專利名稱：：細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是提取中藥材有效成分的方法，具體就是提取大黃中的蒽醌類成分的工藝。
背景技術(shù)：
：大黃為常用中藥。蓼科大黃屬，多年生高大草本植物，頭狀花序，瘦果，花期67月，果期78月。別名有黃良，火參，膚如，將軍等，常用其根及根莖，味苦性寒，具有活血化瘀、涼血解毒、利膽通便、抗菌止血、抗腫瘤及收斂作用。掌葉大黃、唐古特大黃和藥用大黃為常有的三種正品大黃，它們主要分布于我國(guó)西北部和西南大部。大黃為臨床常用中藥，性寒味苦，具瀉熱通便、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)之功。大黃中化學(xué)成分復(fù)雜，最主要成分是蒽醌衍生物，主要以兩種形式存在，即游離蒽醌和結(jié)合蒽醌。近年來(lái)，隨著對(duì)其藥理作用的深入研究，大黃的抗氧化作用也閂益為人們所重視。蒽醌類成分作為大黃中主要有效成分，在治療疾病過(guò)程中起著較為重要的作用，也可能是大黃抗氧化的有效成分之一。然而有效成分的測(cè)定結(jié)果不僅與產(chǎn)地、采收等密切相關(guān)，還與其提取方法有關(guān)，因此研究大黃提取工藝對(duì)其成分的影響很有必要。本專利主要采用細(xì)胞破碎提取器提取大黃中蒽醌類成分，并采用單因素考察和正交試驗(yàn)綜合考察了最佳提取方案，從而為大黃更好地應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目前對(duì)對(duì)蒽醌類化合物的提取方法主要采用溶劑提取法。影響提取關(guān)鍵在于選擇合適的溶劑及方法。但在提取過(guò)程中，溶劑的添加比例、提取時(shí)間及工作頻率、提取次數(shù)等等都能影響效率，必須加以考慮，因此對(duì)以上因素進(jìn)行了單因素考察。所用溶劑主要采用乙醇，這是因?yàn)椴捎靡掖甲鳛樘崛∪軇┚哂幸韵乱恍﹥?yōu)點(diǎn)提取時(shí)間短，溶出雜質(zhì)少；用量少，且大部分可以回收再用；與水提取相比，提取液不易霉變；價(jià)格低廉，毒性小，但究竟采用何種濃度的乙醇最為合適，對(duì)每一種藥物、每一種成分都有差異，因此本專利對(duì)溶劑的濃度進(jìn)行了單因素考察，確定了較優(yōu)的提取濃度，并最終通過(guò)正交試驗(yàn)確定了最佳比例。常見的溶劑提取法有浸漬、滲漉，連續(xù)回流提取等方法。浸漬法不需要加熱，但提取時(shí)長(zhǎng)，效率低；滲漉法由于隨時(shí)保持相當(dāng)?shù)臐舛炔?，提取效率較高，浸出液較澄清，但溶劑消耗量大，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)；連續(xù)回流提取法溶劑用量少，能使藥物不斷地與新溶劑相接觸，提取效率高，但提取液受熱時(shí)間長(zhǎng)，容易使某些成分分解；上述方法所用時(shí)間長(zhǎng)，溶劑用量大，需要加熱，對(duì)蒽醌類成分破壞作用強(qiáng)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種所用時(shí)間短，溶劑用量小，且不需加熱，對(duì)蒽醌類成分沒有破壞作用的提取蒽醌類成分的方法。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是綜合各個(gè)工藝步驟，提供一種最佳提取蒽醌類成分的方法。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，包括下列工藝歩驟1、iH品大黃低溫干燥并粉碎2、乙醇浸泡；3、(200W—800W)細(xì)胞超聲破碎；4、收集提取液；5、測(cè)定蒽醌類成分。上述歩驟1中將大黃粉碎后過(guò)二十目篩。上述/少驟2中使用60%濃度的乙醇浸泡1小時(shí)。上述歩驟3中用400W細(xì)胞超聲破碎提取。用400W細(xì)胞超聲破碎提取時(shí)提取4次，每次破碎提取3分鐘，破碎提取時(shí)破碎10秒間歇10秒交替進(jìn)行，共破碎180秒，每次破碎提取3分鐘之間間隔5分鐘，然后合并提取液。本發(fā)明超聲提取法的作用機(jī)理主要是超聲力學(xué)產(chǎn)生的空化效應(yīng)?？栈?yīng)存在于萃取液中的微氣泡，微氣泡在聲場(chǎng)作用下振動(dòng)，聲壓達(dá)到一定值時(shí)，氣泡迅速增長(zhǎng)，然后突然閉合。在氣泡閉合時(shí)產(chǎn)生激波。造成很大壓力。將藥物組織中細(xì)胞破裂，從而利于溶劑浸透到藥物內(nèi)部，使細(xì)胞中的有效成分溶于溶劑中，同現(xiàn)有三種方法相比，超聲提取法縮短了提取時(shí)間，增加了提取率，(我們?cè)鴮?duì)包括大黃在內(nèi)的7種含蒽醌類成分的中藥進(jìn)行了對(duì)比得出)，本發(fā)明詳細(xì)的提取參數(shù)，提高了蒽醌類成分的提取率。圖l是本發(fā)明工藝流程圖。具體實(shí)施例方式大黃的主要有效成分為蒽醌類。因此我們對(duì)提取方法的考察中，采用浸漬、回流、索氏、微波輔助、細(xì)胞超聲破碎提取等進(jìn)行工藝初篩，以總蒽醌的百分含量、游離蒽醌的百分含量、通過(guò)單因素考察和iH交試驗(yàn)，最終確定工藝路線如上圖1，圖l中1.粉碎粒度和浸潤(rùn)時(shí)間的確定在研究中發(fā)現(xiàn)，乙醇的穿透力與水相比，穿透力較差(尤其是高濃度的乙醇)，如果使用從市場(chǎng)買回的飲片直接提取，提取率較低；但若粉碎過(guò)細(xì)(曾有一部分過(guò)40目甚至60目篩)，則提取過(guò)程中雜質(zhì)太多，濾過(guò)困難，人為增加了成本。因此最終確定粉碎粒度為20目。另外，粉碎后浸潤(rùn)透再進(jìn)行提取，可以很大程度上節(jié)省提取時(shí)間，但浸潤(rùn)透以后再增加時(shí)間沒有實(shí)際意義，因此本專利采用粉碎粒度為過(guò)20目篩，浸泡1小時(shí)。2.超聲功率的確定(結(jié)果見表一)細(xì)胞超聲破碎提取器的提取效果與其工作功率有一定關(guān)系，從表中不難看出，不同功率對(duì)其成分影響不大，經(jīng)顯著性分析，四個(gè)不同功率之間沒有顯著性差異，因此，兼顧對(duì)儀器的使用壽命的考慮，初歩確定工作功率為400W。表一不同超聲功率對(duì)蒽醌提取率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>3.乙醇濃度對(duì)提取率的影響(結(jié)果見表二)從0%—卯％濃度的乙醇，每隔10%濃度分別進(jìn)行提取，結(jié)果在0—40%期間，隨著乙醇濃度的增加，蒽醌類成分的提取率增加，但40%和50%乙醇濃度所得結(jié)果相比，沒有顯著性差異，60%和70%及80%的乙醇提取率之間沒有顯著性差異，但和前面其他濃度之間有顯著性差異，考慮到較高濃度的乙醇回收利用困難，初步確定使用60%濃度的乙醇。表二不同乙醇濃度對(duì)蒽醌提取率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>4.乙醇添加量的確定(體積/質(zhì)量)(結(jié)果見表三)分別采用20倍量、30倍量、40倍量、50倍量進(jìn)行單因素考察，結(jié)果在20倍量、30倍量、40倍量的測(cè)定結(jié)果中，隨著乙醇使用量的增加，蒽醌類成分的提取率但50倍量的結(jié)果中，總蒽醌的含量最高，游離蒽醌含量有小幅度的下降；考慮到使用量的增加，使回收量增大，故確定第一次50倍量(因干藥材吸收一定量溶液)、后兩次均采用40倍量提取。并在實(shí)際過(guò)程中，使用第三次的提取液(不回收)作為下一批藥材的第一次提取液，試驗(yàn)證明這樣使用和使用未使用過(guò)的乙醇進(jìn)行提取效果幾無(wú)差異。表三不同乙醇添加量對(duì)蒽醌提取率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>5.提取次數(shù)的確定(結(jié)果見表四)分別采用提取l次、2次、3次、4次的方法進(jìn)行提取，結(jié)果隨著提取次數(shù)的增加，蒽醌的提取率有不同程度的提高，但提取三次和四次差異不顯著，故采用提取三次的方法。表四不同提取次數(shù)對(duì)蒽醌提取率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>6.提取時(shí)間的確定(結(jié)果見表五)分別考察了lmin、2min、3min、4min、5min時(shí)的提取率，結(jié)果提取3分鐘和4分鐘、5分鐘相比，蒽醌類成分得率沒有顯著差異，且提取5分鐘的蒽醌含量并不是最高，可能是被藥渣吸附引起或者時(shí)間過(guò)長(zhǎng)受熱分解的原因，因此，采用每次提取3分鐘的方法進(jìn)行提取。表五不同提取時(shí)間對(duì)蒽醌提取率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>7.iH交實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)上述單因素考察以后，我們初步確定了本試驗(yàn)的工藝，但我們知道，上述這些因素之間會(huì)相互影響，他們可能存在交互作用，故參照上述單因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，又設(shè)計(jì)了下述正交試驗(yàn)，采用"(34)表，以乙醇添加量、乙醇濃度、提取次數(shù)、提取時(shí)間為因素，分別設(shè)計(jì)三個(gè)水平，因素水平表如下表六因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>0.7420.7980.7290.7840.7960.888212220.7770.9370.7540.9330.7520.9051330.7520.9950働0.9460.8020.926421230.7681.0290.7290.9660.7521.11922310.7161.0870.7501.0380.6620.993623120.6240.9660,6580細(xì)0.9581.258731320.8901.1910.9311.1320.7461細(xì)832130.7271.0350.7730.9580.6660.883933210.6770.9460.7090.9860.7490.8110.7120.7210.8840.9840.9180.9340.7180.7550.7420.7831.0021.0070.9441.0210.7860.6880.7990.749<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表九總蒽醌方差分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>從直觀分析結(jié)果可以看出，對(duì)游離蒽醌來(lái)說(shuō)，最佳的提取工藝為A3B!C3D2，而對(duì)總蒽醌來(lái)說(shuō),最佳的提取工藝為A3B2C3D2，即最佳工藝在B因素上不一致；而從方差分析表可以看出，在對(duì)總蒽醌的影響上，B因素影響不顯著，故綜合考慮，最終確定工藝如下A3B,C3D2作為最佳工藝，即50倍量、60%濃度、提取4次，每次3min。權(quán)利要求1.細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，包括下列工藝步驟A正品大黃低溫干燥并粉碎；B乙醇浸泡；C(200W-800W)細(xì)胞超聲破碎；D收集提取液；E測(cè)定蒽醌類成分。2、如權(quán)利要求l所述的細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，其特征在于步驟A中將大黃粉碎后過(guò)二十目篩。3、如權(quán)利要求l所述的細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，其特征在于步驟B中使用60%濃度的乙醇浸泡1小時(shí)。4、如權(quán)利要求l所述的細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，其特征在于步驟C中用400W細(xì)胞超聲破碎提取。5、如權(quán)利要求4所述的細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，其特征在于用400W細(xì)胞超聲破碎提取時(shí)提取4次，每次破碎提取3分鐘，破碎提取時(shí)破碎10秒間歇10秒交替進(jìn)行，共破碎180秒，每次破碎提取3分鐘之間間隔5分鐘，然后合并提取液。6、如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，其特征在于蒽醌類成分的測(cè)定是采用0.5%醋酸鎂一甲醇顯色，可見分光光度計(jì)510nm處測(cè)定游離蒽醌和總蒽醌類成分的含量。全文摘要本發(fā)明的目的是提供一種所用時(shí)間短，溶劑用量小，且不需加熱，對(duì)蒽醌類成分沒有破壞作用的提取蒽醌類成分的方法。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是綜合各個(gè)工藝步驟，提供一種最佳提取蒽醌類成分的方法。細(xì)胞超聲破碎提取大黃中的蒽醌類成分的最佳工藝，包括下列工藝步驟1正品大黃低溫干燥并粉碎；2乙醇浸泡；4(200W-800W)細(xì)胞超聲破碎；4收集提取液；5測(cè)定蒽醌類成分。本發(fā)明超聲提取法的作用機(jī)理主要是超聲力學(xué)產(chǎn)生的空化效應(yīng)。同現(xiàn)有三種方法相比，超聲提取法縮短了提取時(shí)間，增加了提取率，(我們?cè)鴮?duì)包括大黃在內(nèi)的7種含蒽醌類成分的中藥進(jìn)行了對(duì)比得出)，本發(fā)明詳細(xì)的提取參數(shù)，提高了蒽醌類成分的提取率。文檔編號(hào)C07C50/00GK101205176SQ20061012844公開日2008年6月25日申請(qǐng)日期2006年12月20日優(yōu)先權(quán)日2006年12月20日發(fā)明者劉建華,潘玉善,娟莫,趙漢雨,玲路,陳玉霞,韓立強(qiáng)申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)