專利名稱：假單胞菌屬hzn6及其在降解尼古丁中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株新型高效尼古丁降解菌，特別涉及一株新型高效假單胞屬尼古丁降解菌，即假單胞菌屬HZN6及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
尼古丁(nicotine)，俗稱煙堿，是多種煙草中所特有的、最重要的生物堿，約占煙草干重的1%_2%，是影響煙葉品質(zhì)的重要因素之一，同時也是煙葉和卷煙的主要有害成分之
一。尼古丁的分子式為CltlH14N2，結(jié)構(gòu)式如式(I )所示。
權(quán)利要求
1.假單胞菌屬HZN6(Pseudomonas sp. HZN6),保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址湖北省武漢市珞珈山武漢大學(xué)，保藏日期為2010年8月9日，保藏編號為CCTCCNo:M2010196o
2.如權(quán)利要求I所述的假單胞菌屬HZN6在降解尼古丁中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述假單胞菌屬HZN6在降解尼古丁中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為以尼古丁為底物，以無機(jī)鹽培養(yǎng)液為反應(yīng)介質(zhì)，以假單胞菌屬HZN6為降解菌，在25 45°C、pH值為5. 5^9. 0的條件下反應(yīng)8 15h使反應(yīng)液中尼古丁的質(zhì)量含量小于0. 1%，達(dá)到降解尼古丁的目的。
4.如權(quán)利要求2所述假單胞菌屬HZN6在降解尼古丁中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為將無機(jī)鹽培養(yǎng)液與尼古丁混合，使尼古丁終濃度為10(T3000mg/L，再加入含假單胞菌屬HZN6的細(xì)胞懸液構(gòu)成反應(yīng)體系，在25 45°C、pH值為5. 5^9. 0的條件黑暗振蕩培養(yǎng)至反應(yīng)液中尼古丁的質(zhì)量殘留量小于0. 1% ;所述含假單胞菌屬HZN6的細(xì)胞懸液加入量使反應(yīng) 體系中假單胞菌屬HZN6終濃度為I X 1(T5 X IO9個/ml。
5.如權(quán)利要求3所述假單胞菌屬HZN6在降解尼古丁中的應(yīng)用，其特征在于所述的含假單胞菌屬HZN6的細(xì)胞懸液的制備方法為 (1)斜面培養(yǎng)將假單胞菌屬HZN6接種于斜面培養(yǎng)基，25 45°C培養(yǎng)5 7天，獲得菌體斜面；所述斜面培養(yǎng)基的終濃度組成為酵母粉10g/L，蛋白胨5. Og/L，氯化鈉10. Og/L，瓊脂糖2. Og/L，溶劑為水； (2)種子培養(yǎng)從步驟(I)菌體斜面上挑取一接種環(huán)菌體接種至無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，.25 45°C培養(yǎng)5 7天，獲得種子液；所述無機(jī)鹽培養(yǎng)基終濃度組成為每升培養(yǎng)液中含有NaCl lg，K2HPO4 I. 5g，KH2PO4 0. 5g，(NH4) 2S041. 5g，MgSO4 0. lg，Iml 微量元素溶液，溶劑為水，自然PH值，121°C高壓蒸汽滅菌20min后制得，其中每升微量元素溶液中含MnSO4 H2O.0.13g, ZnCl2 0. 23g, CuSO4 H2O 0. 03g, CoCl2 6H20 0. 42g, Na2Mo04 2H20 0. 15g,AlCl3 6H20 0. 05g，溶劑為水； (3)擴(kuò)大培養(yǎng)將步驟(2)獲得的種子液以體積濃度1(T20%的接種量接種至LB液體培養(yǎng)基中，300C、150rpm振蕩養(yǎng)至對數(shù)生長期，獲得菌液，將菌液離心，棄上清，沉淀用pH值為.7.0的磷酸緩沖液懸浮，獲得含假單胞菌屬HZN6的細(xì)胞懸液；所述LB液體培養(yǎng)基終濃度組成為每升培養(yǎng)中含有酵母粉10g，蛋白胨5. 0g，氯化鈉10. 0g，溶劑為水，自然pH值。
6.如權(quán)利要求5所述假單胞菌屬HZN6在降解尼古丁中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為將無機(jī)鹽培養(yǎng)液與尼古丁混合制成混合液，使尼古丁終濃度為200mg/L，再加入含假單胞菌屬HZN6的細(xì)胞懸液構(gòu)成反應(yīng)體系，在30°C、pH7. 0、150rpm條件下黑暗振蕩培養(yǎng)8h，使反應(yīng)液中尼古丁的質(zhì)量殘留量小于0. 1%，達(dá)到降解尼古丁的目的；所述含假單胞菌屬HZN6的細(xì)胞懸液的加入量使反應(yīng)體系中假單胞菌屬HZN6終濃度為I X IO7^XlO9個/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種假單胞菌屬HZN6(Pseudomonas sp.HZN6)及其在降解尼古丁中的應(yīng)用，所述應(yīng)用是以尼古丁為底物，以無機(jī)鹽培養(yǎng)液為反應(yīng)介質(zhì)，以假單胞菌屬HZN6為酶，在25~45℃、pH值為5.5~9.0的條件下反應(yīng)8~15h使反應(yīng)液中尼古丁的質(zhì)量含量小于0.1%，達(dá)到降解尼古丁的目的；本發(fā)明所述假單胞菌屬HZN6可通過直接投加的方式應(yīng)用于水體和土壤中尼古丁的降解，能安全、高效、快速的降解水體、土壤等物體上殘留的尼古丁，含有該菌株的菌劑制備工藝簡單，成本低廉，使用方便，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號A62D3/02GK102796681SQ201210272570
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月1日
發(fā)明者馬云, 邱吉國, 劉學(xué)虎, 魏銀 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)