1.一種大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于該栽培基質(zhì)是由松毛、畜禽糞便、復(fù)合菌劑、尿素、過磷酸鈣、輔料所組成,所述組分的質(zhì)量百分比為:松毛70%,畜禽糞便20%,尿素0.1%,過磷酸鈣1%,輔料8.9%,復(fù)合菌劑占栽培基質(zhì)總質(zhì)量的5%,所述的復(fù)合菌劑包含枯草芽孢桿菌菌株和畢赤酵母工程菌菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于所述的栽培基質(zhì)由所述各組分混合后腐熟獲得,由復(fù)合菌劑的制備和原料腐熟步驟制備而得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于,所述松毛的含水率為60%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于,所述的畜禽糞便包括雞糞、豬糞、牛糞、羊糞中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于,所述的輔料為草木灰。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于,所述的復(fù)合菌劑中的枯草芽孢桿菌菌劑由以下步驟獲得:
a)一級種子培養(yǎng):從斜面中勾取一環(huán)菌種接入裝有30mL一級種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中,37℃,200r/min,振蕩培養(yǎng)20h,得一級種子液;
b)二級種子培養(yǎng):一級種子液30mL接種到裝有270mL二級種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶,37℃,200r/min,振蕩培養(yǎng)20h,得二級種子液;
c)30L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng):調(diào)節(jié)初始pH=7.0,二級種子液200mL接到30L發(fā)酵罐,以70%的罐裝量,pH值7.5,溫度37℃,前期通風(fēng)1:0.8,后期通風(fēng)1:1發(fā)酵條件進(jìn)行枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng);
所述一級種子培養(yǎng)基配方為:1%可溶性淀粉、1%大豆蛋白胨、0.5%酵母粉、0.02%硫酸鎂、水30mL,pH調(diào)為7.2;二級種子培養(yǎng)基配方為:2%豆粕、0.6%玉米淀粉、0.3%葡萄糖、0.3%酵母粉、0.06%硫酸鎂、0.02%硫酸錳、0.2%磷酸氫二鉀、0.1%磷酸二氫鉀、水200mL、pH調(diào)為7.2;發(fā)酵液培養(yǎng)基為,按24L裝液量計(jì)算:1%豆粕、0.4%玉米淀粉、0.2%葡萄糖、0.3%酵母粉、0.1%硫酸鎂、0.03%硫酸錳、0.2%磷酸氫二鉀、0.1%磷酸二氫鉀、水22L,接種前調(diào)節(jié)pH=7.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于,所述的復(fù)合菌劑中的畢赤酵母工程菌菌劑由以下步驟獲得:
a)種子及發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng):挑取試管斜面保藏菌種于YPD培養(yǎng)基中,30℃搖床培養(yǎng)14h,獲得畢赤酵母工程菌種子液,所述YPD培養(yǎng)基成分為葡萄糖2%,酵母浸粉1%,蛋白胨2%,蒸餾水,pH自然,121℃,濕熱滅菌30min;
b)發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng):采用10L發(fā)酵罐進(jìn)行放大培養(yǎng),按5%V/V的接種量,將畢赤酵母工程菌種子液接入裝有6L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中,30℃、400r/min培養(yǎng)至溶氧達(dá)80%時(shí);所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:葡萄糖2%,蛋白胨2%,酵母浸粉1.5%,硫酸鎂0.05%,磷酸二氫鉀0.11%,磷酸氫二鉀0.044%,發(fā)酵初始pH為8,上述培養(yǎng)基在121℃濕熱滅菌30min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于,所述的復(fù)合菌劑是將枯草芽孢桿菌菌液和畢赤酵母菌液按1:1混合,干燥溫度為75℃、調(diào)節(jié)菌液pH為7.2、載體為麩皮,水分含量為5%,混合菌液和載體按體積比1:2混合。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的大球蓋菇栽培基質(zhì),其特征在于,所述的腐熟包括如下步驟:
a)將松毛長度截成3-5cm長的小段,將復(fù)合菌劑與松毛按質(zhì)量比1:20混合均勻;
b)畜禽糞便拍散,不要成團(tuán),畜禽糞便可由雞糞、豬糞、牛糞、羊糞的一種或幾種的組合;
c)預(yù)先調(diào)濕:將松毛與復(fù)合菌劑和輔料草木灰充分混合,并調(diào)節(jié)濕度達(dá)到60%,畜禽糞便的濕度也調(diào)節(jié)至60%;
d)選取一塊便于排水,干凈、平整的場地,先鋪一層松毛、草木灰和復(fù)合菌劑的混合物,要求寬度為1.5m,長度視料多少而定,均勻撒上尿素和過磷酸鈣,厚度為2cm,然后鋪上一層畜禽糞便,如此往復(fù),最上面一層鋪上畜禽糞便,控制堆高在2m,每隔一周從上到下,從內(nèi)到外翻堆,待其自然降溫,堆肥成棕褐色,沒有氨氣味,沒有酸臭味,手握松軟,成沫,且無扎手感,纖維輕拉即斷,即為發(fā)酵結(jié)束,所得腐熟物即可作為大球蓋菇的栽培基質(zhì)。
10.制備權(quán)利要求1所述的大球蓋菇栽培基質(zhì)的方法,其特征在于該方法包括復(fù)合菌劑的制備和原料腐熟步驟,所述的復(fù)合菌劑包含枯草芽孢桿菌發(fā)酵液和畢赤酵母工程菌發(fā)酵液,先分別制備枯草芽孢桿菌發(fā)酵液和畢赤酵母工程菌發(fā)酵液,然后將枯草芽孢桿菌菌液和畢赤酵母菌液按1:1混合,干燥溫度為75℃、調(diào)節(jié)菌液pH為7.2、載體為麩皮,水分含量為5%,混合菌液和載體按體積比1:2混合;
所述的復(fù)合菌劑中的枯草芽孢桿菌菌劑由以下步驟獲得:
a)一級種子培養(yǎng):從斜面中勾取一環(huán)菌種接入裝有30mL一級種子培養(yǎng)基的250mL三角瓶中,37℃,200r/min,振蕩培養(yǎng)20h,得一級種子液;
b)二級種子培養(yǎng):一級種子液30mL接種到裝有270mL二級種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶,37℃,200r/min,振蕩培養(yǎng)20h,得二級種子液;
c)30L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng):調(diào)節(jié)初始pH=7.0,二級種子液200mL接到30L發(fā)酵罐,以70%的罐裝量,pH值7.5,溫度37℃,前期通風(fēng)1:0.8,后期通風(fēng)1:1發(fā)酵條件進(jìn)行枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng);
所述的一級種子培養(yǎng)基配方為:1%可溶性淀粉、1%大豆蛋白胨、0.5%酵母粉、0.02%硫酸鎂、水30mL,pH調(diào)為7.2;二級種子培養(yǎng)基配方為:2%豆粕、0.6%玉米淀粉、0.3%葡萄糖、0.3%酵母粉、0.06%硫酸鎂、0.02%硫酸錳、0.2%磷酸氫二鉀、0.1%磷酸二氫鉀、水200mL、pH調(diào)為7.2;發(fā)酵液培養(yǎng)基為,按24L裝液量計(jì)算:1%豆粕、0.4%玉米淀粉、0.2%葡萄糖、0.3%酵母粉、0.1%硫酸鎂、0.03%硫酸錳、0.2%磷酸氫二鉀、0.1%磷酸二氫鉀、水22L,接種前調(diào)節(jié)pH=7.0;
所述的復(fù)合菌劑中的畢赤酵母工程菌菌劑由以下步驟獲得:
a)種子及發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng):挑取試管斜面保藏菌種于YPD培養(yǎng)基中,30℃搖床培養(yǎng)14h,獲得畢赤酵母工程菌種子液,所述YPD培養(yǎng)基成分為葡萄糖2%,酵母浸粉1%,蛋白胨2%,蒸餾水,pH自然,121℃,濕熱滅菌30min;
b)發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng):采用10L發(fā)酵罐進(jìn)行放大培養(yǎng),按5%V/V的接種量,將畢赤酵母工程菌種子液接入裝有6L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中,30℃、400r/min培養(yǎng)至溶氧達(dá)80%時(shí);所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:葡萄糖2%,蛋白胨2%,酵母浸粉1.5%,硫酸鎂0.05%,磷酸二氫鉀0.11%,磷酸氫二鉀0.044%,發(fā)酵初始pH為8,上述培養(yǎng)基在121℃濕熱滅菌30min;
所述的原料腐熟包括如下步驟:
a)將松毛長度截成3-5cm長的小段,將已制備好的復(fù)合菌劑與松毛按質(zhì)量比1:20混合均勻;
b)畜禽糞便拍散,不要成團(tuán),畜禽糞便可由雞糞、豬糞、牛糞、羊糞的一種或幾種的組合;
c)預(yù)先調(diào)濕:將松毛與已制備好的復(fù)合菌劑和輔料草木灰充分混合,并調(diào)節(jié)濕度達(dá)到60%,畜禽糞便的濕度也調(diào)節(jié)至60%;
d)選取一塊便于排水,干凈、平整的場地,先鋪一層松毛、草木灰和復(fù)合菌劑的混合物,要求寬度為1.5m,長度視料多少而定,均勻撒上尿素和過磷酸鈣,厚度為2cm,然后鋪上一層畜禽糞便,如此往復(fù),最上面一層鋪上畜禽糞便,控制堆高在2m,每隔一周從上到下,從內(nèi)到外翻堆,待其自然降溫,堆肥成棕褐色,沒有氨氣味,沒有酸臭味,手握松軟,成沫,且無扎手感,纖維輕拉即斷,即為發(fā)酵結(jié)束,所得腐熟物為大球蓋菇的栽培基質(zhì)。