，禾卩P表示被蛋白酶識別的底物，例如肽或者假肽 (pseudopeptide)歹戈基。作為可能適于實施本發(fā)明的蛋白酶的實例，非限制性地可以提及例如la caspase-3的caspase酶、?；孵；拿?、氨基肽酶M、青霉素G?；浮⑹?熱菌蛋白酶、組織蛋白酶B， G， L、金屬蛋白酶、彈性蛋白酶、枯草桿菌蛋 白酶、纖溶酶原激活劑和尿激酶。根據(jù)一個實施方式，當P是肽殘基時，其包括至少兩個氨基酸殘基，尤其 是至少四個，尤其是至少六個和更尤其是至少八個氨基酸殘基。這些氨基酸可以是天然的或者合成的L構型或D構型。這些肽可以通過化學合成或者根據(jù)本領域技術人員的常規(guī)分子生物學方 法獲得。作為適宜實施本發(fā)明的肽殘基的實例，可以提及DEVD四肽序列(按單 字母密碼書寫氨基酸)其選擇性地被caspase-3從天冬氨酸殘基上水解下來。根據(jù)另一個實施方式變化，S可以表示在酯酶類水解酶作用下的不穩(wěn)定結 構，例如羧酸酯酶，磷酸脂酶或脂肪酶。在此情況下，L可以表示-CO-Q，其中Q是O和P表示被酯酶或者葡糖 苷酶類酶所識別的碳類殘基(烷基鏈類型以便P-L組裝形成羧酸殘基，尤其是脂肪酸基團)，或者是被磷酸酶類酶識別的磷酸基團。 當P是磷酸基團時，其可以是通式(VII):<formula>formula see original document page 23</formula>其中M+表示諸如堿金屬的陽離子，例如Na+或K+，銨，或者季銨陽離子 N(R)4+，其中每個R可以是d C2烷基，芳基烷基，例如芐基，或者形成雜 環(huán)的一部分，例如吡啶環(huán)。有益地，這樣的結構被堿性磷酸脂酶所水解。根據(jù)另一個實施方式變化，S可以表示在葡糖苷酶類酶作用下的不穩(wěn)定結構。在此情況下，L可以有益地是氧原子和P表示被葡糖苷酶所識別的底物， 例如糖。作為可能適宜實施本發(fā)明的糖的實例，可以提及a-Z)-或j3-D-半乳糖苷， a-Z)-或P-D-葡萄糖苷，a-D-或(3-D-甘露糖苷和a-D-或卩-D-呋喃果糖苷。根據(jù)另一個實施方式，S可以表示在轉氨酶作用下的不穩(wěn)定結構。在此情況下，L可以表示羰基和P可以表示被酶所識別的底物，所述酶非 限制性地例如丙氨酸轉氨酶或者天冬氨酸轉氨酶。靶向根據(jù)一個實施方式，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以在不穩(wěn)定結構S上另外包括 靶結構D。因此，化合物可以是下述通式(VII):D-S-B-A其中-D表示靶結構；和-S， B和A如前所定義。耙結構D或者配體是可以被識別或者優(yōu)選地結合到表達一個特定細胞分 子的細胞上的成分，例如和不限于受體，酶，結構蛋白，糖蛋白，糖，脂肪或 磷脂。有益地，所述細胞分子是膜分子，優(yōu)選其結構的一部分位于細胞外基質。根據(jù)一個實施方式，所述細胞分子可以是細胞或者細胞周圍組織或者包括該細胞的器官的生理學或病理學狀態(tài)所特異的。因此，并且非限制地，該細胞 分子可以是細胞的生長狀態(tài)、細胞周期的位置、細胞或組織的免疫應答、細胞 凋亡或者組織變性所特異的。短語"識別或者優(yōu)選地結合到"針對于表示靶結構D具有對被考慮的所述 細胞或組織的特別親和性，即使不能徹底排除靶結構D在體內(nèi)或體外與其它 細胞或其它組織的非特異或者不主要地結合。然而，所述的優(yōu)選結合使得可以 將根據(jù)本發(fā)明的化合物靶向目的位點，減少根據(jù)本發(fā)明的化合物分散到非目的 組織和/或細胞中。因此，例如并且非限制性地，靶結構D可以選自凝集素，識別存在于細胞表面的諸如蛋白，糖或脂分子的抗體或其片段；細胞受體配體例如，諸如神 經(jīng)肽Y的肽，諸如腎上腺素的兒茶酚胺，諸如卩-腎上腺素受體拮抗劑(例如 心得安)的拮抗劑，生長因子，氨基酸或其衍生物例如，谷氨酸，細胞因子例 如白介素，干擾素或TNF，激素，維生素，載脂蛋白或膽固醇；能夠與膜脂 或磷脂相互作用的配體，例如膜聯(lián)蛋白；能夠與存在于細胞表面的糖相互作用 的配體。短語"細胞受體"被理解為指任何能夠從細胞外向細胞內(nèi)傳感信息的細胞 分子。對于本領域的技術人員的常識，確定適用于所需靶向的結構D的性質是 個問題，在適宜的時候，通過使用本領域常規(guī)使用的檢測方法。根據(jù)一個實施方式，靶結構D可以是諸如多肽的配體，其能夠結合到以 特有或特異方式存在于特定組織或存在于病理中的細胞表面。靶結構D也可以結合到腫瘤細胞表面或者存在于腫瘤組織中的細胞表面，或者結合到存在于炎性組織中的細胞表面。例如，耙結構D可以結合到參與細胞凋亡過程的細胞表面，在其表面暴 露有負電脂質，例如磷脂酰絲氨酸。根據(jù)一個實施方式的變化，靶結構D可以是蛋白或者例如肽或多肽或假 肽的蛋白片段。在能夠與暴露負電脂質的膜相結合的蛋白質中，非限制性地可以提及膜聯(lián)蛋白家族，包括ci或C2結構域的蛋白家族，例如凝血因子v和vm，包括PH結構域或FYVE結構域的蛋白家族，或者包括與卩2-糖蛋白-I ((3GP-I)的結構域5相同或者同源的結構域的蛋白。這些蛋白或由其序列得到的這些結構 域可以在根據(jù)本發(fā)明的化合物中被用于耙結構。根據(jù)另一個實施方式， 一種或多種通式(I)化合物可以被固定到耙結構 D中以尤其增加所發(fā)射信號的強度。因此，至少一種，尤其是至少兩種，尤其是至少三種，尤其是至少四種，和尤其是至少五種的通式S-B-A化合物可以被固定到耙分子D上。檢測方法如前所說明，本發(fā)明的另一個主題是至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物在為了檢測和/或量化如前所述的化學，物理或生物現(xiàn)象的目的中的應用，其中s表示可以被所述現(xiàn)象所活化的不穩(wěn)定結構。有益地，在該用途中所實施的根據(jù)本發(fā)明的化合物可以是如上所定義的通式(Va)或(Vb)。特別地，本發(fā)明也針對于提供一種用于檢測和/或量化生物體的方法。 根據(jù)本發(fā)明的方法包括至少下述步驟將至少有效量的至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物與假定含有所述生物體的介質相互作用，并測量所產(chǎn)生的發(fā)光信號，所述化合物尤其是通式(Va)或(Vb)化合物，其中S表示可以被待檢測和/或量化的所述生物體所活化的不穩(wěn)定結構。根據(jù)本發(fā)明的方法可以在體外，間接體外或體內(nèi)進行。 當將能夠在其中發(fā)生化學，物理或生物現(xiàn)象的介質與有效量的至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物混合，所述化合物的實體S表示可以被所述現(xiàn)象所活化的不穩(wěn)定結構，在適于完成所述現(xiàn)象的條件下，結構S的活化導致發(fā)光信號的發(fā)射。 通過檢測是否存在發(fā)光信號，可以證明是否存在所述現(xiàn)象和通過檢測信號的強度，也可以測定該現(xiàn)象的程度。根據(jù)一個具體實施方式
，待檢測/量化的生物現(xiàn)象可以是生物體的活性，尤其是酶。在一個具體實施中，不穩(wěn)定結構S表示被所述酶識別的底物。在適于酶的 反應性的條件下，該酶在底物S上的作用，尤其是在通式(II)的L基團上的作用導致發(fā)光信號的發(fā)射。因此，例如，在本文的水解酶中，在適于酶的反應性的條件下，可酶解的水解基團，尤其是在通式(II)中由L所表示的基團的水解導致發(fā)光信號的發(fā) 射。通過檢測是否存在發(fā)光信號，可以證明是否存在所述酶和通過檢測信號的 強度，也可以測定其濃度和/或動力學特性。有益地，適于實施根據(jù)本發(fā)明的方法的介質可以是以生物液體樣品形式的 合成或天然生物介質。有益地，可以在體外，或者當適宜的時候，間接在體外與根據(jù)本發(fā)明的化合物一起使用至少一種光放大物(light amplifier),其能夠增強由根據(jù)本發(fā)明 的化合物降解所產(chǎn)生的光信號。 這樣的化合物都己經(jīng)被知曉。作為這些放大物的實例，可以提及熒光素，牛血清白蛋白，人血清白蛋白， 聚季鑰鹽，例如聚(乙烯基芐基三甲基)氯化銨(TMQ)，聚(乙烯基芐基三 丁基)氯化銨(TBQ) (Sapphire-IITM)，聚(乙烯基芐基二甲基)氯化銨(BDMQ) (Sapphire-ITM)，聚(乙烯基芐基三丁基)氯化膦，聚(乙烯基芐基三丁基)氯 化锍，聚(芐基二甲基乙烯基芐基)氯化銨，熒光素的鈉鹽(EmeraldTM)，聚 (芐基三丁基)銨和熒光素的鈉鹽(EmemldIITM)。當在體外進行根據(jù)本發(fā)明的方法時，可以使用本領域技術人員常規(guī)使用的 任何儀器檢測熒光信號。例如，可選擇地在培育一段時間后，將與根據(jù)本發(fā)明的化合物相接觸的樣 品進行一分析方法，該方法包括或不包括諸如通過色譜層析(例如，高效液相 色譜，HPLC)分離組成樣品的分子的步驟和對分離步驟中的不同流分進行光 譜分析(例如，通過紫外光譜儀)的步驟。對根據(jù)本發(fā)明的化合物特異的譜圖 信號(例如，色譜峰的高度和表面積)的檢測和測量可以與待檢測現(xiàn)象的存在 和/或強度慮相關，例如酶的存在、量和/或動力學活性。有益地，根據(jù)本發(fā)明的方法和用途也可以在體內(nèi)進行。首先可以將根據(jù)本發(fā)明的化合物給予一活生物體，例如動物或人，然后可 以根據(jù)在此領域中通常使用的方法對熒光信號進行體內(nèi)檢測。有益地，根據(jù)本發(fā)明的用途在體內(nèi)的實施使得可以建立易感組織或器官的 圖像，在其中能夠發(fā)生所述待檢測/量化的現(xiàn)象。根據(jù)一個具體實施方式
，可以建立能夠表示待檢測和/或量化的生物體的組織或器官的圖像，和尤其是酶。因此，根據(jù)一個具體實施方式
，可以在醫(yī)學成像方法中實施根據(jù)本發(fā)明的 方法。根據(jù)另一個實施方式，根據(jù)本發(fā)明的方法是體內(nèi)診斷方法，其包括利用通 式(Va)或(Vb)的化合物檢測和/或量化生物體，尤其是酶，其中S表示可 以被所述待檢測和/或量化的生物體所活化的不穩(wěn)定結構。例如且非限制性地，根據(jù)本發(fā)明的方法可以應用于人類或動物的醫(yī)療，實 驗，臨床或臨床前診斷目的，所述動物例如實驗室動物或者農(nóng)業(yè)上使用的動物， 例如大鼠，小鼠，豚鼠，非人的靈長類動物，或豬。根據(jù)一個具體實施方式
，能夠被根據(jù)本發(fā)明的方法所檢測和/或量化的生 物體可以是酶，其尤其和非限制性地選自轉氨酶或水解酶，例如酯酶，蛋白酶 或葡萄糖苷酶。根據(jù)另一個實施方式，當待檢測和/或待量化的酶是蛋白酶時，非限制性地，其有益地選自caspase、青霉素酶、羧肽酶、胰蛋白酶、?；孵ｋ拿?、 氨基肽酶、組織蛋白酶、金屬蛋白酶、彈性蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、嗜熱菌 蛋白酶、纖溶酶原激活劑、尿激酶和異構酶。在體內(nèi)實施的范圍內(nèi)，可以形成根據(jù)本發(fā)明的化合物以便適合于口服或胃 腸外，尤其是靜脈、動脈、心內(nèi)、側腦室、腹腔或瘤內(nèi)給藥，或者肺，鼻，眼 和可選擇地直腸，陰道或局部給藥。根據(jù)本發(fā)明的化合物因此可以被用于制劑，所述制劑適合于待進行的檢測 方法和適合于所選擇的給藥途徑。例如，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以制備成片劑，膠囊或者濃縮或非濃縮的溶 液形式。該溶液可以有益地是無菌的。根據(jù)一個具體實施方式
，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以是固體形式，例如是粉 末形式，和在其給藥前可以有益地被制備成無菌水溶液。因此，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明尤其是通式(Va) 或(Vb)的化合物在生產(chǎn)意欲實施體內(nèi)診斷方法的藥物組合物中的應用，尤 其是醫(yī)學成像方法。因此，根據(jù)本發(fā)明的又一個方面，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，所述藥 物組合物包括至少有效量的至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物，尤其是通式(Va)或(Vb)。有益地，根據(jù)本發(fā)明的化合物在制備藥物組合物中的用途可以衍生物的形 式發(fā)生，例如藥學上可接受的鹽或酯。因此，本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的化合 物的鹽或酯。作為根據(jù)本發(fā)明的化合物的酯的實例，可以提及根據(jù)本發(fā)明的化合物的琥珀酸酯，半琥珀酸酯(hemisuccinate)，蘋果酸酯，酒石酸酯或者乙 醇酸酯。作為根據(jù)本發(fā)明的化合物的鹽的實例，可以提及根據(jù)本發(fā)明的化合物 的硫酸鹽，磷酸鹽，鈉鹽或鈣鹽。對適宜的有效量的化合物或者在根據(jù)本發(fā)明的方法或用途中要使用的根 據(jù)本發(fā)明的化合物的調節(jié)取決于待檢測/量化的現(xiàn)象，或實體(化學，物理或 生物現(xiàn)象)和取決于根據(jù)本發(fā)明的方法所進行的環(huán)境(體外，間接體外或體內(nèi))。在體內(nèi)，該有效量的調節(jié)也取決于根據(jù)本發(fā)明的方法要實施的個體的尺寸 和重量或者取決于根據(jù)本發(fā)明的用途所進行的對象，和也取決于目標器官或組 織?？梢岳帽绢I域技術人員常規(guī)使用的任何方法進行該調節(jié)。 在本發(fā)明的定義中，短語"有效量"被理解為指獲得所需效果(即化學、物理或生物現(xiàn)象或者生物實體的檢測和/或量化)的必需和足夠量。根據(jù)另一個具體實施方式
，本發(fā)明涉及通過產(chǎn)生發(fā)光信號檢測和/或量化化學，物理或生物現(xiàn)象的試劑盒，所述試劑盒包括至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物，其中S表示可以被待檢測和/或量化的所述物理，化學或生物現(xiàn)象所活化的不穩(wěn)定結構。根據(jù)一個具體實施方式
，本發(fā)明涉及一種用于檢測和/或量化生物體，尤 其是酶的試劑盒，其包括根據(jù)本發(fā)明的化合物，和尤其是通式(Va)或(Vb) 的化合物，其中S表示可以被待檢測和/或量化的所述生物體所活化的不穩(wěn)定 結構。根據(jù)一個具體實施，根據(jù)本發(fā)明的試劑盒也可以包括至少一種如前所定義 的光放大物。通過下述實施例將更好的理解本發(fā)明。給出這些實施例以說明本發(fā)明和其不能被解釋為限制本發(fā)明的范圍。 實驗部分利用高效液相色譜(HPLC)進行分離使用幾種色譜體系進行分析實驗和純化步驟-體系A:在三乙胺醋酸緩沖液和乙腈(TEAA 100 mm, pH 7.0) [75% TEAA (2min)，然后乙腈從線性梯度25 100% (30min)]中，以流速為1.0 ml/min 進行反相HPLC (CI8， HYPERSIL GOLD， 54.6 x 150)。在254和285 nm進行雙UV檢測。-體系B..在軟化水和乙腈的混合物[75%水(5min)，然后乙腈從線性梯 度25 55% (15min)和從55 90% (70min) j中，以流速為5.0 ml/min進行 反相HPLC (C18，NUCLEOSIL, 5p， 10 x 250)。在260nm進行UV檢測。-體系C:在三乙胺醋酸緩沖液和乙腈(TEAA 100 mm, pH 7.0) [90% TEAA (2min)然后乙腈從線性梯度10 90% (40min)]中，以流速為1.0 ml/min 反相HPLC (C18， HYPERSIL GOLD, 5 p， 4.6 x 150)。在254和285 nm進行雙 UV檢測。實施例l:活性分支4， 5-二甲氧基-2-[(苯乙酰胺)甲基苯乙酸(7)的合成邊攪拌邊將精細粉末化的氫氧化鉀(2 g， 36 mmol)加入到苯乙腈13(2 ml， 17mmo1)的叔丁醇溶液(20ml)中。將反應混合物回流45min，然后冷卻到 室溫并倒入氯化鈉溶液(50 ml)中。用氯仿(CHC13)萃取產(chǎn)物。有機相用 MgS04干燥和減壓濃縮以得到白色粉末狀的苯乙酰胺12 (2.1 g， 94%)。 M.p. =152°C. !HNMR (CDC13， 300 MHz) 5 7.40 7,10 (m， 5H)， 5.88和5.39 (brs， NH2)， 3.50 (s, 2H)。 13C畫R (CDC13， 75 MHz) 5 173.8， 134.9， 129.5， 129.1， 127.5， 43.4。將苯乙酰胺12 (2g， 15mmol)的碳酸鉀(4%， 2ml， 0.6mmol)溶液 和甲醛水溶液(37%， 2ml， 20mmol)的混合物回流15min (直到徹底溶解)。 將混合物冷卻和用CH2C12 (2 x 30 ml)萃取。合并的有機相用MgS04干燥和減壓濃縮以得到粗產(chǎn)物(1.35 g)，在甲苯中重結晶得到白色粉末狀的N-羥甲基苯乙酰胺ll(Ug，44。/。)。M.p.78。C。 'HNMR (CDC13, 300 MHz) 5 7.50 7.20 (m， 5H)， 6.48 (brs， NH)， 4.69 (t， J二7.0Hz， 2H)， 3.67 (t， J:7Hz， OH)， 3.60 (s， 2H)。 13CNMR(CDC13， 75 MHz) 5 172.9， 134.4， 129.5， 129.0， 127.5， 64.2， 43.6。將高香草酸IO (2g， llmmol)和硫酸(500 ml， 9,4mmol)的甲醇(100 ml)溶液回流3小時。冷卻后，向反應混合物中加入碳酸氫鈉溶液。用CH2C12(2 x 50 ml)萃取產(chǎn)物。合并的有機相用MgS04干燥和減壓濃縮以得到無色 油狀的4-羥基-3-甲氧基苯乙酸甲酯9(2g， 94。/q"HNMR (CDC13， 300MHz) S7,00 6.70 (m， 3H)， 5.82 (brs， OH)， 3.87 (s， 3H)， 3.70 (s， 3H)， 3.56(s， 2H)。 13CNMR (CDC13， 75M他)S 172,6， 146.6， 144.8， 125.7， 122.1， 114.5， 111.8， 55.9， 52.1， 40.8。將碳酸銫(6.6 g， 20.2mmol)和硫酸二甲酯(2ml， 21 mmol)加入到4-羥基-3-甲氧基苯乙酸甲酯9 (2g， 10.2mmo1)的無水DMF溶液(80 ml)中。 將此反應混合物在90。C加熱3小時。冷卻后，向混合物中加入水(20 ml)并 用二乙醚(2x50 ml)萃取產(chǎn)物。合并的有機相用NaCl溶液(20 ml)清洗，用MgS04干燥和減壓濃縮。使用環(huán)己垸/乙酸乙酯(1/1)作為洗脫混合物在硅膠上進行色譜層析得到無色 油狀的2- (3， 4-二甲氧基苯基)乙酸甲酯8 (1.7g， 80%)。 ^NMR (CDC13, 300 MHz) 5 6.80 6.50 (m， 3H)， 3.71 (s， 3H)， 3.69 (s， 3H)， 3.40 (s， 2H)。 13CNMR(CDC13， 75 MHz) 5 172.2， 148.8， 148.0， 126.4， 121.3， 112.3， 111.1， 55.8， 55.7， 51.9， 40.6。將預冷卻的乙酸(20ml)和硫酸(730 ^1， 14mmol)加入到N-羥甲基苯 乙酰胺11和2- (3， 4-二甲氧基苯基)乙酸甲酯8 (1.5 g， 7.2mmol)的混合 物中。在0。C攪拌懸浮液2小時然后在室溫攪拌12小時。在0。C用5M氫氧 化鈉溶液中和反應混合物。用乙酸乙酯(2x30 ml)提取產(chǎn)物。合并的有機相 用MgS04干燥和濃縮以得到無色油狀可結晶的4， 5-二甲氧基-2-[(苯乙酰胺) 甲基]-苯乙酸甲酯6(2g， 78%)。 [M.p.= 118。C。 'H畫R(CDCl3， 300 MHz) 5 7.40 7.15 (m， 5H)， 6.68 (s， 1H)， 6.59 (s， 1H)， 6.24 (brs， NH)， 4.28 (d， J-5.6Hz， 2H)， 3.76 (s， 3H), 3.71 (s， 3H), 3.57 (s， 3H)， 3.51(s, 2H)， 3.47 (s， 2H)。 13C NMR (CDC13， 75 MHz) 5 172.8， 170.8， 148.4 (2C)， 135.0, 129.7 (2C)， 129.2， 127.5 (2C)， 124.9， 113.8， 113.2， 56.3 (2C)， 52.7， 44.2， 41.7， 38.3。 IR (CHC13) 3017， 1732， 1660， 1520， 1466， 1275。分析計算C2。H23N05: C = 67.21， H = 6.49和N-3.92。分析測量C = 66.88， H = 6.56， N = 3.97。將氫氧化鋰溶液(0.5 M， 56 ml, 28mmol)加入到4， 5-二甲氧基-2-[(苯 乙酰胺)甲基]-苯乙酸甲酯6 (2g， 5.6mmol)的甲醇溶液(50ml)中。在室 溫攪拌混合物12小時，然后用HC1 (2N)溶液中和并觀察到產(chǎn)物的沉淀。過 濾得到白色粉末狀的4， 5-二甲氧基-2-[(苯乙酰胺)甲基]-苯乙酸7 (1.5 g， 78%)。
M.p. = 186。C。 iHNMR ((CD3) 2SO， 300MHz) 5 8.40 (brs， 1H)， 7.30 7.20 (m， 6H)， 6.80 (s， 1H)， 6.73 (s， 1H)， 4.18 (d， ^5.6Hz， 2H)， 3.70 (s， 3H)， 3.59 (s， 3H)， 3.55 (s， 2H)， 3.44 (s， 2H)。 13C畫R ((CD3) 2SO， 75MHz) S 172.8， 170.0， 147.4， 147.3， 136.6， 129.9， 129.0 (2C)， 128.3 (2C)， 126.4， 125.2， 114.6， 111.9， 55.6， 55.4， 42.5， 39.6， 37.5。分析計算C19H21N05: C = 66.46， H = 6.16和N = 4.08。分析測量C = 66.52， H= 5.92 andN = 4.06。 實施例2: 二氧環(huán)丁烷前體2-[l- (3-羥基)苯基)-1甲氧基亞甲基1三環(huán)[3.3.1.13' 7癸烷(3a)的合成將叔-丁基二甲基氯化硅垸(2.7 g， 18 mmol)加入到3-羥基苯甲酸甲酯 4a (2.3 g， 15 mmol)和咪唑(2.6 g， 37.5 mmol)的無水DMF溶液中。在氬 氣環(huán)境下，于室溫攪拌反應混合物14小時。用水(20ml)稀釋混合物和用正 戊烷(2 x20 ml)提取產(chǎn)物。合并的有機相用MgS04干燥和減壓濃縮。使用 環(huán)己烷/乙酸乙酯(v/v: 95/5)作為洗脫混合物在硅膠上進行色譜層析得到3-(叔-丁基二甲基硅氧基)苯甲酸甲酯4b (3.7 g， 93%)。 ^NMR (CDC13，300 MHz) 5 7.42 (d， J-8Hz， 1H)， 7.28 (t， 《/=2Hz， 1H)， 7.07 (t， = 8Hz， 1H)， 6.81 (dd， J=8Hz， 2 Hz， 1H)， 3.68 (s， 3H)， 0.78 (s， 9H)， 0.1 (s， 6H)。 13CNMR(CDC13， 75 MHz) S 166.9， 155.8， 131.6， 129.4， 124.9， 122.7， 121.1， 52.2， 25.7， 18.2， -4.4。在0。C下，將LiAlEU (800 mg)緩慢加入到TiCl3 (THF) 3 (16.5 g， 44.6 mmol)的無水THF(15ml)的懸浮液中。在0。C10分鐘后，加入三乙胺(3.5 ml) 和將混合物回流l小時。向混合物中滴加2-金剛垸酮5 (822mg， 5.47mmo1) 和預先制備的苯甲酸甲酯4b (1.2g， 444.50 mmol)的無水THF溶液(10 ml)。 將反應混合物回流3小時。在0°C向混合物中小心加入水，然后將其用二乙醚 稀釋。用飽和的NaCl溶液洗滌有機相，然后用MgS04干燥和減壓濃縮。使用 環(huán)己烷/EtOAc (v/v: 99/1)作為洗脫混合物在硅膠上進行色譜層析可以得到無 色油形式的2-[l-(3-叔-丁基二甲基硅氧基)苯蜀-l-甲氧基-亞甲基]三環(huán)[3.3丄l] 癸烷3b (796 mg， 66%)。 'H畫R (CDC13， 300 MHz) 5 7.09 (t， 1H)， 6.81 (d， 1H)， 6.70 (m， 2H)， 3.20 (s， 3H)， 3.14 (brs， 1H)， 2.54 (brs， 1H)， 1.87 1.67 (m， 12H)， 0.91 (s， 9H)， 0.14 (s， 6H)。 13CNMR (CDC13， 75 MHz) 5 155.5， 143.6， 136.9， 131.2， 129.0， 122.6， 121.2， 119.5， 57.6， 39.3， 39.2， 38.9， 37.4， 32.9， 30.5， 25.8， 18.3， -4.70。將"-Bu4NF的THF溶液(2.1 ml， 2.1 mmol， l崖)加入到2-[l- (3-叔-丁基二甲基硅氧基)苯基]-l-甲氧基亞甲基]三環(huán)[3,3丄l"癸烷3b (740 mg， 1.91mmol)的干燥THF溶液(12ml)中。在室溫攪拌該反應混合物15min。 用二乙醚(30ml)稀釋混合物和用NaCl飽和溶液洗滌。用MgS04干燥有機 相和減壓濃縮以獲得作為粗產(chǎn)物的黃色油狀物2-[1- (3-羥基)苯基]-l-甲氧基 亞甲基]三環(huán)[3.3丄l"〗癸烷3a。 'HNMR(CDC13， 300 MHz) 5 7.19 6.67 (m， 4H)， 3.67 (s， 3H)， 3.30 (brs， 1H)， 3.1 (brs， 1H)， 2.50 (brs， 2H)， 1.87 1.64 (m，麗)。實施例3: 二氧環(huán)丁烷根據(jù)本發(fā)明的化學發(fā)光衍生物(1)的合成將2-[1-(3-羥基)苯基]-1-甲氧基亞甲基]三環(huán)[3.3丄13'7]癸烷3a(520 mg)， 三乙胺(800 ^1)和苯并三唑-l-基-氧基三(二甲胺)膦六氟磷酸鹽(BOP)(950 mg)加入到4， 5-二甲氧基-2-[(苯乙酰胺)甲基]-苯乙酸7 (656 mg， 1.91 mmol)的無水DMF溶液(10 ml)中。在室溫攪拌反應混合物6小時。 真空下濃縮該混合物。使用環(huán)己烷/EtOAc (v/v: 40/60)作為洗脫液在硅膠上 進行色譜層析得到白色粉末狀的[4， 5-二甲氧基-2-(苯乙酰胺甲基)苯基]-乙 酸的3-(金剛垸基-2-烯基-甲氧基甲基)苯基烯醇酯的醚2 (the ether of 3畫(adamantan-2-ylidenemethoxymethyl)phenyl enol ester of [4,5-dimethoxy-2-(phenylacetylaminomethyl)phenyl]acetic acid) (606 mg， 53%)。 M,p. 95°C。 'H NMR (CDC13， 300 MHz) 5 7.21 (t， J=7.9Hz， 1H)， 7.15 7.00 (m， 6H)， 6.91 (t， 《/=2.3Hz， IH)， 6.84 (ddd， /-7.9 Hz, 2,3 Hz, 0.8 Hz, IH)， 6.80(s， IH)， 6.77 (s， IH)， 4,44 (d， /= 5.3 Hz， 2H)， 3.88 (s， 3H)， 3.85 (s， 2H)' 3.81 (s' 3H)， 3.53 (s， 2H)， 3.30 (s， 3H)， 3.25 (br s， 1H)， 2.66(brs， 1H)， 1.90 1.55 (m， 12H)。 13C NMR (CDC13， 75 MHz) 5 150.6， 148.6， 148,5， 142.6， 137.3， 134.9， 132.9， 129.4， 129.1， 128.9， 127.3， 127.1， 124.1, 122.1， 120.4， 113.5， 112.9， 58.0， 56.1， 56.0， 43.9， 41.4， 39.3， 39.1， 38.3， 37.2， 32.2， 30.3， 28.3。 M.S. (Maldi-Tof，正離子模式)m/z 634.27 [M+K]十， 618.30 [M+Na]+.分析計算C37H41N06: C = 74.60， H=6.94和N = 2.35。分析 測量C-74.25， H = 7.09和N = 2.41。向冷卻(匿78。C)的9ml新鮮蒸餾的亞磷酸三苯酯(37^1， 0.14 mmol)的無水CH2Cl2溶液中噴灑臭氧直到出現(xiàn)淺藍色。然后用氬氣凈化反應介質直到藍色消失。在-78。C加入溶解于lml無水CH2C12的前述合成的烯醇2的醚(21 mg， 0.035 mmol)。在-30。C將所獲得的反應混合物攪拌1.5小時和加熱到室溫持續(xù)2小時。進行對照HPLC以后(體系A)，蒸發(fā)反應混合物至千燥。使用半制備HPLC (體系B)純化所獲得的油狀殘余物。將含有產(chǎn)物(保留時間 TR = 48 50min)的流分部分蒸餾，然后冷凍干燥以獲得白色粉末狀的二氧環(huán) 丁烷l (大約lmg，產(chǎn)率5%)。 HPLC (體系C)， TR23.8min。 UV (在HPLC 分析中所記錄)U 235和281 nm。 MS (ESI，正離子木試)m/z 650.0 (M+Na) + (所計算的分子量:(:37，08為627.74)。
權利要求
1. 一種通式(I)的化合物S-B-A其中-S表示不穩(wěn)定結構，其可以被化學或生物體所活化，-B是活性分支，其化學結構是使得不穩(wěn)定結構S的活化導致其以適宜的形式分子內(nèi)重排以釋放分子A-；和-A是通式(IIa)的生色團id="icf0001" file="A2006800273080002C1.gif" wi="38" he="14" top= "85" left = "88" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中-符號◇表示與B的共價鍵；a)R1，R2和R3相互獨立地表示氫原子、羥基、氨基、硫代基團、鹵素原子、C1～C20，尤其是C2～C12，和特別是C3～C6烴類鏈，C6～C30，尤其是C6～C10的芳環(huán)，所述芳環(huán)選自芳基、雜芳基、芳烷基，其在適宜的時候被取代，所述烴類鏈選自烷基、烷氧基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、醚基、烯基、炔基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基甲硅烷基，二烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷基、烷基硅氧基，二烷基硅氧基或三烷基硅氧基、硫代烷基、鹵代烷基；b)R2和R3可以一起形成氧代基團；c)R1和R2可以相連以便形成與二氧環(huán)丁烷環(huán)稠合的C4～C8環(huán)，適宜的時候，其被一個或多個選自O，N和S的雜原子所間斷，和可以被一個或多個如前a)所定義的R1，R2和R3基團所取代；d)R2和R3或者R1和Ar可以相連以便與帶有其的二氧環(huán)丁烷體的碳形成C4～C20，尤其是C6～C10螺環(huán)；該環(huán)可以是單環(huán)或多環(huán)、飽和或不飽和的、芳香的、稠合或未稠合的，和在適宜的時候，插入一個或多個選自O，N和S的雜原子和可選擇地被一個或多個如前a)中所定義的R1，R2和R3基團所取代；-Ar表示C6～C30，尤其是C6～C10的亞芳基，可選擇地被一個或多個取代基所取代，所述取代基尤其選自羥基、鹵素原子、氧代基團、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫代基團、烷基甲硅烷基，二烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷基、烷基硅氧基，二烷基硅氧基或三烷基硅氧基、烷基、烷氧基、硫代烷基、羧基、甲?；?、烷基酯基、烷基酮基、鹵代烷基、芳基、芳基酯基、芳基酮基、芳基氨基、二芳基氨基；和-X表示O，NH或S；和本發(fā)明通式(I)化合物的衍生物。
2、 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于，所述&是熒光基團。
3、 根據(jù)權利要求1或2所述的化合物，其中B表示Q Cs，尤其是C2 C6和特別是C3 C4烷基，可選擇地被C6 Q4，尤其是C6 do亞芳基和/或被一個或多個選自0， N和S的雜原子所間斷，和可選擇地被一個或多個取代基 所取代，該取代基選自羥基、氧代基團、氨基、鹵素原子、烷基、垸氧基、羧 基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基和芳氧基。
4、 根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其中B由通式(III)所表示<formula>formula see original document page 3</formula>其中-口和O分別表示與不穩(wěn)定結構S和生色團A的共價鍵； -j是0 2的整數(shù)，和有益地是l;-R4是位于口-(CH2)j-基團的鄰位、間位或對位上的Q C加，尤其是C2 C,2和特別是C3 C6的烴類鏈，在適宜的時候，其被一個或多個雜原子和域-CO和/或-N (烷基)-基團所間斷，和尤其是選自-(CH2)k-0， -(CH2)k-C(O)-0， -CH2-0-C(0)-N(;CH3MCH2)2-N(CH3)-C(0)- 基團，其中k是1或2，和有益地是l;-115和1^相互獨立地是氫原子或者是飽和或不飽和，線性、分支或環(huán)狀的d C加，尤其是C2 d2和特別是C3 Q的烴類鏈，所述烴類鏈選自烷基、垸氧基、垸基氨基或二烷基氨基、硫代垸基，或者是C6 C，尤其是C6 do 的芳環(huán)，所述的芳環(huán)選自芳基、芳氧基、芳基氨基和硫代芳基。
5、根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其中，其中所述Ar表示通 式(IVa)的亞芳基基團<formula>formula see original document page 4</formula>其中-A表示與X的共價鍵和*表示與二氧環(huán)丁烷環(huán)的共價鍵；-RK)表示氫原子，電活性基團或熒光基團,--Ru選自氫原子或者是與亞苯基稠合的C6 C1Q芳基。
6、 根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其中&是飽和的或不飽和 的、線性、分支或環(huán)狀的d C6烷基或d CV烷氧基，可選擇地包括一個或 多個選自O， N和S的雜原子，和可選擇地被取代。
7、 根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其中當R,和/或R,o是熒光 基團時，其選自苯基及其衍生物、萘及其衍生物、蒽及其衍生物、芘及其衍生 物、聯(lián)苯基及其衍生物、吖啶及其衍生物、香豆素及其衍生物、氧雜蒽及其衍 生物、肽菁及其衍生物、芪及其衍生物、呋喃及其衍生物、噁唑及其衍生物、 噁二唑及其衍生物、硝基苯并噁二唑及其衍生物、苯并噻唑及其衍生物、熒光 素及其衍生物、羅丹明及其衍生物，BODIPY及其衍生物，曙紅及其衍生物、 赤蘚紅及其衍生物、試卣靈及其衍生物、喹啉及其衍生物、咔唑及其衍生物、 熒光花菁及其衍生物、羰花菁及其衍生物、吡啶鹽及其衍生物、鑭系熒光復合 體及其衍生物、熒光蛋白和量子點。
8、 根據(jù)權利要求4-7中任意一項權利要求所述的化合物，其中R4表示 _(CH2)k-0，其位于口-(CH2)j-基團的鄰位，和j-k-l和R5-R6^-OCH3。
9、 根據(jù)權利要求5-8中任意一項權利要求所述的化合物，其中Ru)是電活 性基團，其選自鹵素原子、氰基、硝基、單取代或雙取代酰胺、垸基、烷氧 基、三垸基銨基、烷基胺基、烷基氨基甲?；Ⅴセ?、烷基亞磺酰胺基、三氟甲基、烷基硅甲烷基，二烷基硅甲烷基或三垸基硅甲烷基、烷基硅氧基，二烷 基硅氧基或三垸基硅氧基、垸基胺基磺?；?、烷基磺?；?、烷基硫醚基、卣代 烷基、C6 Cu)基團，其選自芳氧基、芳氨基、芳基氨基甲?；?、芳基亞磺酰 胺基、芳基、雜芳基、三芳基硅甲垸基或垸基芳基硅甲烷基、三芳基硅氧基、 芳基胺基磺酰基、芳基磺?；头蓟蛎鸦?。
10、 根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其中X表示O。
11、 根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其特征在于，其對應于通式(Va):<formula>formula see original document page 5</formula>其中-S， X， Ar， R,， R2,， R3, 115和&如上述任意一項權利要求所限定。
12、根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其是通式(Vb):-S， Ar， Rp R2， R3， R5， &， R,o和Rn如上述任意一項權利要求所限定。
13、 根據(jù)上述權利要求所述的化合物，其中R^二Rn-H ， &=115 = 1^ = -0-CH3，和R2和R3相連以與帶有它們的二氧環(huán)丁烷環(huán)的碳形成金剛烷基螺環(huán)， 其在適宜的時候被取代。
14、 根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其中當S是可以被生物體 所活化的結構時，S是通式(VI):P-L畫口其中-口表示與B的共價鍵； -P表示可以被所述生物體識別的底物；和-L表示氧、硫、氮、羰基或-CO-Q-官能團，其Q是O、 S或NH。
15、 根據(jù)上述權利要求所述的化合物，其中S表示由酶的作用所導致的不 穩(wěn)定結構。
16、 根據(jù)上述權利要求所述的化合物，其中當S表示在蛋白酶作用下的不 穩(wěn)定結構時，L表示-CO-Q，其中Q是NH，和P表示被所述蛋白酶識別的底 物。
17、 根據(jù)上述任意一項權利要求所述的化合物，其特征在于，其是通式 (VII)的衍生物D-S-B-A其中-D表示耙結構；和-S， B和A如前述權利要求所定義。
18、 根據(jù)上述權利要求所述的化合物，其中靶結構D可以選自凝集素， 抗體或其片段；細胞受體配體；能夠與膜脂或磷脂相互作用的配體；能夠與存 在于細胞表面的糖相互作用的配體。
19、 一種藥物組合物，包括至少有效量的至少一種如權利要求1-18中任意一項所限定的化合物。
20、 至少一種如權利要求1-18中任意一項所限定的化合物在用于檢測和/ 或量化物理、化學或生物現(xiàn)象的目的中的應用，其中S表示可以被所述現(xiàn)象所 活化的不穩(wěn)定結構。
21、 一種用于檢測和/或量化生物體的方法，包括至少下述步驟---將至少有效量的至少一種如權利要求1-18中任意一項所限定的化合物與 假定含有所述生物體的介質相互接觸，其中S表示可以被待檢測和/或量化的 所述生物體所活化的不穩(wěn)定結構；和-測量所產(chǎn)生的發(fā)光信號。
22、 根據(jù)上述權利要求所述的方法，其特征在于，所述化合物如權利要求 11-18所限定。
23、 根據(jù)權利要求21或22所述的方法，其在體外實施，包括添加光放大 物的步驟，所述放大物選自熒光素，牛血清白蛋白，人血清白蛋白，聚季鑰鹽， 例如聚(乙烯基芐基三甲基)氯化銨(TMQ)，聚(乙烯基芐基三丁基)氯化 銨(TBQ)，聚(乙烯基芐基二甲基)氯化銨(BDMQ)，聚(乙烯基芐基三丁 基)氯化膦，聚(乙烯基芐基三丁基)氯化锍，聚(芐基二甲基乙烯基芐基) 氯化銨，熒光素的鈉鹽，聚(芐基三丁基)銨和熒光素的鈉鹽。
24、 根據(jù)權利要求21-23中任意一項權利要求所述的方法，其中所述待檢 測和/或量化的生物體是酶和通式(I)的化合物中的S表示可以被所述酶活化 的底物。
25、 一種通過檢測生物體用于檢測和/或量化的試劑盒，包括至少一種如 權利要求1-18中任意一項所限定的化合物，其中S表示可以被待檢測和/或量 化的所述生物體所活化的不穩(wěn)定結構。
26、 權利要求1-18中任意一項所限定的化合物在生產(chǎn)意欲用于實施體內(nèi)診斷方法的藥物組合物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及如說明書中定義的通式(I)的新型1，2-二氧環(huán)丁烷衍生物，其能夠發(fā)出可檢測的發(fā)光信號，本發(fā)明涉及其在用于檢測和/或量化物理、化學或生物，尤其是酶促現(xiàn)象的方法中的應用，本發(fā)明還涉及實施所述方法的試劑盒。
文檔編號C07D319/00GK101233126SQ200680027308
公開日2008年7月30日 申請日期2006年5月24日 優(yōu)先權日2005年5月27日
發(fā)明者安東尼·盧米爾, 皮埃爾-伊夫·雷諾, 馬克·馬索諾 申請人:Quidd公司;魯昂大學