專利名稱：桉烷類化合物，制備方法及其在制備藥物組合物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及桉烷類化合物及其制備方法和在制備藥物組合物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
桉烷型化合物是常見的一種雙環(huán)倍半萜，存在于各種植物揮發(fā)油中，結(jié)構(gòu)上常常帶有羥基、羰基和雙鍵，如α、β、γ-桉醇(α，β，γ-eudesmol)。少數(shù)天然桉烷類化合物已報導具有生物活性，如桉雙烯酮[(+)-Eudesma-4(15)-7(11)-dien-8-one]是菊科植物關(guān)蒼術(shù)的成分，具有抗炎作用。存在于桉葉、厚樸、蒼術(shù)中的β-桉醇(β-Eudesmol)具有鎮(zhèn)靜作用。最近報導Verticillatol具有弱的抑制HIV的作用(Hoang V.D.et alPhytochemistry，2002，59，325-329)，而它的對映體桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇也已發(fā)現(xiàn)，但沒有報導有什么生物活性(Kitajima J.et alPhytochemistry，2002，59，811-815)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供桉烷型化合物，及其制備方法和在制藥中的新用途。本發(fā)明涉及從中間錦雞兒(Caragana intermediia)中分得的多種桉烷型倍半萜以及它們的生物活性，其中桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇和桉烷-4(15)-烯-1β，6α-二醇為主要成分。前者通過化學合成，制備一系列新衍生物。這些化合物具有一定的促進肌肉細胞C2C12對葡萄糖的利用作用?；衔锏幕钚詽舛仍?.05μg/ml～200μg/ml，提示這些桉烷型化合物及其衍生物具有改善胰島素的抵抗性，降低血糖和降低血脂的作用，可單獨或組合成藥物，用于防治糖尿病和肥胖病。
本發(fā)明涉及桉烷類衍生物(通式I)的結(jié)構(gòu)、制備方法及新醫(yī)藥用途。
其中R1、R2表示氫、羥基、氨基、鹵素或C1-6的烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷氧基、甲酰氧基、肼、腙、哌啶、吡啶，或各種氨基酸保護的羥基，或-SO2NHCOR基。R3為羰基、末端雙鍵、羥基、鹵素或C1-6的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基。R4為氫、羥基、甲氧基、乙氧基或乙?；Ｗo的羥基。R5、R6、R7、R9為氫、羥基、鹵素或C1-6的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、氨基、各種氨基酸?；Ｗo的羥基。R8為甲基、羥甲基。也包括藥物學上可接受的桉烷類衍生物的鹽和酯。
豆科植物中間錦雞兒(Caragana intermediia)地上部分含有多種桉烷類倍半萜成分。取中間錦雞兒地上部分10kg，粉碎后用95％乙醇熱回流提取3次，減壓濃縮成浸膏，浸膏用石油醚-90％甲醇分配，甲醇層部分濃縮后用氯仿萃取。氯仿提取物中含多種桉烷類倍半萜成分。氯仿提取物上硅膠柱，用石油醚-乙酸乙酯(100∶1～0∶100)梯度洗脫，分別獲得F-1，F(xiàn)-2，F(xiàn)-3三個流份。其中F-1(約2g)用硅膠柱層析和Sephadex LH-20層析得到桉烷-4(15)，7-二烯-1β-醇，桉烷-4(15)-烯-1β，6β-二醇。F-2(約8g)先用Sephadex LH-20去雜，再經(jīng)硅膠柱層析，反復分離，氯仿-乙酸乙酯和氯仿-丙酮洗脫，分別得到桉烷-4(15)-烯-1β，6α-二醇，桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇和桉烷-4(15)-烯-1β，8α-二醇。F-3(約3g)經(jīng)Sephadex LH-20去雜，硅膠柱層析和RP-8反相硅膠柱層析，分別獲得桉烷-4(15)-烯-1β，7α-二醇，桉烷-4(15)-烯-1β，7β-二醇和桉烷-4(15)-烯-1β，8α-二醇。


圖1是細胞耗糖試驗結(jié)果。
圖2是細胞耗糖試驗乳糖產(chǎn)生。
圖3是二甲雙胍和桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇對血糖水平的影響。
圖4是桉烷類化合物的降血糖作用實驗。
具體實施例方式
實施例1桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇(Eudesm-4(15)-ene-1β，5α-diol)的分離純化和衍生物制備。
中間錦雞兒乙醇提取物的氯仿可溶部分，經(jīng)硅膠柱層析，取石油醚-乙酸乙酯(5∶1)洗脫部位，經(jīng)Sephadex LH-20去雜，再硅膠柱層析反復純化，氯仿-乙酸乙酯和氯仿-丙酮洗脫，得到白色結(jié)晶。以藥材重量計算，收率約0.01％。mp 118℃，C15H26O2，[α]D25+129.4°(0.58，MeOH)，易溶于氯仿、丙酮。
1HNMR(400MC，CDCl3)δ4.05(1H，dd，J＝11.6，5.01-H)，1.85(1H，m，2-H)，1.55(1H，m，2-H)，2.70(1H，m，3-H)，2.15(1H，ddd，J＝13.8，5.3，1.8，3-H)，1.25(1H，m，6-H)，1.60(1H，m，6-H)，1.55(1H，m，7-H)，1.55(2H，m，8-H)，1.68(2H，m，9-H)，1.5(1H，m，11-H)，0.92(3H，d，J＝6.8，12-CH3)，0.90(3H，d，J＝6.8，13-CH3)，0.76(3H，s，14-CH3)，4.85，4.74(2H，s，15-H)反應(yīng)1 在劇烈攪拌下，將N，N-二環(huán)己基碳二亞胺50g(243mmol)加到N-叔丁氧羰基甘氨酸35g(200mmol)和桉烷(100mmol)的THF(250ml)，吡啶(250ml)溶液中，反應(yīng)完成后，過濾，濾液倒入水中，攪拌，析出固體，水洗，烘干，固體溶于冷卻的CF3COOH和CH2Cl2混合液中，然后蒸去大部分溶劑，加入飽和的NaHCO3溶液，析出固體，過濾，水洗，干燥。
反應(yīng)2 取原料0.084mmol溶于10ml CH2CL2加入氧化鉻-吡啶0.12mmol，室溫攪拌過夜，反應(yīng)液NaHCO3洗滌，干燥，上硅膠柱純化得桉烷-4(15)-烯-1-酮-5α-醇13mg，得率65.3％。1HNMR(400 MC，CDCl3)δ5.06(t，15-H)，4.98(s，15-H)，3.01(m，3-H)，2.66(m，3-H)，2.40(m，2-H)，1.99(t，2-H)，1.04(s，14-H)。
反應(yīng)3 0.084mmol原料溶于10ml干燥苯，10ml硝基甲烷中，然后蒸去部分溶劑，四乙酰溴葡萄糖，在隔絕濕氣下，向溶液中加入0.07mmol碳酸銀，然后在60℃下滴加0.1mmol四乙酰溴葡萄糖的苯溶液，冷卻至室溫，攪拌過夜，反應(yīng)液分別用飽和NaHCO3溶液，飽和NaCl溶液洗滌，CH2Cl2萃取，合并有機相，回收溶劑后，上硅膠柱純化得產(chǎn)物。再將該產(chǎn)物在甲醇-四氫呋喃溶液(1∶1，10ml)加入28％的甲醇鈉的甲醇溶液(0.08mmol)，混合物在室溫下攪拌1小時，用1％枸櫞酸中和，在減壓下回收溶劑，剩余物用氯仿提取，水洗，鹽水洗，無水MgSO4干燥，上柱得產(chǎn)品。
反應(yīng)4
0.084mmol原料溶于10ml CHCl3加入0.1mmol間氯過氧苯甲酸，室溫放置過夜，上硅膠柱純化得產(chǎn)物。
反應(yīng)5 0.084mmol原料溶于10ml吡啶中加入0.1mmol對甲苯磺酰氯，室溫攪拌過夜，減壓回收溶劑，上柱分離得產(chǎn)物18mg(transfer，80％，得率54％)。
然后將產(chǎn)物溶于10ml DMF中，加入0.1mmol KCl，在80℃加熱反應(yīng)2～3小時，加入水和CHCl3中分配，有機相干燥并回收溶劑，上硅膠柱純化得產(chǎn)物。
反應(yīng)6取原料0.084mmol，加入0.1mmol乙酐溶于吡啶(10ml)，室溫攪拌5小時，反應(yīng)液硅膠吸附上柱分離得乙酰產(chǎn)物21mg。得率90％。1HNMRδ5.29(dd，5.1，11.7，1-H)，4.80，4.77(s，15-H)，乙酰甲基2.02(3H，s)。
反應(yīng)7取原料0.084mmol，加入0.1mmol NBS溶于10ml四氯化硫溶液中，加少量過氧苯甲酰催化，室溫攪拌過夜，反應(yīng)液過濾，硅膠拌樣，上柱分離純化，得產(chǎn)物19.8mg，得率74％。1HNMRδ3.69(dd，7.4，9.3，1-H)，3.39，3.39(2H，d，J＝10.1，15-H)，2.30(m，3-H)，2.12(m，2-H)，1.89(m，2-H)，1.03(s，14-H)。
反應(yīng)8取原料0.084mmol，溶于10ml吡啶中，加入0.1mmol吡啶2-羧酸，加入0.1mmol DCC，室溫攪拌24小時，反應(yīng)液硅膠拌樣，上柱分離純化，得產(chǎn)物12.96mg，得率45％。
實施例2桉烷-4(15)-烯-1β，6α-二醇(Eudesm-4(15)-ene-1β，6α-diol)的分離純化如實施例1所述，中間錦雞兒粗浸膏硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(5∶1)洗脫部分，用Sephadex LH-20去雜后，再上硅膠柱(200～300目)，用氯仿-乙酸乙酯，分得桉烷-4(15)-烯-1β，6α-二醇，以藥材重量計算，得率約0.008％。白色細針晶，mp 126-7℃，易溶于氯仿、丙酮。20％硫酸試劑加熱后呈紅色，而后變成紫紅色，[α]D25+45.5°。
1HNMR(400MC，CDCl3)δ3.42(1H，m，1-H)，1.53，1.85(2H，m，2-H)，2.09，2.35(2H，m，3-H)，1.75(1H，br，s，5α-H)，3.71(1H，t-d，J＝9.8，1.7，6-H)，1.30(1H，m，7-H)，1.25，1.53(2H，m，8-H)，1.20，1.90(2H，m，9-H)，2.25(1H，m，11-H)，0.87(3H，d，J＝7.0，12-CH3)，0.95(3H，d，J＝7.0，13-CH3)，0.70(3H，s，14-CH3)，5.02，4.74(2H，d，J＝1.1，15-H)實施例3桉烷-4(15)-烯-1β，7α-二醇(Eudesm-4(15)-ene-1β，7α-diol)
如實施例1、2所述，取分去桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇和桉烷-4(15)-烯-1β，6α-二醇的母液，上硅膠柱(200～300目)，用氯仿-乙酸乙酯(8∶1)洗脫，再經(jīng)RP-8反相柱純化得桉烷-4(15)-烯-1β，7α-二醇。Eudesm-4(15)-ene-1β，7α-diol，C15H26O2，HRMS[M]+m/z 238.1926，計算值238.2933。
1HNMR(500MC，CDCl3)δ3.51(1H，dd，J＝11.4，4.1，1-H)，1.82，1.59(2H，m，2-H)，2.30，2.14(2H，m，3-H)，2.17(1H，t，J＝9.7，5-H)，1.47，1.55(2H，m，6-H)，1.52(2H，m，8-H)，1.50，1.74(2H，m，9-H)，1.63(1H，m，11-H)，0.95(6H，d，J＝6.8，12-CH3，13-CH3)，0.65(3H，s，14-CH3)，4.47，4.76(2H，s，15-H)實施例4桉烷-4(15)，7-二烯-1β-醇(Eudesm-4(15)，7-diene-1β-ol)如實施例1所述，中間錦雞兒的粗浸膏，經(jīng)硅膠柱層析，在石油醚-乙酸乙酯(10∶1)流份含此二烯。將此流份，反復上硅膠柱，分別用石油醚-氯仿(3∶1)，石油醚-乙酸乙醋(12∶1)和苯洗脫洗脫，純化得桉烷-4(15)，7-二烯-1β-醇。Eudesm-4(15)，7-diene-1β-ol，C12H24O，HRMS[M+]m/z 220.1835，計算值220.1927。
1HNMR(500MC，CDCl3)δ3.47(1H，dd，J＝11.7，4.3，1-H)，1.79，1.56(2H，m，2-H)，2.35，2.12(2H，m，3-H)，1.95(1H，m，5-H)，2.01，1.95(2H，m，6-H)，5.34(1H，t，J＝5.2，8-H)，1.93(1H，d，J＝5.2，9-H)，1.74(1H，d，J＝5.0，9-H)，2.21(1H，m，11-H)，1.02(6H，d，12，13-CH3)，0.65(3H，s，14-CH3)，4.65，4.83(2H，d，J＝1.1，15-H)實施例5桉烷-4(15)-烯-1β，8α-二醇(Eudesm-4(15)-ene-1β，8α-diol)如實施例1所述，中間錦雞兒提取物硅膠柱層析分離時，在石油醚-乙酸乙酯(5∶1)洗脫部分含桉烷-4(15)-烯-1β，8α-二醇。此流份用Sephadex-LH20去雜后，再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-丙酮(8∶1)洗脫，和RP-8反相柱純化得桉烷-4(15)-烯-1β，8α-二醇。
實驗例1
促肌肉細胞耗糖試驗利用培養(yǎng)肌肉細胞C2C12觀察桉烷類成分對促進葡萄糖轉(zhuǎn)化的作用，以胰島素為對照(分空白、低劑量、高劑量組)，部分化合物在0.05～100μg/ml濃度時能明顯促進葡萄糖的利用。桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇在10.7μg/ml(45μm)濃度時能明顯促進葡萄糖的轉(zhuǎn)化，稀釋5倍，15倍仍有作用，培養(yǎng)液中乳糖化合物的含量相應(yīng)增加。
實驗例2糖尿病小鼠試驗利用db/db轉(zhuǎn)基因糖尿病小鼠試驗桉烷類化合物的降血糖作用，1～500mg/kg劑量時顯示作用，其中桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇給予100mg/kg灌胃給藥，其降血糖作用與二甲雙胍相當。
權(quán)利要求
1.通式(I)的桉烷化合物或其衍生物的藥用鹽和酯， 其中R1、R2表示氫、羥基、氨基、鹵素或C1～6的烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、甲酰氧基、肼、腙、哌啶、吡啶，或各種氨基酸修飾的羥基，或-SO2NHCOR基。R3為羰基、末端雙鍵、羥基、鹵素或C1～6的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基。R4為氫、羥基、甲氧基、乙氧基或乙?；Ｗo的羥基。R5、R6、R7、R9為氫、羥基、甲氧基、乙氧基、氨基酸酰基、C1～6的烷氧基、烷基或鏈烯基。R8為甲基、羥甲基。
2.權(quán)利要求1的桉烷化合物，其特征是所述化合物是單一桉烷類化合物或由這些桉烷類化合物組成的活性部位。
3.按照權(quán)利要求1的桉烷化合物，其特征是所述化合物是桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇。
4.按照權(quán)利要求1或2的桉烷化合物，其特征是可以按下述步驟從豆科中間錦雞兒全植物中通過提取分離獲得，取中間錦雞兒地上部分，粉碎后用95％乙醇熱回流提取，減壓濃縮成浸膏，用石油醚-90％甲醇分配，甲醇層濃縮后用氯仿萃取，氯仿提取物上硅膠柱，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，分別獲得F-1，F(xiàn)-2，F(xiàn)-3三個流份，其中F-1用硅膠柱層析和Sephadex LH-20層析得桉烷-4(15)，7-二烯-1β-醇，桉烷-4(15)-烯-1β，6β-二醇，F(xiàn)-2用Sephadex LH-20去雜，再經(jīng)硅膠柱層析，分離，氯仿-乙酸乙酯和氯仿-丙酮洗脫，得桉烷-4(15)-烯-1β，6α-二醇，桉烷-4(15)-烯-1β，5α-二醇和桉烷-4(15)-烯-1β，8α-二醇，F(xiàn)-3經(jīng)SephadexLH-20去雜，硅膠柱層析和RP-8反相硅膠柱層析，得桉烷-4(15)-烯-1β，7α-二醇，桉烷-4(15)-烯-1β，7β-二醇和桉烷-4(15)-烯-1β，8α-二醇。
5.藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1的一種或多種桉烷化合物或其衍生物的藥用鹽和酯作為有效成分，并含有一種或多種常規(guī)藥用載體和/或稀釋劑。
6.前述任一權(quán)利要求所述的一種或多種桉烷化合物在制備治療肥胖病的藥物中的用途。
7.前述任一權(quán)利要求所述的一種或多種桉烷化合物在制備治療糖尿病藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及通式(I)的桉烷類化合物及其及其衍生物，還涉及它們的制備方法，以及在糖尿病和肥胖病治療劑中的應(yīng)用。所述化合物及其衍生物具有促進肌肉細胞C
文檔編號C07C35/00GK1554626SQ20031012263
公開日2004年12月15日 申請日期2003年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月22日
發(fā)明者胡昌奇, 孫智華, 陳博, 王保平, 蘇瑾, 徐光 , 周金濤, 陳克勤, 包維麗, 趙定義, 施蛟, 張甦 申請人:復旦大學