專利名稱：(20S)－1α－羥基－2－亞甲基－19－去甲－雙高孕鈣化醇及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及維生素D類化合物，更具體而言指(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇(bishomopregnacalciferol)及其藥物學(xué)用途。
背景技術(shù)：
已知天然激素lα，25-二羥維生素D3和其麥角甾醇系列的類似物，如lα，25-二羥維生素D2是人和動(dòng)物中鈣體內(nèi)平衡的調(diào)節(jié)劑，并且其對細(xì)胞分化的作用也已確立(見Ostem等，Proc.Natl.Acad Sci.USA，84，2610(1987))。已制備并測試了這些代謝物的許多結(jié)構(gòu)上的類似物，包括1α-羥基維生素D3、1α-羥基維生素D2、各種側(cè)鏈的同系化的維生素和其氟化類似物。這些化合物中的一些呈現(xiàn)出有趣的在細(xì)胞分化與鈣調(diào)節(jié)作用上的不同。該活性上的差異可用于治療許多疾病如腎性骨營養(yǎng)不良、抗維生素D佝僂病、骨質(zhì)疏松癥、牛皮癬和某些惡性腫瘤。
最近，發(fā)現(xiàn)一類新的維生素D類似物，即所謂19-去甲-維生素D類化合物，其特征為維生素D系統(tǒng)代表性的A環(huán)環(huán)外亞甲基被兩個(gè)氫原子替代。對這種19-去甲-類似物(如1α，24-二羥基-19-去甲-維生素D3)的生物學(xué)測試顯示其選擇性的活性特征誘導(dǎo)細(xì)胞分化的效力高及非常低的鈣動(dòng)員活性。因此，這些化合物有作為惡性腫瘤或各種皮膚疾病的治療藥劑的應(yīng)用潛力。文獻(xiàn)已記述有關(guān)于兩種不同的制備該19-去甲-維生素D類似物的合成方法(Perlman等，TetrahedronLett.31，1823(1990)；Perlman等，Tetrahedron Lett.32，7663(1991)，和DeLuca等第5,086,191號美國專利)。
在第4,666,634號美國專利中，Chugai group已記述并對1α，25-二羥維生素D3的2β-羥基和烷氧基(如ED-71)類似物作為潛在的骨質(zhì)增生治療劑及抗腫瘤劑進(jìn)行研究。又見Okano等，Biochem.Biophys.Res.Commun.163，1444(1989)。1α，25-二羥維生素D3的其它2-取代(被羥烷基，如ED-120，及氟烷基基團(tuán))的A-環(huán)類似物也得以制備并對其進(jìn)行研究(Miyamoto等，Chem.Pharm.Bull.41，1111(1993)；Nishii等，Osteoporosis Int.Suppl.1，190(1993)；Posner等，J.Org.Chem.59，7855(1994)，和J.Org.Chem.60，4617(1995))。
近來，合成了lα，25-二羥基-19-去甲-維生素D3的2-取代類似物，如在2-位被羥基或烷氧基基團(tuán)(DeLuca等，第5,536,713號美國專利)、被2-烷基基團(tuán)(DeLuca等，第5,945,410號美國專利)、被2-亞烷基基團(tuán)(DeLuca等，第5,843,928號美國專利)取代的化合物，它們顯示出有趣且選擇性的活性特征。所有這些研究都顯示出維生素D受體的結(jié)合位可以適應(yīng)合成維生素D類似物的不同的C-2取代基。
在持續(xù)的探索19-去甲類藥理學(xué)有意義的維生素D化合物的努力中，合成并測試了一種特征為在碳2(C-2)位存在亞甲基取代基的類似物。特別令人感興趣的是特征為碳1位置被羥基基團(tuán)取代并在碳20位連接一縮短的側(cè)鏈的類似物，如(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇(此處記作2-MbisP)。因?yàn)橄鄬π〉腃-2亞甲基取代應(yīng)該不會妨礙與維生素D受體的結(jié)合，該維生素D類似物似乎是一種令人感興趣的研究對象。并且在1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-維生素模型上進(jìn)行的分子工程學(xué)研究表明這種分子修飾對環(huán)己二醇環(huán)A的構(gòu)造并無實(shí)質(zhì)性改變。但是，19-去甲-維生素D碳骨架中引入2-亞甲基改變了其1α-與3β-A-環(huán)羥基的特征。現(xiàn)在它們都在烯丙基位置，類似于如1α-羥基基團(tuán)(對生物學(xué)活性是決定性的)在天然激素1α，25-(OH)2D3分子中。
本發(fā)明還涉及通過制備其晶體形態(tài)來純化2-亞甲基-19-去甲-20(S)-1α-羥基-雙高孕鈣化醇(2-MbisP)。
對有機(jī)化合物的純化，尤其是那些指定為藥用的，對于合成該化合物的化學(xué)家非常重要。這些化合物的制備往往需要很多合成步驟，并且因此最終產(chǎn)物不僅會被最后一步合成步驟的副產(chǎn)物污染，還會被之前的步驟中產(chǎn)生的化合物污染。甚至用非常有效但是卻相對耗時(shí)的色譜純化法也常常不能提供足夠純度的化合物以供藥用。
根據(jù)合成1α-羥基維生素D化合物的方法，會有不同的少量雜質(zhì)化合物伴隨最終產(chǎn)物。從而，例如，如果直接C-1羥基化維生素D的5，6-反式幾何異構(gòu)體，然后SeO2/NMO氧化，光化學(xué)照射[見Andrews等，J.Org.Chem.51，1635(1986)；Calverley等，Tetrahedron 43，4609(1987)；Choudry等，J.Org.Chem.58，1496(1993)]，最終的1α-羥基維生素D產(chǎn)物會被1β-羥基-和5，6-反式異構(gòu)體污染。如果方法中含有前維生素D化合物的4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮加合物的C-1烯丙基氧化，然后是堿性環(huán)境下所修飾加合物的裂環(huán)反應(yīng)[Nevinckx等，Tetrahedron 47，9419(1991)；Vanmaele等，Tetrahedron41，141(1985)和40，1179(1991)；Vanmaele等，Tetrahedron Lett.23，995(1982)]，可以預(yù)期產(chǎn)物1α-羥基維生素會被前維生素5(10)，6，8-三烯和1β-羥基異構(gòu)體污染。在非常廣泛的范圍及許多的實(shí)際應(yīng)用中，其中最有用的一種C-1羥基化的方法是Paaren等所詳細(xì)描述的試驗(yàn)簡單的過程[見J.Org.Chem.45，3253(1980)和Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.75，2080(1978)]。該方法包括用SeO2/t-BuOOH對易于從維生素D甲苯磺酸酯的緩沖溶劑分解得到的3，5-環(huán)維生素D衍生物進(jìn)行烯丙基氧化，然后進(jìn)行酸催化的裂環(huán)反應(yīng)，形成所希望的1α-羥基化合物。考慮到該合成路線，可以設(shè)想最終產(chǎn)物可能會被1α-羥基差向(立體)異構(gòu)體、5，6-反式異構(gòu)體和前維生素D形式所污染。1α-羥基維生素D4是另一種存在于從維生素D2或麥角甾醇合成的1α-羥基維生素D類化合物中的雜質(zhì)。1α-羥基維生素D4由維生素D4的C-1氧化而來，而維生素D4又源自商業(yè)麥角甾醇原料中的雜質(zhì)。有代表性地，最終產(chǎn)物可以最高含有1.5重量％的1α-羥基維生素D4。因此，非常期待一種可以消除或者顯著減少1α-羥基維生素D4在最終產(chǎn)物中含量至0.1～0.2％以下的純化技術(shù)。
維生素D的共軛三烯系統(tǒng)不僅對光、熱敏感，還易于被氧化生成復(fù)雜的強(qiáng)極性化合物的混合物。氧化通常發(fā)生在維生素D化合物長時(shí)間儲存的情況下。其他可以造成維生素D化合物部分分解的過程包括某些消除水的反應(yīng)；它們的驅(qū)動(dòng)力是羥基基團(tuán)的烯丙基(1α-)和高烯丙基(3β-)位。用薄層色譜可以輕易發(fā)現(xiàn)上述氧化及消除反應(yīng)產(chǎn)物的存在。因此，例如，用預(yù)涂鋁硅薄層板[含紫外指示劑；見EM Science(Cherry Hill，NJ)]和溶劑系統(tǒng)己烷-乙酸乙酯(4∶6)，可以觀察到1α-OH-D2(Rf0.27)和其消除產(chǎn)物(Rf’s ca.0.7-0.9)的斑點(diǎn)。同樣，在噴灑硫酸及加熱后，還可看到另外一個(gè)來自氧化產(chǎn)物的斑點(diǎn)(Rf0)。
通常，所有的1α-羥基化過程都需要至少一次色譜法純化。但是，即使色譜法純化過的lα-羥基維生素D類化合物，盡管其顯示出一致的表明其均一性的光譜數(shù)據(jù)，卻并不能達(dá)到可以用于口服、非胃腸道或透皮給藥的治療藥物的純度標(biāo)準(zhǔn)。因此，顯然需要一種合適的純化2MBP的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇(2-MbisP)、其生物活性、該化合物的種種藥物學(xué)用途和一種得到其晶體形態(tài)的純化方法。
該19-去甲類似物的結(jié)構(gòu)特征如下結(jié)構(gòu)通式I所示 上述化合物顯示出所希望的、非常有利的生物活性模式。該化合物特征為相對高的維生素D受體結(jié)合率、與1α，25-二羥基維生素D3相比非常低的腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)作用和與1α，25-二羥基維生素D3相比非常低的骨鈣動(dòng)員能力。從而，可以認(rèn)為該化合物的特征是具有即使存在也很微弱的高鈣血活性。因此，其可以用于抑制腎性骨營養(yǎng)不良的繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)。
還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物特別適用于以免疫系統(tǒng)不平衡為特征的人類疾病的治療和預(yù)防，如自身免疫性疾病包括多發(fā)性硬化、lupis、糖尿病、宿主抗移植物反應(yīng)和器官移植中的排斥；還可用于治療炎性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘以及炎性腸疾病如乳糜瀉和croans病，以及可用于改善骨折的治療與骨移植。痤瘡、脫發(fā)和高血壓等其它病癥也可用本發(fā)明化合物治療。
上述化合物的特征還有相對高的細(xì)胞分化作用。因此，該化合物亦可用作治療牛皮癬的藥物，還可作為抗腫瘤藥，特別是應(yīng)用于白血病、結(jié)腸癌、乳腺癌和前列腺癌。此外，由于其相對高的細(xì)胞分化作用，該化合物可以用于治療不同的皮膚癥象，包括皺紋、缺乏足夠的皮膚水合作用即皮膚干燥、皮膚不緊縮即皮膚松弛和皮脂分泌不足。應(yīng)用該化合物不僅可以增加皮膚的水分，還可以提高皮膚的屏障功能。
該化合物可以用于治療上述疾病或紊亂的組合物中，其在組合物中的用量為0.01微克/克～100微克/克。該組合物可以局部、透皮、口服或非非胃腸道給藥，劑量為約0.01微克/天到約100微克/天。本發(fā)明還研究了通過重結(jié)晶純化2-MbisP的方法。在重結(jié)晶過程中，溶劑扮演關(guān)鍵的角色，其典型為單一液態(tài)物質(zhì)或適宜的不同液體的混合物。對于重結(jié)晶2-MbisP，最適宜的溶劑和/或溶劑系統(tǒng)特征因素如下(1)毒性低；(2)沸點(diǎn)低；(3)溶解度性質(zhì)高度依賴于溫度(提供滿意的重結(jié)晶產(chǎn)率的必要條件)；及(4)成本相對低。
研究發(fā)現(xiàn)由于2-MbisP在其中溶解度低，強(qiáng)非極性溶劑(如烴類)不適于作為重結(jié)晶的溶劑。在強(qiáng)劑型溶劑介質(zhì)(如醇類)中情況恰恰相反，2-MbisP在其中的溶解度太高。因此，結(jié)論是2-MbisP的成功重結(jié)晶需要中等極性的溶劑。有趣的是，研究發(fā)現(xiàn)一種單一溶劑，即丙酮，最適于2-MbisP的重結(jié)晶。此外，相信應(yīng)用乙酸乙酯、或異丙醇、或氯仿、或二氯甲烷、或二乙醚的溶劑系統(tǒng)效果也不錯(cuò)。這些溶劑易于通過蒸發(fā)或其他眾所周知的方法除去。在所有情況下，重結(jié)晶過程都輕易且高效地進(jìn)行；并且析出晶體足夠大，可以保證過濾后的回收。


圖1A-1E顯示此處敘述及檢測的化合物的結(jié)構(gòu)，即1α，25-二羥-19去甲-維生素D3，下文記作1，25(OH)219-去甲-D3(圖1A)；天然激素1α，25-二羥維生素D3，下文記作1，25(OH)2D3(圖1B)；1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲孕鈣化醇，下文記作2-Mpregna(圖1C)；(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲雙高孕鈣化醇，下文記作2-MbisP(圖1D)；和1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲高孕鈣化醇，下文記作2-MP(圖1E)；圖2為1，25(OH)219-去甲-D3、2-Mpregna、2-MbisP、2-MP和1，25(OH)2D3同[3H]-1，25-(OH)2-D3競爭與全長重組大鼠維生素D受體結(jié)合的相對活性圖；圖3為顯示HL-60細(xì)胞分化百分比隨1，25(OH)219-去甲-D3、2-Mpregna、2-MbisP、2-MP和1，25(OH)2D3濃度變化的圖；圖4A-4C為1，25(OH)2D3和1，25(OH)219-去甲-D3的骨鈣動(dòng)員活性同2-MbisP(圖4A)、2-Mpregna(圖4B)和2-MP(圖4C)相比較的條狀圖；圖5A-5C為1，25(OH)2D3和1，25(OH)219-去甲-D3的腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)活性同2-MbisP(圖4A)、2-Mpregna(圖4B)和2-MP(圖4C)相比較的條狀圖；圖6為給藥1，25(OH)2D3和1，25(OH)219-去甲-D3慢性劑量的雌性大鼠的血清鈣水平與給藥2-MbisP(圖4A)、2-Mpregna(圖4B)和2-MP(圖4C)相比較的條狀圖；圖7為此處發(fā)現(xiàn)并闡明的通過原子位置參數(shù)確定的2-MbisP的三維結(jié)構(gòu)圖。
具體實(shí)施例方式
合成并測試(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇(此處記作2-MbisP)。該19-去甲類似物的結(jié)構(gòu)特征如本文前述結(jié)構(gòu)通式I所示。
具有基本結(jié)構(gòu)I的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的制備可由普通的常規(guī)方法實(shí)現(xiàn)，即雙環(huán)溫道斯-格倫德曼型酮II與烯丙基氧化膦III縮合得到對應(yīng)的2-亞甲基-19-去甲維生素D類似物IV，然后去掉后面化合物IV中的C1和C3位保護(hù)得到化合物I即2-MbisP。
在結(jié)構(gòu)II、III和IV中，基團(tuán)Y1和Y2為羥基保護(hù)基，本領(lǐng)域中眾所周知，任何可能會易于發(fā)生或妨礙縮合反應(yīng)的官能團(tuán)都應(yīng)得到適宜的保護(hù)。上述過程代表一種縮合原理的應(yīng)用，該原理有效應(yīng)用于制備維生素D類化合物中[如Lythgoe等，J.Chem.Soc.Perkin Trans.I，590(1978)；Lythgoe，Chem.Soc.Rev.9，449(1983)；Toh等，J.Org.Chem.48，1414(1983)；Baggiolini等，J.Org.Chem 51，3098(1986)；Sardina等，J.Org.Chem.51，1264(1986)；J.Org.Chem.51，1269(1986)；Deluca等，第5,086,191號專利；Deluca等，第5,536,713號美國專利]。
結(jié)構(gòu)通式II的茚烷酮是已知的，或可以由已知方法制備。
為制備所需的結(jié)構(gòu)通式III所示的氧化膦，如Perlman等，Tetrahedron Lett.32，7663(1991)和Deluca等第5,086,191號美國專利所述，發(fā)展出一種從奎尼酸甲酯(methyl quinicate)衍生物開始的合成路線。奎尼酸甲酯易于由市售(1R，3R，4S，5R)-(-)-奎尼酸制備。
化合物I的全部合成過程在題為“2-亞烷基-19-去甲-維生素D類化合物”的第5,843,928號美國專利以及題為“1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲高孕鈣化醇及其應(yīng)用”的第6,440,953號美國專利中有更為全面的闡釋和描述。
在說明書和權(quán)利要求書中應(yīng)用的“羥基保護(hù)基”一詞表示任意可以用作起到暫時(shí)保護(hù)羥基作用的基團(tuán)，例如，烷氧基羰基、?；?、烷基甲硅烷基或烷基芳基甲硅烷基等基團(tuán)(此處指簡單如“甲硅烷基”的基團(tuán))，以及烷氧基烷基。烷氧基羰基保護(hù)基為烷基-O-CO-基團(tuán)組，如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、丁氧基羰基、異丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、芐氧基羰基或烯丙氧基羰基?！磅；币辉~表示含有1到6個(gè)碳的烷酰基及其所有的異構(gòu)體形式，或1到6個(gè)碳的羧基烷酰基，如乙二酰、丙二酰、琥珀酰、戊二酰，或如苯甲?；螓u代、硝代或烷基取代的苯甲酰基團(tuán)的芳香?；鶊F(tuán)。權(quán)利要求書的描述中所使用的“烷基”一詞表示1到10個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基以及其所有的異構(gòu)體形式。烷氧基烷基保護(hù)基指如甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧乙氧基甲基或四氫呋喃基和四氫吡喃基。優(yōu)選的甲硅烷基保護(hù)基為三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔-丁基二甲基甲硅烷基、二丁基甲基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基、苯基二甲基甲硅烷基、二苯基-叔-丁基甲硅烷基和類似的烷基化甲硅烷基基團(tuán)。“芳基”一詞具體指苯基或烷基、硝基或鹵取代的苯基基團(tuán)。
“保護(hù)的羥基”基團(tuán)為任意由上述通常用于暫時(shí)或永久保護(hù)羥基的基團(tuán)如甲硅烷基、烷氧基烷基、?；蛲檠趸驶苌虮Ｗo(hù)的羥基。術(shù)語“羥烷基”、“氘代烷基”、“氨基烷基”、“鹵素烷基”、“烷氧基烷基”、“芳氧基烷基”和“氟代烷基”指烷基基團(tuán)分別為一個(gè)或多個(gè)羥基、氘、氨基、鹵素、烷氧基、芳氧基或氟基團(tuán)取代?！胞u素”基團(tuán)包括構(gòu)成元素周期表第VIIA族一部分的五種元素氟、氯、溴、碘、砹中的任何一種。
現(xiàn)在參看合成路線圖I-III，它們表示三種不同的從維生素D2開始的合成2-MbisP的方法。起始的5步在每種得到保護(hù)的20(S)-醛的合成方法中都是相同的(見合成路線圖I)。之后，在合成路線圖I和II中醛轉(zhuǎn)化成保護(hù)的20(S)-醇，該醇的側(cè)鏈又通過兩種不同的方式轉(zhuǎn)化為雙高(bis-homo)(合成路線圖I對合成路線圖II)。對比之下，合成路線圖III表示直接將保護(hù)的20(S)-醛轉(zhuǎn)化為雙高側(cè)鏈。



合成路線圖III
(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的生物活性與lα，25-二羥維生素D3相比，1α-羥基-19-去甲孕鈣化醇的2-位引入亞甲基基團(tuán)對與豬腸內(nèi)維生素D受體的結(jié)合影響很小或無影響。同基準(zhǔn)的1，25-(OH)2D3相比，該化合物與豬受體有同樣良好的結(jié)合(圖2)。從這些結(jié)果可能可以預(yù)期該化合物具有等效的生物活性。但令人驚奇的是，2-MbisP中的2-亞甲基取代產(chǎn)生了具有獨(dú)特生物活性的高選擇性類似物。
圖4B顯示與1，25-二羥基維生素D3(1，25(OH)2D3)相比2-MbisP在刺激腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)方面具有非常小的活性。
圖5B顯示與1，25(OH)2D3相比，2-MbisP的骨鈣激活活性非常小。
因此，圖4B和5B顯示出2-MbisP的特征可能是具有很小——如果有——的高鈣血活性。
圖3顯示2-MbisP對HL-60的分化幾乎同1，25(OH)2D3一樣有效，使其成為優(yōu)秀的治療牛皮癬和癌癥的候選藥，尤其是治療白血病、結(jié)腸癌、乳腺癌和前列腺癌。此外，由于其相對高的細(xì)胞分化活性，該化合物可用于治療各種皮膚癥象，包括皺紋、缺乏足夠的皮膚水合作用即皮膚干燥、皮膚不緊縮即皮膚松弛和皮脂分泌不足。從而應(yīng)用該化合物不僅可以增加皮膚的水分，還可以提高皮膚的屏障功能。
圖6顯示大鼠服用慢性劑量的2-MbisP后血清鈣的分析。這些數(shù)據(jù)提供了對圖4B和5B中數(shù)據(jù)的進(jìn)一步支持，證明2-MbisP具有很小的高血鈣活性，因此在推薦劑量下相對不易引起高血鈣。
Sicinski等(J.Med.Chem.41，4662-4674，1998)描述的一連串的體外和體內(nèi)分析被用于將2-Mpregna、2-MbisP和2-MP的生物活性與1，25(OH)219-去甲-D3和天然維生素D激素1，25(OH)2D3相比。
Ostrem等(J.Biol.Chem.262，14164-14171，1987)對HL-60前髓細(xì)胞到單細(xì)胞的分化進(jìn)行了測定。
數(shù)據(jù)解釋VDR結(jié)合與HL60細(xì)胞分化。2-MbisP、2-Mpregna和2-MP同[3H]-1，25-(OH)2-D3競爭與全長重組大鼠維生素D受體結(jié)合的能力(圖2)幾乎相等(2-MbisP、2-Mpregna和2-MP的Ki各為0.3、0.6和0.3nM)。并且，這三種化合物的競爭結(jié)合活性與1，25(OH)219-去甲-D3(Ki＝0.2nM)及天然激素1，25(OH)2D3(Ki＝0.2nM)相似。這5種化合物除2-Mpregna(EC50＝17nM)略低于2-MbisP(EC50＝7nM)、2-MP(EC50＝6nM)、1，25(OH)219-去甲-D3(EC50＝4nM)和1，25-(OH)2-D3(EC50＝5nM)外促進(jìn)HL-60分化的能力(效力或力量)沒有什么區(qū)別(見圖3)。該結(jié)果顯示由于其對引起細(xì)胞分化及抑制細(xì)胞分解的直接細(xì)胞活性，2-MbisP對牛皮癬將十分有效。該結(jié)果還顯示其作為抗腫瘤劑亦將具有顯著的活性，特別是治療白血病、結(jié)腸癌、乳腺癌和前列腺癌，以及可用于治療如皮膚干燥(缺乏皮膚水合作用)、過度皮膚松弛(皮膚不緊縮)、皮脂分泌不足和皺紋等皮膚癥象。
維生素D缺乏動(dòng)物的骨鈣動(dòng)員及腸鈣吸收。對維生素D缺乏大鼠喂低鈣餐(0.02％)，測定這些化合物在腸和骨中的活性。與預(yù)期一致的是天然激素(1，25(OH)2D3)在所有劑量下都提高血鈣水平(圖4)。圖4還顯示2-MbisP、2-Mpregna和2-MP具有很小——如果有——的骨鈣動(dòng)員活性。2-MbisP、2-Mpregna、2-MP或1，25(OH)219-去甲-D3在260pmol/天的劑量下給藥7天并沒引起骨鈣動(dòng)員，提高2-MbisP、2-Mpregna和2-MP的劑量到1300pmol/天(5倍)也無效。對1，25(OH)219-去甲-D3也有相似的發(fā)現(xiàn)。
采用同組動(dòng)物以腸囊外翻法評價(jià)腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)(圖5)。結(jié)果顯示2-MbisP、2-Mpregna在260或1300pmol/天的劑量下服用都不提高腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)，而1，25(OH)2D3在260pmol/天的劑量下即可顯著提高腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)。相對于2-MbisP和2-Mpregna，2-MP顯示與1，25(OH)2D3在本濃度及5倍更高濃度下腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)活性相等，但更高的劑量卻降低其活性。如圖4所示，1，25(OH)219-去甲-D3與2-MbisP和2-Mpregna衍生物相似，不具備腸鈣轉(zhuǎn)運(yùn)活性。
維生素D充足動(dòng)物中血清鈣對正常鈣餐的反應(yīng)。同1，25(OH)219-去甲-D3和1，25(OH)2D3相比，2-MbisP、2-Mpregna和2-MP不能在正常動(dòng)物中產(chǎn)生高血鈣，由此例證了其優(yōu)點(diǎn)。在圖6所示的試驗(yàn)中，正常雌性大鼠給1，25(OH)2D32500pmol/天共7天或給2-MbisP、2-Mpregna、2-MP或1，25(OH)219-去甲-D35000pmol/天。上述劑量分成兩組分別通過口服或腹腔注射給藥，最后一次給藥后4小時(shí)測定其血清鈣水平。不管是哪種途徑，接受1，25(OH)2D3的動(dòng)物都顯示出高血鈣，一些嚴(yán)重的甚至需要安樂死。同樣的，1，25(OH)219-去甲-D3產(chǎn)生明顯的高血鈣。對比之下，接受2-MP，2-MbisP和2-Mpregna的動(dòng)物中都沒有觀察到血清鈣的升高。
這些結(jié)果顯示2-MbisP是許多人類療法的優(yōu)良的候選藥物，其可能用于許多病癥，如自身免疫性疾病、癌癥和牛皮癬。2-MbisP是優(yōu)良的治療牛皮癬的藥物的原因是(1)它具有顯著的VDR結(jié)合及細(xì)胞分化活性；(2)與1，25(OH)219-去甲-D3和1，25(OH)2D3不同，它不具有高血鈣傾向；以及(3)它易于合成。由于2-MbisP具有顯著的維生素D受體結(jié)合活性且?guī)缀鯖]有提高血清鈣的能力，它也可以用于治療腎性骨營養(yǎng)不良。
為了治療的目的，結(jié)構(gòu)式I所示的本發(fā)明化合物可以依照本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法設(shè)計(jì)成為下列劑型以供藥用在無毒溶劑中的溶液劑，或在適宜溶劑或載體中的乳劑、懸浮劑或分散劑，或加入固體載體的丸劑、片劑或膠囊劑。任意類似劑型還可以包含其他藥物學(xué)可接受的無毒的賦形劑，如穩(wěn)定劑、抗氧劑、粘合劑、著色劑或乳化劑或矯味劑。
該化合物可以口服、局部、非胃腸道或透皮給藥。該化合物利于以注射或靜脈滴注或適宜的無菌溶液，或以通過食道的液體或固體制劑，或以霜?jiǎng)④浉?、糊劑或類似適于透皮應(yīng)用的藥物載體的形式給藥。從每天0.01微克到100微克的化合物都適用于治療目的，如本領(lǐng)域所了解，該劑量可以根據(jù)所治療的疾病、其嚴(yán)重程度及患者的反應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。由于該化合物顯示出活性的特殊性，其可能適于單獨(dú)給藥，或與梯級劑量的其他活性維生素D類化合物，如1α-羥基維生素D2或D3、或1α，25-二羥基維生素D3，在不同程度的骨礦物質(zhì)動(dòng)員及鈣轉(zhuǎn)運(yùn)有益的情況下一起給藥。
在上述治療中使用的組合物包括有效量的結(jié)構(gòu)式I所示(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇作為有效成分及適宜的載體。根據(jù)本發(fā)明，該化合物的有效量為每克組合物中含有從0.01微克到100微克的該化合物，并且可以每天0.01微克到100微克的劑量通過局部、透皮、口服或非胃腸道方式給藥。
該化合物可以制備成霜?jiǎng)?、洗劑、軟膏、局部貼劑、丸劑、膠囊、或片劑，或液體形式如在藥物上無毒并可接受的溶劑或油中的溶液、乳劑、分散劑、混懸劑等劑型，并且該制劑可以含有另外的其他藥物上無毒且有益的成分，如穩(wěn)定劑、抗氧劑、乳化劑、著色劑、粘合劑或矯味劑。
該化合物利于在足夠作用于前髓細(xì)胞分化成正常巨噬細(xì)胞的劑量下應(yīng)用。上述劑量是適宜的，并且如本領(lǐng)域所了解，該劑量可以根據(jù)所治療疾病的嚴(yán)重程度及患者的病情和反應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。
本發(fā)明劑型包含活性成分以及與之相關(guān)的藥物上可接受的載體，還可選地包含其他治療成分。該載體必須與劑型中其他成分相容并且對應(yīng)用的患者無毒，從而是“可以接受的”。
本發(fā)明適于口服的劑型可以是分散單元的形式，如膠囊、小藥囊或錠劑，其都含有既定量的活性成分；散劑或顆粒劑；在水性液體或非水液體中的溶液劑或混懸劑；或水包油或油包水型的乳劑。
直腸給藥的劑型可以是混合了活性成分及載體如可可油的栓劑，或灌腸劑。
非胃腸道給藥的劑型方便地包含活性成分消毒的油或水制劑，其優(yōu)選為與患者血液等滲。
適于局部應(yīng)用的劑型包括如擦劑、洗劑、applicants、水包油或油包水型乳劑如霜?jiǎng)?、軟膏或糊劑；或溶液劑或混懸劑如滴劑；或噴霧劑。
用于治療哮喘時(shí)，可使用分散于噴霧罐、霧化吸入器或噴霧器中的粉末吸入劑、自推進(jìn)劑或噴霧劑。當(dāng)分散時(shí)，這些劑型的粒徑優(yōu)選為10到100微米。
劑型可以方便地呈現(xiàn)為劑量單位形式并可由藥學(xué)領(lǐng)域所熟知的任何方法制備。“劑量單位”一詞指單位的，也就是含有所述活性成分或其與固態(tài)或液態(tài)藥物稀釋劑或載體的混合物，能夠應(yīng)用于患者的物理化學(xué)穩(wěn)定的單位劑量。
2-MbisP的重結(jié)晶本發(fā)明還提供了晶體形式的2-亞甲基-19-去甲-20(S)-1α-羥基雙高孕鈣化醇(2-MbisP)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種有價(jià)值的提純2-MbisP的方法。該提純技術(shù)包括通過提純過程得到2-MbisP產(chǎn)物的晶體形式。在該提純過程中，待提純的2-MbisP溶解于含有丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、氯仿、二氯甲烷或二乙醚的單溶劑系統(tǒng)中。優(yōu)選的溶劑為丙酮。然后，可在或不在真空中蒸發(fā)或用所熟知的其他方法除去溶劑。該技術(shù)可以用于純化大范圍的含有由其任意已知合成方法得到2-MbisP的最終產(chǎn)物，還可用于不同濃度，如從微克量到千克量。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，可以根據(jù)所需純化的2-MbisP量最小化或調(diào)整溶劑量。
本重結(jié)晶過程的用處和優(yōu)點(diǎn)如下具體實(shí)施例1和2所示。重結(jié)晶后，所析出物質(zhì)在顯微鏡下觀察，證實(shí)為其晶體形式。此外，用X-射線衍射進(jìn)行分析。重結(jié)晶產(chǎn)量高且所得晶體顯示出相對較準(zhǔn)確的熔點(diǎn)(熔程相對較窄)162～164℃。
所述的2-MbisP合成產(chǎn)物的重結(jié)晶過程代表了一種有價(jià)值的純化方法。其不僅可以除去一些來自合成路線中的副產(chǎn)物，并且還可除去伴隨的1α-羥基D4。這種雜質(zhì)來自于天然麥角甾醇22，23-二氫類似物對天然麥角甾醇的污染。
實(shí)施例實(shí)施例1從丙酮中重結(jié)晶(a)將所需純化的2-MbisP產(chǎn)物在氬氣環(huán)境下溶解于沸騰的丙酮(1.2ml，Aldrich)中，室溫(68°F)下放置數(shù)小時(shí)(1～3小時(shí))，然后在冰箱中(35～45°F)過夜(8～12小時(shí))。所析出晶體過濾，用少量冷(0℃)丙酮洗滌，干燥。
(b)然后用步驟1(a)中所述丙酮(0.5ml)重結(jié)晶該2-MbisP晶體。所析出的晶體具有相對較準(zhǔn)確的熔點(diǎn)(熔程相對較窄)162～164℃。
實(shí)施例2試驗(yàn)例用大小為0.40×0.25×0.03mm的無色盤狀晶體進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。用配備在平臺角度計(jì)上的Siemens HISTAR面探測儀以Goebel光學(xué)器件聚焦CuKα發(fā)光(λ＝1.54178埃)采集其強(qiáng)度數(shù)據(jù)。將晶體置于涂有真空潤滑油的尼龍布上，在環(huán)境溫度(293°K)下采集數(shù)據(jù)。測量一系列每個(gè)0.25°的ω振動(dòng)幀得到其強(qiáng)度數(shù)據(jù)；其包括5次探測器2θ為-85°的掃描(每次500張圖像，每張40秒)和2次探測器2θ為-40°的掃描(每次500張圖像，每張20秒)。探測器在512×512模式下置于距離樣品6厘米處工作。單一數(shù)據(jù)的范圍為95.4％，達(dá)θ中的58.88度。最初50幀在數(shù)據(jù)采集終點(diǎn)重復(fù)，顯示出在數(shù)據(jù)采集中晶體衍射基本沒有衰減。在4.38＜θ＜58.88°范圍內(nèi)共測量了6917個(gè)數(shù)據(jù)。用SAINT(Bruker-AXS，Inc.)將數(shù)據(jù)合并并換算成一組2697個(gè)R(int)＝0.0562的獨(dú)立數(shù)據(jù)。
斜方空間群P2(1)2(1)2(1)由系統(tǒng)消光及統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)測定，并由其后的求精(refinement)確證。用直接法得到其結(jié)構(gòu)并以SHELXL-97(G.M.Sheldrick，1994；SHELXTL Version 5 Reference Manual，Bruker-AXS，Inc.)用F2的滿矩陣最小平方法求精(refined)。氫原子的位置最初在傅立葉微分圖(Fourier difference maps)中，且由具有理想幾何學(xué)特征的riding模型求精。非氫原子由各項(xiàng)異性置換參數(shù)求精。對總共229個(gè)參數(shù)進(jìn)行0制約求精，由2697個(gè)數(shù)據(jù)得出wR(F2)＝0.1369和S＝1.088，權(quán)重為w＝1/[s2(F2)+(0.0824P)2]，其中P＝[Fo2+2Fc2]/3。對于2697個(gè)觀察到的[F＞2s(F)]數(shù)據(jù)，最終的R(F)為0.0544。最終的微分圖的最大和最小值分別為0.126和-0.153e/3。
由隨后的物理數(shù)據(jù)和此處描述和計(jì)算的原子位置參數(shù)確定的2-MbisP的三維結(jié)構(gòu)如圖7所示。
表12-MbisP的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)精修經(jīng)驗(yàn)式 C23H36O2分子量 344.52溫度 293(2)K波長 1.54178晶體系統(tǒng)，空間群 斜方的，P2(1)2(1)2(1)晶胞大小 a＝6.6320(13) α＝90°b＝15.514(3)β＝90°c＝20.194(4)γ＝90°體積 2077.7(7)Z，計(jì)算密度 4，1.101Mg/m3吸收系數(shù) 0.520mm-1F(000) 760結(jié)晶粒度 0.40×0.25×0.03mm數(shù)據(jù)采集的θ范圍 4.38～58.88°限制指標(biāo) -7＜＝h＜＝5，-12＜＝k＜＝17，-22＜＝1＜＝21反射采集/單值6917/2697[Rint＝0.0562]θ＝25.00完成度 95.4％精修方法 F2滿矩陣最小平方法數(shù)據(jù)/限定/參數(shù) 2697/0/229F2吻合度1.088最終R指數(shù)[I＞2Sigma(I)] R1＝0.0544，wR2＝0.1369R指數(shù)(所有數(shù)據(jù)) R1＝0.0622，wR2＝0.1453最大差異峰谷值 0.126和-0.153e/A-3
表22-MbisP的原子坐標(biāo)(×104)和等量各向同性位移參數(shù)(2×103)U(eq)定義為正交化Uij張量跡的1/3x y z U(eq)O(1)1842(3)3525(1)5011(1)62(1)O(3)7954(4)3113(1)4476(2)78(1)C(1)3883(5)3729(2)4852(2)50(1)C(2)4569(5)3359(2)4201(2)58(1)C(3)6698(5)3569(2)4030(2)61(1)C(4)7074(6)4537(2)4057(2)59(1)C(5)6301(5)4937(2)4686(2)48(1)C(6)7497(5)5433(2)5059(2)52(1)C(7)7012(5)5872(2)5673(2)53(1)C(8)8248(5)6371(2)6020(2)50(1)C(9)10390(5) 6589(2)5828(2)65(1)C(10) 4161(5)4704(2)4851(2)51(1)C(11) 10739(6) 7562(2)5809(2)70(1)C(12) 10108(6) 8006(2)6452(2)61(1)C(13) 7933(5)7806(2)6640(1)47(1)C(14) 7696(5)6814(2)6661(2)50(1)C(15) 5663(6)6668(2)6982(2)62(1)C(16) 5453(5)7416(2)7474(2)59(1)C(17) 7251(5)8038(2)7353(2)51(1)C(18) 6466(6)8205(2)6135(2)64(1)C(19) 3405(7)2898(3)3811(2)97(2)C(20) 6703(6)8967(2)7542(2)65(1)C(21) 6012(8)9017(3)8269(2)92(2)C(22) 8368(7)9636(2)7418(2)89(1)C(23) 10284(9) 9512(3)7809(3)116(2)
表32-MbisP的鍵長[]和鍵角[°]O(1)-C(1) 1.426(4)O(3)-C(3) 1.416(4)C(1)-C(2) 1.505(5)C(1)-C(10) 1.524(4)C(2)-C(19) 1.314(5)C(2)-C(3) 1.490(5)C(3)-C(4) 1.522(4)C(4)-C(5) 1.504(5)C(5)-C(6) 1.335(4)C(5)-C(10) 1.502(5)C(6)-C(7) 1.452(4)C(7)-C(8) 1.327(4)C(8)-C(9) 1.511(5)C(8)-C(14) 1.511(4)C(9)-C(11) 1.527(5)C(11)-C(12) 1.530(5)C(12)-C(13)1.523(5)C(13)-C(18) 1.539(5)C(13)-C(14)1.548(4)C(13)-C(17) 1.553(4)C(14)-C(15)1.513(5)C(15)-C(16) 1.534(5)C(16)-C(17)1.553(5)C(17)-C(20) 1.535(5)C(20)-C(22)1.536(6)C(20)-C(21) 1.540(5)C(22)-C(23)1.508(7)O(1)-C(1)-C(2) 113.5(2)O(1)-C(1)-C(10) 109.6(2)C(2)-C(1)-C(10)109.9(3)C(19)-C(2)-C(3) 122.5(3)C(19)-C(2)-C(1)123.6(3)C(3)-C(2)-C(1) 113.9(3)O(3)-C(3)-C(2) 107.5(3)O(3)-C(3)-C(4) 111.9(3)C(2)-C(3)-C(4) 111.3(3)C(5)-C(4)-C(3) 112.5(3)C(6)-C(5)-C(10)125.1(3)C(6)-C(5)-C(4) 120.7(3)C(10)-C(5)-C(4)114.2(3)C(5)-C(6)-C(7) 128.3(3)C(8)-C(7)-C(6) 126.0(3)C(7)-C(8)-C(9) 125.1(3)C(7)-C(8)-C(14)124.6(3)C(9)-C(8)-C(14) 110.3(3)C(8)-C(9)-C(11)111.7(3)C(5)-C(10)-C(1) 110.8(2)C(9)-C(11)-C(12) 112.5(3)C(13)-C(12)-C(11) 112.2(3)C(12)-C(13)-C(18) 110.6(3)C(12)-C(13)-C(14) 107.8(3)C(18)-C(13)-C(14) 110.8(3)C(12)-C(13)-C(17) 117.3(3)C(18)-C(13)-C(17) 109.7(3)C(14)-C(13)-C(17) 100.1(2)C(15)-C(14)-C(8) 121.0(3)C(15)-C(14)-C(13) 104.6(3)C(8)-C(14)-C(13) 113.8(2)C(14)-C(15)-C(16) 104.2(3)C(15)-C(16)-C(17) 107.4(3)C(20)-C(17)-C(16) 111.3(3)C(20)-C(17)-C(13) 121.2(3)C(16)-C(17)-C(13) 103.0(2)C(22)-C(20)-C(17) 115.0(3)C(22)-C(20)-C(21) 109.6(3)C(17)-C(20)-C(21) 110.8(3)C(23)-C(22)-C(20) 115.7(4)
表42-MbisP的各向異性位移參數(shù)(2×103)各向異性系數(shù)指數(shù)形式為-2π2[h2a*2U11+…+2hka*b*U12]U11U22 U33 U23 U13 U12O(1)36(1) 59(1)92(2) -7(1) -3(1) -5(1)O(3)42(1) 48(1)145(2)3(1) -17(2)2(1)C(1)34(2) 45(2)70(2) -5(2) -11(2)-1(1)C(2)39(2) 51(2)83(2) -21(2)-14(2)6(1)C(3)55(2) 52(2)75(2) -19(2)-7(2) 8(2)C(4)60(2) 56(2)61(2) -2(2) 2(2) 0(2)C(5)52(2) 34(1)58(2) 3(1) -5(2) 1(1)C(6)51(2) 45(2)61(2) 2(1) 5(2) -9(2)C(7)56(2) 42(2)62(2) 2(1) 6(2) -8(2)C(8)47(2) 44(2)58(2) 3(1) -1(2) -10(2)C(9)48(2) 75(2)73(2) -15(2)3(2) -12(2)C(10) 44(2) 41(2)66(2) -11(1)-6(2) 4(1)C(11) 59(2) 78(2)72(2) -12(2)11(2) -32(2)C(12) 59(2) 61(2)63(2) -5(2) 1(2) -22(2)C(13) 43(2) 51(2)47(2) 5(1) -6(2) -7(2)C(14) 45(2) 52(2)53(2) 4(1) -4(2) -8(2)C(15) 53(2) 64(2)69(2) 1(2) 9(2) -19(2)C(16) 48(2) 71(2)58(2) 3(2) 4(2) 0(2)C(17) 49(2) 53(2)50(2) 1(1) -7(2) -1(2)C(18) 71(3) 66(2)57(2) 10(2) -11(2)-5(2)C(19) 53(3) 122(4) 117(3)-68(3)-9(3) -8(2)C(20) 73(3) 59(2)64(2) -5(2) -2(2) 8(2)C(21) 117(4) 82(3)76(2) -16(2)20(3) 9(3)C(22) 104(4) 63(2)99(3) -12(2)18(3) -6(2)C(23) 107(4) 101(4) 140(5)-39(3)-4(4) -25(3)
表52-MbisP的氫坐標(biāo)(×104)和各向同性位移參數(shù)(2×103)x y z U(eq)H(10) 20302820518875H(30) 92483381457394H(1) 47443489520160H(3) 69723366358073H(4A) 85104644402171H(4B) 64184808368271H(6) 88075506490463H(7) 57165796584064H(9A) 10678 6347539578H(9B) 11311 6330614478H(10A)32614960452861H(10B)38174933528461H(11A)99797806544484H(11B)12157 7673572884H(12A)10992 7820680774H(12B)10264 8624640374H(14) 86906614698660H(15A)56276117721074H(15B)45926682665574H(16A)54827201792571H(16B)41867714740571H(17) 83377857765261H(18A)67808804607797H(18B)51098148629597H(18C)65937911571997H(19A)390426893412117H(19B)208327803935117H(20) 55479133726878H(21A)703787798551138H(21B)478586978323138H(21C)578396098388138H(22A)870396276950106H(22B)783210203 7518 106H(23A)997495028273174H(23B)11194 99787717174H(23C)10902 89767684174
表62-MbisP的扭轉(zhuǎn)角[°]O(1)-C(1)-C(2)-C(19) 0.5(5) C(10)-C(1)-C(2)-C(19) -122.6(4)O(1)-C(1)-C(2)-C(3) 179.9(3)C(10)-C(1)-C(2)-C(3) 56.8(3)C(19)-C(2)-C(3)-O(3) -111.3(4) C(1)-C(2)-C(3)-O(3) 69.2(3)C(19)-C(2)-C(3)-C(4) 125.8(4)C(1)-C(2)-C(3)-C(4) -53.7(4)O(3)-C(3)-C(4)-C(5) -71.4(4)C(2)-C(3)-C(4)-C(5) 48.9(4)C(3)-C(4)-C(5)-C(6) 128.0(3)C(3)-C(4)-C(5)-C(10) -50.1(4)C(10)-C(5)-C(6)-C(7) -2.4(5) C(4)-C(5)-C(6)-C(7) 179.7(3)C(5)-C(6)-C(7)-C(8) -178.8(3) C(6)-C(7)-C(8)-C(9) 1.4(5)C(6)-C(7)-C(8)-C(14) -179.6(3) C(7)-C(8)-C(9)-C(11) 125.7(3)C(14)-C(8)-C(9)-C(11)-53.4(4)C(6)-C(5)-C(10)-C(1) -125.0(3)C(4)-C(5)-C(10)-C(1) 53.1(3) O(1)-C(1)-C(10)-C(5) 179.9(2)C(2)-C(1)-C(10)-C(5) -54.7(3)C(8)-C(9)-C(11)-C(12) 53.0(4)C(9)-C(11)-C(12)-C(13) -54.6(4)C(11)-C(12)-C(13)-C(18) -66.8(4)C(11)-C(12)-C(13)-C(14) 54.5(4) C(11)-C(12)-C(13)-C(17) 166.4(3)C(7)-C(8)-C(14)-C(15)3.9(5) C(9)-C(8)-C(14)-C(15) -177.0(3)C(7)-C(8)-C(14)-C(13)-122.0(3) C(9)-C(8)-C(14)-C(13) 57.2(4)C(12)-C(13)-C(14)-C(15) 168.8(3)C(18)-C(13)-C(14)-C(15) -70.1(3)C(17)-C(13)-C(14)-C(15) 45.6(3) C(12)-C(13)-C(14)-C(8)-57.1(3)C(18)-C(13)-C(14)-C(8) 64.1(4) C(17)-C(13)-C(14)-C(8)179.7(3)C(8)-C(14)-C(15)-C(16) -163.1(3) C(13)-C(14)-C(15)-C(16) -33.1(3)C(14)-C(15)-C(16)-C(17) 7.4(4) C(15)-C(16)-C(17)-C(20) 151.9(3)C(15)-C(16)-C(17)-C(13) 20.6(3) C(12)-C(13)-C(17)-C(20) 79.2(4)C(18)-C(13)-C(17)-C(20) -48.2(4)C(14)-C(13)-C(17)-C(20) -164.7(3)C(12)-C(13)-C(17)-C(16) -155.7(3) C(18)-C(13)-C(17)-C(16) 76.9(3)C(14)-C(13)-C(17)-C(16) -39.5(3)C(16)-C(17)-C(20)-C(22) -178.0(3)C(13)-C(17)-C(20)-C(22) -56.8(5)C(16)-C(17)-C(20)-C(21) 56.9(4)C(13)-C(17)-C(20)-C(21) 178.1(3)C(17)-C(20)-C(22)-C(23) -62.9(5)C(21)-C(20)-C(22)-C(23) 62.8(5)
表7 2-MbisP觀測與計(jì)算得到的結(jié)構(gòu)因子h k l 10Fo 10Fc 10s h k l 10Fo 10Fc 10s hk l10Fo10Fc10s h kl10Fo10Fc 10shkl 10Fo10Fc 10s4 0 0 5150 32 8 0 211 1963 -5 1 1107 120 2 5 4127 26 4 181 69 68 26 0 0 4854 43 8 0 6664 1 -4 1 1162 152 4 6 4183 84 3 281 89 87 21 1 0 108 12514 8 0 315 3022 -2 1 1338 350 3 7 4137 41 6 381 152 14512 1 0 813 82310 5 8 0 6763 3 -1 1 11141120514-75158 45 5 481 54 51 64 1 0 448 43546 8 0 3828 6 11 11134120611-65126 18 16 581 67 59 45 1 0 6262 11 9 0 247 2607 41 1163 152 1 -55179 76 2 681 46 46 46 1 0 6572 22 9 0 243 2442 51 1109 120 2 -45144 46 1 -6 91 37 28 120 2 0 650 82083 9 0 193 1862 61 156 55 11-351136 1372 -5 91 84 71 31 2 0 510 51964 9 0 405 3983 71 119 16 18-251337 3364 -4 91 105 10312 2 0 8888 25 9 0 8 2 8 -7 2 138 15 7 -151171 1742 -3 91 156 15114 2 0 217 21326 9 0 8175 7 -6 2 141 44 4 0 51274 2942 -2 91 54 46 15 2 0 120 11710 10 0 119 1242 -5 2 128 16 5 1 51174 1742 -1 91 194 20186 2 0 3642 51 10 0 5449 1 -4 2 1256 252 5 2 51343 3364 091 227 23327 2 0 3749 72 10 0 127 1241 -3 2 1108 98 2 3 51126 1371 191 190 20171 3 0 352 37533 10 0 116 1151 -2 2 198 100 2 4 5145 46 2 291 50 46 32 3 0 3935 34 10 0 260 5 -1 2 1465 481 4 5 5182 76 3 391 157 15113 3 0 5855 25 10 0 6363 4 02 115 2 3 6 5124 18 14 491 114 10314 3 0 8480 11 11 0 7775 2 12 1478 482 4 7 5168 45 4 591 74 71 55 3 0 4342 82 11 0 4645 3 22 193 99 2 -66187 91 4 691 36 28 66 3 0 5451 53 11 0 1515 5 42 1257 252 2 -561125 1282 -5 10 1 54 57 47 3 0 347 74 11 0 142 1412 52 117 16 8 -46161 61 1 -4 10 1 107 11030 4 0 114 11825 11 0 4635 1462 141 44 6 -36177 73 1 -3 10 1 168 16611 4 0 173 30 12 0 5855 3 72 117 14 16-26173 71 2 -2 10 1 79 79 32 4 0 8882 11 12 0 6769 1 -7 3 141 49 6 -161327 3254 -1 10 1 139 14924 4 0 8787 12 12 0 145 1451 -6 3 152 50 4 0 61298 3288 010 1 127 13815 4 0 1915 18 3 12 0 4340 4 -5 3 1171 175 1 1 61326 3244 110 1 145 14816 4 0 9910454 12 0 3224 4 -4 3 1239 231 3 2 6162 70 2 210 1 74 79 17 4 0 6656 45 12 0 4536 4 -3 3 1457 454 6 3 6176 73 2 310 1 168 16511 5 0 174 71 13 0 269 7 -2 3 1306 308 4 4 6168 62 1 410 1 107 11022 5 0 7264 12 13 0 161 1641 -1 3 1375 403 4 5 61125 1292 510 1 62 57 43 5 0 108 10663 13 0 137 1411 03 1358 411 196 6189 91 2 -5 11 1 22 6 134 5 0 8682 14 13 0 4342 9 13 1394 402 3 -571152 1585 -4 11 1 77 79 25 5 0 3429 30 14 0 7984 2 23 1304 307 4 -471168 1651 -3 11 1 51 50 16 5 0 2922 61 14 0 4032 2 33 1472 455 6 -371138 1362 -2 11 1 70 71 17 5 0 5741 62 14 0 3226 4 43 1240 231 2 -271101 94 2 -1 11 1 92 93 20 6 0 645 70883 14 0 8789 2 53 1169 176 3 -171219 2193 011 1 98 10021 6 0 360 43750 4 14 0 4943 4 63 144 50 5 0 71223 2362 111 1 94 93 22 6 0 101 96 21 1 15 0 4353 3 73 154 49 5 1 71213 2203 211 1 68 71 13 6 0 3639 32 15 0 8287 2 -7 4 146 41 5 2 7191 93 2 311 1 52 50 24 6 0 1917 43 15 0 5349 3 -6 4 181 84 2 3 71136 1371 411 1 79 79 25 6 0 8076 50 16 0 2824 8 -5 4 134 26 204 71174 1651 511 1 6 6 56 6 0 4844 41 16 0 2518 5 -4 4 1171 165 1 5 71160 1582 -5 12 1 49 46 81 7 0 3128 32 16 0 1712 8 -3 4 1189 193 3 6 7133 17 24 -4 12 1 40 35 4
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hk l 10Fo 10Fc 10s hkl 10Fo 10Fc 10s hk l 10Fo 10Fc 10s hkl 10Fo 10Fc 10s hk l 10Fo 10Fc 10s12 15172165 3 2715 79 782 -1 2 16152147 1 47164 3 4 03 1740 28322 1541 374 3715 6 315 02 1636 222 -3 81662612 13 1758 55332 1533 363 4715 36 397 12 16153147 3 -2 81633244 23 1754 46442 1538 465 -4 815 35 326 22 1666 611 -1 81675736 33 1760 66252 1545 379 -3 815 48 536 32 1657 584 081648514 -4 4 1739 385-5 3 1560 575 -2 815 28 375 42 1645 594 181672732 -3 4 1746 433-4 3 1539 453 -1 815 47 424 -4 3 1640 469 281628245 -2 4 1760 573-3 3 1547 363 0815 120122 2 -3 3 1664 592 381662624 -1 4 1788 901-2 3 15134131 2 1815 49 422 -2 3 1625 163 -3 91623288 04 1712 5 11-1 3 1575 751 2815 40 3720-1 3 16137133 1 -2 91643473 14 1789 90203 15180165 1 3815 58 535 03 1636 202 -1 91648393 24 1755 57213 1578 741 -3 915 73 792 13 16137133 3 091630425 34 1744 43723 15133131 1 -2 915 37 395 23 1624 1712191642393 44 1724 381333 1533 363 -1 915 55 536 33 1659 593 291640473 -4 5 1752 49343 1540 466 0915 36 274 43 1640 467 3916262812-3 5 1743 36453 1543 576 1915 59 533 -4 4 1641 3810-2 10 1673784 -2 5 1742 394-5 4 1532 8 102915 41 397 -3 4 1658 552 -1 10 1625236 -1 5 17113109 1-4 4 1541 338 3915 63 799 -2 4 16104971 010 1625137 05 1770 682-3 4 1580 814 -3 10 15 45 454 -1 4 1680 751 110 1621239 15 17113109 2-2 4 1593 943 -2 10 15 21 227 04 1647 422 210 1672785 25 1736 394-1 4 1524 163 -1 10 15 59 483 14 1681 752 -1 11 1628131235 1731 36404 1590 921 010 15 17 151224 16105973 011 1630135 45 1738 49614 1538 164 110 15 46 483 34 1654 544 111 16171417-3 6 1745 7 524 1596 945 210 15 24 227 44 1627 389 012 1629187 -2 6 1726 17634 1584 812 310 15 32 446 -4 5 1641 384 101719 25 -1 6 1756 54244 1525 3312-2 11 15 39 383 -3 5 1626 9 7 201782713 06 1765 563-4 5 1545 334 -1 11 15 33 204 -2 5 1678 791 301778732 16 1760 533-3 5 1560 642 011 15 22 218 -1 5 1641 412 401715271526 1723 1722-2 5 15123127 1 111 15 25 208 05 1684 881 -4 11730325 36 1718 7 18-3 7 1757 583 1218 52 472 08 1855 653 -1 61919201824 2026 345-2 7 1796 982 2218 137126 3 18 1855 619 061929126 -2 5 2030 258-1 7 1758 624 3218 19 3 1928 1847 513 161931205 -1 5 2027 20607 1797 965 4218 20 3920-1 9 1839 415 261922298 05 2018 181717 1758 613 -4 318 43 297 09 1816 1213-2 71934151025 2021 25627 1792 983 -3 318 25 5 6 19 1842 416 -1 719162315-2 6 2030 18837 1764 584 -2 318 63 572 10 1915 6 150719272015-1 6 2028 265-3 8 1750 513 -1 318 29 234 20 1929 249 171932235 06 2020 5 11-2 8 1778 822 0318 54 534 30 1937 2520271913151216 2033 266-1 8 1731 328 2318 49 573 -3 1 1963 662 -1 81957583 07 2021 2 1508 1731 12113318 16 4 15-2 1 1948 543 081943414 17 2013 7 1218 1718 32184318 27 2918-1 1 1953 524 181954581310 2145 43428 1783 826 -3 418 14 4 1401 1917 8 12002041455 20 2133 28738 1741 516 -2 418 52 453 11 1954 523 1020131 131 3 -2 1 2161 696
hk l 10Fo 10Fc 10s h k l 10Fo 10Fc 10s hkl 10Fo 10Fc 10s hk l 10Fo 10Fc 10s hk l 10Fo 10Fc 10s-2 9 174954 3 -14 1835333 211952545 20 2046 364 -1 1 2150516-1 9 174437 4 0 4 1848472 311959662 30 2030 9 7 01 212119609 17351 9 1 4 1842324 -3 21936504 -3 1 2038 138 11 216151319 173637 4 2 4 1858453 -2 21948343 -2 1 2063 654 21 215569429 175554 2 4 4 18314410-1 21934294 -1 1 2034 375 -2 2 2127327-1 10 172721 4 -35 1843353 021929127 01 2038 433 -1 2 2144473010 17222 10-25 1852435 121919291011 2032 376 02 2128245110 171821 12-15 1853493 221934346 21 2065 656 12 214547500 18277 6 0 5 1852482 321942508 31 2034 139 22 2136321610 18129 1202 1 5 1853495 -3 31929146 -3 2 2046 47 10 -2 3 213937620 18197 1952 2 5 1846433 -2 31935244 -2 2 2072 712 -1 3 213717630 182320 113 5 1836358 -1 31945393 -1 2 2040 413 13 2125177-4 1 184850 4 -36 1823327 031935337 02 2034 10 13 23 21333711-3 1 184441 4 -26 1865663 131930395 12 2027 417 -1 4 21141914-2 1 188880 2 -16 1841374 231941244 22 2071 713 04 2141295-1 1 185249 2 0 6 188 1 8 -3 41924191032 2046 476 05 2129151401 182623 4 1 6 1827378 -2 41953542 -3 3 2058 583 15 211014911 185649 2 2 6 1862662 -1 41933313 -2 3 2039 374 00 222449421 188380 3 -37 18251710041950514 -1 3 2031 334 10 224435531 184041 6 -27 1845383 141920311003 2029 209 -1 1 223931641 183350 6 -17 1830175 241946545 13 2041 334 01 2227136-4 2 183439 140 7 18424515-2 51938277 23 2036 373 11 22213120-3 2 18173 141 7 18311719-1 51920109 -2 4 2040 343 02 2235376-2 2 18135 1261 2 7 1836383 0519191811-1 4 2053 474-1 2 185447 2 -28 1852513 251933281004 2031 30402 182320 6 -18 1861613 -2 61929296 14 2057 479
權(quán)利要求
1.具有如下結(jié)構(gòu)式的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇
2.晶體形態(tài)的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
3.如權(quán)利要求2所述的晶體形態(tài)，其具有由斜方空間群P2(1)2(1)2(1)所確定的分子斂集排列和晶胞大小a＝6.6、b＝15.5、c＝20.1、α＝90°、β＝90°和γ＝90°。
4.如權(quán)利要求3所述的參數(shù)確定的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的三維結(jié)構(gòu)。
5.一種治療牛皮癬的方法，其包括將有效量的具有如下結(jié)構(gòu)式的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇給藥于牛皮癬患者
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中口服給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中非胃腸道給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其中透皮給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
9.如權(quán)利要求5所述的方法，其中局部給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
10.如權(quán)利要求5所述的方法，其中(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇在制劑中的應(yīng)用的劑量為約0.01微克/天～100微克/天。
11.一種治療白血病、結(jié)腸癌、乳腺癌或前列腺癌的方法，其包括將有效量的具有如下結(jié)構(gòu)式的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇給藥于罹患上述疾病的患者
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中口服給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
13.如權(quán)利要求11所述的方法，其中非胃腸道給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
14.如權(quán)利要求11所述的方法，其中透皮給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
15.如權(quán)利要求11所述的方法，其中(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的給藥劑量為約0.01微克/天～100微克/天。
16.一種治療多發(fā)性硬化、lupis、糖尿病、宿主抗移植物反應(yīng)或器官移植中的排斥反應(yīng)的方法，其包括將有效量的具有如下結(jié)構(gòu)式的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇給藥于罹患上述疾病的患者
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中口服給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
18.如權(quán)利要求16所述的方法，其中非胃腸道給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
19.如權(quán)利要求16所述的方法，其中透皮給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
20.如權(quán)利要求16所述的方法，其中(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的給藥劑量為約0.01微克/天～100微克/天。
21.一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘，炎性腸疾病的方法，其包括將有效量的具有如下結(jié)構(gòu)式的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇給藥于罹患上述疾病的患者
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中口服給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中非胃腸道給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
24.如權(quán)利要求21所述的方法，其中透皮給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
25.如權(quán)利要求21所述的方法，其中(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的給藥劑量為約0.01微克/天～100微克/天。
26.一種治療選自以下組中的皮膚癥象的方法皺紋、皮膚松弛、皮膚水合作用缺乏和皮脂分泌不足，其包括將有效量的具有如下結(jié)構(gòu)式的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇給藥于罹患上述癥象的患者
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中口服給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
28.如權(quán)利要求26所述的方法，其中非胃腸道給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
29.如權(quán)利要求26所述的方法，其中透皮給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
30.如權(quán)利要求26所述的方法，其中局部給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
31.如權(quán)利要求26所述的方法，其中(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的給藥劑量為約0.01微克/天～100微克/天。
32.一種治療腎性骨營養(yǎng)不良的方法，其包括將有效量的具有如下結(jié)構(gòu)式的(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇給藥于腎性骨營養(yǎng)不良患者
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中口服給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
34.如權(quán)利要求32所述的方法，其中非胃腸道給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
35.如權(quán)利要求32所述的方法，其中透皮給藥(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇。
36.如權(quán)利要求32所述的方法，其中(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的給藥劑量為約0.01微克/天～100微克/天。
37.一種純化(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的方法，其包括以下步驟(a)在惰性氣體中沸騰選自以下組的溶劑丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、氯仿、二氯甲烷和二乙醚；(b)將要純化的含有(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇的產(chǎn)物溶解于上述溶劑中；(c)在環(huán)境溫度下冷卻該溶劑和溶解的產(chǎn)物足夠時(shí)間以析出(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇晶體；和(d)回收(20S)-1α-羥基-2-亞甲基-19-去甲-雙高孕鈣化醇晶體。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，還進(jìn)一步包括在環(huán)境溫度以下冷卻之前將上述溶劑和溶解的產(chǎn)物先冷卻到環(huán)境溫度的步驟。
39.如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述惰性氣體為氬氣。
40.如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述溶劑和溶解的產(chǎn)物冷卻至約35°F到約45°F。
41.如權(quán)利要求37所述的方法，其中回收步驟包括過濾。
42.如權(quán)利要求37所述的方法，還進(jìn)一步包括使用由用步驟(d)回收的晶體當(dāng)作步驟(b)的產(chǎn)品而重復(fù)步驟(a)到(d)的步驟(e)。
全文摘要
本發(fā)明涉及(20S)－1α－羥基－2－亞甲基－19－去甲－雙高孕鈣化醇、其藥物學(xué)用途和一種得到其晶體形式的此化合物的純化方法。該化合物顯示出顯著的抑制未分化細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)其分化為單細(xì)胞的作用，因此顯示出其可作為抗腫瘤劑，且其既可用于治療皺紋、皮膚松弛、皮膚干燥等皮膚癥象還可治療如牛皮癬等皮膚疾病。該化合物的致高鈣血作用即使有也很小，因此可以用于治療免疫性疾病和腎性骨營養(yǎng)不良。
文檔編號C07C401/00GK1620431SQ02828104
公開日2005年5月25日 申請日期2002年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月13日
發(fā)明者赫克托·F.·德盧卡, 洛里·A.·普拉姆, 瑪格麗特·克拉格特·達(dá)梅, 詹姆斯·B.·托登, 黑茲爾·M.·霍爾登, 蘇米斯拉·高盧加里, 帕維爾·格日瓦奇 申請人:威斯康星校友研究基金會