專(zhuān)利名稱(chēng)：茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的分離制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的分離制備工藝。
背景技術(shù)：
茶氨酸(theanine，N-乙基-r-L-谷氨酰胺)是茶葉中特有的非蛋白氨基酸，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和藥理研究表明，茶氨酸不但具有鮮爽、緩解苦澀、增加茶湯香甜味的作用，還具有拮抗咖啡堿引起的神經(jīng)系統(tǒng)興奮，以及降血壓的功效。茶氨酸含量作為茶葉質(zhì)量控制的一項(xiàng)重要指標(biāo)，傳統(tǒng)的定量分析方法主要為強(qiáng)酸性陰離子交換樹(shù)脂層析法、茚三酮顯色的薄層色譜法、氣相色譜法和衍生法等，這些方法較為繁瑣，抗干擾能力較差。目前，隨著分析技術(shù)日趨成熟，針對(duì)氨基酸的分析，已有專(zhuān)門(mén)化的儀器，如Waters公司生產(chǎn)的Pico-Tag，AccQ-Tag等系統(tǒng)，但此類(lèi)方法的運(yùn)行成本較高，將其應(yīng)用于茶氨酸的分析時(shí)間較長(zhǎng)。高效液相色譜法(HPLC)具有高的分離定量能力，可對(duì)茶氨酸進(jìn)行定量測(cè)定，但此方法需要有茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，以利于方法的外標(biāo)法定量測(cè)定。目前，國(guó)內(nèi)還未有茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品提供；國(guó)外茶氨酸的合成，由于要采用乙胺或三乙胺有毒和可燃性原料，通過(guò)高溫高壓而合成，生產(chǎn)中可能對(duì)人體造成危害，而采用生化合成的方法成本太高，這些產(chǎn)品最終均得通過(guò)溶劑分配和液相色譜的手段進(jìn)行分離、純化，工藝復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種純度高、收率高、污染少、生產(chǎn)成本低、可作為茶氨酸高效液相色譜測(cè)定的定性、定量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的茶氨酸分離制備工藝。
本發(fā)明包括以下步驟
1.取茶氨酸含量大于10％(W/W)的茶葉提取物，加水使其溶解，超聲提取10-60min，離心(轉(zhuǎn)速大于8000轉(zhuǎn)/分)，上清液用水膜過(guò)濾，所用水膜孔徑以0.2-0.5μm為宜；2.濾液直接進(jìn)半制備或制備色譜進(jìn)行制備，分離固定相宜采用反相填料，流動(dòng)相宜采用0.01-0.2％(v/v)甲酸水溶液，控制流速為3-8ml/min；同步采用紫外檢測(cè)器在195-220nm監(jiān)視流出曲線，3.制備收集液于水浴上濃縮得產(chǎn)品。
最終產(chǎn)品用紫外、紅外及等度高效液相色譜鑒定其純度并進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量控制。
本方法得到的產(chǎn)品純度達(dá)98％以上(HPLC)，可作為茶葉制品中茶氨酸高效液相色譜測(cè)定的定性、定量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品。其方法回收率達(dá)60％以上，生產(chǎn)成本低，對(duì)環(huán)境污染少，操作安全。


圖1為茶氨酸紫外掃描譜圖(195-300nm)。
圖2為茶氨酸等度高效液相色譜分析譜圖。
圖3為茶氨酸紅外掃描譜圖；(4000-400cm-1)圖4為茶氨酸的等度制備色譜圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例稱(chēng)取1克茶氨酸含量為30％(w/w)的茶葉提取物，加入20ml水使其溶解，超聲提取20min，離心(轉(zhuǎn)速11000轉(zhuǎn)/分)，上清液用水膜過(guò)濾，水膜孔經(jīng)為0.45μm，樣液濃度為12mg/ml，直接進(jìn)制備色譜進(jìn)行制備。
色譜條件為色譜柱Prep Nova_pakR HR C18 6μm 19×300mm HPLC column；流動(dòng)相0.1％(v/v)甲酸水溶液；流速5ml/min；監(jiān)視檢測(cè)波長(zhǎng)215nm；進(jìn)樣量1.5ml。
制備收集液于水浴鍋上濃縮蒸干，得茶氨酸產(chǎn)品。收率為80％，產(chǎn)品純度達(dá)98.5％；茶氨酸等度制備色譜圖見(jiàn)圖4。茶氨酸紫外掃描譜圖，茶氨酸等度高效液相色譜分析譜圖，茶氨酸紅外掃描譜圖分別見(jiàn)圖1，圖2，圖3。
權(quán)利要求
1.一種茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品分離制備工藝，其特征在于包括以下步驟①.取茶氨酸含量大于10％(w/w)的茶葉提取物，加水使其溶解，超聲提取10-60min，在轉(zhuǎn)速大于8000轉(zhuǎn)/分的條件下離心，上清液用水膜過(guò)濾；②.濾液直接進(jìn)半制備或制備色譜進(jìn)行制備，分離固定相采用反相填料，流動(dòng)相采用0.01-0.2％(v/v)甲酸水溶液，控制流速為3-8ml/min；同步采用紫外檢測(cè)器在195-220nm監(jiān)視流出曲線；③收集液于水浴上濃縮得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品分離制備工藝，其特征在于所述水膜孔徑為0.2-0.5μm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從茶葉提取物中直接制備茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的制備方法。取茶氨酸含量大于10％的茶葉提取物，加水溶解，經(jīng)超聲提取，離心，上清液用水膜過(guò)濾，經(jīng)制備型或半制備型高效液相制備色譜分離得到茶氨酸，最終產(chǎn)品用紫外、紅外及等度高效液相色譜鑒定其純度并進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量控制。產(chǎn)品純度達(dá)98％以上(HPLC)，可作為茶葉制品(含綠茶、紅茶及茶葉提取物和保健食品)中茶氨酸高效液相色譜測(cè)定的定性、定量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品。
文檔編號(hào)C07C231/24GK1532186SQ0311818
公開(kāi)日2004年9月29日 申請(qǐng)日期2003年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月19日
發(fā)明者波 陳, 陳波, 姚守拙, 朱小蘭, 羅旭彪, 張斐 申請(qǐng)人:湖南師范大學(xué)