專利名稱：猴多動癥動物模型的構建方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測技術領域，具體涉及一種用于篩選治療多動癥藥物，評價治療多動癥方法的動物模型的構建方法。
然而，ADHD病理機制仍然還有許多不明之處，有待于我們進行深入研究，特別是現(xiàn)階段還沒有理想的ADHD動物模型，給徹底了解ADHD病理機制以及完全治療ADHD帶來了很大的困難。如果建立起理想的ADHD猴的動物模型，將有利于我們研究ADHD病理機制，有利于我們大規(guī)模篩選治療ADHD的新藥(如篩選治療ADHD的中草藥)，評價治療ADHD的方法，這不僅有重要的理論價值，也有著潛在的應用前景。
現(xiàn)在一般認為，ADHD的產生與人或動物的行為抑制功能低下有關。行為抑制功能為人或動物的行為(特別是較復雜行為)提供保護框架。如果抑制功能低下，人或動物將不能抑制不相關的信息(包括外來的和內在的)引起的行為，導致注意力不集中、活動增多等癥狀，嚴重時將導致ADHD。神經心理學的研究表明，前額葉皮層在行為抑制中起著關鍵的作用。在幼年猴前額葉注射去甲腎上腺素的α2受體拮抗劑yohimbine后，幼年猴在自由活動狀態(tài)的活動顯著增多，非常類似兒童多動癥現(xiàn)象；通過單個神經元給藥，發(fā)現(xiàn)α2受體拮抗劑yohimbine能抑制與NO-GO反應相關的前額葉神經元活動。這些現(xiàn)象提示前額葉的α2受體功能低下有可能是ADHD的內在機制之一。
動物和臨床研究表明，α2受體激動劑有可能是治療ADHD的有效藥物。臨床研究已開始用α2受體激動劑clonidine來治療ADHD。應用選擇性更強的α2A激動劑guanfacine，不僅能有效的控制ADHD的癥狀，還可以避免使患者產生低血壓和鎮(zhèn)靜等由clonidine治療所產生的副作用。
本發(fā)明提出的猴多動癥動物模型構建方法，是通過在猴前額葉雙側埋泵注射α2受體的特異性拮抗劑yohimbine(育亨賓)，以阻斷α2受體的功能，建立起ADHD猴的動物模型。具體步驟如下1、腦外科手術選取適當?shù)暮铮樽砗笸ㄟ^腦外科手術，切除皮膚，清理顱骨表面，在其表面確定定位點，然后在顱骨表面均勻涂上一層牙科水泥。肌肉注射抗生素，靜脈注射葡萄糖。
2、給藥手術13-14天后，麻醉，在猴雙側前額葉的相對應位點的牙科水泥和顱骨上開孔，用滲透壓泵微量給藥，給藥深度為硬腦膜下1.0-1.5mm，滲透壓泵以每小時1μl速度，連續(xù)7-10天把藥直接泵入前額葉皮層內，藥的濃度為1.5-2.0μg/μl，用生理鹽水配制；3、猴活動量記錄在猴的身上佩帶活動量記錄表，記錄猴給藥前、給藥期間和給藥后自由狀態(tài)下24小時的活動量。
根據(jù)上述猴多動癥動物模型，對不同的猴進行分析對比，實際試驗結果證明，猴的前額葉注射α2受體拮抗劑yohimbine期間，猴的活動量顯著增加，一旦給藥停止，猴的活動量又恢復到給藥前的水平。從而說明本發(fā)明以實驗手段建立了猴多動癥的動物模型，該模型可以用于篩選治療多動癥的藥物，評價治療多動癥的方法。
圖2為本發(fā)明實施例中猴A給藥前、給藥期間和給藥后在自由狀態(tài)下的活動量狀態(tài)圖。
圖3為本發(fā)明實施例中猴B給藥前、給藥期間和給藥后在自由狀態(tài)下的活動量狀態(tài)圖。
下面通過實施例進一步描述本發(fā)明。
選取幼年獼猴(Macaca Mulatta)2只，雌性，2～3歲左右，體重分別為2.2kg和2.5kg左右；未曾用于其它實驗；單籠飼養(yǎng)，水和食物不限。
1.腦外科手術手術前一天，充分準備手術之中各類用品，將手術器械高壓消毒，手術室紫外線照射30分鐘左右。手術前猴禁食12小時左右，但給予充足的水。
用氯胺酮(肌肉注射，3～5mg/kg體重，誘導麻醉)和戊巴比妥鈉(腹腔注射，35mg/kg體重)麻醉猴，將其頭部固定于Narishige SN-2型立體定向儀上。用鉛筆在手術切口部位的頭皮上作標志線；用刀片沿標志線切開皮膚，清理顱骨表面；在顱骨上，用立體定位儀確定幾個定位參考點(A0L0；A20L0；A20L20；A20R20)；在顱骨表面均勻涂上一層牙科水泥。肌肉注射抗生素，靜脈注射葡萄糖。手術后，密切監(jiān)視猴的狀態(tài)。
2、給藥手術二周后，用氯胺酮(肌肉注射，3～5mg/kg體重，誘導麻醉)和戊巴比妥鈉(腹腔注射，35mg/kg體重)麻醉猴，將猴頭部固定于Narishige SN-2型立體定向儀上。以AP0點作為參考點，向前25mm，然后，以中縫為基本點，向左右旁開15mm。用眼科鉆將此位點的牙科水泥和顱骨打開一小洞，注意切勿刺穿硬腦膜。將滲透壓泵針頭插入此孔，深度為硬腦膜下1.0-1.5mm。把去甲腎上腺素α2受體拮抗劑育亨賓(yohimbine)溶于生理鹽水(濃度1.5μg/μl)，灌入滲透壓泵(200μl容量)中。在顱骨表面安裝一不銹鋼小室，其中盛滿生理鹽水，將滲透壓泵泵體放在這一小室中。滲透壓泵以每小時1μl的速度、連續(xù)8天把yohimbine溶液直接泵入前額葉皮層內。
3、猴活動量記錄把Mini-Mitter公司生產的活動量記錄表佩帶在猴的身上，記錄猴給藥前、給藥期間和給藥后自由狀態(tài)下24小時的活動量。
對上述模型的測試結果由圖2-圖3中猴給藥前、給藥期間和給藥后在自由狀態(tài)下的活動量狀態(tài)圖可見，通過對從上午600到下午600共12小時的猴活動狀態(tài)觀察，從中可以看出，在前額葉慢性施加育亨賓期間，猴的總活動量顯著增加。一旦給藥停止，猴的活動量又恢復到給藥前的水平。
權利要求
1.一種猴多動癥動物模型的構建方法，其特征在于通過在猴前額葉雙側埋泵注射α2受體的特異性拮抗劑育亨賓，以阻斷α2受體的功能，建立ADHD猴的動物模型，具體步驟如下(1)腦外科手術選取適當?shù)暮铮樽砗笸ㄟ^腦外科手術，切除皮膚，清理顱骨表面，在其表面確定定位點，然后在其表面均勻涂上一層牙科水泥；(2)給藥手術13-14天后，在猴雙側的前額葉皮層相對應位點的牙科水泥和顱骨上開小孔，用滲透壓泵微量給藥，給藥深度為硬腦膜下1.0-1.5mm，滲透壓泵以每小時1μl速度，連續(xù)7-10天把藥液直接泵入前額葉皮層內，藥的濃度為1.5-2.0μg/μl，用生理鹽水配制；(3)猴活動量記錄在猴的身上佩帶活動量記錄表，記錄猴給藥前、給藥期間和給藥后自由狀態(tài)下24小時的活動量。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測技術領域,具體涉及一種用于篩選治療多動癥藥物、評價治療多動癥方法的猴動物模型的構建方法。通過在猴前額葉局部區(qū)域微量注射α
文檔編號G09B23/36GK1380632SQ0211148
公開日2002年11月20日 申請日期2002年4月25日 優(yōu)先權日2002年4月25日
發(fā)明者李葆明, 馬朝林, 徐開靜 申請人:復旦大學