一株擬莖點(diǎn)霉屬真菌及其在制備菌紋木中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株擬莖點(diǎn)霉屬菌株（Phomopsis?sp.）J9GAN及其在制備菌紋木中的應(yīng)用，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。所述菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCCNo：7108。所述菌株對木質(zhì)基材料具有優(yōu)良的浸染能力，浸染時(shí)間短且深度大，在材料表面能形成美觀的色澤及紋理，且對物理力學(xué)強(qiáng)度無影響。用所述菌株制備菌紋木的方法包括菌株活化、擴(kuò)繁與接菌培養(yǎng)步驟，首先將菌株接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30℃下活化與擴(kuò)繁7~15天，然后將木質(zhì)基材料滅菌，與擴(kuò)繁菌株充分接觸，在22~30℃下培養(yǎng)4~8周即可。本發(fā)明所述方法工藝合理，操作簡單，所制得的菌紋木具有很好的裝飾效果，且對基材的物理力學(xué)性質(zhì)無影響，有利于大規(guī)模生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
【專利說明】一株擬莖點(diǎn)霉屬真菌及其在制備菌紋木中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種侵染時(shí)間短且深度大，色澤及紋理美觀，對木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無影響的擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株及其在制備菌紋木中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]木材的真菌色變長期以來被視為木材的缺陷，降低了木材的價(jià)值，實(shí)際上真菌的色變，如線條、染色等，具有自然天成、獨(dú)一無二的特點(diǎn)，當(dāng)腐朽不嚴(yán)重時(shí)可以作為木材的一種奇妙的修飾。若利用這種帶 有自然線條或色彩的木材制作工藝品，如花瓶、耳環(huán)、鋼筆、貼木單板等，可提高木材的附加價(jià)值。帶有天然花紋和色澤的菌紋木在市場，尤其裝飾、裝修、工藝品市場將會(huì)受到歡迎。
[0003]但是天然獲得的菌紋木仍存在以下不足:1、原料不易獲得，帶有很強(qiáng)的偶然性，因?yàn)樘烊痪y木在自然界中只有在具有可形成菌紋木的菌種存在時(shí)才有可能形成，所以只有少部分林中的枯枝倒木中能找到少量菌紋木；2、天然菌紋木形成的時(shí)間長，受到很多氣候、環(huán)境因素的影響，如干燥、寒冷、缺氧等或其他微生物干擾等；3、天然菌紋木在自然條件下形成，常常存在某些菌種對木質(zhì)基材料侵染過度的問題，導(dǎo)致材料的強(qiáng)度損失嚴(yán)重，無法進(jìn)行加工使用，或者滲透性明顯增加，在進(jìn)行防腐、阻燃等后處理時(shí)會(huì)吸入過多的藥劑，導(dǎo)致成本成倍增加；4、天然菌紋木在自然條件下形成，木材大小、形態(tài)不可預(yù)見，加工時(shí)或?qū)p失美觀線條的部分；5、天然菌紋木在自然條件下形成，易受到蟲害或其他真菌侵染，使木材不完整或形成不美觀的腐朽或變色。
[0004]因此，有必要分離、改良一種侵染時(shí)間短且深度大，色澤及紋理美觀，對木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無影響的菌株，用其對木質(zhì)基材料進(jìn)行侵染處理制備菌紋木，以滿足裝飾、裝修、工藝品制作的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的第一技術(shù)問題在于提供一種侵染時(shí)間短且深度大，色澤及紋理美觀，對木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無影響的真菌菌株。
[0006]本發(fā)明要解決的第二技術(shù)問題在于提供所述真菌菌株在制備菌紋木中的應(yīng)用。
[0007]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。
[0008]除非另有說明外，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為體積百分?jǐn)?shù)。
[0009]一株擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株(J%omopsis sp.)，命名為J9GAN，經(jīng)鑒定為擬莖點(diǎn)霉屬的一種真菌sp.)的一個(gè)株系，是從腐朽的樹樁、倒木或枯枝中分離得到，已于2013年I月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱CGMCCJi址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為 CGMCC No:7108o
[0010]一種用所述擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株sp.)J9GAN制備菌紋木的方法,包括菌株擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，具體包括以下步驟:
A、菌株擴(kuò)繁:將擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株sp.) J9GAN接種到擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30°C下黑暗培養(yǎng)7~15天，得擴(kuò)繁菌株；活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基任一種；
B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與擴(kuò)繁菌株充分接觸，在22~3(TC下培養(yǎng)41周，即得菌紋木。
[0011]本發(fā)明的有益效果包括以下幾個(gè)方面。
[0012]1、本發(fā)明所述菌株對木質(zhì)基材料的侵染效果好，在非常短的時(shí)間內(nèi)即可在木質(zhì)基材料表面及內(nèi)部產(chǎn)生美麗的花紋和顏色。采用固體接菌法，在處理后的第5飛周，基材表面即有紋理和色斑產(chǎn)生，處理后的第61周，處理深度在橫向及縱向方向上均可達(dá)0.2^0.7cm。采用液體接菌法，在處理后的第4飛周，基材表面即有紋理和色斑產(chǎn)生，處理后的第6~8周，處理深度在橫向及縱向方向上均可達(dá)0.3^0.8cm。
[0013]2、本發(fā)明所述菌株對木質(zhì)基材料的侵染方式非常多樣，能夠形成不同效果的花紋，適用于不同的處理對象。采用固體接菌法，有利于形成生動(dòng)多變的具有圈狀圖案的花紋，更有利于按照裝飾設(shè)計(jì)的需求形成局部的紋理。而采用液體接菌法，更有利于形成長而彎曲的細(xì)線狀線條，更迅速地在木塊內(nèi)部形成花紋，更有利于處理形體不規(guī)則的樣品，消除處理死角，使處理效果事半功倍。
[0014]3、本發(fā)明所述菌株及菌紋木的制備方法對木質(zhì)基材料的物理力學(xué)性能，如質(zhì)量、密度、強(qiáng)度，均無影響。接菌處理后的第8周，電鏡掃描結(jié)果顯示真菌的菌絲體主要位于木質(zhì)基材料的細(xì)胞腔中，對細(xì)胞壁幾乎 無損傷。由于菌絲沒有對木質(zhì)基材料的細(xì)胞壁形成明顯的破壞，所制備的菌紋木在吸濕性、密度與強(qiáng)度方面的性能與健康材無明顯差別。
[0015]4、本發(fā)明所述菌紋木的制備方法技術(shù)路線合理、操作流程簡單、原料易得、成功率高，有利于大規(guī)模生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為實(shí)施例2中處理后毛白楊切面的表面的花紋。
[0017]圖2為實(shí)施例2中毛白楊處理后縱切面的表面的花紋。
[0018]圖3為實(shí)施例3中毛白楊處理后橫切面的表面的花紋。
[0019]圖4為實(shí)施例3中毛白楊處理后縱切面的表面的花紋。
[0020]圖5為實(shí)施例3中毛白楊處理后縱剖面的花紋。
[0021]圖6為實(shí)施例4中毛白楊處理后橫切面的表面的花紋。
[0022]圖7為實(shí)施例4中毛白楊處理后縱切面的表面的花紋。
[0023]圖8為實(shí)施例4中毛白楊處理后縱剖面的花紋。
[0024]圖9為實(shí)施例5中思茅松木處理后橫切面的表面的花紋。
[0025]圖10為實(shí)施例5中思茅松木處理后縱切面的表面的花紋。
[0026]圖11為實(shí)施例5中思茅松木處理后縱剖面的花紋。
[0027]圖12為實(shí)施例7中毛白楊處理后橫切面的表面的掃描電鏡圖。
[0028]圖13為實(shí)施例7中毛白楊處理后具花斑紋處的弦切面的掃描電鏡圖。
[0029]圖14為實(shí)施例7中毛白楊處理后具花斑紋處的徑切面的掃描電鏡圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0030]下面對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0031]一株擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株sp.)J9GAN,于2013年I月21日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱06110:，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:7108。
[0032]所述菌株能夠在木質(zhì)材料表面形成黑色、灰色、褐色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀花紋中任一種或幾種。
[0033]所述菌株在接種到木質(zhì)基材料后的第4飛周即能在木質(zhì)基材料的表面產(chǎn)生花紋，接種6~8周，木質(zhì)基材料中的花紋深度可達(dá)0.3^0.8cm。
[0034]所述菌株是通過下述具體步驟獲得的:
A、標(biāo)本采集:在腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有黑色、灰色、褐色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆茫?br> B、菌株分離與篩選:將采集的木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體破碎、消毒后，置于富集培養(yǎng)基中在22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)7~15天至長出菌絲；富集培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基任一種；
將菌落正面白色，背面淺黃褐色，圓周狀發(fā)散生長，氣生菌絲不發(fā)達(dá)，毛氈狀，邊緣不平整，在與周圍菌絲體之間的培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)5~12天至菌落長出；增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基任一種；
C、菌種保存:挑取增殖培養(yǎng)基中菌落周圍形成線條者接種至保存培養(yǎng)基中，于恒溫箱中溫度22~30°C，黑暗靜置培養(yǎng)5~10天，于4°C冰箱中保存；保存培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基的任一種；
PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160~240、葡萄糖10~20、瓊脂14~20、自然pH ;
PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:馬鈴薯200、葡萄糖15、瓊脂17、pH 6.5^7.0 ；
MA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:麥芽膏21~30、瓊脂14~20、ΡΗ6.0~7.5 ；
MA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:麥芽膏25、瓊脂17、PH6.5~7.0 ；
OA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:燕麥片27~33、瓊脂14~20、ΡΗ6.0~7.5 ；
OA培養(yǎng)基成分以g/L優(yōu)選為:燕麥片30、瓊脂17、PH6.5~7.0。
[0035]步驟A所述的標(biāo)本采集是在溫暖潮濕的闊葉林、針葉林或針闊葉混交林中進(jìn)行。
[0036]步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在溫暖潮濕的闊葉林中進(jìn)行。
[0037]步驟A所述的木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體采集后需冷藏保存?zhèn)溆?，冷藏溫度?°C。
[0038]步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在楊柳科楊屬、樺木科榿屬、樺木屬、薔薇科櫻桃屬、杉科杉木屬、木棉科輕木屬、殼斗科櫟屬樹種的腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有黑色、灰色、褐色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆?。[0039]所述楊屬樹種優(yōu)選毛白楊。
[0040]所述樺木屬樹種優(yōu)選西南樺。
[0041]所述棺屬樹種優(yōu)選西南棺木。
[0042]步驟B所述的破碎，是用解剖刀將木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體切成 0.3~0.8cmX0.3~0.8cmX0.3~0.8cm 的小塊。
[0043]步驟B所述的消毒，是用75%酒精浸泡消毒l(Tl5s,再用0.1%升萊浸泡消毒3^7min,再用滅菌蒸餾水清洗3次。
[0044]步驟B所述的富集培養(yǎng)的條件優(yōu)選:26°C黑暗靜置培養(yǎng)9天。
[0045]步驟B所述的菌株分離與篩選是從富集培養(yǎng)基中將菌落正面白色，背面淺黃褐色，圓周狀發(fā)散生長，氣生菌絲不發(fā)達(dá)，毛氈狀，邊緣不平整，在與周圍菌絲體之間的培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中。
[0046]步驟B所述的增殖培養(yǎng)的條件優(yōu)選:22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)10天。
[0047]步驟C所述的保存培養(yǎng)的條件優(yōu)選:22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)8天。
[0048]—種用所述的擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株sp.)J9GAN制備菌紋木的方法,包括菌株活化、接菌培養(yǎng)工序，具體包括以下步驟:
A、菌株活化與擴(kuò)繁:將擬 莖點(diǎn)霉屬真菌菌株sp.) J9GAN接種到活化培養(yǎng)基上，在22~3(TC下培養(yǎng)7~15天，得活化與擴(kuò)繁菌株；
活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基任一種；
PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160~240、葡萄糖10~20、自然PH ;
PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:馬鈴薯200、葡萄糖15、PH 6.5~7.0 ；
B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與活化菌株充分接觸，在22KTC下培養(yǎng)41周，即得菌紋木。
[0049]所述的制備方法，還可以包括后處理步驟，將接菌培養(yǎng)后得到的菌紋木刮去表面的菌絲，洗凈干燥至含水率8~10%。
[0050]步驟B所述的木質(zhì)基材料為原木、實(shí)木塊、木板、木皮、木薄片、木棒、異形木制品中的任一種或幾種。
[0051 ] 步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹種可以為任意樹種。
[0052]步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹種優(yōu)選毛白楊、西南樺、西南榿木、思茅松。
[0053]步驟B所述的木質(zhì)基材料在接種前，可根據(jù)需要加工成任意的形狀。
[0054]步驟B所述的滅菌，是將木質(zhì)基材料在高壓蒸汽式滅菌器中，在121 °C下滅菌處理20分鐘以上。
[0055]步驟B所述的滅菌，是將木質(zhì)基材料置于培養(yǎng)瓶中，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌60分鐘。
[0056]步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化菌株充分接觸，在固體接菌時(shí)是將含有菌落的培養(yǎng)基切成與待接種木質(zhì)基材料大小、形狀相近的菌塊，將至少一塊菌塊貼在木質(zhì)基材料表面。
[0057]所述菌塊的尺寸和形狀優(yōu)選為邊長f4cm的三角形、方形、多邊形或面積相近的圓形。[0058]所述菌塊的總面積在2cm2以上。
[0059]步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化菌株充分接觸，在液體接菌時(shí)，是將 待接種的木質(zhì)基材料浸入含有菌落的培養(yǎng)液中，且/或?qū)⒊蓤F(tuán)的菌絲體夾取置于木質(zhì)基材 料的表面或附近。
[0060]所述菌絲體的夾取量與木質(zhì)基材料的體積比為0. r0. 5:1。
[0061]所述菌絲體的夾取量的總體積在1cm3以上。
[0062]實(shí)施例1 :
-擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp. ) J9GAN的獲得、鑒定與保藏。
[0063](1)擬莖點(diǎn)霉屬真菌iPhomopsis sp. ) J9GAN的獲得與鑒定。
[0064]本發(fā)明所述的擬莖點(diǎn)霉屬真菌，是從活立木的枯枝中分離得到。樣品采自云南省 昆明市金殿公園，采集闊葉材活立木上枯枝部分且具有帶線花紋的樹枝，長約3cm，直徑約 1.5cm，在4°C冷藏保存?zhèn)溆谩?br> [0065]將米集的已腐朽枯枝樣品，以解剖刀切成0. 3?0. 5cmX0. 3?0. 5cmX0. 2?0. 4cm的 小塊，用75%酒精浸泡消毒1(T15s，再用0. 1%升汞浸泡消毒r6min，再用滅菌蒸餾水清洗 3次。置于PDA培養(yǎng)基中在28°C黑暗中靜置培養(yǎng)10天至長出菌絲；然后將菌落正面白色， 背面淺黃褐色，圓周狀發(fā)散生長，氣生菌絲不發(fā)達(dá)，毛氈狀，邊緣不平整，在與周圍菌絲體之 間的培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至PDA培養(yǎng)基中在28°C黑暗靜置培養(yǎng)8天，至 菌落長出。
[0066]待菌落長出后，挑取長勢旺盛者保存培養(yǎng)，保存培養(yǎng)的條件為在28°C黑暗靜置培 養(yǎng)8天，于4°C冰箱中保存；保存培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基；PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為：馬鈴薯 200、葡萄糖 18、瓊脂 17、pH6. 5?7. 0。
[0067]對上述分離的菌株J9GAN，通過生物學(xué)特性觀察，進(jìn)行進(jìn)一步的形態(tài)鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié) 果記錄如下：
A、形態(tài)特征：在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，菌落直徑約8. 3cm,生長較快，菌落正面白色， 背面淺黃褐色，圓周狀發(fā)散生長，氣生菌絲不發(fā)達(dá)，毛氈狀，邊緣不平整。后期形成黑色塊 狀子座，直徑0. 1-0. 4cm，子座內(nèi)形成具孔口分生孢子器，產(chǎn)生兩種孢子，一種卵圓形至紡錘 形，一種線型。
[0068]B、培養(yǎng)特征：在PDA液態(tài)培養(yǎng)基上7天左右形成的菌絲體呈團(tuán)塊狀，表面不平 整，培養(yǎng)液清澈，初期無可溶性色素。在木塊上接種培養(yǎng)期間可形成黑色塊狀子座，直徑 0. 1—0. 4cm。
[0069]C、菌株的穩(wěn)定性：該菌生長溫度范圍在6?35°C，適宜生長溫度為22?30°C，生長PH 值在4. 5?7. 2，最適宜PH值在6. 5?7. 2。
[0070]D、5. 8S rDNA序列分析：對該菌株進(jìn)行5. 8S rDNA序列測定，以菌 株 J9GAN 的總 DNA 為模板，在引物 ITS1 (5，-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’）和 ITS4 (5，-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ )的引導(dǎo)下PCR擴(kuò)增該菌株的5. 8S rDNA序列，PCR反應(yīng)體 系為:2iUDNA 模版、1. 5iil 引物 ITS1U. 5u 1 引物 ITS4、Taqmix22 yl、去離子水 20u 1, 共 50ul。PCR 反應(yīng)程序：a、94°C 4min ;b、94°C lmin，50°C 45s，72°C lmin，35 個(gè)循環(huán)；c、 72°C lOmin。
[0071]將PCR反應(yīng)產(chǎn)物送到生物公司測序得ITS序列，經(jīng)復(fù)檢，在美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)中比對，比對結(jié)果表明，菌株J9GAN與擬莖點(diǎn)霉屬真菌iPhomopsis sp.)的5.8SrDNA序列的相似性達(dá)到了 98 %。通過序列比對和形態(tài)特征將菌株J9GAN鑒定為擬莖點(diǎn)霉/8-- (Phoaopsis sp.)。
[0072](2)擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.) J9GAN 的保藏。
[0073]通過上述鑒定結(jié)果,確認(rèn)菌株J9GAN為擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.)的一個(gè)株系，命名為J9GAN，于2013年I月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱06110:，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:7108。
[0074]實(shí)施例2:
——擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.) J9GAN制備菌紋木。
[0075](I)菌紋木制備。
[0076]首先，將擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.) J9GAN接種到PDA液態(tài)培養(yǎng)基上，在26°C下黑暗搖床培養(yǎng)9天，形成直徑f 3cm的菌絲體及其菌絲體孢子懸浮液。PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯200、葡萄糖18、ρΗ6.5-7.0。
[0077]然后，將待接種的毛白楊原木切成2cmX 2cmX 3cm的小木塊，裝在底面直徑6cm高Ilcm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤，但無多余水分溢出蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌60分鐘。
[0078]夾取木塊放入菌懸液中沾上菌絲或孢子后，放入一并經(jīng)過消毒的蛭石中，并將成團(tuán)的菌絲體夾取置于木塊表面，所夾菌絲體積與木塊體積的比值為0.3:1。在26°C下黑暗培養(yǎng)4周。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，得菌紋木。
[0079](2)結(jié)果觀察。
[0080]接種4周，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，然后將表面圖案掃描后劈開木塊觀察。
侵染深度:到4周，侵染深度達(dá)0.1cm0
[0081]紋理的顏色和類型:木塊表面形成細(xì)線狀、彎曲的黑色線條，大部分閉合成圈，及少量帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀的染色。
[0082]實(shí)施例3:
——擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.) J9GAN制備菌紋木。
[0083](I)菌紋木制備。
[0084]具體步驟與實(shí)施實(shí)例2相同，將培養(yǎng)時(shí)間延長至6周。
[0085](2)結(jié)果觀察。
[0086]接種6周，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，然后將表面圖案掃描后劈開木塊觀察。
侵染深度:到6周，侵染深度達(dá)0.6cm。
[0087]紋理的顏色和類型:木塊表面形成細(xì)線狀、彎曲的黑色線條，部分閉合成圈，及少量帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀的染色。花紋`數(shù)量較實(shí)施例2多，顏色較深?？v向劈開，花紋深入木塊達(dá)0.6cm。
[0088]實(shí)施例4:
——擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.) J9GAN制備菌紋木。[0089](I)菌紋木制備。
[0090]具體步驟與實(shí)施實(shí)例2相同，將培養(yǎng)時(shí)間延長至8周。
[0091](2)結(jié)果觀察。
[0092]接種8周，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，然后將表面圖案掃描后劈開木塊觀察。
侵染深度:到8周，侵染深度達(dá)0.8cm。
[0093]紋理的顏色和類型:木塊表面形成細(xì)線狀、彎曲的黑色線條，部分閉合成圈，及少量帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀的染色?；y數(shù)量較實(shí)施例3多，顏色較深。縱向劈開，花紋深入木塊達(dá)0.8cm。
[0094]實(shí)施例5:
——由擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.) J9GAN制備菌紋木。
[0095](I)菌紋木制備。
[0096]首先，將擬莖點(diǎn)霉屬真菌sp.) J9GAN接種到PDA固體培養(yǎng)基上，在28°C下黑暗靜置培養(yǎng)12天， 菌絲體幾乎布滿平板，制成平板菌落。PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯200、葡萄糖20、瓊脂17、pH 6.5-7.0。
[0097]然后，將待接種的思茅松原木切成2cmX 2cmX 3cm的小木塊，裝在底面直徑6cm高Ilcm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤，但無多余水分溢出。蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌60分鐘。
[0098]用解剖刀將菌落及其培養(yǎng)基切成邊長2cm的方形菌塊，用鑷子將3塊菌塊夾取，貼在滅菌木塊的表面，在28°C下黑暗培養(yǎng)8周。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，得菌紋木。
[0099](2)結(jié)果觀察。
[0100]接種8周，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，然后將表面圖案掃描后劈開木塊觀察。
[0101]侵染深度:到8周，木塊花紋深度在縱向及橫向方向上均可達(dá)0.7cm。
[0102]花紋的顏色和類型:木塊表面形成細(xì)線狀，彎曲的黑色、深褐色、灰色線條，其中大部分閉合成圈狀，同時(shí)兼有帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀的花紋?？v向劈開，剖面可見閉合的圈狀細(xì)線狀的圖案，深度達(dá)0.7cm。
[0103]實(shí)施例6:
——菌紋木的質(zhì)量損失率。
[0104]實(shí)驗(yàn)材料:接種前后的實(shí)施例4中的木塊。
[0105]實(shí)驗(yàn)方法:實(shí)施例4中，將原木切成小木塊后，按照GB1931-1991的方法將木塊烘至絕干，用精確到0.001的電子天秤稱木塊質(zhì)量，為接菌處理前原木絕干質(zhì)量Ml。接菌處理8周后，刮去木塊表面菌絲，洗凈后按照GB1931-1991的方法將木塊烘至絕干，用精確到
0.001的電子天秤稱木塊質(zhì)量，為接菌處理后原木絕干質(zhì)量M2。按下式計(jì)算原木的質(zhì)量損失率C。本實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以3次的質(zhì)量損失率平均值為菌紋木的質(zhì)量損失率。
[0106]C=(接菌處理前原木絕干質(zhì)量-接菌處理后原木絕干質(zhì)量)+接菌處理前原木絕干質(zhì)量X 100%。
[0107]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:平均質(zhì)量損失率為3.8%。[0108]實(shí)施例7:
——菌紋木微觀結(jié)構(gòu)觀察。
[0109]實(shí)驗(yàn)材料:接種前后的實(shí)施例4中的木塊。
[0110]實(shí)驗(yàn)方法:將菌紋木鋸成約為0.6cmX0.6cmX0.6cm的方形,方形至少一個(gè)表面含花紋，置于恒溫水浴鍋中80°C水煮至木塊下沉。以切片機(jī)削平含花紋的表面，在真空裝置中對含花紋的表面及其垂直面實(shí)施噴金，置于掃描電鏡下觀察拍照。
[0111]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:菌絲體分布于菌紋木形成花紋的區(qū)域，在黑色、深褐色、藍(lán)灰色線條之外無菌絲分布；從菌絲體分布情況來看，菌絲主要位于毛白楊基材的細(xì)胞腔中，通過細(xì)胞壁上的紋孔出入胞腔，而基材的各類細(xì)胞尤其木纖維的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整，與無菌絲體分布區(qū)域未有明顯差別。由于基材的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整無損，基材的物理力學(xué)性質(zhì)受到的影響極其輕微，與健康材幾無差別。`
【權(quán)利要求】
1.一株擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株 75.Υ5.sp.)J9GAN,已于2013年I月21日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱06110:，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:7108。
2.如權(quán)利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株能夠在木質(zhì)材料表面形成黑色、灰色、褐色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀花紋中任一種或幾種。
3.如權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的菌株，其特征在于，所述菌株在接種到木質(zhì)基材料后的第4飛周即能在木質(zhì)基材料的表面產(chǎn)生花紋，接種6~8周，木質(zhì)基材料中的花紋深度可達(dá)0.3^0.8cm。
4.如權(quán)利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株是通過下述具體步驟獲得的: A、標(biāo)本采集:在腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有黑色、灰色、褐色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆茫? B、菌株分離與篩選:將采集的木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體破碎、消毒后，置于富集培養(yǎng)基中在22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)疒15天至長出菌絲；富集培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基的任一種； 將菌落正面白色，背面淺黃褐色，圓周狀發(fā)散生長，氣生菌絲不發(fā)達(dá)，毛氈狀，邊緣不平整，在與周圍菌絲體之間的 培養(yǎng)基上形成黑色線條的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中在22~30°C黑暗靜置培養(yǎng)5~12天至菌落長出；增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基任一種； C、菌種純化:挑取增殖培養(yǎng)基中菌落周圍形成線條者接種至純化培養(yǎng)基中，純化培養(yǎng)2次，溫度22~30°C，黑暗靜置培養(yǎng)5~10天；挑取長勢旺盛者編號(hào)并保存；純化培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基的任一種。
5.如權(quán)利要求4所述的菌株，其特征在于，步驟A所述的標(biāo)本采集是在溫暖潮濕的闊葉林、針葉林或針闊葉混交林中進(jìn)行。
6.如權(quán)利要求4或5任一項(xiàng)所述的菌株，其特征在于，步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在楊柳科楊屬、樺木科棺屬、樺木屬、薔薇科樓桃屬、杉科杉木屬、木棉科輕木屬、殼斗科櫟木屬樹種的腐朽樹樁、倒木或枯枝中，采集具有黑、灰色、褐色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)材料組織，連帶其上面生長的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆谩?br> 7.一種用權(quán)利要求1所述的擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株sp.)J9GAN制備菌紋木的方法，包括菌株活化與擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，其特征在于，包括以下具體步驟: A、菌株活化與擴(kuò)繁:將擬莖點(diǎn)霉屬真菌菌株sp.) J9GAN接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30°C下黑暗培養(yǎng)7~15天，得擴(kuò)繁菌株；活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基任一種； B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與擴(kuò)繁菌株充分接觸，在22~3(TC下培養(yǎng)41周，即得菌紋木。
8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，還可以包括后處理步驟，將接菌培養(yǎng)后得到的菌紋木刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率8~10%。
9.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化菌株充分接觸，在固體接菌時(shí)是將含有菌落的培養(yǎng)基切成與待接種木質(zhì)基材料大小、形狀相近的菌塊，將至少一塊菌塊貼在木質(zhì)基材料表面。
10.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化菌株充分接觸，在液體接菌時(shí)，是將待接種的木質(zhì)基材料浸入含有菌落的培養(yǎng)液中，且/或?qū)⒊蓤F(tuán)的菌絲體夾取置于木質(zhì)基材料的表面或附近。
【文檔編號(hào)】B27K5/02GK103497897SQ201310136839
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年4月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月19日
【發(fā)明者】何海珊, 邱堅(jiān), 伍建榕, 羅蓓, 伍建玲, 甘昌濤 申請人:西南林業(yè)大學(xué)