專利名稱：體液細胞塊石蠟切片制作的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是臨床醫(yī)學(xué)檢測腫瘤細胞及細胞分子標(biāo)記檢測方法之一。
背景技術(shù)：
人體的細胞在致癌因素的作用下，細胞的性質(zhì)會逐漸發(fā)生質(zhì)的改變而成為癌細胞，其細胞在長期致癌因素的影響下，細胞所形成的腫瘤細胞增加到一定數(shù)量時就發(fā)展成惡性腫瘤，為了確診病情，以便對癥下藥，爭取最佳的治療，時間和效果，目前醫(yī)療部門對患者采用的方法之一，是體液內(nèi)查找癌細胞，一般使用離心機制作離心沉定涂片，或使用瓊脂包埋細胞塊石蠟切片，使用涂片離心機簡單快捷，但設(shè)備較貴，不能用于免疫組織化學(xué)染色檢查、不能進行細胞分子標(biāo)記物檢測、不能對腫瘤病人進行更加準確的檢測，有時遇到疑難涂片，很難對腫瘤類型進行分類，有時難以區(qū)分是退變的腫瘤細胞還是增生退變的間皮細胞，使用瓊脂細胞塊石蠟包埋切片程序較多，又需要事先制作瓊脂較為麻煩，故需改進。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種方法簡單，不易出差錯，結(jié)果穩(wěn)定的體液細胞塊石蠟切片制作。
本發(fā)明的制作步驟如下1)離心沉淀前處理將體液加入40％的甲醛其比例為體液40％的甲醛等于9∶1，靜止5分鐘至5小時后，加入NaCl使體液內(nèi)NaCl濃度達到0.9％，沉淀30分鐘至72小時；2)離心沉淀將上述沉淀物搖勻后注入到5ml-20ml離心管進行離心處理，離心機轉(zhuǎn)速為3000-5000轉(zhuǎn)/分，每次時間為5-15分鐘，每次離心處理后棄去上部清液，再注入沉淀物，反復(fù)進行2-8次，直到獲得較多的細胞數(shù)量；3)固定將上述離心沉淀的產(chǎn)物棄去上部清液注入10％中性福爾馬林，固定2小時。使組織細胞的結(jié)構(gòu)保持，保持細胞塊中細胞與生活時的形態(tài)相似，防止細胞自溶；4)脫水、透明、浸蠟將上述固定處理后的沉淀物用雙層紗布包裹，在生物組織自動脫水進行脫水，或采用人工脫水，脫水時酒精溫度為攝氏45度，75％酒精脫水60min，85％酒精脫水120min，95％酒精脫水120min，無水乙醇I脫水90min，無水乙醇II脫水90min，無水乙醇III脫水90min，采用有親水性又有親脂性的二甲苯或TO透明試劑進行透明、浸蠟，達到石蠟浸入細胞的目的；5)包埋將浸蠟后的細胞塊冷卻、粉碎，粉碎后混勻、放入石蠟包埋框底部，聚合在一起，緩緩沿著包埋框邊緣加入溶化石蠟這樣使細胞成份在細胞塊內(nèi)部更均勻，容易包埋好；6)切片脫蠟切片厚度為3-5微米。進行脫蠟具體步驟如下①切片在恒溫干燥箱內(nèi)脫蠟50min，溫度為攝氏60度；②二甲苯I脫蠟10min；③二甲苯II脫蠟5min；④無水乙醇洗去二甲苯1min×2；⑤95％酒精1min⑥90％酒精1min⑦85％酒精1min；7)HE染色先將脫蠟切片里流水或靜水中沖洗1-3分鐘，按常規(guī)進行染色，對部分細胞塊切片可根據(jù)需要進行免疫組織的化學(xué)染色，其方法與普通免疫組織化學(xué)染色相同，才可以進行細胞分子標(biāo)記物檢測；最后將采用中性樹脂膠封片完成制作過程。
本發(fā)明與其他制作切片相比較，方法簡單，操作步驟少、不易出差錯，結(jié)果穩(wěn)定，不需要特殊的材料和設(shè)備，可與平常的日常工作一起進行，切片背景清晰，顯色良好，效果滿意，沒有瓊脂包埋的那種模糊背景，可以進行分子病理方面的工作，進行細胞分子標(biāo)記物檢測，提高了體液細胞學(xué)病理診斷的準確率，提高了應(yīng)用范圍，特別是對耐藥基因表達物的檢測，對臨床病人的治療效果提供更加準確的治療指導(dǎo)性意見。
實施例本發(fā)明對50例胸腹水檢測與普通離心涂片結(jié)果相比，查見癌細胞5例，在腫瘤細胞檢出方面沒有顯著差異，但本發(fā)明獲得的腫瘤細胞更多，可以進行免疫組織化學(xué)染色，免疫組織化學(xué)染色的背景清晰，顯色良好，特別是可以進行耐藥基因表達產(chǎn)物的檢測，對腫瘤化療具有重要的幫助，并可以通過免疫組織化學(xué)染色進行腫瘤細胞分類提高診斷質(zhì)量，進行細胞標(biāo)記物檢測，對于退變的間皮細胞和退變的腫瘤細胞有時難以區(qū)分別，使用免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記細胞的類型，可以提高診斷的準確性，可以進行腫瘤分類及提供更加準確的治療指導(dǎo)性意見。
權(quán)利要求
1.一種體液細胞塊石蠟切片制作其步驟如下1)離心沉淀前處理將體液加入40％的甲醛靜止5分鐘至5小時后，加入NaCl使體液內(nèi)NaCl濃度達到0.9％，沉淀30分鐘至72小時；2)離心沉淀將上述沉淀物搖勻后注入到5ml-20ml離心管進行離心處理，離心機轉(zhuǎn)速為3000-5000轉(zhuǎn)/分，每次時間為5-15分鐘，每次離心處理后棄去上清液，再注入沉淀物，反復(fù)進行2-8次，直到獲得較多的細胞數(shù)量；3)固定將上述離心沉淀的產(chǎn)物棄去上部清液注入10％中性福爾馬林，固定2小時；4)脫水、透明、浸蠟將上述固定處理后的沉淀物用雙層紗布包裹，在生物組織自動脫水進行脫水，或采用人工脫水，采用有親水性又有親脂性的二甲苯或TO透明試劑進行透明、浸蠟；5)包埋將浸蠟后的細胞塊冷卻、粉碎，粉碎后混勻、放入石蠟包埋框底部，聚合在一起，緩緩沿著包埋框邊緣加入溶化石蠟均勻的包埋好；6)切片脫蠟切片厚度為3-5微米，切片置流水或靜水沖洗1～3分鐘，主要是將甲醛和氯化鈉去除；7)HE染色按常規(guī)進行染色部分細胞塊可根據(jù)需要進行免疫組織的化學(xué)染色；最后將采用中性樹膠封片，完成制片過程。
全文摘要
一種體液細胞塊石蠟切片制作，是通過前處理、離心沉定、固定、脫水透明浸蠟、包埋、切片、HE染色，封片等工序而完成；本發(fā)明方法簡單，操作步驟少，不易出差錯，結(jié)果穩(wěn)定，不需要特殊的材料和設(shè)備，可與平常的日常工作一起進行，HE和免疫組織化染色背景清晰，效果滿意，沒有瓊脂包埋的那種模糊背景、對進行分子病理方面的工作，提高了體液細胞學(xué)病理診斷的準確率。
文檔編號G09B23/00GK1737526SQ20051002129
公開日2006年2月22日 申請日期2005年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月20日
發(fā)明者徐華 申請人:徐華