一種以制革副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)的了一種以制革副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶的制備方法，其特征是先將制革副廢物室溫下于去離子水中浸泡后與戊二醛反應(yīng)，過(guò)濾并用去離子水洗去制革副廢物上殘留的戊二醛；經(jīng)戊二醛處理后的載體與復(fù)合脫毛酶反應(yīng)，過(guò)濾并洗去載體上殘留的復(fù)合酶，即得到以制革固體副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶。其中復(fù)合脫毛酶的組分構(gòu)成為，每100份復(fù)合脫毛酶包含55-80份的中性蛋白酶、10-25份的α淀粉酶和5-15份的胰酶。采用本發(fā)明方法制備得到的固定化復(fù)合脫毛酶中酶的固載量高、酶活收率高，且具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)使用性。將其用于生皮脫毛和分散膠原纖維，生產(chǎn)條件溫和，對(duì)皮膠原水解過(guò)程和膠原纖維的分離松散程度的可控性提高，可以避免生產(chǎn)中產(chǎn)品質(zhì)量的波動(dòng)。
【專利說(shuō)明】一種以制革副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種以制革副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶的制備方法，屬于制革專用固定化酶制備的【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]浸灰脫毛作為一種古老的方法，在制革工藝過(guò)程中起著重要作用。常規(guī)灰堿法脫毛采用硫化物和石灰，并通過(guò)硫化物和石灰水解毛發(fā)、除去纖維間質(zhì)等作用達(dá)到脫毛和分散皮膠原纖維的作用。由于該方法具有原料易得、成本低、操作簡(jiǎn)單、控制容易、成革質(zhì)量穩(wěn)定、使用范圍廣(豬、牛、羊皮均適用)等優(yōu)點(diǎn)，目前國(guó)內(nèi)外制革生產(chǎn)仍然以灰堿法脫毛為主。然而，灰堿法脫毛存在一些致命缺點(diǎn)，如硫化物污染、石灰污染以及因浸灰脫毛時(shí)大量的毛和表皮被降解所造成的有機(jī)物污染等問(wèn)題。因此，制革工作者正努力尋求其它更為清潔的脫毛和膠原纖維的分散途徑，以降低甚至消除浸灰脫毛工序的污染。
[0003]在過(guò)去的一個(gè)世紀(jì)里，人們已經(jīng)發(fā)展了幾種不使用硫化物和石灰的清潔化脫毛以及膠原纖維分散技術(shù)。生態(tài)脫毛技術(shù)方面，主要包括氧化脫毛法、生物酶脫毛法、有機(jī)硫化物脫毛法等。然而，用生態(tài)學(xué)的觀點(diǎn)衡量，只有酶脫毛法才是真正意義上的保毛脫毛法，也是最清潔的脫毛方法。蛋白酶是最主要的脫毛酶，其脫毛效果好。但是蛋白酶脫毛的同時(shí)，不可避免會(huì)損傷真皮的結(jié)構(gòu)，影響革制品的使用性能，這就嚴(yán)重限制了酶脫毛技術(shù)的應(yīng)用。近些年來(lái)，隨著制革清潔生產(chǎn)被提上議事日程，酶法脫毛的研究又再度成為研究熱點(diǎn)。常規(guī)灰堿法浸灰脫毛，膠原纖維在得到分離松散的過(guò)程中，除去了多數(shù)纖維間質(zhì)尤其是蛋白聚糖，并且通過(guò)石灰的作用以及在生皮基質(zhì)中建立的滲透壓產(chǎn)生規(guī)則的纖維和膠原小纖維的系統(tǒng)。近些年，隨著制革生態(tài) 問(wèn)題的日益嚴(yán)峻，針對(duì)常規(guī)灰堿法在浸灰過(guò)程中產(chǎn)生大量石灰淤泥的缺點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外研究者做了大量的工作，以找尋新的綠色皮革化學(xué)品替代石灰分離松散皮膠原纖維?；谏鲜鲈?，目前也有人通過(guò)采用液堿、硅酸鹽以及生物酶等分散皮膠原纖維的方法。在傳統(tǒng)的制革過(guò)程中，酶只是被作為對(duì)石灰分散皮纖維的一個(gè)補(bǔ)充，主要體現(xiàn)在軟化工序中，如采用胰酶作用于脫灰裸皮的軟化處理。近年,Thanikaivelan.P等人已經(jīng)成功發(fā)展出使用a -淀粉酶的無(wú)石灰纖維開(kāi)松方法(Thanikaivelan.P，Chandrasekara.B.Bharath.C.K，et al.Single step hair removal and fiber opening process:simultaneous and successive addition of protease and a -amylase[J].J.Amer.Leather Chem, Ass., 2006, 101: 388-398.)。該方法已經(jīng)應(yīng)用于用商業(yè)蛋白酶和硫化鈉進(jìn)行脫毛處理的裸皮，是一個(gè)兩步處理的方法。然而，本發(fā)明主要提供了一種固定化復(fù)合酶脫毛的方法，通過(guò)蛋白酶、胰酶、a淀粉酶結(jié)合使用，僅通過(guò)一步處理就可以同時(shí)保證除去毛和開(kāi)松纖維。
[0004]目前在皮革工業(yè)中采用的酶處理方法主要存在以下缺點(diǎn):(1)酶制劑的穩(wěn)定性差，容易失活；(2)酶制劑通常與其它材料在同體系中使用，工序中使用的某些材料容易導(dǎo)致酶的失活；(3)酶的催化活性過(guò)高，工藝可控性差。因此，有必要研究固定化酶在制革領(lǐng)域中的應(yīng)用，以形成保護(hù)和緩釋之效果，增強(qiáng)制革專用酶制劑的耐用性和延長(zhǎng)酶促反應(yīng)時(shí)間。但在固定化酶技術(shù)中，載體的選擇對(duì)固定化酶的活性及使用特性有著至關(guān)重要的作用。為了得到具有良好催化性能、載量高、成本低的固定化酶，現(xiàn)有技術(shù)利用了價(jià)格低廉，易得的天然高分子，如:活性炭、硅藻土、明礬、殼聚糖以及海藻酸鈣等作為固定化載體。其中，殼聚糖、海藻酸鈣作為固定化載體的研究比較廣泛。但使用這些天然高分子作為固定化酶載體時(shí)，由于它們與酶的相容性及親和性有限，得到的固定化酶中的酶的固載量及活力較低。在制革生產(chǎn)中，由原料皮加工成皮革所產(chǎn)生的無(wú)制革利用價(jià)值的固體廢棄物產(chǎn)量很高，主要分為未鞣制和已鞣制的固體副廢物。隨著環(huán)境等全球性生態(tài)問(wèn)題的日益嚴(yán)峻，如何充分高值利用制革固體廢棄物，特別是經(jīng)過(guò)鞣制的固體副廢物，最大限度地減輕環(huán)境污染，成為制革固體副廢物高值轉(zhuǎn)化研究中的熱點(diǎn)和重點(diǎn)內(nèi)容。制革固體廢棄物屬于天然高分子物質(zhì)，含有大量氨基和羧基，既易于與酶共價(jià)結(jié)合，又可結(jié)合金屬離子，使酶對(duì)金屬離子的抵抗力得到加強(qiáng)。同時(shí)，又容易接枝改性，是固定化酶的良好載體。
[0005]本發(fā)明研究了以制革過(guò)程中產(chǎn)生的經(jīng)過(guò)鞣制處理的固體副廢物為固定化酶用載體。利用制革副廢物與酶分子之間存在的專一性親和力、固載到副廢物上的金屬離子對(duì)酶分子具有一定程度的親和力以及交聯(lián)劑的共價(jià)連接等作用實(shí)現(xiàn)酶的固定化。鑒于目前環(huán)境保護(hù)的新形勢(shì)，這也為制革行業(yè)所產(chǎn)生的大量固體副廢物的資源化利用找到了新的途徑。
[0006]因此，在提交本申請(qǐng)時(shí)，本發(fā)明對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言不是顯而易見(jiàn)的，因此不會(huì)想到使用中性蛋白酶、a淀粉酶和胰酶來(lái)同時(shí)進(jìn)行生皮酶脫毛和分散皮膠原纖維，更不會(huì)想到采用經(jīng)過(guò)已鞣制的制革固體廢棄物作為載體，對(duì)酶進(jìn)行固定化負(fù)載處理。本發(fā)明的創(chuàng)造性在于使用以經(jīng)過(guò)鞣制的制革固體副廢物為載體制備得到的固定化復(fù)合酶同時(shí)進(jìn)行生皮酶脫毛和分散膠原纖維。
[0007]本發(fā)明的新穎性和非顯而易見(jiàn)性在于以制革固體副廢物為載體固定化復(fù)合酶，使固定化復(fù)合酶在一步處理過(guò)程中同時(shí)實(shí)現(xiàn)脫毛和開(kāi)松纖維，從而提供一種生態(tài)性良好的、安全的基于生物酶處理的新型脫毛和皮纖維分散技術(shù)體系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有生物酶的不足，提供一種改良的固定化復(fù)合脫毛酶及其制備方法，以解決當(dāng)前酶脫毛和松散皮纖維時(shí)易造成成革質(zhì)量問(wèn)題(容易發(fā)生爛皮、爛面、松面及強(qiáng)度差等事故)、工藝控制性差等難題。
[0009]本發(fā)明提供的固定化復(fù)合酶及其制備方法如下:
1)先將100份制革固體副廢物室溫下浸泡于去離子水中l(wèi)-4h，再加入10-30份戊二醛，并在15-35°C水浴中振蕩反應(yīng)l_3h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的戊二醛；
2)準(zhǔn)確稱取一定量的復(fù)合酶溶于pH值為6.0-8.5的、離子強(qiáng)度為0.01-0.5mol/L的緩沖液中，配制成復(fù)合酶溶液，然后于5°C、8000r/min下離心IOmin,收集上層清液；
3)將制備好的制革固體副廢物加入到復(fù)合酶溶液中，使酶與制革固體副廢物比例為
0.2-0.4，于5-25°C水浴中振蕩反應(yīng)0.5_2h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的復(fù)合酶，即得以制革固體副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶；
4)以上各物料的份數(shù)均為重量份。
[0010]5)以上方法中所用制革固體副廢物為采用鋯、鋁、鈦、鐵、鋅、稀土、硅等任一金屬鹽或任兩種或兩種以上的金屬鹽混合預(yù)鞣或主鞣，所得坯革經(jīng)削勻、修邊、粉碎處理得到的平均粒徑為5-50 u m的粒狀物。
[0011]6)以上方法中所用復(fù)合脫毛酶，其特點(diǎn)在于每100份復(fù)合脫毛酶包含55-80份的中性蛋白酶、10-25份的a淀粉酶和5-15份的胰酶。
[0012]本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
I)采用蛋白酶、胰酶和a淀粉酶同步脫毛和分散皮膠原纖維，具有協(xié)同作用。可以降低蛋白酶的作用程度，減輕或避免皮的損傷。同時(shí)，利用a淀粉酶、胰酶對(duì)蛋白多糖、彈性纖維等的水解，起到松散纖維、軟化皮張的作用，是一種集脫毛、分散纖維、軟化皮張于一體的綜合脫毛酶。
[0013]2)由于本發(fā)明采用的制革固體副廢物不僅可通過(guò)與酶分子之間存在的專一性親和力制備固定化酶，而且固載到制革固體副廢物上的金屬鞣劑對(duì)酶分子具有一定程度的親和力導(dǎo)致固定化，再者經(jīng)過(guò)戊二醛的交聯(lián)作用制備酶載量和活力均較高的固定化酶。不僅為固定化酶尋找到了一種新的性質(zhì)優(yōu)良的載體，同時(shí)也為制革固體副廢物的高值轉(zhuǎn)化開(kāi)辟了一條新的途徑。
[0014]3)通過(guò)對(duì)復(fù)合脫毛酶的固定化負(fù)載處理，對(duì)酶形成保護(hù)和緩釋之效果，增強(qiáng)制革專用脫毛酶的耐用性和延長(zhǎng)酶促反應(yīng)時(shí)間。能夠針對(duì)實(shí)際生產(chǎn)中，皮坯的差異、原料皮存在的部位差、酶的催化活性過(guò)高等問(wèn)題可能導(dǎo)致的酶處理事故的發(fā)生，保證酶在使用過(guò)程中緩慢釋放出其活力，均勻、長(zhǎng)效地作用于皮組織，大大提高酶的使用性能，從而提高對(duì)制革酶處理過(guò)程的可控性。
[0015]4)本發(fā)明采用的載體來(lái)自制革固體副廢物，其不僅來(lái)源豐富，而且市場(chǎng)價(jià)格低廉，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
[0016]5)本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)單，易于實(shí)施，便于推廣。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1為本發(fā)明制備的固定化復(fù)合脫毛酶與自由酶的相對(duì)活力與環(huán)境pH變化關(guān)系對(duì)比曲線
圖2為本發(fā)明制備的固定化復(fù)合脫毛酶與自由酶的相對(duì)活力與環(huán)境溫度變化關(guān)系對(duì)比曲線
圖3為本發(fā)明提供的固定化復(fù)合脫毛酶的脫毛效果
圖4為本發(fā)明提供的固定化復(fù)合脫毛酶加工得到的黃牛鞋面革粒面SEM觀察圖 圖5為本發(fā)明提供的固定化復(fù)合脫毛酶加工得到的黃牛鞋面革斷面SEM觀察圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，有必要在此指出的是本實(shí)施例只用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述本發(fā)明的內(nèi)容作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。
[0019]另外，值得說(shuō)明的是，以下各實(shí)施例中物料的份數(shù)均為重量份。
[0020]實(shí)施例1
將含鈦副廢物100份于室溫下浸泡于去離子水中2h，然后加入24份戊二醛，于25°C水浴中振蕩反應(yīng)2h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的戊二醛；稱取30份的復(fù)合酶(其中中性蛋白酶21份，a淀粉酶6份，胰酶3份)溶于pH值為6.5的、離子強(qiáng)度為0.lmol/L的緩沖液中，配制成濃度為6%的復(fù)合酶溶液，然后于5°C、8000r/min下離心lOmin，收集上層清夜；將制備好的含鈦副廢物加入到復(fù)合酶溶液中，使酶與含鈦副廢物比例為0.3，于5°C水浴中振蕩反應(yīng)lh，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的復(fù)合酶，即得以含鈦副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶。
[0021]實(shí)施例2
將含鋯-鋁副廢物100份于室溫下浸泡于去離子水中2h，然后加入20份戊二醛，于35°C水浴中振蕩反應(yīng)3h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的戊二醛；稱取40份的復(fù)合酶(其中，中性蛋白酶30份，a淀粉酶6份，胰酶4份)溶于pH值為7.0的、離子強(qiáng)度為 0.05mol/L的緩沖液中，配制成濃度為6%的復(fù)合酶溶液,然后于5°C、8000r/min下離心lOmin，收集上層清夜；將制備好的含鋯-鋁副廢物加入到復(fù)合酶溶液中，使酶與含鋯-鋁副廢物比例為0.4，于15°C水浴中振蕩反應(yīng)0.5h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的復(fù)合酶，即得以含鋯-鋁副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶。
[0022]實(shí)施例3
將含鋯-鋁-鈦副廢物100份于室溫下浸泡于去離子水中4h，然后加入15份戊二醛，于15°C水浴中振蕩反應(yīng)3h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的戊二醛；稱取20份的復(fù)合酶(其中，中性蛋白酶16份，a淀粉酶2份，胰酶2份)溶于pH值為6.5的，離子強(qiáng)度為0.05mol/L的緩沖液中，配制成濃度為6%的復(fù)合酶溶液，然后于5°C、8000r/min下離心lOmin，收集上層清夜；將制備好的含鋯-鋁-鈦副廢物加入到酶溶液中，使酶與含鋯-鋁-鈦副廢物比例為0.2，于25°C水浴中振蕩反應(yīng)0.5h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的復(fù)合酶，即得以含鋯-鋁-鈦副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶。
[0023]應(yīng)用實(shí)施例1
取按常規(guī)方法浸水、去肉后的黃牛皮IOOkg,在轉(zhuǎn)鼓中加入水IOOkg,調(diào)節(jié)溫度至約18-22°C，調(diào)節(jié)pH至約7.5，加入按實(shí)施例1制備得到的固定化復(fù)合脫毛酶(酶用量為150_200u/g皮),轉(zhuǎn)動(dòng)60min,停30min,以后間歇轉(zhuǎn)動(dòng),轉(zhuǎn)動(dòng)IOmin,停20min,總時(shí)間2-4小時(shí)，毛松動(dòng)后隨機(jī)械作用而脫落。
[0024]應(yīng)用實(shí)施例2
取按常規(guī)方法浸水、脫脂、去肉后的豬皮IOOkg加入轉(zhuǎn)鼓，加入水60kg，調(diào)節(jié)溫度至約25-28°C，調(diào)節(jié)pH至約8.0，加入按實(shí)施例2制備得到的固定化復(fù)合脫毛酶(酶用量為150-200u/g皮)，轉(zhuǎn)動(dòng)60min，以后間歇轉(zhuǎn)動(dòng)，轉(zhuǎn)動(dòng)15min，停30min，總時(shí)間4_6小時(shí)，毛松動(dòng)后出鼓、拔毛。
[0025]應(yīng)用實(shí)施例3
取按常規(guī)方法浸水、去肉后的山羊皮100kg，在轉(zhuǎn)鼓中加入水80kg，調(diào)節(jié)溫度至約28-30°C，調(diào)節(jié)pH至約8.5，加入按實(shí)施例3制備得到的固定化復(fù)合脫毛酶(酶用量為150_200u/g皮),轉(zhuǎn)動(dòng)60min,停30min,以后間歇轉(zhuǎn)動(dòng),轉(zhuǎn)動(dòng)IOmin,停20min,總時(shí)間3-5小時(shí)，毛松動(dòng)后隨機(jī)械作用而脫落。
[0026]為了考察制備的固定化復(fù)合脫毛酶的酶固載量及活力保持的情況，本發(fā)明隨機(jī)選取以上實(shí)施例制備的固定化復(fù)合脫毛酶，并分別依據(jù)考馬斯亮藍(lán)法(Bradford.M.M.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities ofprotein utilizing the principle of protein dye binding[J].Anal Biochem, 1976,72(1/2):248-254.)、固定化酶活力的測(cè)定方法(庫(kù)漢生，姚曉玲，張婷，等.固定化胰蛋白酶活力的測(cè)定方法探討[J].氨基酸和生物資源，2007，29 (2):33-35.中國(guó)人民共和國(guó)輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn).QB/T 1803-1993[S].工業(yè)酶制劑通用試驗(yàn)方法，1993.)進(jìn)行了酶固載量和活力保持的測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
[0027]其次，本發(fā)明還考察了 pH、環(huán)境溫度對(duì)制備的固定化復(fù)合脫毛酶活力的影響程度。于40°C條件下，將固定化酶與自由酶分別置于pH值為6.0-9.0的緩沖液中保溫IOmin后測(cè)定其酶活力，繼而得到了 PH值對(duì)固定化復(fù)合脫毛酶和自由酶活力的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，固定化復(fù)合脫毛酶在考察PH值范圍內(nèi)較自由酶均表現(xiàn)出了更高的相對(duì)活力。在pH值為6.0時(shí)，固定化酶的相對(duì)活力在90%左右，而自由酶在60%左右。由此可見(jiàn)，復(fù)合脫毛酶經(jīng)本發(fā)明方法固定后對(duì)PH的敏感性降低，可在更寬的pH范圍內(nèi)發(fā)揮較高的催化活力。在考察環(huán)境溫度對(duì)固定化復(fù)合脫毛酶活力的影響時(shí)，將固定化酶與自由酶置于5-75°C下，PH值為8.0的磷酸鹽緩沖液中保溫IOmin后測(cè)定其酶活力，繼而得到了溫度對(duì)固定化復(fù)合脫毛酶和自由酶活力的影響，結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可見(jiàn)，固定化復(fù)合脫毛酶在所考察的溫度范圍內(nèi)較自由酶均表現(xiàn)出更高的相對(duì)活力，當(dāng)溫度達(dá)到75°C時(shí)，固定化酶仍可保持原有活力的80%，而自由酶僅為35%。由此可見(jiàn)，復(fù)合脫毛酶經(jīng)此法固定后對(duì)溫度的敏感性降低，并可在更廣泛的溫度范圍內(nèi)發(fā)揮較高的催化活力。[0028]最后，本發(fā)明還考察了制備的固定化復(fù)合脫毛酶的應(yīng)用效果。將按應(yīng)用實(shí)施例1加工得到的裸皮經(jīng)1.0%的硫化鈉和0.7%的液堿(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氫氧化鈉溶液)補(bǔ)充脫毛、分散纖維后，不經(jīng)過(guò)復(fù)灰、軟化操作，直接按常規(guī)工藝進(jìn)行浸酸、鞣制、鞣后濕加工以及做軟等后整理處理。在此過(guò)程中，采用數(shù)碼相機(jī)對(duì)使用固定化復(fù)合脫毛酶脫毛后的裸皮進(jìn)行拍照，結(jié)果見(jiàn)圖3。同時(shí)，采用JEOL JSM-5900LV型掃描電子顯微鏡觀察的方法對(duì)加工得到的黃牛鞋面革樣品進(jìn)行粒面和斷面情況觀察，結(jié)果見(jiàn)圖4、圖5。由圖3可見(jiàn)，采用固定化復(fù)合脫毛酶脫毛后的黃牛皮幾乎只存在少量短小絨毛和新生小毛。從粒面形態(tài)可以看到，采用固定化復(fù)合脫毛酶脫毛后的裸皮，皮面潔白，粒面毛孔清晰，柔軟性良好，可見(jiàn)固定化復(fù)合脫毛酶具有理想的脫毛綜合作用結(jié)果。由圖4可見(jiàn)，采用固定化復(fù)合脫毛酶加工得到的黃牛鞋面革，粒面平整、光滑，毛孔較完整。表明，固定化復(fù)合脫毛酶不同于常規(guī)生物酶，它未對(duì)加工得到的皮革質(zhì)量帶來(lái)十分顯著的負(fù)面影響，具有高度安全性，工藝及成革質(zhì)量穩(wěn)定性高，具有溫和脫毛和分散皮膠原纖維的能力。由圖5可見(jiàn)，采用固定化復(fù)合脫毛酶加工得到的黃牛鞋面革，其膠原纖維的分離松散程度及均勻性較好，較大纖維束縱向分裂成較小纖維，可清晰地看到個(gè)別松散了的細(xì)小膠原纖維束。此外，還可以看到，膠原纖維束間呈現(xiàn)出一定的空隙。該空隙主要是在樣品加工處理過(guò)程中因纖維間質(zhì)的除去形成的?？梢?jiàn)，與常規(guī)生物酶相比，固定化復(fù)合脫毛酶能夠更好地除去纖維間質(zhì)，分散膠原纖維。
[0029]表1
【權(quán)利要求】
1.一種以制革副廢物為載體固定化復(fù)合脫毛酶的制備方法，該方法的工藝步驟和條件如下: (1)先將100份制革固體副廢物室溫下浸泡于去離子水中l(wèi)-4h，再加入10-30份戊二醛，并在15-35°C水浴中振蕩反應(yīng)l_3h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的戊二醛； (2)準(zhǔn)確稱取一定量的復(fù)合酶溶于pH值為6.0-8.5的、離子強(qiáng)度為0.01-0.5mol/L的緩沖液中，配制成復(fù)合酶溶液，然后于5°C、8000r/min下離心lOmin，收集上層清液； (3)將制備好的制革固體副廢物加入到復(fù)合酶溶液中，使酶與制革固體副廢物比例為0.2-0.4，于5-25°C水浴中振蕩反應(yīng)0.5_2h，過(guò)濾并用去離子水洗去載體上殘留的復(fù)合酶，即得以制革固體副廢物為載體的固定化復(fù)合脫毛酶； 以上各物料的份數(shù)均為重量份。
2.以上方法中所用制革固體副廢物為采用鋯、鋁、鈦、鐵、鋅、稀土、硅等任一金屬鹽或任兩種或兩種以上金屬鹽混合預(yù)鞣或主鞣，所得坯革經(jīng)削勻、修邊、粉碎處理后的平均粒徑為5-50 iim的粒狀物 。
3.以上方法中所用復(fù)合脫毛酶，其特點(diǎn)在于每100份復(fù)合脫毛酶包含55-80份的中性蛋白酶、10-25份的a淀粉酶和5-15份的胰酶。
【文檔編號(hào)】C14C1/06GK103525954SQ201310514415
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月28日
【發(fā)明者】胡楊, 但衛(wèi)華, 劉蘭, 但年華 申請(qǐng)人:四川大學(xué)