專利名稱：地龍的類多金屬硫蛋白及固有生物活性物復配制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明是采用一類新的生物載體——地龍，運用物理化學誘導方法產生類多金屬硫蛋白與地龍固有生物活性物——蚓激酶，抗菌肽等地龍?zhí)崛∥铮团潼S芪提取物、丹參提取物、硫辛酸和1，6二磷酸鋅果糖等功能成分，作為藥物、保健品和化妝品添加劑等用途。
背景技術：
地龍作為中藥材已有幾千年的藥用歷史，具有活血化瘀，平喘止咳等功效。近代研究地龍含有蚓激酶，抗菌肽，嘌呤和琥珀酸等生物成分，采集地龍?zhí)崛∥锘虻佚埛?，作為藥物成分。專利申請?zhí)?2124042.6把微量元素硒、鍺、錳和鋅添加到蚯蚓飼料中，制成富硒、鍺蛋白的方法，飼養(yǎng)周期長達40～60天。存在飼養(yǎng)用期長，微量元素的不均勻波動；蛋白質分子量偏大；飼料、土壤中的有害重金屬如鉛、鎘…汞等進入蚯蚓體中等等諸多局限性，從而限制了對它充分、有效的利用。

發(fā)明內容
本發(fā)明旨在利用新的生物載體——地龍采用有益微量元素特殊的誘導方法，使地龍產生類多金屬硫蛋白(Like-polybasicMetallothionein簡稱L·pMT)并不影響地龍原有的生物活性成分，只是擴展生物的活性物的分子量范圍，類多金屬硫蛋白的分子量在(16～17)KD，蚓激酶的分子量在(20～30)KD。類金屬硫蛋白具有多種生物功能的蛋白質，含有(21～26)％巰基，每個分子含有(5～6)金屬離子。類金屬硫蛋白的生物學功能是(1)捕捉自由基、(2)抗輻射、(3)重金屬解毒劑、(4)有益微量元素調節(jié)劑、(5)修復受損細胞。
類金屬硫蛋白與蚓激酶，抗菌肽、嘌呤和琥珀酸等不僅互不干擾，相反具有互補和協同效應像是系列化的分子量，在不同的范圍。功能基團各不相同。
本發(fā)明的特征在于兩個方面(1)通過物理、化學誘導方法產生類金屬硫蛋白，增加了地龍中活性蛋白質；(2)把多種有益微量元素(Cr、Mn、Zn、Se等)引進活性蛋白中，強化了兩者互補和協同作用，擴展了地龍活性金屬蛋白的全息效應。
類金屬硫蛋白還有一種重要的功能，即土壤中或飼料中的重金屬如鉛、鎘、汞等有毒元素進入地龍活體中，類金屬硫蛋白與之絡合，起到解毒作用和化險為夷的功效，這是其它方法所不具備的。
類金屬硫蛋白是生物體在應激狀態(tài)下的產物，因而它有鎮(zhèn)靜，穩(wěn)定情緒，提高穩(wěn)定心理閾值的作用。它的抗輻射作用，在治療前服用本發(fā)明的制劑，起到保護機體正常細胞，同時具有增敏作用，強化放療效果。
本發(fā)明選擇優(yōu)良健壯的地龍，經過人工誘導、凈化勻漿、離心粗提、離心沉降、柱析精提、超濾脫鹽、冷凍干燥得到地龍多組分活性蛋白的凍干粉類金屬硫蛋白、蚓激酶、抗菌肽等功能成分。所述工藝程序在低溫潔凈狀態(tài)下進行。
人工誘導將鮮活健壯地龍導入誘導床上進行，把氯化鋅或硫酸鋅、三氯化鉻、氯化錳，亞硒酸鈉等鹽類，分別配制相應濃度的水溶液，然后分別加入到紅薯漿中，然后再摻入陳化后植物腐料，制成誘導劑餌料。通過誘導床對地龍進行三方面刺激調控，溫度刺激(6℃至34℃，24h)、干濕刺激(濕度在30～80％)、電位刺激(4～5V/30cm)和饑餓刺激，按照誘導-休眠-誘導-休眠交替進行，至第九天進入下步操作程序。
凈化勻漿漿誘導后的地龍，清洗，用生理鹽水凈化內腔泥砂，加入等容量Tris-HCl(0.01mol/L，PH～8，含0.5ml/L生理鹽水)緩沖液，搗碎勻漿，然后再加2～4倍體積緩沖液攪勻后靜置；粗提離心將勻漿后地龍液，以9000r/min，30min，取上清液；離心沉降將上清液在53℃恒溫水浴上加熱1h，取上清液；柱析精提將上步上清液在已處理好的Sephadex G-50柱上層析，以緩沖液洗脫；超濾脫鹽洗脫液經超濾脫鹽，得超濾液；
冷凍干燥脫鹽后的地龍?zhí)崛∫海诘蜏乩鋬龈稍镌O備上，取得地龍?zhí)崛∥飪龈煞邸?br> 本發(fā)明誘導產生的類多金屬硫蛋白分別為類鉻金屬硫蛋白(L·CrMT)、類錳金屬硫蛋白(L·MnMT)、類鋅金屬硫蛋白(L·ZnMT)和類硒硫蛋白(L·SeMT)與蚓激酶、抗菌肽等地龍活性成分，復配黃芪提取物、丹參提取物、硫辛酸、1，6二磷酸鋅果糖制成腸溶膠囊配比是地龍活性提取物 (52.0-58.0)％黃芪提取物 (12.0-16.0)％丹參提取物 (10.0-15.0)％硫辛酸 (8.0-13.0)％1，6-二磷酸鋅果糖(8.0-16.0)％麥芽糊精 (3.0-4.0)％地龍保健膠囊具有溶栓、抗凝、降低血粘度、調節(jié)血壓、血糖和血脂的順利代謝功能。地龍活性提取物可以作為藥物、保健品和化妝品添加劑的生物活性成分。
具體實施例方式
根據本發(fā)明的方法，結合實施例說明如下人工誘導(1)首先配制微量元素的水溶液，各微量元素溶液濃度如下Cr4.8g/L，Mn5.6g/L，Zn11.6g/L，Se3.6g/L(2)地龍誘導餌料，用紅薯糊加入陳化后植物腐料中；(3)微量元素溶液添加量，按每公斤餌料添加50ml溶液，每一種微量元素為一組分，分別進行誘導；(4)誘導程序誘導-休眠-誘導-休眠。首先將鮮活健壯的地龍導入誘導床，投給一日量的餌料，緊接進行三方面刺激調控溫度刺激，從室溫降至6℃維持8h，逐步升溫至34℃，維持8h，降溫升溫各4h。干濕刺激，濕度在(30-80)％范圍內調節(jié)，在低溫時為高濕度，在高溫時低濕度。電壓刺激，在休眠期在誘導床上加上電位差4～5V/30cm刺激3S間隙30S總共電激三次。
以上刺激交替進行四個周期，到第九天進行下步驟操作；凈化勻漿誘導后的地龍，清洗再用生理鹽水凈化地龍內腔泥砂，加入等容量的Tris-HCl(0.01mol/L PH～80.5ml/L生理鹽水)緩沖液，搗碎勻漿后，加3.6倍容積緩沖液，攪勻后稍靜置；粗提離心將勻漿后地龍液，以9000r/min 30min，取上清液；離心沉降將上清液在53℃恒溫水浴上加熱1h，以10000r/min離心分離1h，取上清液；柱析精提將上步清液，注入已處理好的Sephadex G-50柱上層析，以緩沖液洗脫，收集洗脫液；超濾脫鹽洗脫液經超濾脫鹽，在低溫冷凍干燥設備上，得到地龍?zhí)崛∥飪龈煞邸?br> 將四種地龍活性凍干粉L·CrMT L·MnMT L·ZnMT L·SeMT按5∶50∶160∶1組分比例混合抣勻后，再按下列復配成地龍保健膠囊地龍復合凍干粉 54.0％黃芪提取物 15.0％丹參提取物 11.0％硫辛酸 8.0％1，6二磷酸鋅果糖 9.0％麥芽糊精 3.0％所有操作在較低室溫和潔凈環(huán)境中操作。
權利要求
1.地龍通過物理化學誘導產生的類多金屬硫蛋白與地龍固有的蚓激酶、抗菌肽等生物活性物，用生化方法提取后，復配黃芪提取物、丹參提取物、硫辛酸，1，6二磷酸鋅果糖等制劑，類多金硫蛋白是由類鉻金屬硫蛋白、類錳金屬硫蛋白、類鋅金屬硫蛋白和類硒硫蛋白的復合物，類多金屬硫蛋白的分子量約(16～17)KD，含有(21％～26％)的巰基，每個分子含(5～6)個金屬離子。
2.根據權利要求1所述的物理化學誘導方法和操作程序，采用控溫刺激，控濕刺激，電位刺激和饑餓刺激，周期交替進行，并按誘導—休眠—誘導—休眠操作程序誘導。誘導期為四個周期(約8～10天)。
3.根據權利要求1和2所述的誘導劑由無機鉻鹽、錳鹽、鋅鹽和亞硒酸鹽等配制一定濃度(Cr4.8g/L、Mn5.6g/L、Zn11.6g/L、Se3.6g/L)的溶液，以50ml/kg微量元素溶液量，均勻加入餌料制成誘導餌料。
4.根據權利要求權利要求2和3所述的誘導餌料由各個微量元素鹽類配成相應濃度的溶液，分別添加到由紅薯糊和陳化后的植物腐料，(1∶5.0～10.0)配成誘導餌料。
5.根據權利要求1所述的地龍復配成分是地龍活性復合提取物 (52.0～58.0)％黃芪提取物 (12.0～16.0)％丹參提取物 (10.0～15.0)％硫辛酸 (8.0～13.0)％1，6磷酸鋅果糖 (8.0～16.0)％麥芽糊精(3.0～4.0)％地龍活性復合提取物的復合成分和比例類鉻金屬硫蛋白 相對比例5.0類錳金屬硫蛋白 相對比例5.0類鋅金屬硫蛋白 相對比例160.0類硒硫蛋白 相對比例1.0
全文摘要
本發(fā)明利用地龍通過物理、化學誘導產生的類多金屬硫蛋白(L－polybasic Metallothionein簡稱L·pMT)與地龍固有的蚓激酶、抗菌肽等生物活性物，用生化方法提取后，復配黃芪提取物、丹參提取物、硫辛酸，1，6二磷酸鋅果糖等功效成分，配成制劑。類多金屬硫蛋白由L·CrMT、L·MnMT、L·ZnMT和L·SeMT復合構成地龍活性提取物的組分，類多金屬硫蛋白與蚓激酶相互強化相互協同和互補效應，具有降低血粘度、溶栓抗凝、調整血壓、血糖、血脂代謝等保健功能。作為藥物，保健品和化妝品添加劑等用途。
文檔編號C07K14/435GK1759856SQ200410067090
公開日2006年4月19日 申請日期2004年10月12日 優(yōu)先權日2004年10月12日
發(fā)明者陶芒, 莊力楓 申請人:莊力楓