專利名稱：Dtpa衍生物的區(qū)域選擇性合成的制作方法
1、發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及制備DTPA衍生物的方法。具體地說，本發(fā)明涉及區(qū)域選擇性合成DTPA衍生物的高產(chǎn)率方法，其中所述的DTPA衍生物在放射免疫治療和顯象中用作雙官能團(tuán)螯合劑。
2、背景技術(shù)在顯象、腫瘤診斷和免疫治療中，人們對新放射標(biāo)記劑的興趣日益增加，其可減少常規(guī)試劑引起的各種缺陷。
常規(guī)試劑通?；诜派湫院u素化合物，例如基于碘同位素的放射性化合物。然而，這些試劑存在許多局限性。例如，碳-碘鍵在體內(nèi)降解速率非常高，因而極大地限制了碘同位素的應(yīng)用；另一個限制涉及其發(fā)射特性不夠理想，并且碘放射性核素的物理半衰期也不夠理想。因此，許多工作者努力去開發(fā)新的腫瘤診斷劑，以克服基于鹵素的放射性標(biāo)記試劑的缺陷。
提供更有效的顯象和腫瘤診斷劑的一個途徑是以螯合金屬放射核形式的有機(jī)金屬化合物。通過活性羰基的乙酰化、芳基重氮偶聯(lián)、溴乙?；榛诘鞍踪|(zhì)和螯合物之間形成的共價鍵或者通過硫脲鍵，以這種方式通常能夠把顯象和腫瘤診斷劑偶合到蛋白質(zhì)上。
然而，已知的有機(jī)金屬配合物并沒有最佳的方式標(biāo)記和治療效果。例如，除了需要選擇特定的放射同位素外，成功的腫瘤診斷和放射免疫治療還依賴于對有效螯合物的選擇，所述的螯合物必須在保持抗體完整性同時能夠容易地連接到特定的抗體以及能夠容許放射性核素的插入。
在設(shè)計有效的用于顯象和腫瘤診斷和/或免疫治療的放射金屬螯合抗體時，必須考慮到若干因素。例如，有效的放射性核素必須根據(jù)其理化生物特性來進(jìn)行選擇。理想的核素必須是常規(guī)能夠得到的，易于結(jié)合到MAb并需要具有合適的物理半衰期，從而能夠選擇性診斷和/或消除靶腫瘤組織，而不影響正常組織。
選擇把放射性核酸運(yùn)載到腫瘤靶的MAb必須基于下列因素靶抗原的分布、抗體與其靶的特異性和親和力。
設(shè)計有效的放射性金屬螯合的抗體需要考慮的另一個重要方面涉及用于把放射性核素結(jié)合到抗體的螯合劑(CA)的選擇。例如，有效的放射性金屬螯合的抗體必須具有體內(nèi)穩(wěn)定性。體內(nèi)穩(wěn)定性所取決的因素為螯合連接和放射性標(biāo)記過程不會改變抗體特異性和生物分布。
另外，為了優(yōu)化螯合劑和所選放射性核素和MAb之間的適應(yīng)性，對螯合劑的選擇和合成也是重要的。具體地說，選擇和合成螯合劑應(yīng)該避免放射性核素在體內(nèi)不適當(dāng)?shù)蒯尫?。這一方面也是同樣重要的，因為常規(guī)螯合劑出現(xiàn)的最常見問題就是它們不能連接到抗體或不能與抗體牢固地結(jié)合。結(jié)果，在這些試劑到達(dá)腫瘤細(xì)胞表面之前，大量放射性核素在體內(nèi)從MAb-CA配合物分離開。游離的毒性放射性核素在正常組織中積累會損害正常組織而且不能有益于治療和/或診斷腫瘤靶目標(biāo)。另一個重要方面涉及需要性，即所選擇的螯合劑能夠使MAb-CA絡(luò)合物維持由所選MAb的特異性所提供的優(yōu)點。
因此，對于選定的MAb，選擇合適的螯合劑時必須考慮若干標(biāo)準(zhǔn)。例如(a)CA的加入不應(yīng)改變其MAb對抗原靶的特異性和親和力；(b)其加入到MAb不應(yīng)以其它方式損害該抗體(損害抗體將改變其代謝速率和組織分布模式)；(c)其應(yīng)該牢固地結(jié)合放射性金屬從而在體內(nèi)放射性同位素不至于過早地從MAb-CA配合物中釋放出來；(d)與MAb的連結(jié)不應(yīng)改變螯合劑容留放射性核素的能力；(e)與MAb的連結(jié)方式應(yīng)該盡可能具有特異性從而有助于對腫瘤靶目標(biāo)的特異性檢測和治療方案設(shè)計以及有助于對腫瘤治療和檢測的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；和(f)螯合劑必須能夠有助于在MAb-CA-放射性核素配合物的分解代謝后清除放射性核素。
一組合適的金屬螯合物由二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)和乙二胺四乙酸(EDTA)及其衍生物提供。業(yè)已開發(fā)出DTPA和EDTA的化學(xué)改性衍生物作為能有效螯合放射性核素的金屬配體，其容易與免疫球蛋白結(jié)合。然而，由于這些試劑對結(jié)合的放射性核素的親和力降低，因此這些試劑的效果降低到最低，結(jié)果放射化學(xué)化合物在正常組織中蓄積。
可以通過許多常規(guī)方法把EDTA和DPTA金屬配合物與蛋白質(zhì)偶聯(lián)。然而，這些方法尚未達(dá)到有效顯象和腫瘤診斷所需要的高效速率。例如，常規(guī)方法存在許多缺陷，例如在放射標(biāo)記前需要進(jìn)行廣泛的純化，螯合所述金屬的能力不足，這是由于在與蛋白質(zhì)形成共價鍵時需要應(yīng)用金屬結(jié)合位點造成的。因此，已經(jīng)研究了蛋白連接的新模式，并業(yè)已提出了能夠保留所有金屬結(jié)合位點的新模式。
例如，Brechbiel等在1986年第25卷《無機(jī)化學(xué)(Inorg.Chem.)》第2722-2781頁“DTPA和EDTA的(1-(對-異硫氰基芐基)衍生物合成?？贵w標(biāo)記和腫瘤顯象研究”一文中詳細(xì)記載了化學(xué)改性的配體，這些配體能夠快速高效地與抗體反應(yīng)，并且其存留金屬的時間比顯象或治療所應(yīng)用的放射性核素的半衰期要長。上文公開的內(nèi)容在此引入作為參考。
Brechbiel等提出了具有能有效偶聯(lián)蛋白質(zhì)的異硫氰酸根基團(tuán)的化學(xué)改性螯合物。此螯合物的合成可總結(jié)為“兩步法”，其中第一步包括生成一種乙二胺或二亞乙基三胺，然后對該胺進(jìn)行烷基化形成相應(yīng)的聚乙酸；第二步包括把芐基取代的官能團(tuán)轉(zhuǎn)變得到用于蛋白偶聯(lián)的活性部分。
然而，對于合成MX-DTPA和EDTA類似物來說，上述“兩步法”被局限為低于2％的低總產(chǎn)率。該方法需要對中間體進(jìn)行繁雜的純化過程，包括用于陽離子和陰離子交換色譜。另外，所述合成產(chǎn)生了MX-DTPA的兩個位置異構(gòu)體，并且再現(xiàn)性差。
因此，需要提供一種高產(chǎn)率生產(chǎn)DTPA衍生物的新合成方法。并要求所述新合成方法不需要通過離子交換色譜來分離中間體，從而提供一種能夠容易按比例擴(kuò)大的方法。另外，還需要這樣一種制備單一位置異構(gòu)體螯合物的方法，從而可以對所需要的用作有效放射標(biāo)記試劑的螯合物進(jìn)行區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣伞?br> 發(fā)明概述本發(fā)明涉及制備用作放射免疫治療和顯象中的螯合劑的DTPA衍生物的方法。本發(fā)明的方法能夠高產(chǎn)率地合成DTPA衍生物。具體地說，本發(fā)明包括區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣蒁TPA衍生物的方法，所述的DTPA衍生物適合螯合放射性金屬以及適合偶聯(lián)到免疫球蛋白。該方法包括把單保護(hù)的二胺和一種化合物偶聯(lián)，其中所述的化合物含有胺和能有效地把DTPA衍生物偶聯(lián)到免疫球蛋白的部分或者含有胺和能夠被轉(zhuǎn)變成有效把DTPA衍生物偶合到免疫球蛋白的部分。
一方面，本發(fā)明提供制備式(I)DTPA衍生物的方法， 該方法包括(a)把N-叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸(A)和單保護(hù)的二胺(B)偶合生成化合物(C)；(b)除去(C)中的胺保護(hù)基團(tuán)得到TFA-鹽(D)；(c)把(D)還原形成(E)；(d)對(E)進(jìn)行五烷基化得到(F)；(e)除去(F)中的胺保護(hù)基團(tuán)得到三氟乙酸鹽(G)；(f)還原(G)中的硝基得到三氟乙酸鹽(H)；(g)把(H)中的氨基改變形成DTPA衍生物。
本發(fā)明的方法可以合成多種DTPA衍生物。在不限制本發(fā)明范圍條件下，通過本發(fā)明方法能有利地制備DTPA衍生物的例子包括MX-DTPA、1B3M-DTPA和CHx-DTPA。
本發(fā)明一方面提供制備DTPA衍生物的方法，其中DTPA衍生物的特性通過選擇單保護(hù)的二胺(B)來決定。選擇化合物(B)中的R1和R2獲得化學(xué)改性的DTPA衍生物。
本發(fā)明另一方面提供制備MX-DTPA的方法，包括(a)把N-叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸(A)和單-N-叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)偶聯(lián)形成N-(2-N-叔丁氧羰基-氨基丙基)-N-叔丁氧羰基-對硝基苯丙胺酰胺(C′)；(b)除去(C′)中的叔丁氧羰基得到N-(2-氨基丙基)-對硝基苯丙胺酰胺TFA-鹽(D′)；(c)還原(D′)得到2-甲基-6-(對硝基芐基)二亞乙基三胺三鹽酸鹽(E′)；(d)對(E′)進(jìn)行五烷基化得到N，N，N′，N″，N″-五[(叔丁氧羰基)甲基]-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺(F′)；(e)除去(F′)中的叔丁氧羰基得到N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(G′)；(f)還原(G′)中的硝基得到N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-氨基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(H′)；和(g)把(H′)中的氨基轉(zhuǎn)變形成2-(對異硫氰基芐基)-6-甲基二亞乙基三胺-N，N，N′，N″，N″-五乙酸(MX-DTPA)。一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中步驟(a)包括應(yīng)用苯并三唑-1-基氧三(二甲胺基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)作為偶合試劑。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中步驟(a)包括應(yīng)用雙(2-氧-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)作為偶合試劑。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)通過包括下列步驟的方法得到(i)用氫氧化銨處理乳腈得到α-氨基腈(2)；(ii)用鹽酸處理(2)得到胺鹽酸鹽(3)；(iii)用二叔丁基二碳酸酯(di-tert-butyl dicarbonate)保護(hù)該胺得到叔丁氧羰基保護(hù)的衍生物(4)；(iv)在兩大氣壓的氫氣下，應(yīng)用阮內(nèi)鎳在飽和乙醇溶液中還原該腈得到單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)。
在另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)由包括下列步驟的方法得到(i)在相轉(zhuǎn)移條件下，對席夫堿(5)進(jìn)行烷基化得到單烷基化產(chǎn)品(6)；(ii)用1N鹽酸脫保護(hù)(6)，然后用二叔丁基二碳酸酯保護(hù)胺得到叔丁氧羰基保護(hù)的胺(4)；和(iii)用阮內(nèi)鎳還原(4)得到單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中，除去(C′)中的叔丁氧羰基形成(D′)的反應(yīng)是在二氯甲烷中應(yīng)用三氟乙酸進(jìn)行的。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中還原(D′)的步驟包括用硼烷-四氫呋喃配合物處理(D′)，然后接著用鹽酸處理得到三胺鹽酸鹽(E′)。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中對中間體(E′)進(jìn)行五烷基化的反應(yīng)通過應(yīng)用乙腈和碳酸鉀進(jìn)行的。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中對中間體(E′)的五烷基化是通過應(yīng)用在二甲基甲酰胺中的溴叔丁基乙酸酯和碳酸鈉進(jìn)行的。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中用硅膠色譜純化(F′)。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中對(F′)中的羧酸脫保護(hù)形成五乙酸衍生物(G′)的反應(yīng)是通過應(yīng)用三氟乙酸進(jìn)行的。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中把(G′)中的硝基還原形成(H′)反應(yīng)進(jìn)行如下在水中，在兩大氣壓氫氣下，應(yīng)用鈀置于碳表面進(jìn)行反應(yīng)。
另一方面，本發(fā)明提供合成MX-DTPA的方法，其中把(H′)轉(zhuǎn)變成DX-DTPA的步驟包括通過硫光氣把胺(H′)轉(zhuǎn)變成瓦狀異硫氰酸酯基團(tuán)。該轉(zhuǎn)變可以通過若干方式進(jìn)行。例如，通過(i)把硫光氣加入到含有五乙酸衍生物(H)的氯仿和水的雙相混合物中；(ii)快速攪拌該混合物2小時；(iii)減壓除去溶劑得到殘余物；(iv)用反相硅膠純化殘余物；和(v)用含有1％乙酸的25％乙腈水溶液洗脫。該轉(zhuǎn)變還可以應(yīng)用下列物質(zhì)進(jìn)行二氯甲烷和三乙胺，或乙腈和碳酸氫鈉或碳酸鈉。
另一方面，本發(fā)明提供改進(jìn)的MX-DTPA組合物，其中所述改進(jìn)包括其基本上只含有單一的螯合物區(qū)域異構(gòu)體。在本發(fā)明中，“基本上只含有”單個區(qū)域異構(gòu)體意指相對于任何其它異構(gòu)體，單一異構(gòu)體的百分比至少為90％，更優(yōu)選至少95％，最優(yōu)選至少99％。
另一方面，本發(fā)明涉及這樣改進(jìn)的MX-DTPA組合物在制備蛋白質(zhì)或抗體螯合劑和其放射標(biāo)記物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明涉及這樣改進(jìn)的MX-DTPA組合物在制備放射標(biāo)記螯合物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明提供制備CHx-DTPA的方法，包括(a)把N-叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸(A)與單保護(hù)的二胺(B″)偶聯(lián)形成化合物(C″)；(b)除去(C″)中的氨基保護(hù)基團(tuán)形成TFA-鹽(D″)；(c)還原(D″)得到(E″)；(d)對(E″)進(jìn)行五烷基化得到(F″)；(e)除去(F″)中的氨保護(hù)基團(tuán)得到三氟乙酸鹽(G″)；(f)還原(G″)中的硝基得到三氟乙酸鹽(H″)；和(g)轉(zhuǎn)變(H″)中的氨基得到CHx-DTPA。其單保護(hù)的二胺(B″)可以用作順式或反式異構(gòu)體。
附圖簡述

圖1是概述了式(I)DTPA衍生物的區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣傻钠卟椒椒ǖ姆磻?yīng)方案。
圖2是概述了MX-DTPA的區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣傻钠卟椒椒ǖ姆磻?yīng)方案。
圖3是合成(B′)的四步反應(yīng)方案。
圖4是合成(B′)的另一種反應(yīng)方案。
圖5是圖2反應(yīng)方案中另一種步驟1的反應(yīng)方案。
圖6是代表(B′)和4-硝基-L-苯丙氨酸甲酯在(a)甲醇中和(b)甲苯中的未成功縮合的反應(yīng)方案。
圖7是烷基化(E′)形成(F′)的兩種供選擇的反應(yīng)方案(a)和(b)。
圖8是一種把(H′)轉(zhuǎn)變成MX-DTPA的另一種反應(yīng)方案。
圖9是概述CHx-DTPA的區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣傻钠卟椒椒ǖ姆磻?yīng)方案。
圖10是描述通過本發(fā)明方法選擇性制備CHx-DTPA的區(qū)域異構(gòu)體的方案。
圖11是合成(B″)的兩步反應(yīng)方案。
優(yōu)選實施方案的詳細(xì)描述除非另有說明，此處所用的所有科技術(shù)語具有本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常理解的相同意義。雖然可以應(yīng)用類似于或等同于此處描述的任意方法和材料來實施或測試本發(fā)明，但此處描述優(yōu)選的方法和材料。
本發(fā)明提供高產(chǎn)率區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣苫瘜W(xué)改性DTPA衍生物的方法，該方法不需要通過離子交換色譜分離中間體。而且，由于該方法得到螯合物的單個區(qū)域異構(gòu)體，其提供用作放射標(biāo)記試劑所需螯合物的區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣伞?br> 更具體地說，圖1是總結(jié)區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣墒?I)DTPA衍生物的七步方法的反應(yīng)方案。在此方案中，本發(fā)明提供式(I)DTPA衍生物的制備方法，其包括下列步驟(a)把N-叔丁氧羰基對硝基-L-苯丙氨酸(A)和單保護(hù)的二胺(B)偶合生成化合物(C)；(b)除去(C)中的胺保護(hù)基團(tuán)得到TFA-鹽(D)；(c)把(D)還原形成(E)；(d)對(E)進(jìn)行五烷基化得到(F)；(e)除去(F)中的胺保護(hù)基團(tuán)得到三氟乙酸鹽(G)；(f)還原(G)中的硝基得到三氟乙酸鹽(H)；和(g)把(H)中的氨基轉(zhuǎn)變形成式(I)的DTPA衍生物。
本發(fā)明方法可以合成多種DTPA衍生物。在不限制本發(fā)明的范圍條件下，可以通過本發(fā)明方法有利地制備DTPA衍生物的例子包括MX-DTPA、1B3M-DTPA和CHx-DTPA。
本發(fā)明一方面提供制備DTPA衍生物的方法，其中DTPA衍生物的特性通過選擇單保護(hù)二胺(B)確定。在化合物(B)中選擇R1和R2得到所需要的DTPA化學(xué)改性衍生物。
圖2含有概述了根據(jù)本發(fā)明一個方面應(yīng)用七個步驟進(jìn)行MX-DTPA區(qū)域選擇性合成的反應(yīng)方案。在此方案中，MX-DTPA的區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣砂ㄏ铝胁襟E(a)把N-叔丁氧羰基對硝基-L-苯丙氨酸(A)和單-N-叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)偶聯(lián)形成N-(2-N-叔丁氧羰基-氨基丙基)-N-叔丁氧羰基-對硝基苯丙胺酰胺(C′)；(b)除去(C′)中的叔丁氧羰基得到N-(2-氨基丙基)-對硝基苯丙胺酰胺TFA-鹽(D′)；(c)還原(D′)得到2-甲基-6-(對硝基芐基)二亞乙基三胺三鹽酸鹽(E′)；(d)對(E′)進(jìn)行五烷基化得到N，N，N′，N″，N″-五[(叔丁氧羰基)甲基]-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺(F′)；(e)除去(F′)中的叔丁氧羰基得到N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(G′)；(f)還原(G′)中的硝基得到N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-氨基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(H′)；和(g)把(H′)中的氨基轉(zhuǎn)變形成2-(對異硫氰基芐基)-6-甲基二亞乙基三胺-N，N，N′，N″，N″-五乙酸(MX-DTPA)。
從單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)和叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸(A)開始，該區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣蒑X-DTPA的方法的總產(chǎn)率約20％，并且該方法適合按比例擴(kuò)大。因此，與已知方法的總產(chǎn)率(小于2％)相比，本發(fā)明MX-DTPA的合成方法的總產(chǎn)率約高一個數(shù)量級。并且，以前的合成方法必須通過繁雜的陰離子和陽離子交換色譜技術(shù)對中間體進(jìn)行純化；相反，本發(fā)明方法消除了該昂貴的純化步驟，并高純度地提供目標(biāo)化合物。例如，在本發(fā)明方法中，僅僅需要一個正相柱色譜和一個反相柱就可純化最終化合物。
圖3是合成單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)的四步反應(yīng)方案。合成(B′)方案如下用氫氧化銨處理市售乳腈得到α-氨基腈(2)，用鹽酸處理得到胺鹽酸鹽(3)。用二叔丁基二碳酸酯保護(hù)該胺得到叔丁氧羰基保護(hù)的衍生物(4)。在兩大氣壓氫氣下，應(yīng)用阮內(nèi)鎳在飽和乙醇溶液中還原該腈得到所需的單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)。從經(jīng)濟(jì)角度考慮，該反應(yīng)方案非常具有吸引力，因為其可再生，并且易于按比例擴(kuò)大。
還考慮了制備(B′)的許多其它條件。例如，圖4顯示了合成(B′)的反應(yīng)方案，其中(B)通過下列方法制備在相轉(zhuǎn)移環(huán)境中，對席夫堿(5)進(jìn)行烷基化，中等產(chǎn)率地得到單烷基化產(chǎn)物(6)。用1N鹽酸對(6)脫保護(hù)，然后用二叔丁基二碳酸酯保護(hù)得到叔丁氧羰基保護(hù)的氨(4)，再用阮內(nèi)鎳還原得到所需要的叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)。
在圖1顯示的方案中，所述合成反應(yīng)應(yīng)用了偶合于單-N-叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)的N-叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸(A)。進(jìn)行該反應(yīng)優(yōu)選的偶合試劑為苯并三唑-1-基氧三(二甲胺基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)。應(yīng)用這些條件合成化合物(C′)時，該步驟單獨的產(chǎn)率為72-83％。通過酸/堿洗滌再用己烷磨碎來對(C′)進(jìn)行純化。
圖5是圖2反應(yīng)方案另一種步驟1的反應(yīng)方案。正如圖5所示，應(yīng)用雙(2-氧-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)也導(dǎo)致得到所需產(chǎn)品(C′)；然而，在圖2中，步驟1反應(yīng)的產(chǎn)率可以達(dá)到83％，而在圖5中步驟1的反應(yīng)產(chǎn)率僅僅為23％。
合成(C′)的其它反應(yīng)途徑是不成功的。例如，如圖6反應(yīng)方案所示，為了得到(C′)的相關(guān)衍生物，把(B′)和4-硝基-L-苯丙氨酸甲酯(1)通過(a)在甲醇中攪拌或者(b)在甲苯中回流加熱來進(jìn)行縮合，結(jié)果沒有成功。
已經(jīng)成功合成化合物(C′)后，可以在二氯甲烷中應(yīng)用三氟乙酸除去叔丁氧羰基保護(hù)基團(tuán)得到二胺(D′)。在此方法中，定量得到(產(chǎn)率100％)固體(D′)。
正如圖2所述，用硼烷-四氫呋喃配合物還原酰胺(D′)，然后用鹽酸處理得到三胺鹽酸鹽(E′)。另外，除圖2中所描述的烷基化步驟外，也可以應(yīng)用其它反應(yīng)方法。例如，圖7顯示把(E′)烷基化生成(F′)的兩種反應(yīng)方案(a)和(b)。應(yīng)用溴叔丁基乙酸酯，在二甲基甲酰胺中以碳酸鈉作為堿，或者以乙腈作溶劑和碳酸鉀，均可對中間體(E′)進(jìn)行五烷基化。當(dāng)應(yīng)用后一反應(yīng)條件時，更容易擴(kuò)大規(guī)模，并且不需要應(yīng)用按常規(guī)方法難以除去的二甲基甲酰胺。但反應(yīng)進(jìn)行72-96小時時，此步反應(yīng)單獨產(chǎn)率為60％。優(yōu)選應(yīng)用硅膠柱色譜純化(F′)。
如圖2所示，可以通過脫保護(hù)羧酸(優(yōu)選通過應(yīng)用三氟乙酸進(jìn)行)制備五乙酸衍生物(G′)。在兩大氣壓氫氣下，應(yīng)用置于碳表面的鈀在水中進(jìn)行硝基的還原。需要注意的是本發(fā)明人避免了在現(xiàn)有已知的合成方法中存在的缺陷。例如，本發(fā)明避免應(yīng)用難以除去的氫氧化銨，因為產(chǎn)生硫脲副產(chǎn)品，需要產(chǎn)生異硫氰酸酯的步驟，使合成方法變復(fù)雜。
在圖2反應(yīng)方案中，最后一步涉及通過硫光氣把胺轉(zhuǎn)變成瓦狀異硫氰酸酯(isothiocyanate)基團(tuán)。關(guān)于這一步，本發(fā)明者研究了許多操作條件。
把(H′)轉(zhuǎn)變成MX-DTPA的優(yōu)選條件描述于圖2方案最后一步。這些條件包括把硫光氣加入到含有五乙酸衍生物(H′)的氯仿和水雙相混合物中，快速攪拌2小時。減壓除去溶劑，殘余物用反相硅膠純化，用含有1％乙酸的25％乙腈水溶液洗脫，高產(chǎn)率地得到目標(biāo)化合物MX-DTPA。
還研究了其它操作條件。例如，圖8顯示這樣的反應(yīng)方案應(yīng)用二氯甲烷作溶劑，以三乙胺為堿，把(H′)轉(zhuǎn)變成MX-DTPA。然而，除MX-DTPA外，該反應(yīng)還產(chǎn)生難以除去的副產(chǎn)品鹽酸三乙胺。
把(H′)轉(zhuǎn)變成MX-DTPA還可以這樣進(jìn)行應(yīng)用乙腈為溶劑，以碳酸氫鈉和碳酸鈉為堿進(jìn)行反應(yīng)。此反應(yīng)也產(chǎn)生許多雜質(zhì)。
本發(fā)明合成的MX-DTPA可以有效地用于需要螯合劑的許多方面。例如，經(jīng)本發(fā)明方法得到的MX-DTPA提供有效的放射標(biāo)記螯合劑、抗體螯合劑和蛋白質(zhì)螯合劑。放射標(biāo)記的MX-DTPA是許多應(yīng)用方面的有效工具，例如用于閃爍照相術(shù)、放療和放射免疫分析。
在這一方面，本發(fā)明MX-DTPA合成方法具有許多優(yōu)點。例如，該方法不需要陽離子和陰離子交換色譜進(jìn)行繁雜的中間體純化步驟。由于不需要進(jìn)行陽離子和陰離子交換色譜，本發(fā)明方法容易按比例擴(kuò)大規(guī)模。
本發(fā)明方法的另一優(yōu)點是高產(chǎn)率。如上所述，有效用于放射免疫分析的螯合劑必須容易獲得，在數(shù)量上足以滿足可能的高需要。本發(fā)明方法可以提供高達(dá)20％的MX-DTPA，比現(xiàn)有合成MX-DTPA的方法高一個數(shù)量級。
通過本發(fā)明方法合成的MX-DTPA螯合物具有高純度。高純度的螯合物具有許多優(yōu)點，例如容易調(diào)節(jié)和制備螯合的MAbs，其中可以把不需要的副產(chǎn)品降低至最少量。在合成的螯合物中最大限度地減少雜質(zhì)能夠較容易地調(diào)理生物學(xué)應(yīng)用中的螯合物。
另一個優(yōu)點是本發(fā)明方法具有區(qū)域?qū)Ｒ恍?。本發(fā)明提供MX-DTPA區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣傻男峦緩健?br> 不愿意被任何理論所束縛，本發(fā)明可以通過應(yīng)用單一異構(gòu)體形式的化合物(A)達(dá)到MX-DTPA的區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣?。在合成方法中一旦選擇化合物(A)的一個特定異構(gòu)體作為起始原料，則在整個合成方法中能夠維持(A)中手性碳原子的構(gòu)型。
應(yīng)用單個區(qū)域異構(gòu)體形式的MX-DTPA具有若干優(yōu)點。例如，應(yīng)用MX-DTPA單個異構(gòu)體具有更好的閃爍照相結(jié)果，并且避免由于應(yīng)用外消旋混合物導(dǎo)致的光學(xué)信號損失。而且，應(yīng)用單個異構(gòu)體能夠設(shè)計高特異性的MAb-CA配合物。在這一方面，應(yīng)用單個異構(gòu)體能夠使所有螯合分子以基本上相同的方式與Mab相連。
專一性合成MX-DTPA單個區(qū)域異構(gòu)體的另一優(yōu)點在于能夠控制螯合的放射性核素相對于MAb、最終相對于靶腫瘤的相對位置。通過應(yīng)用MX-DTPA的單個異構(gòu)體，有可能控制放射性核素的位置。通過應(yīng)用單個異構(gòu)體提供單個連結(jié)方式的優(yōu)點包括能夠潛在地改進(jìn)由MAb-CA配合物得到的顯象和免疫治療結(jié)果。
按照本發(fā)明合成的MX-DTPA適合螯合多種放射性核素。這些螯合物還適合與多種Mabs和蛋白質(zhì)絡(luò)合。因此，可以預(yù)料當(dāng)與任意適合結(jié)合MX-DTPA的放射性核素或MAb結(jié)合時，按照本發(fā)明區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣芍苽涞腗X-DTPA能夠提供等效的放射標(biāo)記和治療試劑。
在一個實施方案中，MX-DTPA與2B8抗體結(jié)合形成2B8-MX-DTPA。當(dāng)對淋巴瘤患者給藥時，2B8是顯示影響B(tài)細(xì)胞缺失的抗CD-20抗體。在美國專利US 5,736,137中詳細(xì)記載了制備2B8-MX-DTPA的具體方案，該文內(nèi)容在此引入作為參考。
然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然明白按照本發(fā)明合成的DTPA螯合物可以用于放射標(biāo)記其它抗CD-20抗體或者用于放射標(biāo)記已經(jīng)結(jié)合到DTPA或其它多價螯合劑的任何其它抗體。另外，按照本發(fā)明制備的MX-DTPA螯合物可以與其它蛋白質(zhì)或肽結(jié)合，例如受體、激素、生長因子，如生長激素釋放抑制因子肽。
上面的詳細(xì)記載集中針對于MX-DTPA的合成，本發(fā)明方法對于合成其它化學(xué)改性DTPA衍生物也是同樣有用的。在這一方面，本發(fā)明方法可以有利地用于區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣稍S多適合螯合放射性金屬和偶合到免疫球蛋白的DTPA衍生物，該方法包括把單保護(hù)的二胺和一種化合物偶聯(lián)，其中所述的化合物含有胺和能有效地把DTPA衍生物偶聯(lián)到免疫球蛋白的部分，或者含有胺和能夠被轉(zhuǎn)變成有效把DTPA衍生物偶合到免疫球蛋白的部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解本發(fā)明方法是非常有益的，因為許多單保護(hù)的二胺可以偶合到許多種含有胺和能有效地把DTPA衍生物偶聯(lián)到免疫球蛋白的部分的、或者含有胺和能夠被轉(zhuǎn)變成有效把DTPA衍生物偶合到免疫球蛋白的部分的化合物。這樣的DTPA衍生物的合成也包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
例如，在本發(fā)明一個方案中，1B3M-DTPA是按照類似于圖2反應(yīng)方案的反應(yīng)方案制備得到的。1B3M-DTPA是應(yīng)用異構(gòu)體(B′)制備的，其中R1(即H)和R2(即CH3)的位置可以交換。
可以按照本發(fā)明方法制備的DTPA衍生物的另一個例子是CHx-DTPA。圖9是概述CHx-DTPA的合成方法的一個反應(yīng)方案。在圖9方案的步驟(a)中，單叔丁氧羰基保護(hù)的二氨基環(huán)己烷(B″)與化合物(A)縮合得到化合物(C″)。得到化合物(C″)后，再按照類似于圖2的步驟合成CHx-DTPA。
可以應(yīng)用順式-或反式-二胺(B″)制備相應(yīng)的CHx-DTPA異構(gòu)體。圖10描述了CHx-DTPA的區(qū)域異構(gòu)體，其可通過把選定的化合物A和(B″)的異構(gòu)體組合制備。
單保護(hù)的二胺(B″)可以按照多種途徑制備，制備(B″)的優(yōu)選途徑描述于圖11的兩步反應(yīng)方案中。
實施例應(yīng)用市售試劑和HPLC級或無水溶劑無需再進(jìn)行純化。分別應(yīng)用ICN硅膠(63-200，60A)和含有熒光指示劑的默克硅膠(60A)進(jìn)行正相柱色譜和TLC。分別應(yīng)用EM Science LiChroprep RP-18(40-63um)和含有熒光指示劑的Techware RPS-F反相烴浸滲硅膠進(jìn)行反相柱色譜和TLC。
1-N-叔丁氧基羰基-2-甲基-乙二胺(B′)的合成
a.2-氨基丙腈鹽酸鹽(3)的合成把含有23.1g(324.99mmol)乳腈(技術(shù)等級90％純度)、7.1g(132.74mmol)氯化銨和86ml(2208.3mmol)氫氧化銨室溫下攪拌2小時?；旌衔镉枚燃淄?2×500ml)提取，有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥。過濾混合物，減壓除去溶劑得到24g黃色油(2)。用250ml無水乙醚稀釋該黃色油，用冰浴冷卻。然后加入350ml(350mmol)1N鹽酸的乙醚液。攪拌10分鐘后，過濾得到的固體，用乙醚洗滌，真空干燥得到28.79產(chǎn)品，基于起始原料乳腈的純度計算，產(chǎn)率92.83％。
b.N-叔丁氧羰基-2-氨基丙腈(4)把104ml(746.16mmol)三乙胺加入到含有28.5g(268.79mmol)2-氨基丙腈鹽酸鹽的300ml無水二氯甲烷的混合物中。在冰浴中冷卻混合物，然后以30分鐘時間加入64.5g(295.53mmol)二叔丁基二碳酸酯的100ml無水二氯甲烷溶液。把反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪?8小時。通過玻璃燒結(jié)漏斗過濾反應(yīng)混合物，然后減壓縮小濾液體積。加入1L乙醚，攪拌混合物15分鐘。再次用玻璃燒結(jié)漏斗過濾除去剩余的三乙胺鹽酸鹽。減壓濃縮濾液，殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜，洗脫劑為30％的乙酸乙酯/己烷，得到18.50g產(chǎn)品，產(chǎn)率為40.44％。
c.1-N-叔丁氧羰基-2-甲基-乙二胺(B′)把18.4g(108.10mmol)N-叔丁氧羰基-2-氨基丙腈和200ml用氨飽和的無水乙醇加入到500ml Parr燒瓶中。然后加入阮內(nèi)鎳(10g 50％水漿液)，把燒瓶加壓至50psi氫氣，然后放氣。再次把燒瓶加壓至50psi氫氣，然后放氣。然后，把燒瓶加壓至50psi氫氣并振搖，直至不在攝取氫氣，通常過夜才能達(dá)到此效果。讓燒瓶放氣，把混合物通過硅藻土(celite)521墊。減壓濃縮濾液，定量(100％產(chǎn)率)得到19.2g無色油狀產(chǎn)品。
或者，2-氨基丙腈鹽酸鹽(3)可以從N-(二苯基亞甲基)氨基乙腈按照下列方法制備a.N-(二苯基亞甲基)-2-甲基-氨基乙腈(6)
把4.5g(19.76mmol)氯化芐基三乙基銨(BTEAC)加入到含有50g(226.98mmol)N-(二苯基亞甲基)氨基乙腈的250ml甲苯中，然后加入28.3g(707.50mmol)氫氧化鈉的50ml水溶液中。在冰浴中冷卻該反應(yīng)物，以1小時時間滴入22ml(232.51mmol)硫酸甲酯。把反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝?4小時。用1升二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物，用水洗滌(2×1L)。用無水硫酸鎂干燥有機(jī)相。過濾，除去溶劑，殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜，用20％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到產(chǎn)品46.2g，產(chǎn)率62.05％。
b.2-氨基丙腈鹽酸鹽(3)把含有3.0g(12.80mmol)N-二苯基亞甲基-2-甲基-氨基乙腈的30ml己烷溶液和25ml(25mmol)1N鹽酸水溶液的混合物室溫下攪拌72小時。分離水相，用己烷洗滌。減壓濃縮水相，得到1.25g產(chǎn)品，產(chǎn)率92.10％。
N-(2-N-叔丁氧羰基-氨基丙基)-N-叔丁氧羰基-對硝基苯丙氨酰胺(C′)把12.5ml(89.68mmol)三乙胺加入到含有25g(80.57mmol)N-叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸的300ml無水二氯甲烷溶液中，然后加入37g(83.66mmol)苯并三唑-1-基-氧三(二甲氨基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)。室溫攪拌1小時后，加入15.1g(86.66mmol)1-N-叔丁氧羰基-2-甲基乙二胺的40ml無水二氯甲烷溶液。室溫下攪拌反應(yīng)20小時。用300ml二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物，用1N鹽酸水溶液(2×500ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×500ml)和水(1×500ml)洗滌。用無水硫酸鎂干燥有機(jī)相。過濾，減壓除去溶劑，得到黃色固體。加入己烷(600ml)，攪拌反應(yīng)混合物20分鐘。過濾固體，干燥得到27.0g(71.83％)白色固體產(chǎn)品。
N-(2-氨基丙基)-對硝基苯丙氨酰胺TFA-鹽(D′)把65ml(843.77mmol)三氟乙酸加入到含有26.50g(56.80mmol)N-(2-N-叔丁氧羰基-氨基丙基)-N-叔丁氧羰基-對硝基苯丙氨酰胺的300ml二氯甲烷溶液中。室溫下攪拌反應(yīng)1小時，減壓除去溶劑，然后加入500ml無水乙醚。用玻璃燒結(jié)漏斗過濾得到的固體，然后用400ml乙醚洗滌，真空干燥固體得到32.0g(100％)含有一些殘余三氟乙酸和乙醚的產(chǎn)品。
2-甲基-6-(對硝基芐基)二亞乙基三胺三鹽酸鹽(E′)把500ml 1M硼烷-四氫呋喃配合物以30分鐘時間加入到含有35g(70.80mmol)N-(2-氨基丙基)-對硝基苯丙氨酰胺TFA鹽的500ml無水四氫呋喃溶液中?；亓骷訜岱磻?yīng)16小時。冰浴冷卻反應(yīng)物后，緩緩加入122ml甲醇除去過量的硼烷試劑。完全放完氣體后，減壓除去溶劑。殘余物溶解于265ml無水乙醇中，在冰浴冷卻的同時用鹽酸(g)飽和該溶液，然后用200ml無水乙醚稀釋混合物，過濾得到的固體，真空干燥得到19.39g產(chǎn)品，產(chǎn)率75.72％。
N，N，N′，N″，N″-五[(叔丁氧羰基)甲基]-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺(F′)把86.60g(626.58mmol)碳酸鉀加入到含有19.0g(52.53mmol)2-甲基-64-對硝基芐基)二亞乙基三胺三鹽酸鹽的550ml無水乙腈混合物中，然后加入42ml(284.44mmol)溴乙酸叔丁酯。室溫攪拌90小時后，用500ml水稀釋混合物，用乙酸乙酯提取(2×500ml)。有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥。過濾，減壓除去溶劑得到黃色油狀物。在硅膠柱上進(jìn)行柱色譜，用30％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到26.37g產(chǎn)品，產(chǎn)率60.99％。
N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(G′)把含有5.0g(6.08mmol)N，N，N′，N″，N″-五[(叔丁氧羰基)甲基]-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺在35ml三氟乙酸中的溶液室溫下攪拌48小時，減壓除去溶劑，真空干燥所得固體，得到4.02g淺黃色固體產(chǎn)品，產(chǎn)率為74.75％。
N，N′，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-氨基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(H′)把3.40g(3.84mmol)N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-硝基苯基)甲基-]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽和50ml水加入到Parr燒瓶中，然后加入0.3g 5％的鈀-碳。把燒瓶加壓至30psi氫氣并放氣，進(jìn)行兩次。然后把容器加壓至45psi氫氣，振搖。當(dāng)氫氣攝取停止后(一般為2-4小時后)，把燒瓶放氣，經(jīng)硅藻土(celite)墊過濾混合物。用20ml水洗滌該硅藻土。減壓濃縮濾液，得到3.02g產(chǎn)品，產(chǎn)率為92.03％。產(chǎn)品的光譜數(shù)據(jù)符合參考標(biāo)準(zhǔn)值。
2-(對-異硫氰基芐基)-6-甲基二亞乙基三胺-N，N，N′，N″N″-五乙酸(MX-DTPA)在1L裝有電磁攪拌器的園底燒瓶中，把7.0g(7.23mmol)N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-氨基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽加入到含有150ml水和300ml氯仿的混合物中，然后加入4.67(44.06mmol)碳酸鈉。所得溶液的pH值約為9.0。把0.64ml(8.39mmol)硫光氣加入到此雙相混合物中，然后室溫下攪拌溶液2小時。減壓除去溶劑得到殘余物。把殘余物溶解于15ml 1％乙酸所水溶液中，將其置于反相硅膠柱上，用1％乙酸洗脫，然后用含有1％乙酸的25％乙腈/水洗脫。把含有所述產(chǎn)品的部分合并，減壓除去溶劑，得到2.47g產(chǎn)品，呈淡黃色油狀固體，產(chǎn)率為61.60％。
已經(jīng)以優(yōu)選實施方案方式描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解在不偏離本發(fā)明精神范圍的前提下，可以進(jìn)行各種修飾、替換、刪減和改變。因此，本發(fā)明范圍應(yīng)該只能由權(quán)利要求書(包括其等同描述)來限定。
權(quán)利要求
1.區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣蛇m合螯合放射性金屬并適合偶聯(lián)于免疫球蛋白的DTPA衍生物的方法，該方法包括區(qū)域選擇性偶聯(lián)(a)單保護(hù)的二胺；和(b)含有胺和能有效地把DTPA衍生物偶合于免疫球蛋白的部分的化合物；或者含有胺和能轉(zhuǎn)變成有效把DTPA衍生物偶合于免疫球蛋白的部分的化物；因此合成基本上含純異構(gòu)體的DTPA衍生物。
2.制備式(I)DTPA衍生物的方法， 該方法包括(a)把N-叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸(A)和單保護(hù)的二胺(B)反應(yīng)形成化合物(C)；(b)除去(C)中的胺保護(hù)基團(tuán)得到TFA-鹽(D)；(c)還原(D)得到(E)；(d)對(E)進(jìn)行五烷基化得到(F)；(e)除去(F)中的氨保護(hù)基團(tuán)得到三氟乙酸鹽(G)；(f)還原(G)中的硝基得到三氟乙酸鹽(H)；和(g)把(H)中的氨基轉(zhuǎn)變形成式(I)的DTPA衍生物。
3.權(quán)利要求2的方法，其中式(I)化合物為MX-DTPA。
4.權(quán)利要求2的方法，其中式(I)化合物為1B3M-DTPA。
5.權(quán)利要求2的方法，其中式(I)化合物為CHx-DTPA。
6.權(quán)利要求2的方法，其中DTPA衍生物的特性通過選擇二胺(B)控制。
7.制備MX-DTPA的方法，包括(a)把N-叔丁氧羰基對硝基-L-苯丙氨酸(A)和單-N-叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)偶聯(lián)形成N-(2-N-叔丁氧羰基-氨基丙基)-N-叔丁氧羰基-對硝基苯丙胺酰胺(C′)；(b)除去(C′)中的叔丁氧羰基得到N-(2-氨基丙基)-對硝基苯丙胺酰胺三氟乙酸鹽(D′)；(c)還原(D′)得到2-甲基-6-(對硝基芐基)二亞乙基三胺三鹽酸鹽(E′)；(d)對(E′)進(jìn)行五烷基化得到N，N，N′，N″，N″-五[(叔丁氧羰基)甲基]-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺(F′)；(e)除去(F′)中的叔丁氧羰基得到N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-硝基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(G′)；(f)還原(G′)中的硝基得到N，N，N′，N″，N″-五(羧甲基)-2-[(4-氨基苯基)甲基]-6-甲基二亞乙基三胺三氟乙酸鹽(H′)；和(g)把(H′)中的氨基轉(zhuǎn)變形成2-(對異硫氰基芐基)-6-甲基二亞乙基三胺-N，N，N′，N″，N″-五乙酸(MX-DTPA)。
8.權(quán)利要求7的方法，其中(a)包括應(yīng)用苯并三唑-1-基氧三(二甲胺基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)作為偶合試劑。
9.權(quán)利要求7的方法，其中(a)包括應(yīng)用雙(2-氧-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)作為偶合試劑。
10.權(quán)利要求7的方法，其中單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)由包括下列步驟的方法得到(i)用氫氧化銨處理乳腈得到α-氨基腈(2)；(ii)用鹽酸處理(2)得到胺鹽酸鹽(3)；(iii)用二叔丁基二碳酸酯保護(hù)該胺得到叔丁氧羰基保護(hù)的衍生物(4)；(iv)在兩大氣壓的氫氣下，應(yīng)用阮內(nèi)鎳在飽和乙醇溶液中還原該腈得到單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)。
11.權(quán)利要求7的方法，其中單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)有包括下列步驟的方法得到(i)在相轉(zhuǎn)移條件下，對席夫堿(5)進(jìn)行烷基化得到單烷基化產(chǎn)品(6)；(ii)用1N鹽酸脫保護(hù)(6)，然后用二叔丁基二碳酸酯保護(hù)得到叔丁氧羰基保護(hù)的胺(4)；和(iii)用阮內(nèi)鎳還原(4)得到單叔丁氧羰基保護(hù)的二胺(B′)。
12.權(quán)利要求7的方法，其中應(yīng)用在二氯甲烷中的三氟乙酸除去(C′)中的叔丁氧羰基得到(D′)。
13.權(quán)利要求7的方法，其中還原(D′)的步驟包括用硼烷-四氫呋喃配合物處理(D′)，接著用鹽酸處理得到三胺鹽酸鹽(E′)。
14.權(quán)利要求7的方法，其中應(yīng)用乙腈和碳酸鉀進(jìn)行中間體(E′)的五烷基化。
15.權(quán)利要求7的方法，其中應(yīng)用在二甲基甲酰胺中的溴叔丁基乙酸酯和碳酸鈉進(jìn)行中間體(E′)的五烷基化。
16.權(quán)利要求7的方法，其中應(yīng)用硅膠柱色譜純化(F′)。
17.權(quán)利要求7的方法，其中應(yīng)用三氟乙酸脫保護(hù)(F′)的羧酸得到五乙酸衍生物(G′)。
18.權(quán)利要求7的方法，其中在兩大氣壓氫氣下，在水中用鈀/碳還原(G′)中的硝基得到(H′)。
19.權(quán)利要求7的方法，其中把(H′)轉(zhuǎn)變成MX-DTPA的步驟包括通過硫光氣把胺(H′)轉(zhuǎn)變成瓦狀異硫氰酸酯基團(tuán)。
20.權(quán)利要求14的方法，其中把(H′)轉(zhuǎn)變成MX-DTPA的步驟包括(i)把硫光氣加入到含有五乙酸衍生物(H′)的氯仿和水的雙相混合物中；(ii)快速攪拌該混合物2小時；(iii)減壓除去溶劑得到殘余物；(iv)用反相硅膠純化殘余物；和(v)用含有1％乙酸的25％乙腈水溶液洗脫。
21.權(quán)利要求19的方法，其中應(yīng)用二氯甲烷和三乙胺把(H′)轉(zhuǎn)變成MX-DTPA。
22.權(quán)利要求19的方法，其中應(yīng)用乙腈和碳酸氫鈉或碳酸鈉把(H′)轉(zhuǎn)變成DX-DTPA。
23.按照權(quán)利要求7所述方法制備的MX-DTPA組合物。
24.應(yīng)用MX-DTPA以產(chǎn)生抗體螯合劑的改進(jìn)方法，其中的改進(jìn)包括應(yīng)用按照權(quán)利要求7制備的MX-DTPA。
25.基本上含純凈異構(gòu)體的MX-DTPA組合物。
26.應(yīng)用權(quán)利要求25的MX-DTPA組合物產(chǎn)生放射標(biāo)記的MX-DTPA的方法。
27.制備CHx-DTPA的方法，包括(a)把N-叔丁氧羰基-對硝基-L-苯丙氨酸(A)與單保護(hù)的二胺(B″)偶聯(lián)形成化合物(C″)；(b)除去(C″)中的氨基保護(hù)基團(tuán)形成TFA-鹽(D″)；(c)還原(D″)得到(E″)；(d)對(E″)進(jìn)行五烷基化得到(F″)；(e)除去(F″)中的氨保護(hù)基團(tuán)得到三氟乙酸鹽(G″)；(f)還原(G″)中的硝基得到三氟乙酸鹽(H″)；和(g)轉(zhuǎn)變(H″)中的氨基得到CHx-DTPA。
28.權(quán)利要求27的方法，其中單保護(hù)的二胺(B″)為順式。
29.權(quán)利要求27的方法，其中單保護(hù)的二胺(B″)為反式。
全文摘要
本發(fā)明提供高產(chǎn)率區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣蒁TPA衍生物的方法，該方法不需要應(yīng)用離子交換色譜分離中間體。而且，該方法得到單一的螯合物區(qū)域異構(gòu)體，其對用作放射標(biāo)記試劑所需的螯合物提供區(qū)域?qū)Ｒ恍院铣伞?br> 文檔編號C07C331/28GK1548419SQ20041003125
公開日2004年11月24日 申請日期2000年3月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月3日
發(fā)明者P·秦, A·吉爾科斯, M·J·拉巴勒, S·魯爾, T·萊斯坎普, P 秦, 撲, 拉巴勒, 箍財 申請人:Idec藥物公司