專利名稱：兩步樹脂法制備紅景天苷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從天然植物紅景天粗提取物中分離制備紅景天苷(salidroside)的方法，屬生物化工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
景天科紅景天屬植物是多年生草本或亞灌木植物，全世界共有90多種，中國有近80種，大部分生長在海拔3500～5000米的石灰?guī)r、花岡巖山地、山谷巖石上。我國的紅景天資源主要分布在東北、西北、華北及西南的一些地區(qū)。研究表明紅景天具有抗缺氧、抗疲勞、抗衰老、抗輻射、抗腫瘤、降血脂防治心血管疾病等生物醫(yī)學(xué)作用。紅景天苷(salidroside)是紅景天中的主要有效成分。
文獻(xiàn)報道紅景天苷的制備多采用多步柱色譜法或制備型高效液相色譜法完成。傳統(tǒng)提取方法有采用活性炭吸附，用乙醇或甲醇洗脫，將洗脫液濃縮后用濾膜過濾后用制備色譜進(jìn)行精制。由于制備色譜的制備量很小，無法大規(guī)模生產(chǎn)。也有將紅景天的醇提取物依次經(jīng)過聚酰胺、大孔吸附樹脂、硅膠及葡聚糖凝膠四種柱層析分離制備紅景天苷。此方法使用的分離介質(zhì)品種多，葡聚糖凝膠價格貴，硅膠無法循環(huán)使用，整個分離過程時間長，成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。采用高速逆流液相色譜法制備紅景天苷，目前已制得克級產(chǎn)品，所得產(chǎn)品純度高，缺點(diǎn)是制備量少，而且高速逆流液相色譜設(shè)備昂貴，無法規(guī)?；a(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡單、產(chǎn)品純度高、適合工業(yè)化生產(chǎn)的紅景天苷的制備方法。
為達(dá)到上述目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案是將紅景天粗提取物用溫度為20～90℃的水?dāng)嚢枞芙?0分鐘～3小時，過濾得到澄清濾液。調(diào)節(jié)濾液pH為1～5，常溫下過吸附樹脂柱進(jìn)行吸附，然后用10％～40％的丙酮、低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑洗脫。收集洗脫液，濃縮洗脫液至糖漿狀，加入吸附樹脂混合均勻后烘干，加入樹脂的量以烘干后樹脂不互相粘連為佳。將烘干的吸附樹脂加入已填充了吸附樹脂的層析柱中，烘干的吸附樹脂∶已裝柱的吸附樹脂＝1∶(1～10)，常溫下用5％～25％低碳醇類有機(jī)溶劑進(jìn)行層析，收集層析透過液，將其濃縮蒸干。加入低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑加熱溶解，加熱溫度不超過60℃，趁熱過濾，濃縮濾液，冷卻至0℃，析出結(jié)晶，再用低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑進(jìn)行洗晶，70℃以下干燥，得到產(chǎn)品，濾液回收套用。
上述方案中所述吸附樹脂是非極性吸附樹脂，如上海華震科技有限公司產(chǎn)品HZ-816、美國RohmHass公司產(chǎn)品Amberlite XAD-4、Amberlite XAD-16、Amberlite XAD-1600或Amberchrom CG161。方案中低碳醇類有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、異丙醇中的一種；所述乙酸酯類有機(jī)溶劑是醋酸乙酯或醋酸丁酯。
與紅景天苷的其他提取工藝相比，本發(fā)明的積極效果是僅經(jīng)過一次樹脂吸附、一次樹脂層析和結(jié)晶就可從低含量(1％～5％)的天然紅景天粗提取物制備出純度為90％～98％的紅景天苷，而且吸附、層析過程都在常溫下進(jìn)行，工藝簡單，各分離步驟都是成熟的生物化工單元操作，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面通過從市售紅景天粗提取物(含量1％～5％)制備高純度紅景天苷實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1取紅景天粗提取物500克，加水5000ml溶解，加熱至30℃，攪拌保溫2.5個小時。過濾得到澄清濾液。濾液調(diào)節(jié)pH至3，常溫下流過HZ-816吸附樹脂(上海華震科技有限公司)柱，然后通入30％的乙醇1200ml，收集流出液。流出液濃縮至糖漿狀，加入HZ-816吸附樹脂混合均勻并烘干。按照烘干的吸附樹脂∶已裝柱的吸附樹脂＝1∶6的比例，將烘干的樹脂加入已填充了HZ-816吸附樹脂的層析柱，，常溫下通入15％的乙醇溶液進(jìn)行層析。收集層析液，濃縮至干。加入乙醇溶解，加熱至50℃，趁熱過濾。濃縮濾液，冷卻至0℃，析出結(jié)晶，濾液回收套用。紅景天苷結(jié)晶用乙醇清洗后，60℃真空干燥，得到紅景天苷白色粉末，經(jīng)HPLC測定，純度為97.2％。
實(shí)施例2取紅景天粗提取物500克，加水5000ml溶解，加熱至70℃，攪拌保溫1個小時。過濾得到澄清濾液。濾液調(diào)節(jié)pH至4，常溫下流過Amberlite XAD-4吸附樹脂(美國RohmHaas公司產(chǎn)品)柱，然后通入25％的乙醇2000ml，收集流出液。流出液濃縮至糖漿狀后加入Amberlite XAD-4吸附樹脂混合均勻并烘干。按照烘干的吸附樹脂∶已裝柱的吸附樹脂＝1∶2的比例，將烘干的樹脂加入已填充了Amberlite XAD-1600吸附樹脂(美國RohmHass公司產(chǎn)品)的層析柱，常溫下通入20％的乙醇溶液進(jìn)行層析，收集層析液，濃縮至干。加入正丁醇溶解，加熱至50℃，趁熱過濾。濃縮濾液，冷卻至0℃，析出結(jié)晶，濾液回收套用。紅景天苷結(jié)晶用正丁醇清洗后，60℃真空干燥，得到紅景天苷白色粉末，經(jīng)HPLC測定，純度為95.6％。
實(shí)施例3取紅景天粗提取物500克，加水5000ml溶解，加熱至60℃，攪拌保溫1.5個小時。過濾得到澄清濾液。濾液調(diào)節(jié)pH至3，常溫下流過HZ-816吸附樹脂(上海華震科技有限公司)柱，然后通入15％的甲醇2500ml，收集流出液。流出液濃縮至糖漿狀后加入HZ-816吸附樹脂混合均勻并烘干。按照烘干的吸附樹脂∶已裝柱的吸附樹脂＝1∶10的比例，將烘干的樹脂加入已填充了HZ-816吸附了樹脂的層析柱，常溫下通入5％的甲醇溶液進(jìn)行層析，收集層析液，濃縮至干。加入正丁醇溶解，加熱至50℃，趁熱過濾。濃縮濾液，冷卻至0℃，析出結(jié)晶，濾液回收套用。紅景天苷結(jié)晶用正丁醇清洗后，60℃真空干燥，得到紅景天苷白色粉末，經(jīng)HPLC測定，純度為96.0％。
實(shí)施例4取紅景天粗提取物500克，加水5000ml溶解，加熱至80℃，攪拌保溫40分鐘。過濾得到澄清濾液。濾液調(diào)節(jié)pH至1，常溫下流過HZ-816吸附樹脂(上海華震科技有限公司)柱，然后通入40％的丙酮1500ml，收集流出液。流出液濃縮至糖漿狀后加入HZ-816吸附樹脂混合均勻并烘干。將烘干的樹脂加入已填充了HZ-816吸附樹脂的層析柱，烘干的吸附樹脂∶已裝柱的吸附樹脂＝1∶3，常溫下通入25％的異丙醇溶液進(jìn)行層析，收集層析液，濃縮至干。加入醋酸丁酯溶解，加熱至50℃，趁熱過濾。濃縮濾液，冷卻至0℃，析出結(jié)晶，濾液回收套用。紅景天苷結(jié)晶用醋酸丁酯清洗后，60℃真空干燥，得到紅景天苷白色粉末，經(jīng)HPLC測定，純度為92.9％。
權(quán)利要求
1.一種紅景天苷的制備方法(1)將紅景天粗提取物用溫度為20～90℃的水?dāng)嚢枞芙?0分鐘～3小時，過濾得到澄清濾液；(2)調(diào)節(jié)濾液pH為1～5，常溫下過吸附樹脂柱進(jìn)行吸附，然后用10％～40％的丙酮、低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑洗脫；(3)濃縮洗脫液至糖漿狀，加入吸附樹脂混合均勻后烘干；(4)將烘干的吸附樹脂加入已填充了吸附樹脂的層析柱中，常溫下用5％～25％的低碳醇類有機(jī)溶劑進(jìn)行層析，收集層析透過液，將其濃縮蒸干；(5)加入低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑加熱溶解，加熱溫度不超過60℃，趁熱過濾，濃縮濾液，冷卻至0℃，析出結(jié)晶，用低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑進(jìn)行洗晶，70℃以下干燥，得到產(chǎn)品，濾液回收套用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述紅景天苷的制備方法，其特征在于所述吸附樹脂是非極性吸附樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述紅景天苷的制備方法，其特征在于所述吸附樹脂是HZ-816(上海華震科技有限公司產(chǎn)品)、Amberlite XAD-4、AmberliteXAD-16、Amberlite XAD-1600或Amberchrom CG161(美國RohmHass公司產(chǎn)品)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述紅景天苷的制備方法，其特征在于所述低碳醇類有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、異丙醇中的一種；所述乙酸酯類有機(jī)溶劑是醋酸乙酯或醋酸丁酯。
全文摘要
采用兩步樹脂法從天然紅景天粗提取物中分離制備高純度紅景天苷，將紅景天粗提取物用溫度為20～90℃的水?dāng)嚢枞芙?、過濾，濾液調(diào)節(jié)pH為1～5，常溫下流過吸附樹脂柱，用丙酮、低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑洗脫，濃縮洗脫液，加入層析柱中常溫下進(jìn)行層析，層析液濃縮蒸干，加入低碳醇或乙酸酯類有機(jī)溶劑加熱溶解，過濾，濃縮濾液，析出結(jié)晶，過濾得高純度紅景天苷。本發(fā)明僅經(jīng)過一次樹脂吸附、一次樹脂層析，就可從低含量(1％～5％)的天然紅景天粗提取物制備出純度為90％～98％的紅景天苷，而且吸附、層析過程都在常溫下進(jìn)行，工藝簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H1/00GK1880326SQ200510026830
公開日2006年12月20日 申請日期2005年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月16日
發(fā)明者陳駿, 徐環(huán)昕, 劉坐鎮(zhèn), 周曉明, 江邦和 申請人:周曉明