一種含有解淀粉芽孢桿菌hfj-7的復合雞糞腐熟發(fā)酵劑及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，涉及雞糞發(fā)酵劑配方，具體涉及一種含有解淀粉芽孢 桿菌HFJ-7的復合雞糞腐熟發(fā)酵劑及其應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 有機廢棄物種類繁多，包括多農(nóng)作物秸桿、畜禽糞便、生活垃圾及城市污泥等。畜 禽糞便是比較重要的有機廢棄物，近年來，已經(jīng)日益引起社會各界關(guān)照。去年11月，國務院 簽發(fā)《畜禽規(guī)模養(yǎng)殖污染防治條例》，自2014年1月1日起施行。條例規(guī)定，畜禽養(yǎng)殖廢棄 物未經(jīng)處理，不得直接向環(huán)境排放，條例中明確鼓勵對畜禽養(yǎng)殖廢棄物進行綜合利用。
[0003] 在對養(yǎng)殖廢棄物進行綜合利用前，必須按照國家與農(nóng)業(yè)部的標準，對其進行無公 害化處理，相對于焚燒、填埋等傳統(tǒng)處理方式，生物腐熟處理是比較新型、有效、綠色、環(huán) 保的處理方式。用于生物腐熟處理的發(fā)酵劑一般由微生物與酶制劑復合而成，微生物包 括多種能分解各種有機物料的細菌、真菌、放線菌，酶制劑則多根據(jù)需處理物料的組分而 做出相應的配合。雞糞中的粗蛋白一般為25% -30%，尿酸、氨、尿素等非蛋白氮一般為 30% -50%，粗纖維一般為12% -17%，如何有效利用利用這些營養(yǎng)物質(zhì)，變廢為寶，是雞糞 類有機廢棄物無公害化處理研發(fā)的方向。本發(fā)明選用篩選自辣椒根際土的解淀粉芽孢桿菌 HFJ-7,它可拮抗立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌、根腐病病原菌、黃瓜枯萎病病原菌、辣椒疫霉病 原菌等多種病原真菌，還可產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、尿素酶等酶類，考慮到雞糞中營養(yǎng)物質(zhì)種 類繁雜，在復合雞糞腐熟發(fā)酵劑配方中再添加中性纖維素酶、中性木聚糖酶、耐高溫脂肪酶 等多種酶類，旨在豐富其酶系組成，接種雞糞后能更迅速有效地酶解其碳水化合物、蛋白、 非蛋白氮、纖維素、半纖維素、脂肪等多種營養(yǎng)物質(zhì)，為解淀粉芽孢桿菌在雞糞中的萌發(fā)、生 長、繁殖等生命活動提供足夠的養(yǎng)分與能量。耐高溫脂肪酶的加入，還可在發(fā)酵中期環(huán)境溫 度較高時持續(xù)發(fā)揮作用，釋放養(yǎng)分以維持菌體增殖，可顯著降低雞糞中糞大腸菌群數(shù)量，殺 菌率達99. 99%，并可顯著降低氨氮含量，提高發(fā)芽指數(shù)與幼苗定植成功率，很好地實現(xiàn)了 雞糞等養(yǎng)殖廢棄物的無公害化處理。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種含有解淀粉芽孢桿菌HFJ-7的復合雞糞腐熟發(fā)酵劑及其應用， 使用本發(fā)明所述的復合雞糞腐熟發(fā)酵劑，可顯著降低雞糞中糞大腸菌群數(shù)量，殺菌率超過 99. 99%，并可顯著降低氨氮含量，提高發(fā)芽指數(shù)與幼苗定植成功率，很好地實現(xiàn)了雞糞等 養(yǎng)殖廢棄物的無公害化處理。
[0005] 為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：
[0006] 本發(fā)明提供了一種含有解淀粉芽孢桿菌HFJ-7的復合雞糞腐熟發(fā)酵劑，它以稻殼 粉為復配載體，還包括以下組分：含菌量為4X 108CFU/g~4. 4X 108CFU/g的解淀粉芽孢桿 菌HFJ-7,酶活為900U/g~1000U/g的中性纖維素酶，酶活為200U/g~250U/g的中性木聚 糖酶和酶活為80U/g~100U/g的耐高溫脂肪酶。
[0007] 所述解淀粉芽孢桿菌HFJ-7經(jīng)分子鑒定為解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens，于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏號是 CGMCC No. IOOll0
[0008] 本發(fā)明還提供了所述的含有解淀粉芽孢桿菌的復合雞糞腐熟發(fā)酵劑，所述解淀粉 芽孢桿菌HFJ-7選用含菌量為2000X 108CFU/g-2200X 108CFU/g的解淀粉芽孢桿菌HFJ-7 菌粉；中性纖維素酶選用酶活為45000U/g~50000U/g的中性纖維素酶原酶粉；中性木聚 糖酶選用酶活為l〇〇〇〇〇U/g~125000U/g的中性木聚糖酶原酶粉；耐高溫脂肪酶選用酶活 為40000U/g~50000U/g的耐高溫脂肪酶原酶粉。
[0009] 所述雞糞腐熟發(fā)酵劑組成成分的質(zhì)量比例為：解淀粉芽孢桿菌HFJ-7菌粉：中性 纖維素酶原酶粉：中性木聚糖酶原酶粉：耐高溫脂肪酶原酶粉：稻殼粉=1:10:1:1:500,混 合均勻。
[0010] 本發(fā)明還提供了所述的含有解淀粉芽孢桿菌的復合雞糞腐熟發(fā)酵劑在發(fā)酵雞糞 中的應用。
[0011] 對上述技術(shù)方案的進一步改進：所述雞糞腐熟發(fā)酵劑以占物料1 %的質(zhì)量比例接 種于含水量50% -55%的復合有機物料中，所述復合有機物料的主料為雞糞、輔料為蘑菇 棒，主料：輔料質(zhì)量比=6:4,混合均勻，進行好氧發(fā)酵。
[0012] 對上述技術(shù)方案的進一步改進：所述好氧發(fā)酵的時間為15d，每3天翻拋一次。
[0013] 對上述技術(shù)方案的進一步改進：所述腐熟發(fā)酵劑接種于雞糞發(fā)酵后，能顯著雞糞 中的殺滅糞大腸菌群，降低氨氮含量。
[0014] 對上述技術(shù)方案的進一步改進：所述發(fā)酵劑接種于雞糞發(fā)酵后獲得的腐熟后雞 糞，能顯著提高油菜種子發(fā)芽指數(shù)，防止燒苗現(xiàn)象。
[0015] 對上述技術(shù)方案的進一步改進：所述發(fā)酵劑接種于雞糞發(fā)酵后獲得的腐熟后雞 糞，用做幼苗定植底肥，能顯著辣椒苗定植成功率。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法的優(yōu)點和技術(shù)效果是：
[0017] 1、本發(fā)明提供的解淀粉芽孢桿菌菌株HFJ-7具有優(yōu)異的產(chǎn)尿素酶、降氨氮等能 力，是選出的優(yōu)異菌株，經(jīng)分子鑒定為解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens，于中 國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏號是CGMCC No. 10011。
[0018] 2、本發(fā)明所述復合雞糞腐熟發(fā)酵劑含有解淀粉芽孢桿菌菌株HFJ-7,此菌株在 雞糞腐熟發(fā)酵過程中，可進行好氧呼吸與繁殖，產(chǎn)生大量熱量，使得雞糞的平均溫度高于 70°C，可顯著降低雞糞中大腸菌群數(shù)量，殺菌率達99. 9 %，并實現(xiàn)氨氮的有效去除，腐熟后 可提高發(fā)芽指數(shù)，作為底肥也可提高幼苗定植成功率，真正實現(xiàn)了雞糞等養(yǎng)殖廢棄物的無 公害化處理。
[0019] 結(jié)合附圖閱讀本發(fā)明的【具體實施方式】后，本發(fā)明的其他優(yōu)點將變得更加清楚。
【附圖說明】
[0020] 圖1表明解淀粉芽孢桿菌HFJ-7對多種土傳病害病原真菌的拮抗特性；
[0021] 圖2表明解淀粉芽孢桿菌HFJ-7具有產(chǎn)生淀粉酶與蛋白酶的特性；圖2a為淀粉酶 酶解平板，圖2b為蛋白酶酶解平板；
[0022] 圖3表明不同菌株以雞糞為底物培養(yǎng)后的尿素酶活性與氨氮含量；
[0023] 圖4表明解淀粉芽孢桿菌HFJ-7菌粉的生產(chǎn)工藝流程圖；
[0024] 圖5表明所述含解淀粉芽孢桿菌復合雞糞腐熟發(fā)酵劑的應用方案；
[0025] 圖6表明雞糞腐熟發(fā)酵過程中翻拋次數(shù)對發(fā)酵平均溫度與糞大腸菌群數(shù)量的影 響；
[0026] 圖7表明同一稀釋梯度下腐熟前與腐熟后的糞大腸菌群數(shù)量；
[0027] 圖8表明雞糞腐熟發(fā)酵前后油菜種子發(fā)芽指數(shù)的變化；
[0028] 圖9腐熟前后雞糞用作底肥時的辣椒苗定植成功率。
【具體實施方式】
[0029] 為更好地了解該解淀粉芽孢桿菌復合雞糞腐熟發(fā)酵劑的功能，下面結(jié)合附圖和具 體實施例對本發(fā)明的產(chǎn)品引用特點做進一步詳細的說明。
[0030] 實施例1、解淀粉芽孢桿菌HFJ-7的分離篩選與鑒定保藏
[0031] 一、解淀粉芽孢桿菌HFJ-7的分離篩選
[0032] 2012年1月至2012年3月，從山東省濰坊市壽光市上口鎮(zhèn)10家辣椒蔬菜大棚取 30個辣椒根際土樣本。土樣分別充分研磨，于75°C水浴內(nèi)加熱處理20min，然后用無菌生理 鹽水中1000倍稀釋，于營養(yǎng)瓊脂NA平板上稀釋涂布，挑取單菌落劃線純化，共篩選出68株 純菌，經(jīng)鏡檢均為芽孢桿菌，其中包括菌株HFJ-7。
[0033] 二、解淀粉芽孢桿菌HFJ-7與其他菌株的病原真菌抗性能力比較
[0034] 采用平板對峙的方法，以立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌、根腐病病原菌、黃瓜枯萎病病 原菌、辣椒疫霉等土傳病害病原真菌為靶標病原真菌，考察68株芽孢桿菌之間病原真菌拮 抗特性的差異。先用打孔器獲得6mm直徑的病原菌菌塊，接于PDA平板中央，在平皿四周， 垂直據(jù)中心約3cm出，接種靶標菌菌線，長度約為lcm?？紤]到不同病原真菌生長速度不同， 立枯絲核菌預培養(yǎng)8h、尖孢鐮刀菌、根腐病病原菌、黃瓜枯萎病病原菌、辣椒疫霉