專利名稱：化合物及其在調(diào)節(jié)淀粉樣蛋白β中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
提供了化合物，藥物組合物和這些化合物的使用方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些化合物用于治療神經(jīng)變性疾病(neurodegenerativediseases)。
背景技術(shù)：
在此所提供的信息和所引用的參考文獻(xiàn)僅供幫助讀者理解，并非構(gòu)成承認(rèn)任何參考文獻(xiàn)或信息是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。神經(jīng)變性疾病是以選擇性神經(jīng)元群的破壞或降解為特征的病癥。示例性神經(jīng)變性疾病包括阿爾茨海默病(AD)，帕金森綜合癥例如(PD)，亨廷頓舞蹈病(HD)，朊病毒疾病，腦淀粉樣血管病(CAA)和輕度認(rèn)知損壞(MCI)。神經(jīng)變性疾病與進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙有關(guān)，而且經(jīng)常導(dǎo)致染病的中樞或末梢神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的萎縮。阿爾茨海默病(AD)(alzheimer’s diease)是一種進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病，該病是年齡超過65歲人群癡呆的主要原因。該病的臨床癥狀開始于輕微的短期記憶問題。隨著病情的發(fā)展，記憶、語言和方向上的困難惡化到干擾該人的獨(dú)立行使功能能力的程度。其他可以有差異的癥狀，包括肌痙攣和癲癇發(fā)作。從最初的記憶損失癥狀到死亡，AD的持續(xù)期間平均是10年。AD的特征表現(xiàn)為AD患者腦部的一些腦區(qū)中大量神經(jīng)元細(xì)胞的損失，和蛋白物質(zhì)的沉積。這些沉積物包括神經(jīng)纖維纏結(jié)和β-淀粉樣蛋白斑塊。β-淀粉樣蛋白斑塊的主要蛋白質(zhì)成分是Aβ。已經(jīng)推測(cè)Aβ增加的累積對(duì)AD的發(fā)病機(jī)理顯著地起作用，而且Aβ增加的累積也與其它淀粉樣變和神經(jīng)病癥有關(guān)，例如，帕金森病，唐氏綜合癥，擴(kuò)散盧伊體病，進(jìn)行性核上麻痹，和遺傳性淀粉樣變腦出血-Dutch型(HCHWA-D)(Hereditary Cerebral Hemorrhage withAmyloidosis-Dutch Type)，腦淀粉樣血管病(CAA)和輕度認(rèn)知損壞(MCI)?？梢栽谔剖暇C合癥患者身上發(fā)現(xiàn)Aβ在AD中所起作用的支持性證據(jù)，這些唐氏綜合癥患者在40歲之后發(fā)展了類似AD的癥狀和病理過程。這樣的病人在其它AD癥狀發(fā)作之前表現(xiàn)出類似AD的淀粉樣斑塊，表明Aβ增加的累積是最初的致病性事件。其它暗示Aβ肽(Aβpeptides)在AD中累積的證據(jù)來自對(duì)各種突變的鑒定，這些突變引起Aβ在那些定為某種類型遺傳性AD(家族AD，或FAD)的細(xì)胞上形成增加。FAD個(gè)體占所有AD病例的10％，而且通常比單個(gè)發(fā)生的AD患者表現(xiàn)出更早的疾病癥狀。Aβ肽來自淀粉樣前體蛋白(APP)的加工過程。產(chǎn)生自在第21號(hào)染色體上的APP基因的mRNA經(jīng)過選擇性剪接，產(chǎn)生大約10個(gè)可能的同種型(isoforms)，其中三個(gè)(APP695，751，和770氨基酸同種型)在大腦中占優(yōu)勢(shì)。APP695是三種同種型中最短的，而且主要產(chǎn)生在神經(jīng)元中。APP751含有一個(gè)Kunitz蛋白酶抑制劑(KPI)結(jié)構(gòu)域，和APP770含有KPI結(jié)構(gòu)域和MRC-OX2抗原結(jié)構(gòu)域，它們主要被發(fā)現(xiàn)于非神經(jīng)元的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(glial cells)上。主要的APP同種型是單-跨膜蛋白質(zhì)(single-transmembraneproteins)，由一個(gè)胞外的氨基末端結(jié)構(gòu)域(大約590-680個(gè)氨基酸)和一個(gè)含有胞內(nèi)運(yùn)輸信號(hào)(trafficking signals)的胞質(zhì)尾(大約55個(gè)氨基酸)組成。在APP內(nèi)，Aβ肽序列部分位于細(xì)胞膜的胞外端，部分延伸到跨膜區(qū)中。APP同種型695、751和770共享相同的Aβ、跨膜和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。APP通過固有分泌途徑被運(yùn)輸(trafficked)，在那里它經(jīng)歷翻譯后加工(post-translational processing)，包括通過兩種途徑的切割淀粉樣蛋白途徑(amyloidogenic pathway)和非淀粉樣蛋白途徑(non-amyloidogenic pathway)。在非淀粉樣蛋白途徑中，APP被Aβ結(jié)構(gòu)域內(nèi)的α-分泌酶切割，釋放一種用于分泌的大的可溶性N-末端片段(sAPPα)和一種非淀粉樣蛋白C-末端片段(C83)。因?yàn)榍懈畎l(fā)生在Aβ結(jié)構(gòu)域內(nèi)，所以非淀粉樣蛋白途徑中的α-分泌酶切割排除了Aβ的形成。由α-分泌酶切割(C83)所產(chǎn)生的APP的C-末端片段隨后被預(yù)測(cè)跨膜結(jié)構(gòu)域內(nèi)的γ-分泌酶切割，產(chǎn)生被稱作p3的非淀粉樣蛋白肽片段(22-24個(gè)殘基)。在淀粉樣蛋白途徑中，在定義Aβ肽的氨基末端的Aβ結(jié)構(gòu)域始端，APP被β-分泌酶(BACE1或BACE2酶)切割。BACE1或BACE2切割產(chǎn)生一個(gè)較短的可溶N-末端，sAPPβ以及淀粉樣蛋白C-末端片段(C99)。另外，BACE1也在Aβ結(jié)構(gòu)域的始端之后10個(gè)氨基酸(位于氨基酸10和11之間)切割A(yù)PP，產(chǎn)生一個(gè)較長(zhǎng)的N-末端可溶片段和一個(gè)較短的C-末端片段(C89)。通過γ-分泌酶，即早老基因依賴酶(presenilin-dependent enzyme)，對(duì)C89或C99進(jìn)一步切割，產(chǎn)生不同長(zhǎng)度的Aβ肽。從AD腦的斑塊中所發(fā)現(xiàn)的Aβ的主要形式是Aβ42和Aβ40種。Aβ42是最初沉積到腦斑中的種類，非常易于在活體外聚集。因此，在發(fā)展治療以Aβ累積為特征的疾病或障礙的療法中，淀粉樣肽的Aβ42種，尤其可能成為一種可行的靶標(biāo)(viable target)。目前，沒有治愈AD或有效地治療AD的治療方法，少數(shù)被認(rèn)可的藥物，包括Aricept、Exelon、Cognex和Reminyl，最多起減輕作用?；贏β累積、神經(jīng)元損失與AD之間的相關(guān)性，調(diào)節(jié)Aβ水平，例如減少病原性Aβ種類的水平，表明是一種可減少斑塊形成和最小化神經(jīng)元細(xì)胞死亡的可行方式。因此，對(duì)調(diào)節(jié)Aβ水平的化合物存在著醫(yī)學(xué)需求。的確，這樣的化合物對(duì)治療諸如AD這樣的神經(jīng)變性病癥是有用的。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對(duì)治療很多疾病有幫助的新型化合物。也介紹了包括該新型化合物的組合物和試劑盒。本發(fā)明的一方面提供對(duì)調(diào)節(jié)淀粉樣蛋白-β(amyloid-beta)(Aβ)水平具有活性的化合物。因此，這樣的化合物適用于治療與異常Aβ水平相關(guān)的疾病，和/或與Aβ水平調(diào)節(jié)產(chǎn)生治療效果的任何情形相關(guān)的疾病。優(yōu)選地，這里的化合物對(duì)治療諸如AD這樣的神經(jīng)變性病癥是有幫助的。
發(fā)明詳述除非有其它定義，在此所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所通常理解的含義相同。所有的專利、申請(qǐng)、已公開的申請(qǐng)和其它出版物的全部?jī)?nèi)容在此被引入作為參考。
I.發(fā)明化合物本發(fā)明提供了新型化合物，及其藥物學(xué)可接受的鹽和其前藥(prodrugs)，所述新型化合物具有對(duì)應(yīng)于式(I)的結(jié)構(gòu)(A)-LA-(B)-LB-(C)-LC-(D)(I)其中A是 其中，每個(gè)E獨(dú)立為N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過四個(gè)E是雜原子，R是氫，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代環(huán)烷基，或取代或未取代芳基；每個(gè)R1獨(dú)立為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代氨基，取代或未取代環(huán)烷基，或取代或未取代芳基；或A是
其中，每個(gè)M獨(dú)立選自CR1或N，條件是不超過三個(gè)M是N，以及B是 其中，每個(gè)M獨(dú)立為CR2或N，條件是不超過三個(gè)G是N；每個(gè)R2獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代氨基；或B與A一起，構(gòu)成稠環(huán)系；C是 其中，J選自CR3，O，S，N和NR；每個(gè)K獨(dú)立為N，NR，C或CR3；每個(gè)R3獨(dú)立為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代芳基，取代或未取代雜芳基，取代或未取代烷氧基，限制性條件為當(dāng)C是
時(shí)，R3不是-NH2；或C是 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR1或N，條件是不超過三個(gè)M是N；D是 其中每個(gè)E獨(dú)立是N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過四個(gè)E是雜原子；或D是 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR5或N，條件是不超過三個(gè)M是N；每個(gè)R5獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代雜環(huán)，取代或未取代芳基，取代或未取代雜芳基，或取代或未取代氨基，取代或未取代烷基氨基；LA為任意，當(dāng)存在時(shí)，為共價(jià)鍵或連接物(linker)，選自-C＝C-，-C＝C-，-(C(R′)2)z-，-O-，-O-(C(R′)2)z-，-S-，-NR′-，-NH-(C(R′)2)z-，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-S(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-NR′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，-NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C-(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C-(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′-，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′-，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)2-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)-，-O-NR′-S(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中，每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的環(huán)烷基，以及z為1-10；LB獨(dú)立為共價(jià)鍵或連接物，選自-C＝C-，-C≡C-，-(C(R′)2)z-，-O-，-O-(C(R′)2)z-，-S-，-NR′-，-NH-(C(R′)2)z，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-S(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，-O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-NR′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′-，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′-，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-NR′-S(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中，每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的環(huán)烷基，以及z是1-10；LC是-O-，-S-，-S(O)2-，-NR-，-C(O)-，-(C(R′)2)z-或-C(S)-；限制性條件是，當(dāng)A是 時(shí)，LA不是-C(O)NH-，-CH2NH-，-CH2-O-或-C(O)N(CH3)-；以及式(I)的所述化合物不是 正如在此所使用的，提到某種元素，例如氫或H，意味著包括該元素所有的同位素。例如，如果一個(gè)組被定義包括氫或H，它也可以包括氘和/或氚。在此處所提供的結(jié)構(gòu)中，其中氮原子看起來為二價(jià)，應(yīng)認(rèn)為該氮原子為三價(jià)且第三個(gè)取代基為氫。除非特別標(biāo)注，本發(fā)明的化合物可以有不對(duì)稱中心，也可能以立體異構(gòu)體的混合物或以單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體，或?qū)τ钞悩?gòu)體出現(xiàn)，其所有的異構(gòu)體形式被包括在本發(fā)明中。本發(fā)明的化合物包括所有的構(gòu)象異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物也可以一種或多種互變異構(gòu)體的形式存在，既包括單互變異構(gòu)體，又包括互變異構(gòu)體混合物。短語“烴基”指的是其碳原子可直接連接到這里所出現(xiàn)的任何分子的任何有機(jī)基基團(tuán)?！叭〈鸁N基”指根據(jù)如下所提供的定義被取代的烴基基團(tuán)。烴基基團(tuán)包括飽和的和不飽和烴，直鏈和支鏈脂肪族烴，環(huán)烴和芳烴。短語“取代的”指的是被另外一個(gè)取代基代替的一個(gè)原子或原子團(tuán)。短語“取代的”包括任何級(jí)別的取代，例如，一-取代，二-取代，三-取代，四-取代或五-取代，在此這樣的取代是化學(xué)許可的。取代可以發(fā)生在任何化學(xué)可及的位置和任何原子上，例如在碳或任何雜原子上的取代。例如，取代的化合物是連接其所含的氫或碳原子的一個(gè)或多個(gè)鍵被連接非氫和/或非碳原子的鍵所代替的化合物。短語“烷基”指的是含有1-20個(gè)碳原子的烴基鏈。短語“烷基”包括直鏈烷基，例如甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，己基，庚基，辛基，壬基，癸基，十一烷基，十二烷基，及類似物。烷基也包括直鏈烷基的支鏈異構(gòu)體，包括但并不限于由下述例子所提供的基團(tuán)-CH(CH3)2，-CH(CH3)(CH2CH3)，-CH(CH2CH3)2，-C(CH3)3，-C(CH2CH3)3，-CH2CH(CH3)2，-CH2CH(CH3)(CH2CH3)，-CH2CH(CH2CH3)2，-CH2C(CH3)3，-CH2C(CH2CH3)3，-CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)，-CH2CH2CH(CH3)2，-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)，-CH2CH2CH(CH2CH3)2，-CH2CH2C(CH3)3，-CH2CH2C(CH2CH3)3，-CH(CH3)CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2和-CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)。因此，烷基包括伯烷基，仲烷基和叔烷基。優(yōu)選的烷基包括具有1-16個(gè)碳原子，或1-3個(gè)碳原子的烷基，例如，甲基，乙基，丙基和-CH(CH3)2。短語“取代烷基”指的是根據(jù)上述定義被取代的烷基?！叭〈榛苯M的例子包括但并不限于，鹵原子取代碳或氫原子，例如三氟甲基；基團(tuán)上的氧原子取代碳或氫原子，例如羥基，烷氧基，芳氧基，和酯基；基團(tuán)上的硫原子取代碳或氫原子，例如硫醇基，烷基和芳基硫，砜基，磺?；蛠嗧炕?；基團(tuán)上的氮原子取代碳或氫原子，例如胺，酰胺，烷基胺，二烷基胺，N-氧化烷基，二酰亞胺和烯胺；基團(tuán)上的硅原子取代碳或氫原子，例如三烷基硅基(trialkylsilyl)，二烷基芳基硅基，烷基二芳基硅基和三芳基硅基；和其它各種雜原子取代碳或氫原子。另外，取代烷基可結(jié)合一個(gè)或多個(gè)碳原子。短語“鏈烯基”指的是含有2-20個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳雙鍵(-C＝C-)的烴鏈。短語“鏈烯基”包括直鏈鏈烯基，以及直鏈鏈烯基的支鏈異構(gòu)體。優(yōu)選地，鏈烯基含有1-8個(gè)雙鍵。短語“取代鏈烯基”指的是根據(jù)如上所提供的定義被取代的鏈烯基。短語“炔基”指的是含有2-20個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳三鍵(-C≡C-)的烴鏈?！叭不卑ㄖ辨溔不约爸辨溔不闹ф湲悩?gòu)體。優(yōu)選地，炔基含有1-8個(gè)三鍵。短語“取代炔基”指的是根據(jù)如上所提供的定義被取代的炔基。短語“環(huán)烷基”指的是有3-20個(gè)碳原子并含有任何化學(xué)許可的飽和和不飽和鍵數(shù)量的脂環(huán)部分。優(yōu)選地，環(huán)烷基含有4-7個(gè)碳原子。環(huán)烷基包括但不限于，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，環(huán)辛基及類似物。短語“取代環(huán)烷基”指的是根據(jù)如上所提供的定義被取代的環(huán)烷基。取代環(huán)烷基可以有一個(gè)或多個(gè)被直鏈或支鏈烷基取代的原子，并且可以進(jìn)一步包括被其它環(huán)包括稠環(huán)取代的環(huán)烷基。被稠環(huán)取代的環(huán)烷基的實(shí)例包括，但并不限于，金剛烷基(adamantyl)，降冰片基(norbornyl)，二環(huán)[2.2.2]辛基，萘烷基(decalinyl)，四氫化萘基和2，3-二氫化茚基，龍腦基，莰烯基(camphenlyl)，異莰烯基(isocamphenyl)和蒈烯基(carenyl)。典型的取代環(huán)烷基可以是單取代或多次取代，例如，但并非限于，2，2-，2，3-，2，4-，2，5-，或2，6-二取代環(huán)己基，或單取代、二取代或三取代降冰片基或環(huán)庚基，例如，這些基團(tuán)可以被烷基，烷氧基，氨基，硫代或鹵基取代。短語“環(huán)亞烷基”指的是含有3-20個(gè)碳原子的二價(jià)環(huán)烷基，以及短語“取代環(huán)亞烷基”指的是進(jìn)一步含有如上述的一個(gè)或多個(gè)取代基的環(huán)亞烷基。短語“雜環(huán)基”，“雜環(huán)的”或“雜環(huán)”指的是至少有一個(gè)環(huán)原子為雜原子的非芳族環(huán)烴化合物。雜環(huán)基包括含有3-20個(gè)環(huán)原子的單環(huán)、雙環(huán)和多環(huán)化合物，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子為雜原子，例如，但不限于，N，O和S。雜環(huán)基包括任何級(jí)別的飽和。例如，雜環(huán)基包括含有1-4個(gè)氮原子的不飽和3-8元環(huán)；含有1-4個(gè)氮原子的飽和3-8元環(huán)；含有1-4個(gè)氮原子的縮合不飽和雜環(huán)基；含有1-2個(gè)氧原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和3-8元環(huán)；含有1-2個(gè)氧原子和1-3個(gè)氮原子的飽和3-8元環(huán)；含有1-2個(gè)氧原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和縮合雜環(huán)基；含有1-3個(gè)硫原子和1-3個(gè)氮原子的不飽和3-8元環(huán)。優(yōu)選的雜環(huán)基含有5或6元環(huán)。雜環(huán)基實(shí)例包括，但不限于嗎啉和哌嗪。短語“取代雜環(huán)基”或“取代雜環(huán)的”指的是根據(jù)上面所提供的定義被取代的雜環(huán)基。短語“雜環(huán)亞烷基(heterocyclene)”或“雜環(huán)亞烷基(heterocyclylene)”指的是含有3-20個(gè)碳原子的二價(jià)雜環(huán)基(即含環(huán))，而“取代雜環(huán)亞烷基(substituted heterocycloalkylene)”指的是進(jìn)一步含有如上所述的一個(gè)或多個(gè)取代基的雜環(huán)亞烷基。短語“芳基”指的是可包括5-20個(gè)碳原子的單環(huán)芳基。芳基包括，但并不限于，苯基，聯(lián)苯基，蒽基和萘次甲基。短語“取代芳基”指的是根據(jù)如上所提供的定義被取代的任何芳基。例如，取代芳基可以結(jié)合一個(gè)或多個(gè)碳原子，氧原子，氮原子和/或硫原子，而且也包括其中芳基的一個(gè)或多個(gè)芳族碳與一個(gè)取代和/或未取代甲基、鏈烯基或炔基結(jié)合的芳基。這包括其中芳基的兩個(gè)碳原子與烷基、鏈烯基或炔基的兩個(gè)原子結(jié)合從而定義一個(gè)稠環(huán)系的成鍵排列(例如，二氫萘基或四氫化萘基)。因此，短語“取代芳基”包括，但不限于，甲苯基，羥苯基等。短語“亞芳基”指的是含有3-20個(gè)碳原子的二價(jià)芳基，而短語“取代亞芳基”指的是進(jìn)一步含有如上所述的一個(gè)或多個(gè)取代基的亞芳基。短語“雜芳基”指的是由碳原子和諸如N，S和O這樣的雜原子組成的3-20元芳環(huán)，或(ii)含有碳原子和諸如N，S和O這樣的雜原子的8-10元雙環(huán)或多環(huán)系，其中在雙環(huán)系中至少有一個(gè)環(huán)是芳環(huán)。雜芳基環(huán)可以在任何雜原子或碳原子上相連接。典型的雜芳基化合物包括，例如，咪唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，苯硫基，噻唑基，呋喃基，吡啶并呋喃基，嘧啶并呋喃基，吡啶并噻吩基，噠嗪并噻吩基，吡啶并噁唑基，噠嗪并噁唑基，嘧啶并噁唑基，吡啶并噻唑基，噠嗪并噻唑基，吡咯基，吡咯啉基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，二氫吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，噠嗪基，三唑基(例如4H-1，2，4-三唑基，1H-1，2，4-三唑基和2H-1，2，4-三唑基)，四唑基(例如1H-四唑基和2H四唑基)，吡咯烷基，咪唑烷基，哌啶基，哌嗪基，吲哚基，異氮茚基，二氫吲哚基，中氮茚基(indolizinyl)，苯并咪唑基，喹啉基，異喹啉基，吲唑基，苯并三唑基，噁唑基，異噁唑基，噁二唑基(例噁1，2，4-二唑基，1，3，4-噁二唑基和1，2，5-噁二唑基)，苯并噁唑基，苯并噁二唑基，苯并噁嗪基(例如2H-1，4-苯并噁嗪基)，噻唑基，異噻唑基，噻二嗪基(例如1，2，3-噻二嗪基，1，2，4-噻二嗪基和1，2，5噻二嗪基)。短語“取代雜芳基”指的是根據(jù)如上所提供的定義被取代的雜芳基。短語“雜亞芳基”指的是含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(例如N，O，S，或類似原子)作為芳環(huán)的一部分，和典型具有3-20個(gè)碳原子的二價(jià)芳基，而“取代雜亞芳基”指的是進(jìn)一步含有如上所述的一個(gè)或多個(gè)取代基的雜亞芳基。短語“烷氧基”指的是含氧的烷基或環(huán)烷基，如上所定義。短語“烷基酰胺基”指的是如上所定義的含有-C(O)NR2的烷基，其中每個(gè)R獨(dú)立為氫，烷基，環(huán)烷基，芳基，雜芳基等。而且，烷基酰胺基包括其中R和N一起構(gòu)成一個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的具體例。短語“氨基”指的是-NR2，其中每個(gè)R獨(dú)立為氫，烷基，環(huán)烷基，芳基，雜芳基等。而且，氨基包括其中R和N一起構(gòu)成一個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的具體例。短語“烷基氨基”指的是含有一個(gè)如上所定義的氨基的烷基，烷基如上所定義。短語“鹵素”指的是F，Cl，Br或I。短語“連接物(linker)”指的是任何一種能被用來加入、結(jié)合或連接兩個(gè)或多個(gè)烴基、取代烴基、含雜原子的取代烴基，或含取代雜原子的烴基的化學(xué)部分。典型的連接物包括-C＝C-，-C≡C-，-(C(R′)2)z-，-O-，-O-(C(R′)2)z-，-S-，-NR′-，-NH-(C(R′)2)z-，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-S(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，-O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，-NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′-，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′-，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)2-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)-，-O-NR′-S-(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中，每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代的烷基，取代取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，或取代或未取代的環(huán)烷基，以及z為1-10。這里優(yōu)選的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中LC為-NH-。在此介紹的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中A和B一起，或B和C一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)體系。示例性稠環(huán)體系包括 或 短語“稠環(huán)體系”指的是被稠和到一起的兩個(gè)或三個(gè)環(huán)，例如二環(huán)或三環(huán)體系。示例性稠環(huán)體系包括，例如萘基，1-咔啉基(1-carbolinyl)及類似物；和取代環(huán)體系例如聯(lián)苯、苯基吡啶基、二苯哌嗪基(diphenylpiperazinyl)及類似物。在這里優(yōu)選的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中D是 而且d為0-5。每個(gè)R5的優(yōu)選實(shí)施方案，當(dāng)存在時(shí)，獨(dú)立選自鹵素，取代或未取代的C1-C5烷基，取代或未取代的C1-C5烷氧基，取代或未取代的5-6元雜芳基，或N(R″)2，其中每個(gè)R″為獨(dú)立的取代或未取代C1-C5烷基或C3-C10環(huán)烷基。D的實(shí)施方案進(jìn)一步包括其中D和R5一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)體系的化合物。更優(yōu)選的D的實(shí)施方案選自 或 此處優(yōu)選的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中C是 例如，C的實(shí)施方案可選自 或 更優(yōu)選的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中C是 此處優(yōu)選的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中B是 而且b為0-2。例如，B的實(shí)施方案可選自 或 更優(yōu)選的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中B選自 或 其中各R2獨(dú)立選自鹵素或取代或未取代的C1-C5烷基。此處優(yōu)選的實(shí)施方案包括式(I)的化合物，其中A為 其中F是CH或N。更優(yōu)選的A的實(shí)施方案包括其中R1是鹵素或取代或未取代的C1-C5烷基的化合物。此處所介紹的優(yōu)選的實(shí)施方案包括具有對(duì)應(yīng)于式(II)的結(jié)構(gòu)的化合物 此處其它優(yōu)選的實(shí)施方案包括具有對(duì)應(yīng)于式(III)的結(jié)構(gòu)的化合物 此處進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案包括具有對(duì)應(yīng)于式(IV)的結(jié)構(gòu)的化合物 此處更進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案包括具有對(duì)應(yīng)于式(V)的結(jié)構(gòu)的化合物 此處特別優(yōu)選的實(shí)施方案包括具有對(duì)應(yīng)于式(VI)的結(jié)構(gòu)的化合物 所介紹的實(shí)施方案包括組合物，其含有式(I)的化合物與藥物學(xué)可接受載體；和試劑盒(kits)，其含有式(I)的化合物及其使用說明。
II.化合物的制備下面介紹的是制備本發(fā)明化合物的示例性總體方案。更詳細(xì)的合成方案在這里的實(shí)施例中給出。因?yàn)榘凑毡绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的方法，此處的化合物能被輕易地制備，所以代替或除下面所介紹的合成方案之外的很多方法可以用于制備此處的化合物。在本說明書公開內(nèi)容范圍內(nèi)的衍生物和化學(xué)相似的化合物，可以通過常規(guī)修改此處所提供的方法，使用適當(dāng)?shù)脑牧蟻碇苽洌瑢?duì)其選擇對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是顯而易見的。
A.常規(guī)縮合方案此處含有氨基噻唑或氨基唑部分(3)的化合物可以通過結(jié)合α-鹵化的酮衍生物(1)與適當(dāng)?shù)牧螂寤螂寤衔?2)來制備。例如，下面的方案1描述了一個(gè)制備2-氨基噻唑化合物的常規(guī)方案。例如，通過改變環(huán)A，B和D而控制方案1，以制備本發(fā)明的化合物。
方案1 另外，利用簡(jiǎn)單的硫脲例如NH2-C(＝S)-NH2和各種不同的α-溴酮衍生物也可以進(jìn)行縮合反應(yīng)。如方案2的路線所示例，生成的胺(4)可以和含有環(huán)D(5)的羧酸衍生物在偶聯(lián)劑(coupling agent)存在時(shí)發(fā)生共軛反應(yīng)，生成酰胺鍵化合物(6)。
方案2 B.α-溴酮衍生物的制備方案1所使用的優(yōu)選的鹵化酮衍生物包括α-溴酮衍生物。如下方案3所示，適當(dāng)?shù)耐榛匿寤瘜?dǎo)致α-溴酮衍生物的形成。
方案3
因此，通過改變方案3中的環(huán)A和B部分，可以制備多種α-溴酮衍生物。例如，其中環(huán)A為咪唑衍生物和環(huán)B為苯基衍生物(1a)的α-溴酮衍生物可以按照方案4制備。而且，例如，方案4也可以用來制備其中環(huán)A為三唑或噻唑衍生物的α-溴酮衍生物。
方案4 其中環(huán)A為非芳族衍生物，例如哌嗪與環(huán)B為苯基衍生物的α-溴酮衍生物可以利用相應(yīng)酮的溴化容易地制備。
C.硫脲衍生物的制備在方案1所述的常規(guī)縮合反應(yīng)中使用了硫脲或脲，而且可以利用方案5制備硫脲或脲。通常，可以通過將適當(dāng)?shù)陌?，例如苯胺衍生物加入到合適的異硫氰酸酯化合物中來制備脲衍生物。
方案5
硫脲衍生物7或8適合與α-溴酮衍生物縮合。而且，7或8的相應(yīng)脲衍生物也適合用在此處所介紹的常規(guī)縮合中。
D.制備取代的氨基噻唑的可選合成路線除了上述方案1和方案2所述的常規(guī)縮合路線外，也可以使用如下方案6所示的修改的Suzuki偶合(Suzuki coupling)反應(yīng)來制備各種取代的噻唑和吡啶衍生物。
方案6 氨基噻唑衍生物通過利用方案6的修改來制備，如下面方案7所示。注意，方案7中所有的成鍵條件與方案6的相同。
方案7 III.調(diào)節(jié)Aβ的方法及治療與Aβ相關(guān)的疾病的方法本發(fā)明的一方面涉及調(diào)節(jié)Aβ水平的方法和治療與異常Aβ水平相關(guān)的疾病的方法，其使用具有對(duì)應(yīng)于式(VII)的結(jié)構(gòu)的化合物及其藥物可接受鹽和其藥物前體(A1-LA1)0-1-(B1)-LB1-(C1)-LC1-(D1)(VII)其中A1是任選的，當(dāng)存在時(shí)，是5元或6元取代或未取代的環(huán)烷基，雜環(huán)基(heterocyclyl)，芳基，雜芳基，環(huán)亞烷基，雜環(huán)亞烷基(heteroclylene)，亞芳基或雜亞芳基；B1是5元或6元取代或未取代的環(huán)亞烷基，雜環(huán)亞烷基(heteroclylene)，亞芳基，或雜亞芳基；或B1與A1一起，形成一個(gè)稠環(huán)體系；C1是5元或6元取代或未取代的亞芳基或雜亞芳基；D1是5元或6元取代或未取代芳基，雜芳基，亞芳基，或雜亞芳基；和LA1是任選的，當(dāng)存在時(shí)，是共價(jià)鍵或連接物；每個(gè)LB1和LC1獨(dú)立為共價(jià)鍵或連接物；其中式(VII)的所述化合物調(diào)節(jié)Aβ水平。此處優(yōu)選的方法包括使用式(VII)的化合物，其中A1是任選的，當(dāng)存在時(shí)為
其中，每個(gè)E獨(dú)立為N，NR，C，CR1，S或O，條件是不多于四個(gè)的E是雜原子；R是氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的烷基酰胺基，取代或未取代的烷基氨基，取代或未取代的環(huán)烷基，或取代或未取代的芳基；每個(gè)R1是氫，鹵素，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的烷基酰胺基，取代或未取代的烷基氨基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的環(huán)烷基，或取代或未取代的芳基；或A1，當(dāng)存在時(shí)，是 其中，每個(gè)M獨(dú)立地選自CR1或N，條件是不超過三個(gè)M是N；和B1是 其中每個(gè)G獨(dú)立地為CR2或N，條件是不超過三個(gè)G是N；每個(gè)R2獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的烷基酰胺基，取代或未取代的烷基氨基，取代或未取代的氨基；C1是 其中J選自CR3，O，S，N和NR；每個(gè)K獨(dú)立地是N，NR，C或CR3；R3是氫，鹵素，取代或未取代的烷基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基，或取代或未取代的烷氧基；或C1是 其中每個(gè)M獨(dú)立地選自CR1或N，條件是不超過三個(gè)M是N；D1是 其中每個(gè)E獨(dú)立是N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過四個(gè)E是雜原子；或D1是 其中每個(gè)M獨(dú)立地選自CR5或N，條件是不超過三個(gè)M是N；
每個(gè)R5獨(dú)立地選自氫，鹵素，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的環(huán)烷基，取代或未取代的雜環(huán)，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜芳基，取代或未取代的氨基，或取代或未取代的烷基氨基；LA1，當(dāng)存在時(shí)，以及每個(gè)LB1和LC1獨(dú)立地為共價(jià)鍵或連接物，選自-C＝C-，-C-C-，-(C(R′)2)z-，-O-，O(CR′)2)z-，-S-，-NR′-，-NH-(C(R′)2)z，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-S(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，-O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-NR′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，-NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′-，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′-，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)2-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)-，-O-NR′-S(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中，每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，或取代或未取代的環(huán)烷基，和z為1至10。此處優(yōu)選的方法包括使用式(VII)的化合物，其中LC1是-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，-NR′-，-C(O)-，-(C(R′)2)2-或-C(S)-。此處更優(yōu)選的實(shí)施方案包括使用對(duì)應(yīng)于式(II)，(III)，(IV)，(V)或(VI)的化合物調(diào)節(jié)Aβ水平的方法和治療與異常Aβ水平相關(guān)的疾病的方法。短語“淀粉樣蛋白β”或“Aβ”指一種來自人類或者其他物種的肽，其(a)由加工或切割A(yù)PP產(chǎn)生，且是淀粉樣蛋白(amyloidogenic)，(b)是β-淀粉樣蛋白斑塊的肽組分之一，(c)是Aβ的43-氨基酸序列(APP770的氨基酸672-714；基因庫收錄編號(hào)P05067)，(d)是一種如(a)，(b)或(c)所述的肽的片段，和/或(e)含有一個(gè)或多個(gè)與(a)，(b)，(c)或(d)有關(guān)的加入、去除或取代。在本領(lǐng)域中，Aβ也被稱作βAP、AβP或βA4。衍生自APP蛋白水解的Aβ肽通常為～4.2Kd蛋白質(zhì)，其典型長(zhǎng)度為39-43個(gè)氨基酸，這取決于羰基末端的終點(diǎn)，該終點(diǎn)表現(xiàn)其不均一性。然而，含有小于39個(gè)氨基酸的Aβ肽，例如Aβ38、Aβ37和Aβ34也可以存在。Aβ肽可以通過淀粉樣蛋白(amyloidogentic)APP加工途徑產(chǎn)生，其中APP被β-分泌酶(BACE)和一種或多種γ-分泌酶的活性所切割。Aβ肽包括那些始于APP770的672位置和那些始于APP770的682位置的肽(例如，請(qǐng)參閱基因庫收錄編號(hào)P05067)。通常，如此處所用，“Aβ”包括任何和所有的Aβ肽，除非氨基酸殘基被指定，例如，諸如1-43(Aβ43)，1-42(Aβ42)，1-40(Aβ40)，1-39(Aβ39)，1-38(Aβ38)，1-37(Aβ37)，1-34(Aβ34)，11-43，11-42，11-40，11-39，11-38，11-37，11-34以及其它。各種長(zhǎng)度不同的Aβ肽在此被稱作Aβ的“種類(species)”。短語“淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein)”或“APP”指的是能夠通過一種或多種加工或切割反應(yīng)進(jìn)行蛋白水解加工或切割而產(chǎn)生Aβ的蛋白質(zhì)。APP包括所有通過選擇性剪接(alternativesplicing)而產(chǎn)生的同種型，其典型地通過在具體同種型中氨基酸的數(shù)量來區(qū)分。例如，APP包含APP695，APP751和APP770。例如，APP其它的同種型包括APP714，L-APP752，L-APP733，L-APP696，L-APP677，APP563和APP365。APP也包括所有含有突變的同種型，該突變?cè)贏D家族和其它淀粉樣變條件下被發(fā)現(xiàn)。例如，這些突變包括瑞典(Lys670Asn，Met671Leu)雙突變，倫敦突變(Val717Ile)，印第安納突變(Val717Leu)，Val717Phe，Val717Gly，Ala713Thr，Ala713Aal，奧地利突變(Thr714Ile)，伊朗突變(Thr714Ala)，法國(guó)突變(Val715Met)，德國(guó)突變(Val715Ala)，佛羅里達(dá)突變(Ile716Val)，Ile716Thr，澳大利亞突變(Leu723Pro)，佛蘭德突變(Ala692Gly)，荷蘭突變(Glu693Gln)，北極突變(Glu693Gly)，意大利突變(Glu693Lys)，愛荷華突變(Asp694Asn)和淀粉樣變-荷蘭型(Dutch-type)突變(Glu693Gln)。(此處所有的編號(hào)方式與APP770形式相關(guān))。術(shù)語“APP”進(jìn)一步包括含有與上述同種型有關(guān)的一種或多種加入、去除或取代的蛋白質(zhì)，和來自人類和其他物種的APP蛋白質(zhì)。除非指定特定的同種型，在此所用到的APP通常指的是來自任何物種的、有突變或沒有突變的任何和所有同種型的APP。短語“淀粉樣前體蛋白片段”指的是通過一種或多種加工或切割反應(yīng)被加工或切割來產(chǎn)生Aβ的APP的任何部分。APP的淀粉樣前體片段通常包含β-分泌酶切割位點(diǎn)，當(dāng)切割時(shí)，該位點(diǎn)產(chǎn)生Aβ的N-末端，或者γ-分泌酶切割位點(diǎn)，當(dāng)切割時(shí)，該位點(diǎn)產(chǎn)生Aβ的C-末端，或者同時(shí)包含β-分泌酶和γ-分泌酶切割位點(diǎn)。示例性淀粉樣前體片段包括被命名為C99和C89的APPC-末端片段，及其缺少一些或所有C-末端殘基的部分，該殘基通常殘存于細(xì)胞溶質(zhì)中。短語“淀粉樣前體蛋白(APP)，其淀粉樣前體片段和/或Aβ的來源”指的是任何在活體內(nèi)，離體或活體外的含有APP、其淀粉樣前體片段和/或Aβ的物質(zhì)。例如，一種“來源”可以是一種活的生物體(包括人類患者，或?qū)嶒?yàn)室或獸醫(yī)動(dòng)物)、其樣品(例如組織或體液，或其提取物)、細(xì)胞(例如原代細(xì)胞或細(xì)胞系，或其提取物)、胞外介質(zhì)或基質(zhì)或環(huán)境或分離的蛋白質(zhì)。關(guān)于Aβ水平的短語“調(diào)節(jié)(modulate)”或“調(diào)節(jié)(modulating)”指的是至少一種Aβ肽(例如Aβ43，Aβ42，Aβ40，Aβ39，Aβ38，Aβ37，Aβ34，11-43，11-42，11-40，11-39，11-38，11-37，11-34等)的數(shù)量可檢測(cè)地增加或減少；不同種的Aβ肽相對(duì)數(shù)量(例如Aβ42與Aβ40的比例)可檢測(cè)地增加或減少；特殊形式的Aβ肽(例如單體、低聚體或原纖維形式；在溶液中或聚集在斑塊上；在一個(gè)特殊的構(gòu)象中；等)的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量可檢測(cè)地增加或減少；和/或特殊位置的Aβ肽(例如胞內(nèi)，膜相關(guān)的或胞外的位置，或在特殊的組織或體液中)的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量可檢測(cè)地增加或減少。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，隨Aβ42或Aβ40水平的減少，或Aβ37或Aβ38水平的增加，調(diào)節(jié)是可以檢測(cè)的。例如，相對(duì)于一個(gè)參考水平，通過增加或減少至少5％的一種Aβ、總Aβ或特殊形式的Aβ的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量，例如10％，20％，30％，40％，50％，75％，90％或更多，對(duì)Aβ水平的調(diào)節(jié)是可以被證明的。調(diào)節(jié)可以是增加或減少，該增加或減少相對(duì)于參考水平，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有著顯著的不同。短語“接觸(contacting)”指的是使兩種或更多的物質(zhì)發(fā)生或直接或間接的聯(lián)系。接觸可以發(fā)生在活體內(nèi)，活體外或在試管內(nèi)。例如，通過化合物的治療或預(yù)防性投藥(prophylactic administration)，人類或其它動(dòng)物的APP、其淀粉前體片段和/或Aβ來源或BACE活性來源，都能與化合物接觸。例如，通過把化合物導(dǎo)入溫育基，組織、組織提取物或細(xì)胞的APP、其淀粉前體片段和/或Aβ來源可以與化合物接觸。例如，通過把化合物和流體預(yù)混合，是流體例如胞外介質(zhì)的APP、其淀粉前體片段和/或Aβ來源可以與化合物接觸。短語“治療(treating)”或“治療(treatment)”指的是一種疾病或病癥的一種或多種癥狀得到改善或有益的變化的任何一種方式，不管是永久的還是暫時(shí)的方式，這可以歸功于此處化合物或組合物的施用或者與此處化合物或組合物的施用有關(guān)。該術(shù)語包含任何藥物使用，包括其中疾病或病癥的一種或多種癥狀的發(fā)展被阻止、延緩或減少的預(yù)防使用，不管是永久的還是暫時(shí)的方式，這可以歸功于化合物的施用或與化合物的施用有關(guān)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，治療包括這里化合物的任何藥物使用，用于治療以變化的或異常的Aβ生成、分解代謝、加工和/或水平為特征的疾病或障礙。短語“與異常Aβ水平相關(guān)的疾病”指的是任何情況，其特征是至少一種Aβ肽(例如Aβ43，Aβ42，Aβ40，Aβ39，Aβ38，Aβ37，Aβ34，11-43，11-42，11-40，11-39，11-38，11-3，11-34等)的數(shù)量異常；不同種的Aβ肽的相對(duì)數(shù)量異常(例如Aβ42對(duì)Aβ40的比例)；特殊形式的Aβ肽(例如單體，低聚體，或原纖維形式；在溶液中或聚集在斑塊上；在一個(gè)特殊的構(gòu)象中；等)的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量異常；和/或特殊位置(例如胞內(nèi)，膜相關(guān)的或胞外的位置，或在特殊的組織或體液中)的Aβ的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量異常。一種或多種Aβ肽、Aβ形式和/或Aβ的反常數(shù)量可能與處于正常的、無疾病狀態(tài)的情況有關(guān)。以變化的Aβ水平為特征的疾病和障礙在本領(lǐng)域和/或此處所述是已知的，例如，包括唐氏綜合癥，帕金森病，擴(kuò)散盧伊體病，進(jìn)行性核上麻痹，遺傳性淀粉樣變腦出血-Dutch型(Hereditary CerebralHemorrhage with Amyloidosis-Dutch Type(HCHWA-D))，腦淀粉樣血管病(CAA)和輕度認(rèn)知損壞(MCI)。本發(fā)明的實(shí)施方案包括治療任何與異常Aβ水平例如AD有關(guān)的疾病的方法。本發(fā)明的化合物可以施給一個(gè)主體，來治療(包括預(yù)防或改善)與變化的Aβ產(chǎn)生、原纖維形成/沉積、降解和/或清除，或Aβ任何變化的同種型有關(guān)的狀況。優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物用于治療神經(jīng)障礙，包括但并不限于神經(jīng)變性狀況和其它癡呆或創(chuàng)傷狀況。示例性神經(jīng)障礙可包括擴(kuò)散性盧伊體病，皮克病，多系統(tǒng)變性(夏-德綜合癥)，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病，包括肌萎縮性側(cè)索硬化癥，變性共濟(jì)失調(diào)，皮質(zhì)基底變性(cortical basaldegeneration)，肌萎縮性側(cè)索硬化癥-帕金森-癡呆綜合癥(ALS-Parkinson’s-Dementia complex of Guam)，亞急性硬化性全腦炎，亨廷頓舞蹈病，synucleinopathies，原發(fā)進(jìn)行性失語，紋狀體黑質(zhì)變性，馬-約病/脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)3型和橄欖體橋腦小腦變性，圖雷特病，延髓和假性球麻痹，脊髓和脊髓延髓性肌萎縮(肯尼迪病)，原發(fā)性側(cè)索硬化，家族痙攣性截癱，韋-霍病，庫-韋綜合癥，家族黑矇性白癡，桑德霍夫病，家族痙攣性截癱，沃-庫-韋綜合癥，痙攣性輕截癱，進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病，朊病毒疾病(包括克-雅綜合癥，格-施-沙病，庫魯病致命家族失眠癥)，年齡相關(guān)性癡呆和其它伴隨記憶損失的情況，例如血管癡呆，亞急性皮質(zhì)下動(dòng)脈硬化性白質(zhì)腦病(賓斯內(nèi)旺格病)，內(nèi)分泌或代謝起源的癡呆，頭部創(chuàng)傷和彌散性腦損傷癡呆，拳擊性癡呆和額葉癡呆，腦缺血或腦梗塞(infaction)，包括栓子閉塞和血栓閉塞，以及任何類型的顱內(nèi)出血(包括但并不限于硬膜外的、硬膜下的、蛛網(wǎng)膜下的和大腦內(nèi)的)，和顱內(nèi)與脊柱內(nèi)損害(包括但并不限于挫傷、穿透、切力、壓迫和撕裂)。
IV.其它治療應(yīng)用本發(fā)明的化合物和組合物可以用來治療或改善多種障礙。在一個(gè)實(shí)施方案中，可用于治療用途的化合物和組合物在靶組織中(即腦、治療神經(jīng)變性障礙、其它生成淀粉樣蛋白情況的具體外圍器官)具有相當(dāng)高的生物利用度，和相當(dāng)?shù)偷亩拘?。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以利用標(biāo)準(zhǔn)化方法評(píng)估此處所述化合物的藥物學(xué)可接受性。例如，本發(fā)明的化合物可用于治療癌癥或其它以異常細(xì)胞增生為特征的疾病，炎癥，細(xì)菌或病毒感染，自身免疫疾病，急性疼痛，肌肉痛，神經(jīng)病痛，過敏癥，神經(jīng)疾病，皮膚病，心血管病，糖尿病，胃腸疾病，抑郁癥，內(nèi)分泌或其它以異常激素分解代謝為特征的疾病，肥胖癥，骨質(zhì)疏松或其它骨障礙，胰腺疾病，癲癇或癲癇發(fā)作病，勃起功能障礙或性功能障礙，眼科障礙或眼病，膽固醇失調(diào)，高血壓或低血壓，偏頭痛或頭痛，強(qiáng)迫癥，恐慌癥，焦慮癥，創(chuàng)傷后精神緊張性障礙，化學(xué)品依賴或成癮等。在此所提供的化合物也可用于預(yù)防或治療淀粉樣變。淀粉樣變包括以淀粉樣蛋白沉積到腦部或外周為特征的所有情況，包括與風(fēng)濕病，特發(fā)性疾病，遺傳病，炎癥，感染病和惡性病有關(guān)的淀粉樣變。例如，淀粉樣變癥包括與上述變化的Aβ水平有關(guān)的情況(例如阿爾茨海默病，唐氏綜合癥，HCHWA-D，腦淀粉樣血管病(CAA)，和輕度認(rèn)知損壞(MCI)等)，以及家族性淀粉樣多發(fā)性神經(jīng)病，家族性淀粉樣心肌病(Danish型)，分離心臟淀粉樣變性(isolated cardiacamyloid)，淀粉樣血管病，全身性老年性淀粉樣變，家族性全身性淀粉樣變，輕鏈淀粉樣變(AL)，透析相關(guān)性淀粉樣變，腎淀粉樣變，淀粉樣變朊病毒相關(guān)腦病，糖尿病(其中淀粉不溶素可能沉積到腎或胰上)，心房淀粉樣變和垂體淀粉樣變。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以決定施用在此所述的化合物或組合物對(duì)其有益的其它疾病和障礙。
V.藥物組合物短語“藥物學(xué)可接受的載體”指的是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的適合特定施用方式的任何載體。另外，化合物可以被制成在組合物中的單獨(dú)藥物活性組分，或者也可以與其它活性組分結(jié)合。短語“藥物學(xué)可接受的鹽”指的是適用于作藥物應(yīng)用的任何鹽制劑。藥物學(xué)可接受的鹽包括胺鹽，例如，N，N′-二芐基乙二胺，氯化普魯卡因(chloroprocaine)，膽堿，氨，二乙醇胺和其它羥基胺，1，2-乙二胺，N-甲基葡糖胺，普魯卡因，N-二芐基苯乙胺，1-對(duì)-氯-芐基-2-吡咯烷-1′-基甲基苯并咪唑，二乙胺和其它烷基胺，哌嗪，三羥甲基氨基甲烷等；堿金屬鹽，例如，鋰，鉀，鈉等；堿土金屬鹽，例如鋇，鈣，鎂等；過渡金屬鹽，例如鋅，鋁等；其它金屬鹽，例如磷酸氫二鈉，磷酸二鈉等；無機(jī)酸，例如氫氯化物，硫酸鹽等；和有機(jī)酸鹽，例如醋酸鹽，乳酸鹽，蘋果酸鹽，酒石酸鹽，檸檬酸鹽，抗壞血酸鹽，琥珀酸鹽，丁酸鹽，戊酸鹽，延胡索酸鹽等。短語“前藥”指的是化合物，其在活體上施用后，通過一個(gè)或多個(gè)步驟或過程被代謝為，或被轉(zhuǎn)化為具有生物、藥物或治療活性的化合物形式?？梢酝ㄟ^修改化合物現(xiàn)有的官能團(tuán)來制備前藥，方式是該修改或者以常規(guī)的操作或者在活體內(nèi)被裂解成在此所述的化合物。例如，前藥包括本發(fā)明的化合物，其中羥基、氨基或硫氫基與其它基團(tuán)結(jié)合，當(dāng)化合物施用到哺乳動(dòng)物身上時(shí)，能夠被裂解分別形成自由羥基、自由氨基，或自由硫氫基。例如，典型的前藥包括酯，烯醇醚，烯醇酯，乙酸鹽，甲酸鹽，苯甲酸鹽衍生物，以及本發(fā)明化合物中的醇和胺官能團(tuán)的類似物。通過了解在活體中的藥效過程和藥物代謝，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員，一旦知道一種有藥物學(xué)活性的化合物，就能夠設(shè)計(jì)該化合物的前藥(例如，請(qǐng)參考Nogrady(1985)MedicinalChemistry A Biochemical Approach，Oxford University Press，New York，pages 388-392)。此處的組合物包括一種或多種此處所提供的化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物被制成合適的藥物制劑，例如溶液，懸液，片劑，可分散片劑，丸，膠囊，粉劑，緩釋劑或酏劑，用于口服，或在無菌溶液或懸液中用于腸胃外投藥，以及經(jīng)皮貼片制劑(transdermal patchpreparation)和干粉吸入器。在一個(gè)實(shí)施方案中，利用本領(lǐng)域所熟知的技術(shù)和過程將上述化合物制成藥物組合物(例如，請(qǐng)參閱AnselIntroduction to Pharmaceutical Dosage Forms，F(xiàn)ourth Edition 1985，126)。在組合物中，有效濃度的一種或多種化合物或其藥物學(xué)可接受衍生物與適合的藥物載體混合。在配成劑型之前，如上所述，化合物可被衍變?yōu)橄鄳?yīng)的鹽，酯，烯醇醚或烯醇酯，縮醛，縮酮，原酸酯(orthoesters)，半縮醛，半縮酮，酸，堿，溶劑合物，水合物或前藥。化合物在組合物中的濃度是有效的釋放量，一旦施用，該劑量可治療、預(yù)防或改善被治療疾病或障礙的一種或多種癥狀。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物被制成單劑量施用。為制備一種組合物，在所選載體中按有效濃度溶解、懸浮、分散或混合重量分?jǐn)?shù)的化合物，使得所治療的病癥得以減輕、預(yù)防，或者一種或多種癥狀得以改善。在對(duì)被治療患者沒有不良副作用的同時(shí)，活性化合物以足以發(fā)揮有效治療作用的量被加入到藥物學(xué)可接受載體中。通過此處以及PCT公開的WO 04/018997所述，在活體內(nèi)和活體外體系，測(cè)試化合物，可以經(jīng)驗(yàn)地決定治療上有效的濃度，然后由此推斷人類使用劑量?；钚曰衔镌谒幬锝M合物中的濃度將取決于活性化合物的吸收、失活和排泄速度，化合物的物理化學(xué)特性，劑量方案，和投藥量以及本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它因素。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種治療上有效的劑量應(yīng)當(dāng)產(chǎn)生大約0.1ng/ml到大約50-100μg/ml的活性組分的血清濃度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物應(yīng)當(dāng)提供的劑量為每天每千克人體體重大約0.001mg到大約2000mg。藥物劑量單位方式被制成，每劑量單位形式提供大約0.01mg、0.1mg或1mg到大約500mg、1000mg或2000mg，在一個(gè)實(shí)施方案中，每劑量單位方式提供大約為10mg到大約500mg的活性組分或必要組分的組合物?；钚越M分可以一次施用，或可以分成許多小劑量按時(shí)間間隔施用。應(yīng)當(dāng)理解，精確的劑量和治療持續(xù)期間是被治療疾病的函數(shù)，而且可以利用已知的測(cè)試方案或者根據(jù)來自活體或活體外測(cè)試數(shù)據(jù)的推斷，經(jīng)驗(yàn)性地確定。應(yīng)當(dāng)注意，濃度和劑量值也隨要改善的病癥的嚴(yán)重程度而變化。進(jìn)一步應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)任何特殊的主體而言，要根據(jù)個(gè)體需要和實(shí)施或監(jiān)督組合物實(shí)施的人員的專業(yè)判斷，隨時(shí)間調(diào)整具體劑量控制，而且，在此所闡述的濃度范圍僅僅是示范性的，并非意欲限定所要求保護(hù)的組合物的范圍或使用。在化合物顯示其溶解度不夠的情況下，可使用溶解化合物的方法。這些方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法，包括但不限于，使用共溶劑，例如二甲基亞砜(DMSO)，使用表面活性劑，例如TWEEN，或溶解在碳酸氫鈉水溶液中?；衔锏难苌铮缁衔锏那八幰部捎糜谥苽溆行У乃幬锝M合物。一旦混合或加入化合物，所形成的混合物可以是溶液，懸液，乳狀液等。所形成的混合物的形式取決于很多因素，包括預(yù)期的投藥方式和化合物在所選載體或媒介(vehicle)中的溶解度。有效濃度要足以改善所治療的疾病、障礙或情況的癥狀，而且可以經(jīng)驗(yàn)地決定。提供藥物組合物用于按單位劑量方式施予人類和動(dòng)物，例如含有適量化合物或其藥物學(xué)可接受衍生物的片劑，膠囊，丸，粉劑，粒劑，無菌腸胃外溶液或懸液，和口服溶液或懸液，和油-水乳狀液。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物治療活性化合物及其衍生物按單位劑量方式或多劑量方式被制備和施用。此處所用的單位劑量方式指的是適合用于人類和動(dòng)物主體的物理分離的單位，如本領(lǐng)域已知，可進(jìn)行單獨(dú)包裝。每個(gè)單位劑量含有足夠產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的治療活性化合物，和必需的藥物載體、媒介或稀釋液。單位劑量方式的實(shí)例包括安瓿和注射器以及單獨(dú)包裝的片劑或膠囊。單位劑量方式可以其部分或其倍量被施用。多劑量方式是多個(gè)相同的單位劑量方式，其被包裝在一個(gè)單獨(dú)的容器中，以分開的單位劑量方式來施用。多劑量方式的實(shí)例包括管形瓶、片劑或膠囊瓶，或品脫或加侖瓶。因此，多劑量方式是集中在包裝中的多個(gè)單位劑量。例如，液體的藥物可施用組合物可通過在載體中溶解、分散或混合上述活性化合物和任選的藥物輔助劑，形成溶液或懸液而制備，載體例如水，鹽水，葡萄糖水溶液，甘油，乙二醇，乙醇等。如果需要的話，要施用的藥物組合物也可以含有少量無毒的輔助物質(zhì)，例如濕潤(rùn)劑，乳化劑，加溶劑，pH緩沖劑等，例如，醋酸鹽，檸檬酸鈉，環(huán)糊精(cyclodextrine)衍生物，失水山梨糖醇單月桂酸酯，三乙醇胺醋酸鈉，油酸合三乙醇胺以及其它這樣的試劑。制備這樣的劑量方式的實(shí)際方法對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是已知或是顯而易見的；例如，請(qǐng)參考Remington’s Pharmaceutical Science，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，15th Edition，1985.可制備含活性組分在0.005％-100％(wt％)范圍內(nèi)和剩余部分由無毒載體補(bǔ)足的劑量方式或組合物。制備這些組合物的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。預(yù)期使用的組合物可含有0.001％-100％(wt％)活性組分，在一個(gè)實(shí)施方案中，為0.1％-95％(wt％)，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為75％-85％(wt％)。
A.口服組合物口服藥物劑量方式為固態(tài)、凝膠或者液態(tài)。固態(tài)劑量方式為片劑，膠囊，粒劑，和散粉?？诜瑒┑姆N類包括壓縮式、咀嚼錠劑和可以是腸溶、糖衣或膜衣的片劑。膠囊可以是硬的或軟的明膠膠囊，而粒劑和散粉可以非泡騰或泡騰方式提供，并結(jié)合本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它組分。
1.口服固態(tài)組合物在某些實(shí)施方案中，劑型為固態(tài)劑量方式，在一個(gè)實(shí)施方案中，為膠囊或片劑。片劑，丸，膠囊，錠劑等可以含有一種或多種下列組分，或相似性質(zhì)的化合物粘合劑；潤(rùn)滑劑；稀釋劑；助流劑；崩解劑；著色劑；脫硫劑；增香劑；濕潤(rùn)劑；an emetic coating；薄膜包衣。粘合劑的實(shí)例包括微晶纖維素，黃蓍樹膠，葡萄糖溶液，金合歡漿，明膠溶液，糖蜜，聚乙烯吡咯烷，聚維酮(povidon)，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和漿糊。潤(rùn)滑劑包括滑石，淀粉，硬脂酸鎂或鈣，石松科和硬脂酸。稀釋劑包括，例如乳糖，蔗糖，淀粉，高嶺土，鹽，甘露糖醇和磷酸二鈣。助流劑包括但不限于膠體二氧化硅。崩解劑包括交叉羧甲纖維素鈉(crosscarmellose sodium)，甘醇酸淀粉鈉，藻酸，玉米淀粉，馬鈴薯淀粉，膨潤(rùn)土，甲基纖維素，瓊脂和羧基甲基纖維素。著色劑包括，例如，任何一種被認(rèn)可鑒定的水溶性FD和C染料、其混合物；懸浮在水合氧化鋁中的水溶性FD和C染料。脫硫劑包括蔗糖，乳糖，甘露糖醇和人工脫硫劑，例如糖精和任意數(shù)量噴霧干燥香料。增香劑包括從植物例如水果中提取的天然香料，和合成的化合物混合物，這些化合物產(chǎn)生令人愉快的感覺，例如，但不限于，薄荷和水楊酸甲酯。濕潤(rùn)劑包括丙二醇單月桂酸酯，失水山梨糖醇單油酸酯，單月硅酸二甘醇酯和聚氧乙烯十二烷基醚(polyoxyethylene lauralether)。emetic-coatings包括脂肪酸，脂肪，蠟，紫膠，含氨紫膠和乙酸鄰苯二甲酸纖維素。薄膜包衣包括羥乙基纖維素，羧基甲基纖維素鈉，聚乙二醇4000和乙酸鄰苯二甲酸纖維素?；衔?，或其藥物學(xué)可接受衍生物可以在一種組合物中被提供，該組合物保護(hù)它-免于胃部酸性環(huán)境。例如，組合物可被制成包在腸溶衣中，腸溶衣可維持其在胃中的完整性，并在腸內(nèi)釋放活性化合物。組合物也可以結(jié)合抗酸劑和其它這樣的組分制備而成。當(dāng)劑量單位方式為膠囊時(shí)，除含有上述類型物質(zhì)之外，它可以包含諸如脂肪油之類的液體載體。另外，劑量單位方式能夠包含其它各種各樣的修改劑量單位物理形狀的物質(zhì)，例如糖衣和其它的腸內(nèi)吸收藥?；衔镆材軌蜃鳛轸齽?，懸液，糖漿，片，噴灑劑，口香糖等的成分被施用。糖漿除含有活性化合物外，可含有蔗糖作為脫硫劑，和某些防腐劑，染料以及著色劑和香料?；钚晕镔|(zhì)也能夠和不會(huì)削弱所需作用的其它活性物質(zhì)混合，或與補(bǔ)充所需作用的物質(zhì)混合，例如，抗酸劑，H2阻滯劑以及利尿劑。活性組分指在此所述的化合物或其藥物學(xué)可接受衍生物。可以包括較高濃度，按重量計(jì)算可達(dá)到大約98％的活性組分。在所有的實(shí)施方案中，片劑和膠囊可以被包衣，正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知，目的是緩和或維持活性組分的溶解。因此，例如，可以用傳統(tǒng)的腸吸收包衣來包衣，例如苯基水楊酸，蠟和乙酸鄰苯二甲酸纖維素。
2.口服液態(tài)組合物液態(tài)口服劑量方式包括水溶液，乳狀液，懸液，再生自非泡騰粒劑的溶液和/或懸液，和再生自泡騰粒劑的泡騰制劑。例如，水溶液包括酏劑和糖漿。乳狀液或者為水包油或者為油包水。酏劑為清澈而甜味的含水酒精制劑。用于酏劑的藥物學(xué)可接受載體包括溶劑。糖漿是濃縮的糖的水溶液，例如蔗糖，而且可以含有防腐劑。乳狀液為兩相體系，其中一種液體以小液珠的方式分散在另外一種液體中。用在乳狀液中的藥物學(xué)可接受載體為非水液體、乳化劑和防腐劑。懸液使用藥物學(xué)可接受的懸浮劑和防腐劑。用于非泡騰粒劑的、可再生成液態(tài)口服劑量方式的藥物學(xué)可接受物質(zhì)，包括稀釋劑、甜味劑和潤(rùn)濕劑。用于泡騰粒劑、可再生成液態(tài)口服劑量方式的藥物學(xué)可接收物質(zhì)包括有機(jī)酸和二氧化碳源。著色劑和增香劑用在所有上述劑量方式中。溶劑包括甘油，山梨糖醇，乙醇和糖漿。防腐劑實(shí)例包括甘油，甲基和對(duì)羥苯甲酸丙酯，苯甲酸，苯甲酸鈉和乙醇。用于乳狀液的非水液體實(shí)例包括礦物油和棉花子油。乳化劑的實(shí)例包括明膠，金合歡屬，黃蓍樹膠，膨潤(rùn)土和諸如聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯這樣的表面活性劑。懸浮劑包括羧基甲基纖維素鈉，果膠，黃蓍樹膠，Veegum和金合歡屬。脫硫劑包括蔗糖，糖漿，甘油和諸如糖精這樣的人工脫硫劑。濕潤(rùn)劑包括丙二醇單硬脂酸酯，失水山梨糖醇單油酸酯，單月硅酸二甘醇酯和聚氧化乙烯十二烷基醚。有機(jī)酸包括檸檬酸和酒石酸。二氧化碳源包括碳酸氫鈉。著色劑包括任何一種被認(rèn)可鑒定的水溶性FD和C染料，及其混合物。增香劑包括從植物例如水果中提取的天然香料，和合成的化合物混合物，這些化合物產(chǎn)生令人愉快的感覺。對(duì)固態(tài)劑量方式而言，在一個(gè)實(shí)施方案中，在例如碳酸異丙稀酯、植物油或甘油三酯中的溶液或懸液被密封入明膠膠囊中。美國(guó)專利號(hào)4,328,245，4,409,239和4,410,545公開了這樣的技術(shù)方案、制劑和其封裝。對(duì)液態(tài)劑量方式而言，例如在聚乙二醇中的溶液可被足量的藥物學(xué)可接受液態(tài)載體例如水稀釋，以便施用時(shí)容易計(jì)量。另外，通過把活性化合物或鹽溶解或分散到植物油，乙二醇，甘油三酯，丙二醇酯(例如碳酸異丙稀酯)和其它這樣的載體中，并把這些溶液或懸液密封入硬或軟的膠囊殼中，以制備液態(tài)或半-固態(tài)口服制劑。其它有用的劑型包括在美國(guó)專利RE28,819和4,358,603所述的那些。簡(jiǎn)要地，這樣的劑型包括但不限于那些含有該處所提供的化合物，二烴基化的單或聚烷撐二醇和一種或多種抗氧化劑的劑型，所述化合物包括但不限于1，2-二甲氧基甲烷，二甘醇二甲醚，三甘醇二甲醚，四甘醇二甲醚(tetraglyme)，聚乙二醇-350-二甲醚，聚乙二醇-550-二甲醚，聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550和750指的是聚乙二醇的近似平均分子量，所述抗氧化劑例如2，6-二叔丁基對(duì)甲酚(BHT)，叔丁基羥基苯甲醚(butylated hydroxyanisole)(BHA)，棓酸丙酯，維他命E，對(duì)苯二酚，羥基香豆素，乙醇胺，卵磷脂，腦磷脂，抗壞血酸，蘋果酸，山梨醇，磷酸，硫代二丙酸和其酯，以及二硫代氨基甲酸鹽類。其它劑型包括但不限于含水醇溶液，其包括藥物學(xué)可接受的乙縮醛。用于這些劑型的醇為任何藥物學(xué)可接受的含一個(gè)或多個(gè)羥基基團(tuán)的水混溶性溶劑，包括但不限于乙二醇和乙醇。乙縮醛包括但不限于低烷基醛的二(低烷基)乙縮醛，例如乙醛二乙縮醛。
B.血管注射劑、溶液和乳狀液在一個(gè)實(shí)施方案中以注射為特征，在此也考慮腸胃外投藥，其或者為皮下注射、肌內(nèi)注射或者靜脈內(nèi)注射。可以用傳統(tǒng)的方式制備血管注射劑，或?yàn)橐簯B(tài)溶液或?yàn)閼乙海渥⑸渲斑m合以液體中的溶液或懸液存在的固態(tài)形式，或?yàn)槿闋钜?。血管注射劑、溶液和乳狀液也含有一種和多種賦形劑。合適的賦形劑例如有水，鹽，葡萄糖，或乙醇。另外，如果需要，被施用的藥物組合物也可以含有少量的無毒輔助物質(zhì)，例如濕潤(rùn)劑或乳化劑，pH緩沖劑，穩(wěn)定劑，增溶劑和其它這樣的助劑，例如諸如醋酸鈉，失水山梨糖醇單月桂酸酯，三乙醇胺油酸酯和環(huán)糊精。植入一種緩慢釋放和緩釋系統(tǒng)在此也被考慮在內(nèi)，以便維持一種穩(wěn)定的劑量水平(請(qǐng)參閱美國(guó)專利3,710,795)。簡(jiǎn)要地，在此所提供的化合物被分散于一種固態(tài)的內(nèi)部基質(zhì)(inner matrix)中，例如，聚甲基丙烯酸甲酯，聚丁基丙烯酸甲酯，增塑或未增塑聚氯乙稀，增塑尼龍，增塑聚對(duì)苯二甲酸乙二酯，天然橡膠，聚異戊二烯，聚異丁烯，聚丁二烯，聚乙烯，乙烯-乙烯基乙酸酯共聚物，硅橡膠，聚二甲基硅氧烷，硅碳酸酯(silicone carbonate)共聚物，親水聚合物例如丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯水凝膠，骨膠原，交聯(lián)聚乙烯醇和交聯(lián)部分水解的聚乙酸乙烯酯，它被外部高分子膜環(huán)繞，該高分子膜例如聚乙烯，聚丙烯，乙烯/丙稀共聚物，乙烯/丙烯酸乙酯共聚物，乙烯/乙烯基乙酸酯共聚物，硅橡膠，聚二甲基硅氧烷，氯丁橡膠，氯化聚乙稀，聚氯乙稀，氯乙烯與乙酸乙烯酯的共聚物，1，1-二氯乙烯，乙烯和丙稀，離聚聚對(duì)苯二甲酸乙二酯(ionomer polyethylene terephthalate)，丁基橡膠，表氯醇橡膠，乙烯/乙烯醇共聚物，乙烯/乙烯基乙酸酯/乙烯醇三元共聚物和乙烯/乙烯氧基乙醇(vinyloxyethanol)的共聚物，該物質(zhì)在體液中不能溶解?；衔镆砸粋€(gè)釋放速度可控制的步驟擴(kuò)散通過外部高分子膜。活性化合物在該腸胃外組合物中的百分比高度取決于其具體的性質(zhì)，以及化合物的活性和主體的需要。組合物的腸胃外投藥包括靜脈內(nèi)、皮下和肌內(nèi)投藥。腸胃外投藥制劑包括用于注射的無菌液、無菌干燥可溶制劑，例如凍干的散粉，其僅僅在使用之前與溶劑結(jié)合；包括皮下注射用的片劑，用于注射的無菌懸液，僅僅在使用之前與溶劑結(jié)合的無菌干燥可溶制劑和無菌乳狀液。溶液可以是含水的，或者是不含水的。如果是靜脈內(nèi)投藥，合適的載體包括生理鹽水和磷酸緩沖鹽(PBS)，和含有增稠劑和增溶劑的溶液，例如葡萄糖，聚乙二醇和聚丙二醇，及其混合物。用于腸胃外制劑的藥物學(xué)可接受載體包括含水媒介，非水媒介，抗菌劑，等滲劑，緩沖液，抗氧化劑，局部麻醉劑，懸浮劑和分散劑，乳化劑，隱蔽(sequestering)劑或鰲合(chelating)劑以及其它藥物學(xué)可接受的物質(zhì)。含水媒介(aqueous vehicle)實(shí)例包括氯化鈉注射液，格林注射液，等滲葡萄糖注射液，無菌水注射液，葡萄糖和乳酸格林注射液。非水腸胃外媒介包括植物源的固定油類(fixed oils)，棉花子油，玉米油，芝麻油和花生油。必須將細(xì)菌抑制或真菌抑制濃縮體(concentrations)中的抗菌劑加入包裝在多劑量容器中的腸胃外制劑中，抗菌劑包括苯酚或甲酚，汞劑，苯甲醇，氯代丁醇，甲基和丙基對(duì)羥基苯甲酸酯，乙基汞硫代水楊酸鈉，苯扎氯銨(benzalkoniumchloride)和苯索氯銨。等滲劑包括氯化鈉和葡萄糖。緩沖液包括磷酸鹽和檸檬酸鹽。抗氧化劑包括硫酸氫鈉。局部麻醉劑包括鹽酸普魯卡因。懸浮劑和分散劑包括羧甲基纖維素鈉，羥丙基甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化劑包括Polysorbate 80(TWEEN80)。金屬離子的隱蔽(sequestering)劑或鰲合(chelating)劑包括EDTA。藥物學(xué)載體也包括作為水混溶性媒介的乙烯醇，聚乙烯醇和丙二醇；和用于調(diào)整pH值的氫氧化鈉，鹽酸，檸檬酸或乳酸。調(diào)節(jié)藥物學(xué)活性化合物的濃度，以便注射液提供有效的量來產(chǎn)生所需的藥理效應(yīng)。準(zhǔn)確的劑量取決于患者或者動(dòng)物的年齡、重量和狀況，這在本領(lǐng)域中是已知的。單位劑量腸胃外制劑被裝入安剖、管形瓶或帶針頭的注射器中。所有用于腸胃外投藥的制劑必須是無菌的，正如本領(lǐng)域所知并實(shí)踐的。作為說明，靜脈或動(dòng)脈輸注含有活性化合物的無菌水溶液是一種有效的投藥方式。另一種實(shí)施方案是將含有活性物質(zhì)的無菌水或油溶液或懸液按需要進(jìn)行注入，以產(chǎn)生所需的藥理效應(yīng)。血管注射劑被設(shè)計(jì)用于局部和全身施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，治療上有效的劑量被制備成其濃度至少約為0.1％w/w到約90％w/w或更大，在某些實(shí)施方案中，超過1％w/w的活性化合物被施用到被治療組織?；衔锟梢砸晕⒎蹱罨蚱渌m合的形狀懸浮，或可以被衍變而產(chǎn)生更易溶的活性產(chǎn)品或產(chǎn)生藥物前體。所形成混合物的形狀取決于很多因素，包括預(yù)期的施用方式和化合物在所選載體或媒介中的溶解度。有效濃度要足夠用于改善疾病的癥狀，并且可以經(jīng)驗(yàn)地決定。
C.凍干的散粉此處也對(duì)凍干的散粉感興趣，其能夠被再生成溶液、乳狀液和其它的混合物進(jìn)行施用。它們也可以被再構(gòu)成并制成固體或凝膠。通過在合適的溶劑中溶解此處所提供的化合物，或者其藥物學(xué)可接受衍生物來制備無菌、凍干的散粉。該溶劑可含有提高穩(wěn)定性的賦形劑，或散粉的其它藥物成分或由散粉制得的再生溶液?？梢允褂玫馁x形劑包括但不限于，葡萄糖，山梨醇，果糖，玉米漿，木糖醇，甘油，葡萄糖，蔗糖，或其它合適的制劑。溶劑也可含有緩沖液，例如檸檬酸鹽、磷酸鈉或磷酸鉀或其它本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的此類緩沖液，在一個(gè)實(shí)施方案中，其大約為中性pH值。隨后在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)條件下，進(jìn)行溶液無菌過濾，然后進(jìn)行冷凍干燥，由此提供所需的制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所形成的溶液被分裝到管形瓶中進(jìn)行冷凍干燥。每個(gè)管形瓶含有單劑量或多劑量的化合物。凍干的散粉可以被存儲(chǔ)在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下，例如大約4℃到室溫。該凍干的散粉與水再構(gòu)成注射液，提供一種用于腸胃外投藥的劑型。為實(shí)現(xiàn)再構(gòu)成，凍干的散粉被加入到無菌水或其它合適的載體中。精確量取決于所選的化合物。該量可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)決定。
D.局部施用局部混合物(topical mixtures)的制備如用于局部和全身施用所述。所形成的混合物可以是溶液，懸液，乳狀液或類似物，而且被制成霜(creams)，凝膠，藥膏，乳狀液，溶液，酏劑，洗劑，懸液，酊劑，糊，泡沫，氣溶膠，洗液，噴霧，栓劑，繃帶，皮膚貼片(dermalpatches)或其它任何適合局部施用的劑型。化合物或其藥物學(xué)可接受衍生物被制成氣溶膠，用于局部施用，例如通過吸入(例如，請(qǐng)參閱美國(guó)專US4,044,126，4,414,209和4,364,923，這些專利描述了釋放類固醇治療炎癥尤其是哮喘的氣溶膠)。施用到呼吸道的劑型可以是氣溶膠或噴霧器溶液的形式，或者為噴撒用的微細(xì)粉劑，其單獨(dú)或者與其它惰性載體例如乳糖結(jié)合施用。在此情況下，在一個(gè)實(shí)施方案中，劑型粒子的直徑小于50微米，在一個(gè)實(shí)施方案中小于10微米?；衔锟梢员恢瞥删植炕蛘吣骋惶囟ú课皇┯?，例如局部施用到皮膚和粘膜，例如在眼中，以凝膠、霜、洗劑的形式，用到眼部或者腦池內(nèi)或脊柱內(nèi)施用。用于穿皮給藥法(transdermal delivery)和用于眼部或黏膜，或用于吸入治療的局部施用也被考慮在內(nèi)。也可以使用單獨(dú)的活性化合物的鼻溶液(nasal solutions)，或結(jié)合其它藥物可接受賦形劑的活性化合物的鼻溶液。這些溶液，尤其是那些意欲用于眼科的溶液，可以結(jié)合適合的鹽被制成0.01％-10％(體積％)的等滲溶液，其pH約為5-7。
E.其它施用途徑的組合物其它施用方式，例如經(jīng)皮貼片(transdermal patches)，包括離子電滲療法和電泳裝置，和直腸投藥在此也被考慮在內(nèi)。經(jīng)皮藥膏，包括離子電滲療法和電泳裝置為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知。例如，這樣的貼片(patches)被公開在美國(guó)專利6,267,98，6,261,595，6,256,533，6,167,301，6,024,975，6,010,715，5,985,317，5,983,134，5,948,433和5,860,957中。例如，直腸投藥的藥物劑量方式為作用于全身的直腸栓劑，膠囊和片劑。在此所用的直腸栓劑指的是放入直腸中的固態(tài)物，該固態(tài)物在體溫下熔化或軟化，釋放一種或多種藥理或治療活性組分。直腸栓劑所使用的藥物學(xué)可接受物質(zhì)為可提高熔點(diǎn)的基質(zhì)(base)或媒介和介質(zhì)?；|(zhì)的例子包括可可油(可可油)，甘油-明膠，聚乙二醇(聚乙二醇)，和脂肪酸的單甘油酯、雙甘油酯和三甘油酯的合適混合物?？梢允褂酶鞣N不同基質(zhì)的組合物?？商岣咚▌┤埸c(diǎn)的介質(zhì)包括鯨蠟和蠟。可以通過壓縮法或者模塑，制備直腸栓劑。直腸栓劑的重量在一個(gè)實(shí)施方案中大約為2-3gm(mg)。使用同樣的藥物學(xué)可接受物質(zhì)，并利用與口服劑型同樣的方法來制造用于直腸投藥的片劑和膠囊。
F.靶標(biāo)劑型在此所提供的化合物，或其藥理可接受衍生物也可被制備成，以被治療主體的特殊組織、受體或者身體其它部位為目標(biāo)。許多這樣的靶標(biāo)方法為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知。所有這樣的靶標(biāo)方法在此被考慮在內(nèi)，用于本組合物。有關(guān)靶標(biāo)方法的非限制性實(shí)例，請(qǐng)參閱美國(guó)專利6,316,652，6,274,552，6,271,359，6,253,872，6,139,865，6,131,570，6,120,751，6,071,495，6,060,082，6,048,736，6,039,975，6,004,534，5,985,307，5,972,366，5,900,252，5,840,674，5,759,542和5,709,874。在一個(gè)實(shí)施方案中，脂質(zhì)體懸液，包括靶標(biāo)組織的脂質(zhì)體，例如靶標(biāo)瘤的脂質(zhì)體，也適合作為藥物學(xué)可接受載體。這些載體可按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法來制備。例如，脂質(zhì)體劑型可以按美國(guó)專利4,522,811所述來制備。簡(jiǎn)要地，諸如多片介質(zhì)(MLV′s)這樣的脂質(zhì)體可以通過在燒瓶?jī)?nèi)部干燥雞蛋卵磷脂和大腦磷脂酰絲氨酸(摩爾比為7∶3)而形成。加入在此所述化合物在無二價(jià)陽離子的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中形成的溶液，晃動(dòng)燒瓶直到液膜被分散為止。沖洗所形成的媒介，以去除未密封的化合物，離心成丸，然后再次懸浮在PBS中。
G.聯(lián)合治療在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物可以被聯(lián)合施用或者與另一種治療劑順序施用。這些治療劑包括那些已知的用于治療、預(yù)防和改善淀粉樣變和神經(jīng)變性疾病和障礙癥狀的治療劑。這樣的治療劑包括，但不限于鹽酸多奈哌齊(donepezil hydrochloride)(Aracept)、酒石酸卡巴拉汀(rivastigmine tartrate)(Exelon)，(鹽酸他克林)tacrinehydrochloride(Cognex)和氫溴酸加蘭他敏(galantamine hydrobromide)(Reminyl)。
VI.試劑盒根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了試劑盒。根據(jù)本發(fā)明，該試劑盒包括含有本發(fā)明的化合物或組合物的包裝。短語“包裝”指的是含有在此所介紹的化合物或組合物的任何容器。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，包裝可以是盒子或包裝材料(wrapping)。用于包裝藥物制品的包裝物質(zhì)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，例如，請(qǐng)參閱美國(guó)專利5,323,907，5,052,558和5,033,252。藥物包裝材料實(shí)例包括，但不限于，發(fā)皰藥包(blister pack)，瓶，管，吸入器，泵，袋，小瓶，容器，注射器，瓶以及適合所選劑型和預(yù)期投藥方式和治療的任何包裝材料。試劑盒也含有不含在包裝之內(nèi)，但附在包裝外面的物品，例如移液管。試劑盒可任選地包含使用說明，用于將本發(fā)明的化合物或組合物施用到患有需要治療狀況的主體上。試劑盒也可包含經(jīng)管理機(jī)構(gòu)認(rèn)可使用的化合物使用說明，例如美國(guó)食品及藥物管理局。試劑盒也可任選含有本發(fā)明化合物的標(biāo)簽或產(chǎn)品插入物(product inserts)。包裝和/或任何產(chǎn)品插入物本身可以是經(jīng)管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)認(rèn)可的。試劑盒可包括在包裝中以固相或液相(例如在此所提供的緩沖液)存在的化合物。試劑盒也可以包括用于制備操作方法所用溶液的緩沖液，和將液體從一種容器轉(zhuǎn)移到另外一種容器中的移液管。試劑盒也可任選地含有用于此處所述聯(lián)合治療的一種或多種化合物。在某些實(shí)施方案中，包裝是用于靜脈內(nèi)投藥的容器。在其它的實(shí)施方案中，化合物是在吸入器中提供的。在又一些實(shí)施方案中，化合物是以聚合物基質(zhì)或以脂質(zhì)體形式提供。
VII.評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)Aβ水平的活性此處所述的化合物包括調(diào)節(jié)Aβ水平的化合物?？梢岳煤芏啾绢I(lǐng)域已知的和/或此處所述的測(cè)定方法來評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)Aβ水平的活性。通常，APP或其片段和/或Aβ的源與化合物接觸適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，而且Aβ水平被直接或間接地評(píng)價(jià)，如下所述。將在化合物存在下的Aβ水平和合適對(duì)照物的Aβ水平(例如媒介對(duì)照物(vehicle control)或陽性對(duì)照物(positive control))比較，來測(cè)定化合物是否調(diào)節(jié)Aβ水平。
A.APP、淀粉樣前體片段和/或Aβ來源用于評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)Aβ活性的APP、淀粉樣前體片段和/或Aβ來源取決于被檢測(cè)的產(chǎn)物以及要測(cè)定的性質(zhì)。例如，要評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)APP或淀粉樣前體片段的γ-分泌酶切割的活性，可使用對(duì)應(yīng)于β-分泌酶切割產(chǎn)物的APP C-末端片段，例如C99。在任何和所有APP產(chǎn)生階段評(píng)價(jià)化合物時(shí)，優(yōu)選完整長(zhǎng)度的APP。用于評(píng)價(jià)化合物活性的合適的APP、淀粉樣前體片段和/或Aβ來源包括活體試驗(yàn)動(dòng)物(例如，天然和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物)，以及組織(例如大腦)，組織提取物，體液(例如，血，血漿，腦脊髓液，尿等)和來自人類和試驗(yàn)動(dòng)物的原代細(xì)胞。其它來源包括重組細(xì)胞系、細(xì)胞溶胞產(chǎn)物(完整的細(xì)胞提取物，膜片段等)和胞外介質(zhì)。在某些應(yīng)用上，可交替使用基本純化的APP或Aβ。分離組織、產(chǎn)生和維持原代和重組細(xì)胞、制備溶胞產(chǎn)物，以及與Aβ測(cè)定相容的蛋白質(zhì)純化的方法都是本領(lǐng)域已知的方法。為直接或間接評(píng)價(jià)化合物對(duì)Aβ肽產(chǎn)生、分泌和/或降解的影響，要使用含有APP或其淀粉樣前體片段，而且有能力對(duì)其進(jìn)行解蛋白加工來產(chǎn)生Aβ的生物體內(nèi)和生物體外來源。為評(píng)價(jià)化合物對(duì)Aβ形式(例如，單體，低聚或原纖形式或構(gòu)造)、原纖維沉積和原纖維降解的影響，要使用含有Aβ單體，低聚體或原纖維的生物體內(nèi)或生物體外來源，該來源任選地可含有產(chǎn)生APP或淀粉樣前體片段的細(xì)胞。
B.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物對(duì)評(píng)價(jià)化合物活性有用的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物能夠表達(dá)任何所需的野生型和突變型APP、淀粉樣前體片段或Aβ同種型，正如此處所述。所產(chǎn)生的動(dòng)物會(huì)有利地作為人類疾病的模型，尤其是阿爾茨海默病和其它神經(jīng)變性以及與淀粉樣變有關(guān)的疾病的模型。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物包括，但不限于嚙齒動(dòng)物，包括小鼠，大鼠和倉鼠，綿羊，山羊，雞，豬，牛，猴子，靈長(zhǎng)類和其它非人類哺乳動(dòng)物。任選地，動(dòng)物可進(jìn)一步外源地表達(dá)已知一種或多種參與APP加工或降解途徑的基因，例如野生型和突變型早老基因(presenilin)(PS-1或PS-2)，BACE，IDE和/或腦啡肽酶(neprilysin)，和/或一種或多種涉及發(fā)病機(jī)理的其它基因，例如tau基因。可以在所有組織，或僅在所選組織(例如系統(tǒng)組織)，在任何或所有發(fā)展階段，以及在生理學(xué)，超-或次-生理學(xué)水平，通過適當(dāng)?shù)剡x擇調(diào)節(jié)元素(regulatory elements)來表達(dá)外源基因。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)一步可以是外源基因純和的、半合子的、雜合的或嵌合的。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以含有外源基因以及內(nèi)源相似物(endogenous counterpart)，或替代為內(nèi)源相似物(例如通過“釘入(knock in)”方法)。標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)手冊(cè)描述了產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，例如，包括Hogan et al.，(1994)，Manipulating the Mouse EmbryoA Laboratory Manual，2nd ed.，ColdSpring Harbor Laboratory，New York。表達(dá)AAP的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是本領(lǐng)域已知的，包括Tg2576小鼠，該鼠類含有在倉鼠朊病毒蛋白質(zhì)啟動(dòng)基因控制下的瑞典(Lys670Asn，Met671Leu)雙突變的人類APP695(Hsiao et al.(1996)Science 27499-102；U.S.Patent No.5,877,399)；V717F PDAPP小鼠，該鼠類含有在血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)鏈基因啟動(dòng)子控制下的人類APP695(Val717Phe)(Games et al.(1995)Nature 373523-527；U.S.Patent No.5,811,633)；和C100小鼠，該鼠類含有在抗肌萎縮蛋白神經(jīng)系統(tǒng)促進(jìn)劑(dystrophin neural promoter)控制下的APP的神經(jīng)毒性C-末端100氨基酸(Neve et al.(1996)Neurobiol.Aging 17191-203；U.S.Patent Nos.5,672,805)。其它表達(dá)APP的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物描述例如在美國(guó)專利5,612,486，5,850,003，5,387,742，6,037,521，6,184,435，6,187,992，6,211,428和6,340,783中所描述；Emilien，et al.，(2000)Arch.Neuro.57176-181對(duì)其進(jìn)行了綜述。
C.細(xì)胞用于評(píng)價(jià)化合物活性的細(xì)胞能夠表達(dá)內(nèi)生或重組的任何所需的野生型或突變APP和/或Aβ同種型，如此處所述。細(xì)胞可以是來自任何動(dòng)物原代細(xì)胞或的細(xì)胞系(cell lines)，該動(dòng)物包括人類和其它哺乳動(dòng)物，例如上述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。細(xì)胞可以是任何不同的系屬，例如神經(jīng)系屬(例如皮層神經(jīng)中樞細(xì)胞，微神經(jīng)膠質(zhì)(microglia)，神經(jīng)膠質(zhì)，星形膠質(zhì)細(xì)胞)，纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞，或者可以是全能或者多能細(xì)胞(請(qǐng)參閱Freshney，R.I.(2000)″Culture of AnimalCellsA Manual of Basic Technique，″4th ed.，Wiley-Liss)。一種適于評(píng)價(jià)調(diào)節(jié)Aβ的化合物的活性的實(shí)例細(xì)胞系為SH-SY5Y-APP751，在此處的實(shí)施例部分描述了該細(xì)胞系。進(jìn)一步的示例性細(xì)胞系為HGB，其表達(dá)內(nèi)生APP(endogenous APP)。適合用于評(píng)價(jià)調(diào)節(jié)Aβ的化合物活性的示例性原代細(xì)胞為來自Tg2576轉(zhuǎn)基因小鼠的混合大腦溫育物(mixed brain cultures)，或者其它表達(dá)APP的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。例如，通過解剖來自大約17天的小鼠晶胚的大腦組織，用木瓜蛋白酶分離腦組織，然后通過原代神經(jīng)元溫育標(biāo)準(zhǔn)程序溫育細(xì)胞，以制備混合大腦溫育物。在合適的構(gòu)成或可誘導(dǎo)調(diào)整元素的控制下，APP、淀粉樣前體片段或編碼Aβ核酸能夠通過各種眾所周知的轉(zhuǎn)染方法被瞬時(shí)或穩(wěn)定地導(dǎo)入原代細(xì)胞或細(xì)胞系(Sambrook and Russell(2000)″MolecularCloningA Laboratory Manual″Cold Spring Harbor Laboratory Press；Ausubel et al.(eds.)(current edition)″Current Protocols in MolecularBiology″John Wiley & Sons.)。
D.直接評(píng)價(jià)Aβ水平的測(cè)定可以利用直接評(píng)價(jià)Aβ水平的測(cè)定來評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)Aβ的能力。因此，可以通過測(cè)量具體Aβ肽(Aβ43，Aβ42，Aβ40，Aβ39，Aβ38，Aβ37，Aβ34，11-43，11-42，11-40，11-39，11-38，11-37，11-34等)的數(shù)量；通過測(cè)量全體Aβ的數(shù)量；通過測(cè)量具體Aβ肽相對(duì)于第二種Aβ肽的數(shù)量(例如Aβ42與Aβ40的比例)；通過測(cè)量特定形式的Aβ(例如單體，低聚體或原纖形式；在溶液中或聚集在斑塊上，在特殊構(gòu)造中等)的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量，和/或通過測(cè)量特定位置的Aβ(例如胞內(nèi)的，膜相關(guān)的或胞外的，或在特殊的組織或者體液中)的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量，來評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)Aβ的能力。很多本領(lǐng)域所熟知的方法可用于地測(cè)量樣品中特定的Aβ種或形式，或總Aβ肽的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量。在這些方法中，任選可以使用內(nèi)標(biāo)和/或通過利用已知數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)定而產(chǎn)生的校準(zhǔn)曲線來定量Aβ的水平。例如，可以利用采用Aβ-特定抗體的免疫檢測(cè)方法(例如單克隆或多克隆抗體，單鏈抗體，嵌合抗體，雙功能抗體，人化抗體，CDR-嫁接抗體，CDR-嫁接可選支架(alternative scaffolds)，以及其抗原結(jié)合片段)。這樣的抗體對(duì)具體的Aβ種或形式，可任選為特定。例如，在Aβ的N-末端，C-末端，或中心位置上或其附近結(jié)合抗原決定部位(epitope)的抗原可用于同時(shí)檢測(cè)Aβ的多種同種型。示例性抗原包括，但不限于，6E10，B436，抵抗Aβ12-28的抗體，21F12，A387，Clone GB-10和Aβ-40選擇性抗體。而且，任何Aβ種的任何所需的抗原決定部位的抗體可以輕易地用本領(lǐng)域所述的眾所周知的方法來制備?？贵w或者結(jié)合劑(binding agent)任選地被可檢測(cè)地標(biāo)記，或者，如果使用第二種抗體或結(jié)合劑的話，第二抗體或結(jié)合劑可以被可檢測(cè)地標(biāo)記。示范性可檢測(cè)的標(biāo)簽包括放射性的，熒光的，生物發(fā)光的，化學(xué)發(fā)光的標(biāo)簽。檢測(cè)這類標(biāo)簽的方法，以及基于這樣的檢測(cè)定量或定性測(cè)定結(jié)合肽的方法在本領(lǐng)域是眾所周知的。適合測(cè)定Aβ水平的免疫檢測(cè)方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法。典型的方法包括，但不限于，免疫沉淀反應(yīng)(任選結(jié)合電泳分離，或變性或非變性凝膠，或質(zhì)譜分析)，西部雜交法(westernhybridization)，免疫細(xì)胞化學(xué)，基于熒光共振能量傳遞(FRET)的方法，以及各種形式的酶連接免疫吸附測(cè)定(ELISA)。對(duì)于測(cè)定任何形式的Aβ(例如無論Aβ為單體，低聚或原纖形式，以及Aβ的構(gòu)造)，可以使用非變性分離環(huán)境(例如非變性電泳或色譜法)。對(duì)于測(cè)定具體Aβ種的水平，可以進(jìn)行尿素-雙-二(羥乙基)甘氨酸SDS基的電泳法(urea-bis-bicine-SDS based electrophoresis)，該電泳法可用于Aβ37，Aβ38，Aβ39，Aβ40，Ars2-42和Aβ-42種(Wiltfang et al.，(2001)J.Biol.Chem.，27642645-42657)。諸如上面所述的免疫檢測(cè)方法可以容易地適于與結(jié)合Aβ的非抗體基介質(zhì)結(jié)合使用，這些非抗體基介質(zhì)例如Aβ-結(jié)合蛋白質(zhì)、其片斷，和小分子化合物。結(jié)合Aβ的蛋白質(zhì)和化合物是本領(lǐng)域已知的，或者可以通過常規(guī)的篩選測(cè)定加以識(shí)別?？墒褂萌魏我环N測(cè)定沉積在活生物體組織中Aβ數(shù)量的方法，包括成像方法(imaging methods)，例如多光子顯微鏡方法和正電子散射X線斷層攝影術(shù)。例如，將成像劑跨過血液-大腦障礙物，并高度親和地結(jié)合淀粉樣蛋白沉積物，成像劑例如硫代黃素-T類似物2-[4’-(甲氨基)苯基]苯并噻唑(Mathis et al.(2002)Bioorg.Med.Chef.Lett.12295-298)和剛果紅衍生的甲氧基-X04(Klunk et al.(2002)J；Neuropathol.Exp.Neurol.61797-805)。
E.間接評(píng)價(jià)Aβ水平的測(cè)定另外，可以利用間接評(píng)價(jià)Aβ水平的測(cè)定來評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)Aβ的能力。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以決定合適的測(cè)定方法來評(píng)價(jià)Aβ水平的調(diào)節(jié)。例如，評(píng)估未切割A(yù)PP的數(shù)量，或非Aβ的APP加工產(chǎn)物的數(shù)量。因此，可以評(píng)估化合物調(diào)節(jié)APP的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量，和/或α-分泌酶(例如sAPPα或C83)的切割產(chǎn)物的數(shù)量或者相對(duì)數(shù)量，和/或α-分泌酶和γ-分泌酶(例如p3)聯(lián)合切割的產(chǎn)物的數(shù)量或者相對(duì)數(shù)量，和/或β-分泌酶(sAPPβ，C99，或C89)切割產(chǎn)物的數(shù)量或相對(duì)數(shù)量。測(cè)量APP或APP加工產(chǎn)物的數(shù)量的方法為本領(lǐng)域已知的方法，包括利用合適的抗體，與上述測(cè)定Aβ相似的免疫檢測(cè)測(cè)定。提供下列實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明的實(shí)施方案。這些實(shí)施例并非限定，而且不應(yīng)當(dāng)被解釋為限定本發(fā)明的任何方面。
實(shí)施例除非另外說明，所有的溶劑和試劑都來自Aldrich ChemicalCompany(Milwaukee，WI)。使用1HNMR光譜儀測(cè)定結(jié)構(gòu)特征。使用殘留1H溶劑峰做內(nèi)標(biāo)，在氘化的氯仿(CDCl3)或水(D2O)中，質(zhì)子核磁共振(1HNMR)光譜被記錄在Varian 300MHz NMR分光計(jì)上。使用Applied Biosystems AP150X質(zhì)譜儀和Shimadzu HPLC系統(tǒng)分析純化化合物的正確質(zhì)量和純度。典型梯度(gradient)為使用4分鐘以上的乙腈/水1-99％的流動(dòng)相，0.035-0.050％的三氟乙酸被加入流動(dòng)相。梯度在7ml/min的速度下運(yùn)行，通過ChromalithTMSpeedRodRP-18e，4.6×50mm色譜柱。通過觀察(M+H+)離子(M+1)，來確認(rèn)化合物的結(jié)構(gòu)。通過紫外線在220nm和254nm的波長(zhǎng)處吸收，以評(píng)價(jià)化合物的純度。純度百分比基于色譜上峰面積的積分。
實(shí)施例1典型的α-溴酮衍生物的制備通過與典型的硫脲縮合，制備典型的α-溴酮衍生物。下面的描述是用于合成典型的α-溴酮衍生物的示例性方法。
A.2-溴代-1-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-乙酮(ethanone)(10) 在一個(gè)100ml的圓形燒瓶中，將4-乙酰基苯基硼酸(820mg，5mmol，2.0eq)，和4-甲基-1H-咪唑(205mg，2.5mmol，1.0eq)溶解于22ml的DMF/CH2Cl2溶液中(1∶10)。然后往該反應(yīng)混合物中加入無水醋酸銅(681mg，3.75mmol，1.5eq)，4分子篩(sieves)(1.875g)和吡啶(pyridine)(0.4ml，5mmol，2.0eq)。在室溫下空氣中(air，room temp)，攪拌反應(yīng)16小時(shí)，此刻LC-MS判斷反應(yīng)結(jié)束。通過Celite過濾該反應(yīng)產(chǎn)物，用甲醇洗滌，利用硅膠層析法(ISCO系統(tǒng)，0-5％甲醇/乙酸乙酯)純化，從而產(chǎn)生化合物9(200mg，收率為40％)。將化合物9(200mg，1mmol)溶解在按重量計(jì)算為30％的溴化氫的醋酸(2mL)溶液中。往該溶液中，逐滴加入溴(160mg，1mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物被倒入冰水中(～5g)。所需產(chǎn)物被沉淀下來。過濾固體沉淀物，用冰水洗滌，然后通過真空泵干燥，產(chǎn)生一種黃色的固體產(chǎn)物10(120mg，HOAc鹽)，該產(chǎn)物不需要純化即可繼續(xù)隨后的步驟。
B.2-溴-1-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-丙-1-酮(40) 將溶解于DMSO中的4-甲基-咪唑(1.72g，21mmol，1.05eq)和1-(4-氟代-苯基)-丙-1-酮(3.04g，20mmol，1.0eq)的溶液與無水碳酸鉀(K2CO3)(5.52g，40mmol，2.0eq)在90℃下攪拌整夜(overnight)。此刻，LC-MS判斷反應(yīng)結(jié)束。冷卻后，將反應(yīng)混合物倒入冰水中(～50g)。所需產(chǎn)物被沉淀下來，過濾沉淀物，并用冷水洗滌，然后通過真空泵進(jìn)行干燥，產(chǎn)生一種黃色固態(tài)產(chǎn)物11(2.14g，收率50％)。采用與上述相似的方式對(duì)化合物11進(jìn)行溴化處理而生成化合物12。與上述步驟相似，1-(3，4-二氟-苯基)-丙-1-酮與4-甲基-咪唑反應(yīng)生成化合物13。采用如上所述的方式對(duì)化合物13進(jìn)行溴化處理生成{4-[3-氟代-4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-噻唑-2-基}-(5-異丙基-4-甲氧基-2-甲基-苯基)-胺(14)。
C.2-溴代-1-[4-(4-乙基-咪唑-基)-苯基]-乙酮(16) 1.5-乙基-4-甲苯磺酰基-2-唑啉(15)將細(xì)粉狀氰化鈉(NaCN)(0.098g，2mmol)加入甲苯磺酰基異氰酸甲酯(TosMIC，3.90g，20mmol)和丙醛(1.5mL 20.4mmol)在60mL干乙醇(EtOH)的攪拌懸浮液中。反應(yīng)混合物變?yōu)榍宄?，唑啉的白色結(jié)晶在15分鐘內(nèi)開始沉淀出來。繼續(xù)攪拌反應(yīng)30分鐘。過濾混合物，在干燥之前用乙醚-己烷(1∶1)洗滌。得到收率為81％的化合物15(4.1g)。利用1H NMR在CDCl3中，確認(rèn)結(jié)構(gòu)。LC-MS[M+1]＝254。純度大于98％。
2.4-乙基咪唑(16)在一個(gè)壓力瓶中，將化合物15(1.1g，4.3mmol)溶解于飽和氨的干甲醇(MeOH)(30mL)溶液中。在100-110℃之間將反應(yīng)混合物攪拌18小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，通過急驟層析法(flash chromatography)純化產(chǎn)物，利用CH2Cl2-MeOH洗脫。化合物16被分離出來，其為淺黃色油狀(收率72％，0.3g)。在CDCl3中利用1H NMR確認(rèn)化合物的結(jié)構(gòu)，采用TLC在CH2Cl2-MeOH(9∶1)中純化。純度大于95％。
3.1-[4-(4-乙基咪唑-1-基)-苯基]-乙酮(17)將NaH(0.068g在60％油分散體中，1.7mmol)加入化合物16(0.180g，1.8mmol)的DMF(6mL)溶液中，在室溫下攪拌?；旌衔锉粩嚢?5分鐘，加入4′-氟乙酰酮(0.215g，1.56mmol)的DMF(2mL)溶液。在80℃將反應(yīng)混合物加熱1小時(shí)，然后冷卻，用水稀釋，接著用EtOAc萃取。用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥，并蒸發(fā)得到一種黃色固體?；衔?7在室溫下很快結(jié)晶形成白色針狀晶體。收率為0.270g，67％。在CDCl3中利用1HNMR確認(rèn)化合物17的結(jié)構(gòu)。LC-MS[M+1]＝215。純度大于98％。
4.2-溴代-1-[4-(4-乙基-咪唑-基)-苯基]-乙酮(18)將酮17(0.160g，0.66mmol)溶解到30％醋酸/溴化氫(5mL)中，然后加入溴(0.104g，0.66mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后倒入冷水中(10mL)。用乙酸乙酯(20mL)萃取產(chǎn)物。用水和鹽水洗滌結(jié)合的有機(jī)層，干燥，蒸發(fā)產(chǎn)生一種黃色固體，并從乙酸乙酯己烷(1∶1)中結(jié)晶出來產(chǎn)生0.170g(77％)的化合物18。在CDCl3中利用1H NMR確認(rèn)化合物18的結(jié)構(gòu)。LC-MS[M+1]＝294。純度大于95％。
D.2-溴代-1-[6-(4-甲基-咪唑-1-基)-吡啶-3-基]-乙酮(20) 1.1-[6-(4-甲基-咪唑-1-基)-吡啶-3-基]-乙酮(19)將1-(6-氯代-吡啶-3-基)-乙酮(7.00g，45.16mmol)和4-甲基咪唑(11.11g，135.50mmol)在DMSO(35ml)中混合，然后加入K2CO3?；旌衔镌?10℃下被加熱22小時(shí)，并快速攪拌。然后將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，將其倒入冰水中(400ml)，并劇烈攪拌15分鐘。將產(chǎn)生的沉淀物收集到過濾器上，并用水充分洗滌。所生成的物質(zhì)在真空下被干燥，產(chǎn)生一種茶色固體19(6.1g，67％)。LC/MS[M+1]+＝202.2.C11H11N3O＝201.2。1H NMR(DMSO-d6)300MHzδ2.18(3H，s)，2.63(3H，s)，7.72(1H，s)，7.87(2H，d，J＝9.0Hz)，8.41(2H，d，J＝9.0Hz)，8.51(1H，s)，8.98(1H，s)。
2.2-溴代-1-[6-(4-甲基-咪唑-1-基)-吡啶-3-基]-乙酮(20)將化合物19懸浮在30％HBr/AcOH(75ml)中。在大于1小時(shí)的時(shí)間內(nèi)逐滴地加入溴(4.82g，30.30mmol)。在室溫下，反應(yīng)被攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入600mL的冰水中并快速攪拌15分鐘。所生成的沉淀物被收集到過濾器上并用水洗滌。風(fēng)干化合物，產(chǎn)生一種為黃色固體20(10.6g，80％)。LC/MS[M+1]+＝281.1.C11H10BrN3O2HBr＝442.0。1H NMR(DMSO-d6)300MHzδ2.36和2.37(6H，two s)，5.06(2H，s)，8.16(1H，d，J＝9.0Hz)，8.29(1H，s)，8.69(1H，d，J＝9.0Hz)，9.15(1H，s)，9.93(1H，s)。
E.1-[4-(5-溴代-噻唑-2-基)-苯基]-乙酮(1221)和2-溴代-l-[4-(5-溴代-噻唑-2-基)-苯基]-乙酮(1222) 1.1-[4-(5-溴代-噻唑-2-基)-苯基]-乙酮(1221)將2-溴噻唑(1g，6.1mmol)放入燒瓶中，加入甲苯∶EtOH(4∶1，80mL∶20mL)，然后加入4-乙酰基苯基硼酸(1.2g，7.32mmol)、碳酸鈉(2.16g，20.4mmol)和水(3mL)。通入鼓泡氮?dú)?0分鐘，使反應(yīng)混合物脫氣。隨后加入Pd(PPh3)4，并且在80℃下將反應(yīng)混合物加熱17小時(shí)，然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。加入EtOAc(3×100mL)和水(100mL)。用水(100mL)、鹽水(100mL)洗滌有機(jī)提取物，并通過MgSO4干燥，過濾，利用柱層析法(120g ISCO柱體)純化?；衔?219被分離出來，為一種白色粉末(974mg，79％，C11H9NOS質(zhì)量計(jì)算值203.3，觀測(cè)值204.2[M+1])。在逐滴加入溴(160mg，1mmol)之前，先將化合物1219(204mg，1mmol)溶解在30％HBr的醋酸(3mL)中。反應(yīng)混合物在室溫下被攪拌6小時(shí)，然后被倒入冰水中，攪拌10分鐘，并過濾沉淀物?；衔?221被分離出來，為一種黃色粉末(257mg，92％，C11H8BrNOS質(zhì)量計(jì)算值281.2，觀測(cè)值282.1[M+1])。
2.2-溴代-1-[4-(5-溴代-噻唑-2-基)-苯基]-乙酮(1222)利用與上面所述相同的步驟，以2，5-二溴噻唑(809mg，4.94mmol)為開始來制備化合物1220。1-[4-(5-溴代-噻唑-2-基)-苯基]-乙酮1220被分離出來，為一種暗黃色粉末(500mg，43％，C11H8BrNOS質(zhì)量計(jì)算值283.2，觀測(cè)值284.1[M+1])。2-溴代-1-[4-(5-溴代-噻唑-2-基)-苯基]-乙酮1222被分離出來，為暗黃色粉末(436mg，77％，C11H7BrNOS質(zhì)量計(jì)算值360.1，觀測(cè)值361.6[M+1])。下面列于表1中的α-溴酮(α-bromoketone)衍生物為所有制備的溴酮化合物的示例性說明。
表1
實(shí)施例2硫脲衍生物的制備通過苯胺衍生物與芳基異硫氰酸鹽衍生物結(jié)合，制備硫脲衍生物。大多數(shù)苯胺化合物都是商業(yè)可得的，和/或用眾所周知的方法來合成。一種示例性苯胺，5-(N，N-二乙胺)-2-甲基-苯胺，根據(jù)下面的典型路線來制備。該過程也用于合成其它5-(N，N-二乙胺)-2-甲基-苯胺類似物。
在一個(gè)350mL玻璃瓶(glass bomb)中，將4-甲基-3-硝基苯胺(25.0g，164.5mmol)和溴乙烷(44.8g，411.2mmol)溶解于DMF中，以制備化合物29，二乙基-(4-甲基-3-硝基苯)-胺。加入一個(gè)大攪拌棒和K2CO3(56.75g，411.2mmol)。緊緊地蓋住瓶(bomb)并置于80℃的油浴上。然后將反應(yīng)混合物劇烈攪拌40小時(shí)。接著冷卻反應(yīng)混合物并打開蓋子，物質(zhì)在EtOAc(400mL)和水(300mL)之間被分隔開。水層用EtOAc(150mL)洗滌兩次，混合EtOAc層用水(500mL)洗滌兩次，用鹽水(500mL)洗滌一次。然后將EtOAc層通過MgSO4進(jìn)行干燥，過濾并濃縮成一種黑色液體。用5％EtOAc/己烷進(jìn)行硅膠層析法，純化產(chǎn)物。濃縮純餾分，產(chǎn)生一種橙色的液體化合物29(20.8g，61％)。LC/MS[M+H]+＝209.1.C11H16N2O2＝208.2。1H NMR(CDCl3)300MHzδ1.16(t，6H，J＝6.9Hz)，2.44(s，3H)，3.35(q，4H，J＝6.9Hz)，6.76(2d，1H，J＝3.0Hz)，7.09(2d，1H，J＝0.6Hz)，7.25(d，1H，J＝3.0Hz)。將化合物29(20.8g，100.0mmol)溶解于MeOH∶CH2Cl2中，并在冰浴中冷卻到0℃。在大于90分鐘的時(shí)間內(nèi)，1克1份地加入NiCl2-6H2O(4.0g，16.8mmol)和NaBH4(11.0g，297.3mmol)。TLC確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束。減壓下除去溶劑，并且將物質(zhì)再懸浮于CH2Cl2(500mL)和硅膠中。然后在減壓下除去溶劑直到物質(zhì)呈現(xiàn)松散的灰色粉末為止。將粉末放置在漏斗中，并用EtOAc(500mL)充分洗滌。所形成的溶液被濃縮成一種黃色液體，在硅膠柱中用30％EtOAc/己烷洗脫，純化該黃色液體。在減壓下，將純餾分混合在一起并濃縮而成一種淺紫色液態(tài)化合物30(15.3g，85％)。LC/MS[M+H]+＝179.2。C11H168N2＝178.2。1H NMR(CDCl3)300MHzδ1.13(t，6H，J＝6.9Hz)，2.04(s，3H)，3.27(q，4H，J＝6.9Hz)，3.51(broad s，2H)，6.05(d，1H，J＝2.4Hz)，6.11(two d，1H，J＝2.4Hz)，6.86(d，1H，J＝8.1Hz)。通過與典型的α-溴酮衍生物縮合，制備下列典型的硫脲衍生物。下面所列為用來制備硫脲衍生物的示例性過程。
A.2-甲基-5-吡咯-1-基-苯基-硫脲(32) 將異硫氰酸苯甲酰酯(6.4mmol，1.04g)放入10ml干丙酮(acetone)中，在攪拌下快速地加入2-甲基-5-吡咯-1-基-苯胺。在40℃下反應(yīng)被攪拌2小時(shí)，然后被倒入過量的碎冰中并劇烈攪拌。收集所形成的固體，充分用冷水洗脫，隨后用己烷洗滌，然后風(fēng)干。產(chǎn)物31(收率90％)不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于接下來的步驟。將一份化合物31加入預(yù)熱的(～80℃)攪拌的10％的NaOH水溶液中。在整夜攪拌之后，混合物被倒在過量的冰上。用濃鹽酸將pH值調(diào)整為5-6。收集所形成的苯甲酸和所需產(chǎn)物32的共沉淀物，并用冷水洗滌，然后用己烷洗滌，以除去苯甲酸。產(chǎn)物(收率80％)被風(fēng)干，不經(jīng)進(jìn)一步純化而進(jìn)入隨后的反應(yīng)。
B.4-羥基-2，5-二甲基-苯基-硫脲(34)
將異硫氰酸苯甲酰酯(33mmol，5.38g)放入30ml干丙酮中，在攪拌下快速地加入苯胺。在40℃下反應(yīng)被攪拌2小時(shí)，然后被倒入過量的碎冰中并劇烈攪拌。收集所形成的固體，充分用冷水洗脫，隨后用己烷洗滌，然后風(fēng)干。產(chǎn)物33(收率大于80％)不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于接下來的步驟。將一份化合物33加入預(yù)熱的(～80℃)攪拌的10％NaOH水溶液中。在整夜攪拌之后，混合物被倒在過量的冰上。用濃鹽酸將pH值調(diào)整為5-6。收集所形成的苯甲酸和所需產(chǎn)物34的共沉淀物，并用冷水洗滌，然后用己烷洗滌，以除去苯甲酸。產(chǎn)物(～80％收率)被風(fēng)干，不經(jīng)進(jìn)一步純化而進(jìn)入隨后的反應(yīng)。
C.(4-乙氧基-2，5-二甲基-苯基)-硫脲(39) 1.4-羥基-2，5-二甲基-苯基-氨基甲酸叔丁酯(35)分別將Boc酸酐(二碳酸二叔丁酯)(22mmol，4.8g)和TEA(30mmol，4.17mL)加入4-氨基-2，5-二甲基-苯酚(20mmol，2.74g)的40ml THF溶液中。在室溫下攪拌整夜后，濃縮反應(yīng)混合物除去THF，并將殘余物再次溶于水(50mL)和乙酸乙酯(80mL)中。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水層。將混合的有機(jī)層通過硫酸鈉進(jìn)行干燥。除去溶劑之后，用急驟層析法(ISCO系統(tǒng)，5-40％乙酸乙酯/己烷)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生標(biāo)題化合物35(90％收率)。
2.(4-乙氧基-2，5-二甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(36)將碳酸鉀(K2CO3，8mmol，1.1g)和溴乙烷(4.8mmol，523mg)加入化合物35(4mmol，948g)的5ml DMF溶液中。在60℃，攪拌整夜后，加入水(2mL)溶解未反應(yīng)的碳酸鉀，然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取反應(yīng)混合物?；旌嫌袡C(jī)層并通過硫酸鈉進(jìn)行干燥。除去溶劑之后，用急驟層析法(0-30％乙酸乙酯/己烷)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生標(biāo)題化合物36(90％收率)。
3.4-乙氧基-2，5-二甲基-苯胺(37)將三氟乙酸(5mL)加入化合物36(950mg，3.6mmol)的10ml二氯甲烷溶液中。反應(yīng)混合物被攪拌2小時(shí)。此時(shí)，LC-MS顯示反應(yīng)結(jié)束。蒸濃反應(yīng)燒瓶以除去溶劑和大部分TFA。殘余物接著在高真空爐中被進(jìn)一步干燥24小時(shí)以上，產(chǎn)生作為TFA鹽的標(biāo)題化合物37。使用上面所述的制備化合物33和34的合成方法，合成化合物38和39。
D.N，N-乙基-2，5-二甲基-苯-1，4-二胺-硫脲(44) 1.(4-氨基-2，5-二甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(40)分別將boc酸酐(Boc2O)(33mmol，7.2g)和TEA(45mmol，6.26mL)加入2，5-二甲基-苯-1，4-二胺(30mmol，4.1g)的40ml THF溶液中。在室溫下攪拌整夜后，濃縮反應(yīng)混合物以除去THF，并將殘余物再次溶于水和乙酸乙酯中。用乙酸乙酯(3×80mL)萃取水層。有機(jī)層被混合并通過硫酸鈉進(jìn)行干燥。除去溶劑之后，用急驟層析法(5-50％乙酸乙酯/己烷)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生標(biāo)題化合物40(大于90％收率)。
2.(4-二乙胺-2，5-二甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(41)將碳酸鉀(K2CO3，15mmol，2.07g)和溴乙烷(12.5mmol，1.36g，0.93mL)加入化合物40(5mmol，1.18g)的3mL DMF溶液中。在70℃下反應(yīng)被攪拌整夜。加入水(3mL)溶解未反應(yīng)的碳酸鉀，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取反應(yīng)混合物。混合有機(jī)層并通過硫酸鈉進(jìn)行干燥。除去溶劑之后，用急驟層析法(0-30％乙酸乙酯/己烷)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生標(biāo)題化合物41(75％收率)。
3.N，N-二乙基-2，5-二甲基-苯-1，4-二胺(42)將三氟乙酸(1mL)加入41的2ml二氯甲烷溶液中。反應(yīng)混合物被攪拌2小時(shí)。此時(shí)，LC-MS顯示反應(yīng)結(jié)束。濃縮反應(yīng)以除去溶劑和大部分TFA。殘余物接著在高真空爐中被進(jìn)一步干燥24小時(shí)以上，產(chǎn)生作為TFA鹽(100％收率)的標(biāo)題化合物42。使用與上述制備化合物33和34相似的合成方法，從42來合成化合物43和44。
E.N，N-二乙基-4，6-二甲基-苯-1，3-二胺-硫脲(49)
1.(5-氨基-2，4-二甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(45)分別將boc酸酐(33mmol，7.2g)和TEA(45mmol，6.26mL)加入2，6-二甲基-苯-1，3-二胺(30mmol，4.1g)的40mL THF溶液中。在室溫下攪拌整夜之后，濃縮反應(yīng)混合物以除去THF，殘余物再次溶解于水和乙酸乙酯中。用乙酸乙酯(3×80mL)萃取水層。有機(jī)層被混合，并通過硫酸鈉進(jìn)行干燥。除去溶劑后，用急驟層析法(5-50％乙酸乙酯/己烷)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生標(biāo)題化合物45(95％收率)。
2.(5-二乙胺基-2，4-二甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(46)在化合物45(5mmol，1.18g)的3mL DMF溶液中加入碳酸鉀(K2CO3，15mmol，2.07g)和溴乙烷(12.5mmol，1.36g，0.93mL)。在70℃下反應(yīng)被攪拌整夜。加入水(3mL)溶解未反應(yīng)的碳酸鈉，接著將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。有機(jī)層被混合，并通過硫酸鈉進(jìn)行干燥。除去溶劑之后，用急驟層析法(0-30％乙酸乙酯/己烷)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生標(biāo)題化合物46(80％收率)。
3.N，N-二乙基-4，6-二甲基-苯-1，3-二胺(47)在化合物46(1.16g，4.0mmol)的10mL二氯甲烷溶液中加入三氟乙酸(5mL)。反應(yīng)混合物被攪拌2小時(shí)。此刻，LC-MS顯示反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)被濃縮以除去溶劑和大部分TFA。殘余物接著在高真空爐中被進(jìn)一步干燥24小時(shí)以上，產(chǎn)生作為TFA鹽的標(biāo)題化合物46(100％收率)。使用與上述制備化合物33和34的相似合成方法，從47合成化合物48和49。
F.2-甲基-5-溴苯基硫脲(50) 2-甲基-5-溴苯胺(10.8g，58.4mmol)和異硫氰酸苯甲酰酯(9.5g，58.4mmol)在丙酮(Acetone)中結(jié)合，并被加熱回流(reflux)30分鐘。反應(yīng)被冷卻并被倒入攪拌的冰水中?；旌衔锉粩嚢?5分鐘，然后形成一種沉淀物，該沉淀物被過濾，并在真空內(nèi)被風(fēng)干1小時(shí)。所生成的黃色粉末接著被懸浮在5％的NaOH水溶液中，并在80℃下被攪拌18小時(shí)。反應(yīng)被冷卻，接著被倒入攪拌的冰水中(400ml)。在冰水中攪拌1小時(shí)之后，所產(chǎn)生的白色固體被真空過濾，并被空氣真空過濾器(air vaccum filter)干燥1小時(shí)，產(chǎn)生一種白色固體混合物51(10.1g，71％)。LC/MS[M-H]-＝244.1。C8H9BrN2S＝245.1。1H NMR(DMSO-d6)300MHzδ2.14(s，3H)，7.17(d，1H，J＝8.4Hz)，7.31(d，1H，J＝7.8Hz)7.45(s，1H)，9.24(broad s，1H)。下面列于表2中的硫脲(thiourea urea)衍生物為所有被制備的硫脲化合物的范例收集。
表2
實(shí)施例3典型α-溴酮和示例性硫脲的縮合典型的α-溴酮衍生物(0.08mmol；請(qǐng)參閱下面表3中的“溴酮(bromoketone)”列)與4-二乙胺-2甲基-苯基-硫脲67(0.08mmol)在1mL DMF溶液中結(jié)合。在70℃，用任選的旋渦攪拌反應(yīng)4-6小時(shí)。冷卻到室溫之后，反應(yīng)混合物被直接注入反相HPLC(Gilson 215)中，在一個(gè)C18色譜柱中使用乙腈/水/TFA梯度分離標(biāo)題產(chǎn)物(title product)。標(biāo)題產(chǎn)物作為一種TFA鹽在真空中被濃縮。
表3
下列{4-[6-(4-甲基-咪唑-1-基)-吡啶-3-基]-噻唑-2-基}-(2-甲基-5-吡咯-1-基-苯基)-胺與其典型的類似物按照與上述相似的步驟被制備。通常，0.1mmol的32與各種α-溴酮衍生物(請(qǐng)參閱下列表4的“溴酮(bromoketone)”列)被溶解于1ml DMF溶液中。反應(yīng)在70℃下被攪拌6小時(shí)。冷卻到室溫之后，在反相HPLC中，使用乙腈/水/TFA梯度和C18固定相純化反應(yīng)混合物。產(chǎn)物被分離出來，然后濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題混合物(title product)，為一種TFA鹽。

表4 按照與上述相同的方法，制備各種典型的N，N-二乙基-2，5-二甲基-N′-{4-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-噻唑-2-基}-苯-1，4-二胺化合物和其示例性類似物。該反應(yīng)所使用的典型溴酮和所產(chǎn)生的合成標(biāo)題化合物列于下列表5中。
表5 按照與上述相同的方法，制備各種典型的N，N-二乙基-4，6-二甲基-N′-{4-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-噻唑-2-基}-苯-1，3-二胺化合物和其示例性類似物。該反應(yīng)所使用的典型溴酮和所產(chǎn)生的合成標(biāo)題化合物列于下列表6中。
表6 各種典型的α-溴酮衍生物以與上述相似的方法與硫脲衍生物34結(jié)合，例外是縮合產(chǎn)物(0.1mmol，37.5mg)隨后被溶解于0.5mLDMF溶解中。將碳酸鈉(K2CO3，0.2mmol，27.6mg)和溴乙烷(0.12mmol，13mg)加入溶液中。反應(yīng)在室溫下被攪拌整夜。除去未反應(yīng)的碳酸鈉之后，利用反相HPLC，使用乙腈/水/TFA梯度和C18固定相，純化反應(yīng)混合物，以分離并接著濃縮標(biāo)題產(chǎn)物。該反應(yīng)所使用的典型的溴酮和所提供的合成標(biāo)題化合物列于下列表7中。
表7 利用不同的烷基溴化物，使用與上面所述相似的化學(xué)過程，合成87(觀測(cè)值[M+1]＝431.4，計(jì)算值[M+1]＝431.6) 典型的硫脲衍生物(請(qǐng)參閱表8的“硫脲(thiourea)”列)與2-溴代-1-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-乙-1-酮88化合，制備下列典型的含哌嗪基的氨基噻唑類似物。使用下列示例性路線，制備表8所列舉的典型標(biāo)題化合物。通常，將0.1mmol 2-溴代-1-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-乙-1-酮溶解在1.0mL無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，并加入0.1mmol硫脲?；旌衔镌?0℃下被渦動(dòng)攪拌加熱4小時(shí)。冷卻到室溫之后，反應(yīng)混合物被直接注入反相HPLC色譜柱，使用10分鐘以上1-99％乙腈/水/0.05TFA梯度。含有標(biāo)題化合物的所需餾分經(jīng)過快速真空(speedvac)被濃縮。經(jīng)HPLC測(cè)量，所有標(biāo)題化合物純度為95％。

表8
典型的硫脲衍生物(請(qǐng)參閱表9的“硫脲”列)與2-溴-1-(4-咪唑-1-基-苯基)乙-1-酮22化合，制備下列典型的含咪唑基的氨基噻唑類似物。用與上述相同的示例性方法，制備表9所列舉的典型的標(biāo)題化合物。

表9 使用與上述相似的方法也可制備含吡咯烷基的類似物。一種示例性吡咯烷基類似物，化合物1201，是通過將0.1mmol 2-溴-1-(4-吡咯烷-1-基-苯基)乙-1-酮溶解于1.0mL無水DMF，并加入0.1mmol(3-甲硫基(methylsulfanyl)-苯基)-硫脲來制備的。混合物在70℃下被渦動(dòng)攪拌加熱4小時(shí)。冷卻到室溫之后，反應(yīng)混合物被直接注入反相HPLC色譜柱，使用10分鐘以上1-99％乙腈/水/0.05TFA梯度。所需餾分經(jīng)過快速真空(speedvac)被濃縮。經(jīng)HPLC測(cè)量，化合物1201的純度為95％。
除了含噻唑類似物之外，用與上述相似的方法，含唑烷酮的類似物也通過縮合芳基尿素衍生物與溴酮衍生物來制備。一種示例性唑烷酮類似物，[4-(4-咪唑-1-基-苯基)-唑-2-基]-(4-甲氧基-苯基)-胺1202，及其示例性類似物通過下述示例性路線制備。
在該典型方法中，混合的溴酮(0.2g，0.75mmol)和尿素(0.375g，2.26mmol)在一個(gè)密封玻璃試管中被1.5mL DMF溶解?；旌衔镌?5-90℃下被加熱攪拌24小時(shí)。在反應(yīng)被冷卻到室溫之后，用DMF稀釋反應(yīng)混合物，并直接注入反相HPLC柱，使用10分鐘以上1-99％CH3CN/水/0.05％TFA梯度。利用快速真空(speedvac)濃縮含有所需餾分的產(chǎn)物，并從己烷/EtOAc(1∶1)中沉淀下來，進(jìn)一步純化得到0.140g(56％)白色固體化合物1202。在DMSO中利用1H NMR確認(rèn)化合物的結(jié)構(gòu)，其LC-MS[M+1]＝333。HPLC測(cè)定的純度大于95％。
實(shí)施例4典型噻唑的制備A.環(huán)狀部分和N-取代基的加入各種典型N-取代含噻唑的化合物通過下面所示的示例性路線來制備。而且，該路線顯示了另一種方法，通過該方法，環(huán)狀部分被加到典型的噻唑化合物上。在如下所示的示例性路線中，溴酮22與4-溴-苯基硫脲通過與實(shí)例3所述相似的方法縮合生成1203。隨后的N-?；?204，而后來的N-烷化生成了1205。另外，雜環(huán)被進(jìn)一步加到1203或1205，分別生成1209或1206和1207。
1.(4-溴苯基)-(4-(4-咪唑-1-基苯基)-噻唑-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(1204)將化合物1203(400mg，1.0mmol)在氮?dú)鈿夥障聭腋≡跓o水吡啶(5mL)中，然后加入二叔丁基碳酸氫鹽(di-tert-butyldicarbonate)(262mg，1.2mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下被攪拌16小時(shí)(反應(yīng)在5分鐘后變清澈)，之后被倒入冰水中。攪拌10分鐘之后，過濾混合物，并將沉淀物抽氣干燥2小時(shí)?；衔?204作為一種白色粉末(460mg)被分離出來。預(yù)期質(zhì)譜分析＝497；觀測(cè)值＝498[M+1]。
2.4-溴苯基-(4-(4-咪唑-1-基苯基)-噻唑-2-基)-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-胺(1208)將化合物1204在氮?dú)鈿夥障路湃霟o水DMF(7mL)中，然后加入NaH(35mg，95％粉末，1.38mmol)。在室溫下攪拌10分鐘之后，加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(0.25mL，1.38mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下被攪拌3小時(shí)，然后小心地加入水(50mL)和EtOAc(3×50mL)。用水(100mL)、鹽水(100mL)洗滌有機(jī)提取物，通過硫酸鎂進(jìn)行干燥，并過濾。在真空下除去溶劑，生成一種黃色油狀化合物25，該化合物片刻后凝固(530mg)。1H NMR(300MHz，DMSO，δinppm)-0.07(s，9H)，0.93(t，J＝7.8Hz，2H)，3.69(t，J＝7.5Hz，2H)，5.32(s，2H)，7.11(s，1H)，7.44-7.50(m，3H)，7.65(d，J＝6.3Hz，2H)，7.68(d，J＝5.7Hz，2H)，7.78(d，J＝0.9Hz，1H)，7.97(d，J＝8.4Hz，2H)，8.30(s，1H).預(yù)期質(zhì)譜分析＝527；觀測(cè)值＝528[M+1].
3.(4-(4-咪唑-1-yl-苯基)-噻唑-2-基)-(4-哌啶-1-基-苯基)-胺(1209)在用氮?dú)獯祾叩募訜針尭稍锲?heat-gun dried vial)內(nèi)，將(+/-)-BINAP(10mg，0.015mmol)溶解在無水甲苯中(1mL)。2分鐘之后，將Pd2(dba)3(3mg，0.0025mmol)、化合物1208(53mg，0.1mmol)和哌啶(11mg，0.12mmol)加入反應(yīng)燒瓶中。在室溫下攪拌5分鐘之后，加入NaOtBu(14mg，0.14mmol)，反應(yīng)混合物在90℃下被加熱18小時(shí)，然后通過一個(gè)0.45μm的過濾器，隨后進(jìn)行HPLC純化?；衔?209作為一種棕色油被分離出來(1.3mg)。預(yù)期質(zhì)譜分析＝401；觀測(cè)值＝402[M+1]。
4.(4-溴苯基)-乙基-(4-(咪唑-1-基苯基)-噻唑-2-基)-胺(1205)將化合物1203在氮?dú)鈿夥障路湃霟o水DMF(7mL)中，然后加入NaH(17mg 95％的粉末，0.65mmol)。在室溫下攪拌10分鐘之后，加入溴乙烷(0.05mL，0.65mmol)，反應(yīng)混合物在90℃下被攪拌2小時(shí)，然后小心地加入水(50mL)和EtOAc(3×50mL)。用水(100mL)、鹽水(100mL)洗滌有機(jī)提取物，通過硫酸鎂進(jìn)行干燥，并過濾。在真空下除去溶劑，生成一種淺黃色固體化合物1205(200mg)。預(yù)期質(zhì)譜分析＝425；觀測(cè)值＝426[M+1]。
5.N-乙基-(4-(4-咪唑-1-基苯基)-噻唑-2-基)-(4-哌啶-1-基苯基)-胺(1206)在用氮?dú)獯祾叩目諝饧訜針尭稍锲績(jī)?nèi)，將(+/-)-BINAP(10mg，0.015mmol)溶解在無水甲苯中(1mL)。2分鐘之后，加入Pd2(dba)3(3mg，0.0025mmol)、化合物1205(43mg，0.1mmol)和哌啶(11mg，0.12mmol)。在室溫下攪拌5分鐘之后，加入NaOtBu(14mg，0.14mmol)，反應(yīng)混合物在90℃下被加熱23小時(shí)，然后通過一個(gè)0.45μm的過濾器，隨后進(jìn)行HPLC純化?；衔?206作為一種棕色油被分離出來(12mg)。預(yù)期質(zhì)譜分析＝429；觀察＝430[M+1]。
6.N-乙基-(4-(4-咪唑-1-基-苯基)-噻唑-2-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(1207)在用氮?dú)獯祾叩目諝饧訜針尭稍锲績(jī)?nèi)，將(+/-)-BINAP(10mg，0.015mmol)溶解在無水甲苯中(1mL)。2分鐘之后，加入Pd2(dba)3(3mg，0.0025mmol)、化合物1205(43mg，0.1mmol)和嗎啉(11mg，0.12mmol)。在室溫下攪拌5分鐘之后，加入NaOtBu(14mg，0.14mmol)，反應(yīng)混合物在90℃下被加熱23小時(shí)，然后通過一個(gè)0.45μm的過濾器，隨后進(jìn)行HPLC純化?；衔?207作為一種棕色油被分離出來(21mg)。預(yù)期質(zhì)譜分析＝431；觀測(cè)值＝432[M+1]。
B.非環(huán)部分的加入除了環(huán)部分，溴酮衍生物與硫脲衍生物縮合之后，非環(huán)官能團(tuán)可被加到典型的噻唑化合物。如下面的示例性路線所示，噻唑1208發(fā)生N-烷基化而生成1209。加入N，N-二乙胺，生成1210，隨后發(fā)生N-去保護(hù)(N-deprotection)，生成1211。

1.N*1，N*1-二乙基-4-甲基-N*-3*-{4-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-噻唑-2-基}-N*3*-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-苯-1，3-二胺(1210)將三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)(Pd2(dba)3)(0.066g，0.146mmol)、三(叔丁基)膦(P(t-Bu)3)(0.44ml 10％的己烷溶液，0.146mmol)、化合物1209的干甲苯溶液(1.62溶解于15ml甲苯中，2.92mmol)、二乙胺(0.90ml，8.76mmol)和叔丁基氧化鈉(sodium tert-butoxide)(NaOtBu)(0.420g，4.38mmol)一起加入一個(gè)帶攪拌棒的干燥密封(screw-capped)管瓶中。用氮?dú)鉀_洗管瓶，并將其緊緊地密封。然后在90℃的油浴中混合物被攪拌1小時(shí)。在減壓下除去甲苯。將物質(zhì)再次懸浮在CH2Cl2和硅膠中。接著在減壓下，移去CH2Cl2，以便將化合物吸收到硅膠上。然后利用柱層析法純化產(chǎn)物，用EtOAc/己烷洗脫，產(chǎn)生一種淺黃色半固體產(chǎn)物1210(0.842g，52％)。LC/MS[M+1]+＝548.4.C30H41N5OSSi＝547.8。
2.N*，N*1-二乙基-4-甲基-N*-3*-{4-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-噻唑-2-基}-N*3*-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-苯-1，3-二胺(1211)將化合物1210溶解在DMF(5ml)和2M鹽酸溶液(5ml)中，并在室溫下攪拌1.5小時(shí)。接著利用反相HPLC純化產(chǎn)物。在減壓下混合純餾分并濃縮至變干。所產(chǎn)生的物質(zhì)溶解于CH2Cl2(250ml)中，并用飽和碳酸氫鈉(100mL)洗滌兩次，用鹽水(100mL)洗滌一次。有機(jī)相通過硫酸鎂進(jìn)行干燥，在減壓下過濾并濃縮，生成一種白色固體1211(不含堿)(0.610g，51％)。LC/MS[M+H]+＝418.5.C24H27C5S＝417.5。
3.N*1，N*1-二乙基-4-甲基-N*-3*-{4-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-噻唑-2-基]-N*3*-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-苯-1，3-二胺的二鹽酸鹽將化合物1211(不含堿)(0.610g，1.46mmol)部分溶解于MeOH(2ml)中。然后加入2M HCl/Et2O(1.46ml，2.92mmol)，溶液變清。使用氮?dú)饬鲗⑷芤簼饪s到最小的體積。然后加入Et2O(5ml)，將化合物研磨成白色固體，被Et2O(5ml)洗滌兩次，用氮?dú)饬鞲稍?。接著將物質(zhì)再次溶解在干Et2O(1.5ml)中，同時(shí)稍微加熱。冷卻混合物，化合物結(jié)晶。晶體被收集在過濾器上，用Et2O(1ml)洗滌兩次，真空干燥，產(chǎn)生一種白色固體二鹽酸鹽(0.320g，26％)。LC/MS[M+1]+＝418.5。C24H27N5S·2HCl＝490.5。1H NMR(DMSO-d6)300MHzδ1.09-1.36(6H，t，J＝6.9Hz)，2.34和2.36(6H，two s)，3.51(4H，broad s)，7.42(2H，t，J＝8.4Hz)，7.57(1H，s)，7.79(2H，d，J＝9.0Hz)，8.07(1H，t，J＝1.2Hz)，8.19(2H，d，J＝9.0Hz)，8.57(1H，s)，9.69(1H，d，J＝1.8Hz)，9.68(1H，s)。通過對(duì)各種溴酮衍生物和硫脲衍生物使用相似的方法，合成一組含有環(huán)狀、非環(huán)狀和N-烷基化噻唑的化合物，包括下面典型的化合物1212，及其二鹽酸鹽(0.032g，97％)。LC/MS[M+1]+＝433.4.C24H28N6S.2HCl＝505.5。1H NMR(DMSO-d6)300MHzδ0.856(3H，t，J＝7.2Hz)，1.07-1.23(5H，m)，2.35和2.38(6H，two s)，3.43and 3.54(4H，two broad s)，7.41(2H，broad s)，7.73(1H，s)，8.03(1H，d，J＝9.0Hz)，8.24(1H，s)，8.62(1H，broad s)，8.75(1H，d，J＝8.7Hz)，9.12(1H，d，J＝1.8Hz)，9.80(1H，broad s)，9.90(1H，d，J＝1.5Hz)。
C.典型的C-連接噻唑除N-連接噻唑之外，通過如下所示示例性路線，制備各種C-連接的噻唑。

1.2-(3，4-二氯-苯基)-硫代乙酰胺(1213)將硫化氫(氣體)鼓泡加入(3，4-二氯苯基)-乙腈(1.86g，10mmol，1.0eq))和三乙胺(TEA)(10mmol，1eq)的乙醇(10ml)溶液中，大約1小時(shí)。1小時(shí)后，密封反應(yīng)混合物，并在室溫下攪拌整夜。TLC顯示大部分腈轉(zhuǎn)化為硫代乙酰胺(thioacteamide)。通過將氮?dú)夤娜敕磻?yīng)混合物30分鐘，去除過量的H2S。然后濃縮反應(yīng)混合物，并利用硅膠層析法(ISCO系統(tǒng)，30-60％乙酸乙酯/己烷)純化反應(yīng)混合物，產(chǎn)生標(biāo)題化合物(1213)(55％收率)。
2.2-(3，4-二氯-芐基)-4-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-噻唑(1214)將硫代乙酰胺1213(0.08mmol)和2-溴-1-[4-(4-甲基-咪唑-1-基)-苯基]-乙酮(0.08mmol)10溶解于1ml DMF中。反應(yīng)在70℃下被攪拌6小時(shí)。冷卻到室溫之后，反應(yīng)混合物被直接注入反相HPLC中(Gilson 215)，使用乙腈/水/TFA梯度和C18固定相進(jìn)行分離，然后濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題產(chǎn)物1214，為TFA鹽。
實(shí)施例5典型的三唑基和呋喃基氨基噻唑化合物的制備使用下列示例性常規(guī)路線，制備含三唑基和呋喃基的化合物。
采用下列路線制備典型的三唑基氨基噻唑化合物。
1.N*1*-[4-(4-疊氮基-苯基)-噻唑-2-基]-N*4*，N*4-二乙基-2-甲基-苯-1，4-二胺(1216a)4-疊氮基-溴苯乙酮(bromoacetophenone)28(0.300g，1.24mmol)和(4-二乙氨基-2-甲基-苯基)-硫脲75(0.293g，1.24mmol)在一個(gè)20mL帶攪拌棒的閃爍管中化合。加入無水EtOH(5ml)，在65℃油浴中，將混合物攪拌加熱2.5小時(shí)。生成一種黑色清澈的溶液。冷卻該溶液，在減壓下移去EtOH，生成一種紫色的油，該油在室溫下放置2天后結(jié)晶，產(chǎn)生一種紫色固體1216a(0.465g，99％)。LC/MS[M+1]+＝379.0.C20H22N6S＝378.5。
2.1-(-{4-[2-(4-二乙氨基-2-甲基-苯氨基)-噻唑-4-基]-苯基}-1H-[1，2，3]噻唑-4-基)-乙醇(1218a)將化合物1216a(0.100g，0.26mmol)，抗壞血酸鈉(SodiumAscorbate)(0.005g，0.026mmol)、五水硫酸銅(II)(0.001g，0.0026mmol)和but-3-yn-2-ol(0.018g，0.26mmol)加入一個(gè)有攪拌棒的旋蓋著的管瓶中。將叔丁醇(1ml)和水(1ml)加入管瓶中，并蓋緊。在室溫下混合物被劇烈攪拌16小時(shí)。減壓下移去溶劑，并將所生成的殘余物再次溶解于DMF(1.5ml)中。然后利用反相HPLC分離產(chǎn)物。在減壓下濃縮純餾分，產(chǎn)生ditrflouroacetate salt 1218a(0.038g，21％)。LC/MS[M+1]+＝449.1。C24H28N6OS＝448.5。下列步驟用于制備典型的呋喃基氨基噻唑化合物，N*1*，N*1*-二乙基-N*3*-[4-(4-呋喃-3-基-苯基)-噻唑-2-基]-4-甲基1-苯-1，3-二胺(1217a)。將N*3*-[4-(4-溴代-苯基)-噻唑-2-基]-N*1*，N*1*-二乙基-4-甲基-苯-1，3-二胺(104mg，0.25mmol)(1215a)置于燒瓶中，加入甲苯∶EtOH(4∶1，12mL∶3mL)，然后加入3-呋喃硼酸(34mg，0.30mmol)、抗壞血酸鈉(80mg，0.75mmol)和水(1mL)。利用氮?dú)夤呐萃ㄟ^反應(yīng)混合物30分鐘，使反應(yīng)混合物脫氣。隨后加入Pd(PPh3)4(29mg，0.025mmol)，反應(yīng)混合物在80℃下被加熱17小時(shí)，然后冷卻到室溫。加入EtOAc(3×100mL)和水(100mL)。用水(100mL)、鹽水(100mL)洗滌有機(jī)提取物，通過硫酸鎂進(jìn)行干燥，使用柱層析法純化(40g ISCO柱體)。標(biāo)題化合物作為一種黃色粉末被分離出來(40mg，40％，C24H25N3O5S的質(zhì)量計(jì)算值403.5。觀察值404.1[M+1])。
實(shí)施例6典型的發(fā)明化合物表10列舉了利用上述實(shí)施例1-5中的示例性路線合成的典型化合物。
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實(shí)施例7評(píng)價(jià)Aβ調(diào)節(jié)的ELISA測(cè)定使用下面的夾心ELISA測(cè)定法(sandwich ELISA assay)評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)胞外介質(zhì)中Aβ42和Aβ40水平的活性。
A.細(xì)胞的制備通過用包含在載體pcDNA.1中的編碼人類APP751的DNA，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染來自ATCC(收錄編號(hào)CRL-2266)的人類SH-SY5Y細(xì)胞，產(chǎn)生表達(dá)APP的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系。細(xì)胞被鋪在384-孔板上(～20,000SH-SY5Y-APP轉(zhuǎn)染細(xì)胞/孔)，允許粘附至少18小時(shí)。然后在培養(yǎng)液(DMEM，10％FBS，100單位/ml青霉素，0.1mg/ml鏈霉素)中洗滌細(xì)胞，并加入30μl含有適當(dāng)濃度化合物的培養(yǎng)液。
B.化合物效能(potency)的計(jì)算將化合物懸浮在DMSO(媒介)中。使用化合物的一個(gè)濃度，即30μM，進(jìn)行初測(cè)定，以測(cè)定化合物是否具有減少胞外介質(zhì)的Aβ42水平的活性。將化合物加入細(xì)胞中，在化合物存在下細(xì)胞被溫育18-22小時(shí)。如果與該化合物濃度接觸的細(xì)胞胞外介質(zhì)的Aβ42水平(如下述夾心ELISA所評(píng)價(jià))小于僅與媒介接觸的細(xì)胞胞外水平(陰性對(duì)照)的大約60％，那么要測(cè)定一定范圍濃度的化合物，以測(cè)量化合物減少Aβ42和Aβ40水平的效能(即化合物的IC50值)。為測(cè)量化合物減少胞外介質(zhì)的Aβ42水平的效能，用化合物的六個(gè)不同濃度處理細(xì)胞(相差1/2對(duì)數(shù)稀釋(log dilutions))，計(jì)算Aβ42水平減少為Aβ42水平最大減少的一半時(shí)的濃度。同樣，為測(cè)量化合物減少胞外介質(zhì)的Aβ40水平的效能，采用化合物的不同濃度，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，計(jì)算Aβ40水平減少為Aβ40水平最大減少的一半時(shí)的濃度。為測(cè)量化合物減少胞外介質(zhì)的Aβ42水平相對(duì)于減少胞外介質(zhì)的Aβ40水平的選擇性程度，比較化合物減少Aβ42水平和化合物減少Aβ40水平的效能，并表示為倍選擇性(fold selectivity)。如果胞外介質(zhì)的Aβ40水平減少不大于50％，則在計(jì)算中使用被測(cè)化合物的最高濃度(例如30μM)。
C.評(píng)價(jià)Aβ水平的ELISA測(cè)定利用Aβ42或Aβ40選擇性抗體作為捕獲抗體，通過夾心ELISA測(cè)定來自組織培養(yǎng)皿孔的上清液(supernatant)來評(píng)價(jià)胞外介質(zhì)的Aβ水平。在開始進(jìn)行免疫測(cè)定之前，用在TBS中的25μl的～5μg/ml的Aβ42或者Aβ40選擇性單克隆抗體包被白色的微量滴定384-孔板過夜。為評(píng)價(jià)在樣品上清液中Aβ42的水平，在夾心測(cè)定的第一次反應(yīng)中使用Aβ42選擇性單克隆抗體A387(第一抗體或捕獲抗體)，該抗體抵抗Aβ的35-42氨基酸(請(qǐng)參考WO 04/018997)。為評(píng)價(jià)在細(xì)胞上清液中Aβ40的水平，在夾心測(cè)定的第一次反應(yīng)中使用Aβ40選擇性單克隆抗體B113，該抗體識(shí)別Aβ的30-40氨基酸(請(qǐng)參考WO04/018997)。用在夾心測(cè)定中的第二抗體，抵抗Aβ的氨基酸1-12的B436(請(qǐng)參考WO 04/018997)，與Aβ40和Aβ42肽都反應(yīng)。用作檢測(cè)抗體的第二抗體與堿性磷酸酶結(jié)合。利用一種在堿性磷酸酶存在下發(fā)射光的底物的發(fā)光來測(cè)量抗體結(jié)合的存在或缺乏，該底物即CDP-Star化學(xué)發(fā)光底物(Applied Biosciences)。在4℃下用捕獲抗體包被過夜后，測(cè)定板被50μl 1％的BAS/TBS，F(xiàn)raction V封閉(Sigma，St.Louis，MO)。用50μl TBS/0.1％Tween-20洗滌含有細(xì)胞的測(cè)定板三次，然后將來自組織培養(yǎng)板孔的上清液轉(zhuǎn)移到抗體包被板(將20μl的上清液加入包被了Aβ42選擇性抗體的板中，將10μl的上清液加入包被了Aβ40選擇性抗體的板中)。細(xì)胞上清液與測(cè)定板在室溫下被溫育2小時(shí)。然后用50μl TBS/0.1％Tween-20洗滌測(cè)定板三次。洗滌之后，用25μl與堿性磷酸酶(～0.5ug/ml在1％TBS中)結(jié)合的抗-Aβ1-12，將孔在室溫下溫育2.5小時(shí)。用50μl TBS/0.1％Tween-20洗滌孔三次，加入25μl CDP-Star化學(xué)發(fā)光底物(Tropix，Inc.)，并在室溫下溫育20分鐘。在Analyst HT(Molecular Devices Corp.)上對(duì)發(fā)光進(jìn)行定量。數(shù)據(jù)顯示了相對(duì)于明顯區(qū)分于介質(zhì)對(duì)照值(vehicle controls)的陽性對(duì)照孔背景的可接受信號(hào)(～7-20倍(fold))。Aβ42肽測(cè)定有一個(gè)很大的線性范圍，其大約為75-2000pg/孔；高動(dòng)態(tài)范圍(high dynamicrange)，其在線性范圍內(nèi)(信號(hào):背景)，是背景的大約3-30倍；低靈敏度極限，其小于20pg/孔，和Aβ42的選擇性，其為至少高于其它Aβ肽約1000倍，這使得本方法能夠進(jìn)行高產(chǎn)量篩選調(diào)節(jié)Aβ42水平的化合物。下面的表11列舉了此處所提供的典型的化合物，這些化合物在上述Aβ42和/或Aβ40活性減少的生物體外測(cè)定中表現(xiàn)出活性。典型化合物的效能數(shù)據(jù)表示如下A＝＜0.2uM；B＝0.2uM-1.0uM；C＝1.1uM-5.0uM；D＝5.1uM-10uM；E＝10.1μM-30μM；F＝濃度大約為30μM時(shí)可檢測(cè)的減少Aβ40的活性。表12進(jìn)一步說明此處所提供典型化合物，這些化合物顯示在濃度大約為30μM時(shí)減少的Aβ42和/或Aβ40活性。
表11
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表12
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實(shí)施例8化合物細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)為評(píng)價(jià)化合物的細(xì)胞毒性，除去用化合物處理過的細(xì)胞上清液，如上面實(shí)施例7中所述，并加入按體積計(jì)算含10％細(xì)胞存活能力指示劑(cell viability indicator)染料AlamarBlueTM(Biosource，San Diego)的溶液。細(xì)胞在37℃被溫育3小時(shí)，之后讀取CytoFluor(AppliedBiosystems)分光光度計(jì)上的熒光，該分光光度計(jì)使用一個(gè)530-nm的激發(fā)濾色片(excitation filter)和一個(gè)580-nm發(fā)射濾色片(emission filter)。相對(duì)于對(duì)照細(xì)胞，表11所示的化合物處理的細(xì)胞顯示AlamarBlue熒光減少量小于40％。
實(shí)施例9評(píng)價(jià)Aβ調(diào)節(jié)的FRET測(cè)定使用均相時(shí)間分辨熒光(HTRF)測(cè)定法，評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)胞外介質(zhì)中的Aβ40和Aβ42水平的活性如下。SH-SY5Y-APP細(xì)胞被鋪于板中并用化合物處理，如上述實(shí)施例所述，例外是，為測(cè)定化合物的效能，用化合物的11種不同濃度處理細(xì)胞，按四分之一對(duì)數(shù)間隔(quarter-log intervals)，典型使用1、3或10μM的最大濃度。對(duì)HTRF分析，將5或10μl的來自處理細(xì)胞的上清液加入到10或15μl的標(biāo)記的抗體對(duì)中，總量為20μl，并在4℃下溫育20-24小時(shí)。標(biāo)記抗體對(duì)或者是用于評(píng)價(jià)Aβ40水平的8000pgB436-XL665和400pg B113銪，或者是用于評(píng)價(jià)Aβ42水平的8000pgB436-XL665和400pg A387銪，其稀釋在50mM NaPO4，0.2％BSA，0.5M KF，pH為7的溶液中。在BMG Rubystar上讀取620nm和665nm處的熒光值。為制定濃度響應(yīng)曲線，測(cè)量每個(gè)濃度在665/620nm的讀數(shù)比，并作為未處理細(xì)胞的讀數(shù)的百分比繪制曲線，Aβ42或Aβ40水平減少為最大減少值一半時(shí)的濃度被計(jì)算為化合物的效能。在此說明的本發(fā)明可以在缺乏在此并沒有被具體公開的任何一種或一些元素，任何一種限制或一些限制的情況下被實(shí)施。所用到的術(shù)語和表達(dá)式用作描述性術(shù)語，而并非限制，而且使用這樣的術(shù)語和表達(dá)式無意排除所示和所述特征或其部分的任何一些等效物，而要認(rèn)識(shí)到，在本發(fā)明范圍的要求之內(nèi)，各種修改都是有可能的。因此，應(yīng)當(dāng)理解，盡管本發(fā)明通過優(yōu)選的實(shí)施方案和任選特征具體公開，但是此處所公開的概念的修改和變動(dòng)可被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所使用，這樣的修改和變動(dòng)被認(rèn)為是在權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在此所提及或引用的文章、專利、專利申請(qǐng)和所有其它文件以及電子信息，在此被全部引入，作為參考，其引用程度如同每個(gè)單獨(dú)出版物被具體和單獨(dú)表明引入作為參考文獻(xiàn)一樣。申請(qǐng)人保留將來自任何這樣的文章、專利、專利申請(qǐng)或其它文件的任何和所有材料和信息有用地加入該申請(qǐng)的權(quán)利。在此所闡明的本發(fā)明可以在缺乏在此并沒有被具體公開任何一種或一些元素，任何一種限制或一些限制的情況下適宜地被實(shí)施。因此，例如，術(shù)語“包含(comprising)”，“包括(including)”，“含有(containing)”，等應(yīng)當(dāng)被廣泛性理解，而且沒有限定。另外，在此所用到的術(shù)語和表達(dá)式用作描述性術(shù)語，并非限制，而且使用這樣的術(shù)語和表達(dá)式無意排除所示和所述特征或其部分的任何一些等效物，而要認(rèn)識(shí)到，在本發(fā)明所要求的范圍之內(nèi)，各種修改都是有可能的。因此，應(yīng)當(dāng)理解，盡管本發(fā)明通過優(yōu)選的實(shí)施例和任選特征具體公開，但是此處所公開的概念的修改和變動(dòng)可被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所使用，這樣的修改和變動(dòng)被認(rèn)為是在權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在此對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了廣泛和一般的描述。每一種落在一般公開之內(nèi)的較窄種類和下位分組也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。這包括帶有限制型條款的本發(fā)明的一般描述，或帶有從種中去除任何主體的負(fù)面限定的本發(fā)明的一般描述，不管所去除的物質(zhì)是否在此被具體引用。另外，其中本發(fā)明的特征或方面根據(jù)Markush groups被描述，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明也因此根據(jù)Markush groups成員的單個(gè)成員或下屬小組被描述。其它實(shí)施方案在下面的權(quán)利要求中被闡明。
權(quán)利要求
1.一種化合物及其藥物學(xué)可接受鹽和其前藥，所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(I)的結(jié)構(gòu)(A)-LA-(B)-LB-(C)-LC-(D)(I)其中A是 其中每個(gè)E獨(dú)立為N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過4個(gè)E是雜原子；R是氫，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代環(huán)烷基，或取代或未取代芳基；每個(gè)R1為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代氨基，取代或未取代環(huán)烷基，或取代或未取代芳基；或A是 其中，每個(gè)M獨(dú)立選自C R1或N，條件是不超過3個(gè)M是N；和B是 其中，每個(gè)G獨(dú)立為CR2或N，條件是不超過3個(gè)G是N；每個(gè)R2獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代氨基；或B和A一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)系；C是 其中J選自CR3，O，S，N和NR；每個(gè)K獨(dú)立為N，NR，C或CR3；每個(gè)R3為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代芳基；取代或未取代雜芳基，或取代或未取代烷氧基，其限制性條件為當(dāng)C是 時(shí)，R3不是-NH2；或C是 其中，每個(gè)M獨(dú)立選自CR1或N，條件是不超過3個(gè)M是N；D是 其中，每個(gè)E獨(dú)立選自N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過4個(gè)E是雜原子；或D是 其中，每個(gè)M獨(dú)立選自CR5或N，條件是不超過3個(gè)M是N；每個(gè)R5獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代雜環(huán)，取代或未取代芳基，取代或未取代雜芳基，取代或未取代氨基，取代或未取代烷基氨基；LA為任意，當(dāng)存在時(shí)，為共價(jià)鍵或連接物，選自-C＝C-，-C＝C-，-(C(R′)2)z-，-O-，-O-(C(R′)2)z-，-S-，-NR′-，-NH-(C(R′)2)z-，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-S(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，-O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-NR′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，-NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C-(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C-(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)2-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)-，-O-NR′-S(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中，每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的環(huán)烷基，以及z為1-10；LB獨(dú)立為共價(jià)鍵或連接物，選自-C＝C-，-C≡C-，-(C(R′)2)z-，-O-，-O-(C(R′)2)z-，-S-，-NR′-，-NH-(C(R′)2)z，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-S(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，-O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-NR′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，-NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′-，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′-，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-NR′-S(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中，每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代的烷基，取代或未取代的鏈烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的環(huán)烷基，以及z是1-10；LC為-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，-NR-，-C(O)-，-(C(R′)2)Z-，或-C(S)-；限制性條件為當(dāng)A為 時(shí)，LA不是-C(O)NH-，-CH2NH-，-CH2-O-或-C(O)N(CH3)-；和式(I)的所述化合物不是
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中A和B一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)系。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中B和C一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)系。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中D是 且d為0-5。
5.權(quán)利要求4所述的化合物，其中每個(gè)R5獨(dú)立選自鹵素，取代或未取代C1-C5烷基，取代或未取代C1-C5烷氧基，取代或未取代5元到6元雜芳基，取代或未取代氨基，和-N(R″)2，其中每個(gè)R″獨(dú)立為取代或未取代C1-C5烷基或C3-C10環(huán)烷基。
6.權(quán)利要求5所述的化合物，其中D和R5一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)系。
7.權(quán)利要求4所述的化合物，其中D是 或
8.權(quán)利要求7所述的化合物，其中，R5獨(dú)立選自鹵素，取代或未取代C1-C5烷基，取代或未取代C1-C5烷氧基，取代或未取代5元到6元雜芳基，和-N(R″)2，其中每個(gè)R″獨(dú)立為取代或未取代C1-C5烷基或C3-C10環(huán)烷基。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中LC為-NH-。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，其中C是
11.權(quán)利要求10所述的化合物，其中C是
12.權(quán)利要求11所述的化合物，其中C是
13.權(quán)利要求10所述的化合物，其中C選自 或
14.權(quán)利要求1所述的化合物，其中B是 和b為0-2。
15.權(quán)利要求14所述的化合物，其中B選自 或
16.權(quán)利要求15所述的化合物，其中B選自 或
17.權(quán)利要求16所述的化合物，其中每個(gè)R2獨(dú)立選自鹵素或取代或未取代C1-C5烷基。
18.權(quán)利要求1所述的化合物，其中A是 其中F是CH或N。
19.權(quán)利要求18所述的化合物，其中R1是鹵素或取代或未取代C1-C5烷基。
20.權(quán)利要求1所述的化合物，其具有對(duì)應(yīng)于式(II)的結(jié)構(gòu)
21.權(quán)利要求20所述的化合物，其具有對(duì)應(yīng)于式(III)的結(jié)構(gòu)
22.權(quán)利要求21所述的化合物，其具有對(duì)應(yīng)于式(IV)的結(jié)構(gòu)
23.權(quán)利要求22所述的化合物，其具有對(duì)應(yīng)于式(V)的結(jié)構(gòu)
24.權(quán)利要求23所述的化合物，其具有對(duì)應(yīng)于式(VI)的結(jié)構(gòu)
25.一種組合物，其包括權(quán)利要求1所述的化合物和藥物學(xué)可接受載體。
26.一套試劑盒，其包括權(quán)利要求1所述的化合物和使用說明。
27.一種調(diào)節(jié)淀粉樣蛋白-β(Aβ)水平的方法，包括將淀粉樣前體蛋白(APP)或其片段和/或Aβ的來源與有效數(shù)量的化合物及藥物學(xué)可接受鹽和其前藥接觸，所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(VII)的結(jié)構(gòu)(A1-LA1)0-1-(B1)-LB1-(C1)-LC1-(D1)(VII)其中A1為任選，當(dāng)存在時(shí)，為5元或6元取代或未取代環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基，環(huán)亞烷基，雜環(huán)亞烷基，亞芳基，或雜亞芳基；B1為5元或6元取代或未取代環(huán)亞烷基，雜環(huán)亞烷基，亞芳基，或雜亞芳基；或B和A一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)系；C1為5元或6元取代或未取代亞芳基或雜亞芳基；D1為5元或6元取代或未取代芳基，雜芳基，亞芳基，或雜亞芳基；和LA1為任選，當(dāng)存在時(shí)，為共價(jià)鍵或連接物；每個(gè)LB1和LC1獨(dú)立為共價(jià)鍵或連接物；其中式(VII)的所述化合物調(diào)節(jié)Aβ水平。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其中A1為任選，當(dāng)存在時(shí)為 其中，每個(gè)E獨(dú)立為N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過4個(gè)E是雜原子；R是氫，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代羥炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代芳基；每個(gè)R1為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代氨基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代芳基；或A1，當(dāng)存在時(shí)為 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR1或N，條件是不超過3個(gè)M為N；和B1是 其中每個(gè)G獨(dú)立為CR2或N，條件是不超過3個(gè)G為N；每個(gè)R2獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代羥炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，C1是 其中，J選自CR3，O，S，N和NR；每個(gè)K獨(dú)立為N，NR，C或CR3；和R3為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代芳基，取代或未取代雜芳基，或取代或未取代烷氧基；或C1為 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR1或N，條件是不超過3個(gè)M為N；D1是 每個(gè)E獨(dú)立選自N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過4個(gè)E為雜原子；或D1為 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR5或N，條件是不超過3個(gè)M是N；每個(gè)R5獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代雜環(huán)，取代或未取代環(huán)芳基，取代或未取代雜芳基，取代或未取代氨基，或取代或未取代烷基氨基；LA1，當(dāng)存在時(shí)，和每個(gè)LB1和LC1獨(dú)立為共價(jià)鍵或連接物，選自-C＝C-，-C＝C-，-(C(R′)2)z-，-O-，-O-(CR′2)z，-S-，-NR′-，-NH-(C R′2)z，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-S(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，-O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-NR′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，-NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′-，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′-，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)2-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)-，-O-NR′-S(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，或取代或未取代環(huán)烷基，及z為1-10。
29.權(quán)利要求28所述的方法，其中LC1為-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，-NR-，-C(O)-，-(C(R′)2)z-或-C(S)-。
30.權(quán)利要求29所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(II)的結(jié)構(gòu)
31.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(III)的結(jié)構(gòu)
32.權(quán)利要求31所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(IV)的結(jié)構(gòu)
33.權(quán)利要求32所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(V)的結(jié)構(gòu)
34.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(VI)的結(jié)構(gòu)
35.一種治療與異常Aβ水平有關(guān)的疾病的方法，包括向主體施用有效數(shù)量的化合物及藥物學(xué)可接受鹽和其前藥，所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(VII)的結(jié)構(gòu)(A1-LA1)0-1-(B1)-LB1-(C1)-LC1-(D1)(VII)其中A1為任選，當(dāng)存在時(shí)，為5元或6元取代或未取代環(huán)烷基，雜環(huán)基，芳基，雜芳基，環(huán)亞烷基，雜環(huán)亞烷基，亞芳基，或雜亞芳基；B1為5元或6元取代或未取代環(huán)亞烷基，雜環(huán)亞烷基，亞芳基，或雜亞芳基；或B和A一起構(gòu)成一個(gè)稠環(huán)系；C1為5元或6元取代或未取代亞芳基或雜亞芳基；D1為5元或6元取代或未取代芳基，雜芳基，亞芳基，或雜亞芳基；和LA1為任選，當(dāng)存在時(shí)，為共價(jià)鍵或連接物；每個(gè)LB1和LC1獨(dú)立為共價(jià)鍵或連接物；其中式(VII)的所述化合物調(diào)節(jié)Aβ水平。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中A1為任選，當(dāng)存在時(shí)為 其中，每個(gè)E獨(dú)立為N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過4個(gè)E是雜原子；R是氫，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代羥炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代環(huán)烷基，或取代或未取代芳基；每個(gè)R1為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，取代或未取代烷基氨基，取代或未取代氨基，取代或未取代環(huán)烷基，或取代或未取代芳基；或A1，當(dāng)存在時(shí)為 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR1或N，條件是不超過3個(gè)M為N；和B1是 其中每個(gè)G獨(dú)立為CR2或N，條件是不超過3個(gè)G為N；每個(gè)R2獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代羥炔基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代烷基酰胺基，或取代或未取代烷基氨基；C1是 其中，J選自CR3，O，S，N和NR；每個(gè)K獨(dú)立為N，NR，C或CR3；和各R3為氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代芳基，取代或未取代雜芳基，或取代或未取代烷氧基；或C1為 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR1或N，條件是不超過3個(gè)M為N；D1是 每個(gè)E獨(dú)立選自N，NR，C，CR1，S或O，條件是不超過4個(gè)E為雜原子；或D1為 其中每個(gè)M獨(dú)立選自CR5或N，條件是不超過3個(gè)M是N；每個(gè)R5獨(dú)立選自氫，鹵素，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代烷氧基，取代或未取代環(huán)烷基，取代或未取代雜環(huán)，取代或未取代環(huán)芳基，取代或未取代雜芳基，取代或未取代氨基，或取代或未取代烷基氨基；LA1，當(dāng)存在時(shí)，和每個(gè)LB1和LC1獨(dú)立為共價(jià)鍵或連接物，選自-C＝C-，-C＝C-，-(C(R′)2)z-，-O-，-O-(CR′2)z，-S-，-NR′-，-NH-(CR′2)z，-N＝N-，-C(O)-，-C(O)NR′-，-O-C(O)-，-O-C(O)-O-，-O-C(O)-NR′-，-NR′-C(O)-，-NR′-C(O)-O-，-NR′-C(O)-NR′-，-S-C(O)-，-S-C(O)-O-，-S-C(O)-NR′-，-S(O)-，-8(O)2-，-O-S(O)2-，-O-S(O)2-O-，-O-S(O)2-NR′-，-O-S(O)-，-O-S(O)-O-，-O-S(O)-NR′-，-O-NR′-C(O)-，-O-NR′-C(O)-O-，-O-NR′-C(O)-NR′-，-NR′-O-C(O)-，-NR′-O-C(O)-O-，-NR′-O-C(O)-NR′-，-O-NR′-C(S)-，-O-NR′-C(S)-O-，-O-NR′-C(S)-NR′-，-NR′-O-C(S)-，-NR′-O-C(S)-O-，-NR′-O-C(S)-NR′-，-O-C(S)-，-O-C(S)-O-，-O-C(S)-NR′-，-NR′-C(S)-，-NR′-C(S)-O-，-NR′-C(S)-NR′-，-S-S(O)2-，-S-S(O)2-O-，-S-S(O)2-NR′-，-NR′-O-S(O)-，-NR′-O-S(O)-O-，-NR′-O-S(O)-NR′-，-NR′-O-S(O)2-，-NR′-O-S(O)2-O-，-NR′-O-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)-，-O-NR′-S(O)-O-，-O-NR′-S(O)-NR′-，-O-NR′-S(O)2-O-，-O-NR′-S(O)2-NR′-，-O-NR′-S(O)2-，-O-P(O)(R′)2-，-S-P(O)(R′)2-和-NR′-P(O)(R′)2-，其中每個(gè)R′獨(dú)立為氫，取代或未取代烷基，取代或未取代鏈烯基，取代或未取代炔基，或取代或未取代環(huán)烷基，及z為1-10。
37.權(quán)利要求36所述的方法，其中LC1為-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，-NR-，-C(O)-，-(C(R′)2)z-，或-C(S)-。
38.權(quán)利要求37所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(II)的結(jié)構(gòu)
39.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(III)的結(jié)構(gòu)
40.權(quán)利要求39所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(IV)的結(jié)構(gòu)
41.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(V)的結(jié)構(gòu)
42.權(quán)利要求41所述的方法，其中所述化合物具有對(duì)應(yīng)于式(VI)的結(jié)構(gòu)
全文摘要
提供了新型化合物，組合物和試劑盒。也提供了調(diào)節(jié)Aβ水平的方法，和治療與異常Aβ水平相關(guān)的疾病的方法。
文檔編號(hào)C07D277/00GK1787822SQ200480012784
公開日2006年6月14日 申請(qǐng)日期2004年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月14日
發(fā)明者S·鄭, D·D·科默, L·毛, G·P·巴絡(luò), D·普萊勒特 申請(qǐng)人:托里派因斯療法公司