黃芩苷在制備妊娠合并糖尿病胎兒心臟發(fā)育保護(hù)藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體公開(kāi)了黃芩苷在制備妊娠合并糖尿病胎兒心臟發(fā)育保護(hù)藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用中藥單體黃芩苷進(jìn)行了雞胚試驗(yàn)，結(jié)果證明，一定濃度黃芩苷不會(huì)導(dǎo)致雞胚發(fā)育畸形，并且能夠有效緩解高糖環(huán)境誘導(dǎo)的胚胎心臟發(fā)育不良。本發(fā)明公開(kāi)了黃芩苷在藥物領(lǐng)域的新用途，不僅擴(kuò)大了黃芩苷的應(yīng)用范圍，提高了其應(yīng)用價(jià)值，還有助于進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新的藥物，比如以黃芩苷為先導(dǎo)化合物，通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾或改造，或有望進(jìn)一步提高其活性或降低副作用。
【專利說(shuō)明】
黃芩苷在制備妊娠合并糖尿病胎兒心臟發(fā)育保護(hù)藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及黃芩苷在制備妊娠合并糖尿病胎兒心臟發(fā)育保護(hù)藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，飲食習(xí)慣及生活方式的改變，妊娠合并糖尿病的發(fā)病率在全球都呈逐年上升的趨勢(shì)，成為各國(guó)的公共健康問(wèn)題。葡萄糖可以通過(guò)胎盤屏障，妊娠合并糖尿病的胎兒實(shí)質(zhì)是處于一個(gè)高葡萄糖的環(huán)境，報(bào)道稱糖尿病妊娠的胎兒的先天畸形發(fā)生率高于非糖尿病妊娠2-5倍，主要表現(xiàn)為先天性心臟病和神經(jīng)系統(tǒng)異常。
[0003]妊娠合并糖尿病患者是一類特殊的人群，主要治療措施是胰島素治療來(lái)降低體內(nèi)血糖濃度。由于胎兒的肝臟發(fā)育不完善，藥物及降解產(chǎn)物排泄延，且排除的部分代謝產(chǎn)物，可因“羊水腸道循環(huán)”被胎兒重吸收，容易在體內(nèi)蓄積，影響胎兒組織器官的發(fā)育。在妊娠期間，即使對(duì)母體無(wú)嚴(yán)重的不良反應(yīng)的藥品也可能對(duì)胎兒產(chǎn)生毒性作用。當(dāng)前治療糖尿病的口服藥物包括二甲雙胍，甲糖寧及氯磺丙脲等都明確說(shuō)明了孕婦不宜使用。
[0004]祖國(guó)醫(yī)學(xué)中，服用中藥保護(hù)胎兒正常生長(zhǎng)發(fā)育，防止流產(chǎn)、早產(chǎn)、畸形已有悠久的歷史，積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，在臨床治療方面突出了自身的優(yōu)勢(shì)。黃芩為傳統(tǒng)安胎名藥，藥源廣泛，價(jià)格低廉，無(wú)明顯毒副作用。黃芩的抗菌抗病毒、抗炎、抗過(guò)敏、降脂、保肝、利膽是其清熱燥濕的藥理學(xué)基礎(chǔ);鎮(zhèn)靜、解毒、利尿、降血壓、抗氧化、抗腫瘤等是其瀉火解毒的現(xiàn)代依據(jù)。黃芩適合妊娠期服用，因具有抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)靜、降壓、舒張血管平滑肌等藥理作用，可以提高胎盤血供。不但對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊高癥、宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩等具有防治作用，同時(shí)可減少產(chǎn)時(shí)、產(chǎn)后感染，有利產(chǎn)后子宮的止血及復(fù)舊過(guò)程。黃芩苷(Baicalin)是從黃芩根中提取分離出來(lái)的一種黃酮類化合物，分子式為C21H18O11，分子量為446.35，具有一定脂溶性，可以通過(guò)胎盤屏障。具有抑菌、利尿、抗炎、抗變態(tài)、解痙及較強(qiáng)的抗癌反應(yīng)等生理效能，在臨床醫(yī)學(xué)已占有重要地位，當(dāng)前已有多個(gè)廠家生產(chǎn)黃芩苷片，主要應(yīng)用于急、慢性肝炎，迀延性肝炎的輔助治療，對(duì)孕婦及哺乳期婦女用藥并不明確。
[0005]黃芩苷的專利多集中在其提取技術(shù)上，例如一種提高黃芩毛狀根黃芩苷產(chǎn)量的方法(201410143966.0)，一種快速高效提取黃芩苷的方法(201410502598.4)，一種生物酶法生產(chǎn)黃芩苷的提取方法(201510156727.3)等。在黃芩苷的應(yīng)用方面，多集中在其抗炎、抗菌方面的專利，例如黃芩苷在制備口腔護(hù)理品中的應(yīng)用(201310489646.6)，黃芩苷在制備保護(hù)靶器官藥物中的用途(200910004166.X)等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種黃芩苷的新用途，不僅擴(kuò)大了黃芩苷的應(yīng)用范圍，提高了其應(yīng)用價(jià)值，還有助于進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新的藥物，比如以黃芩苷為先導(dǎo)化合物，通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾或改造，或有望進(jìn)一步提高其活性或降低副作用。
[0007]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0008]提供中藥單體黃芩苷在制備妊娠合并糖尿病胎兒心臟發(fā)育保護(hù)藥物中的新用途。
[0009]所述藥物為藥學(xué)上可接受的任何劑型，可含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
[0010]黃芩雖然為傳統(tǒng)安胎名藥，但是其提取物黃芩苷對(duì)于妊娠期糖尿病胎兒的保護(hù)作用尚不明確。當(dāng)前治療妊娠合并糖尿病主要采用胰島素治療，但是價(jià)格相對(duì)高，有的患者會(huì)存在過(guò)敏反應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致新生兒低血糖癥?？诜堤撬幇ǘ纂p胍，甲糖寧及氯磺丙脲等都明確說(shuō)明了孕婦不宜使用。因此當(dāng)前并無(wú)安全的口服藥物保護(hù)妊娠合并糖尿病胎兒的心臟發(fā)育。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)一定濃度黃芩苷不會(huì)導(dǎo)致胚胎發(fā)育畸形，并且能夠有效緩解高糖環(huán)境誘導(dǎo)的胚胎心臟發(fā)育不良。本發(fā)明所述的中藥單體黃苳苷分子式為C21H18O11，分子量為446.35，結(jié)構(gòu)式如圖1所示。本發(fā)明提供了黃芩苷或其作為先導(dǎo)化合物合成出來(lái)的修飾物可以作為藥物制劑的原料，與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑一起制成藥學(xué)上可接受的任何劑型、并具有保護(hù)妊娠合并糖尿病胎兒心臟發(fā)育作用的藥物的新用途。
[0011]本發(fā)明應(yīng)用雞胚建立妊娠合并糖尿病胎兒的模型(CellCycle: 14(5):772-783.2015)，發(fā)現(xiàn)高糖環(huán)境可以通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞自噬和抑制GATA4等關(guān)鍵基因的表達(dá)導(dǎo)致胚胎心臟畸形，這為本發(fā)明提供了一個(gè)良好的研究保護(hù)妊娠合并糖尿病胎兒發(fā)育藥物的在體模型。
[0012]本發(fā)明采用中藥單體黃芩苷進(jìn)行了雞胚試驗(yàn)，結(jié)果證明，一定濃度黃芩苷不會(huì)導(dǎo)致雞胚發(fā)育畸形，并且能夠有效緩解高糖環(huán)境誘導(dǎo)的胚胎心臟發(fā)育不良，具體具有以下優(yōu)占.V.
[0013](I)一定濃度黃芩苷不會(huì)影響雞胚發(fā)育。
[0014](2)黃芩苷會(huì)顯著改善高糖環(huán)境導(dǎo)致的胚胎死亡及發(fā)育畸形。
[0015](3)黃芩苷會(huì)顯著改善高糖環(huán)境導(dǎo)致的心管發(fā)育畸形，調(diào)節(jié)相應(yīng)心管發(fā)育基因。
[0016](4)黃芩苷會(huì)顯著改善高糖環(huán)境誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1為黃芩苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0018]圖2為不同濃度黃芩苷對(duì)胚胎早期發(fā)育的影響。
[0019]圖3為不同濃度黃芩苷對(duì)高糖環(huán)境下胚胎早期發(fā)育的影響。
[0020]圖4為黃芩苷對(duì)高糖環(huán)境下心管發(fā)育的影響。
[0021 ]圖5為黃芩苷對(duì)高糖環(huán)境下雞胚細(xì)胞自噬和凋亡的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0022]下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。本發(fā)明實(shí)施例所述的中藥單體黃苳苷購(gòu)自Santa Cruz(sc_204638)。
[0023]實(shí)施例1:一定濃度黃芩苷不會(huì)影響雞胚發(fā)育
[0024]采用Early chick(EC)Culture的方法培養(yǎng)早期雞胚，將雞胚分為正常組(0.1%二甲基亞砜DMS0)和黃芩苷組(DMS0溶解黃芩苷)。黃芩苷用DMSO溶解后，所用實(shí)驗(yàn)組工作液DMSO濃度低于0.1 %。將不同濃度的黃芩苷加入到EC Culture后培養(yǎng)雞胚至HHll期(0μΜ:η=30，3.125“]?:11 = 30，6.254]\1:11 = 30，12.54]\1:11 = 27和254]\1:11 = 30)。發(fā)現(xiàn)3.1254]\1，6.254]\1的黃芩苷對(duì)26h，39h和48h的胚胎發(fā)育基本沒(méi)有明顯影響，與正常組胚胎(ΟμΜ)形態(tài)相似(圖2中的A-C3)，體節(jié)數(shù)(判斷雞胚早期發(fā)育階段的標(biāo)志性結(jié)構(gòu))沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(ρ>0.05)。12.5μΜ，25μΜ條件下的雞胚部分基本正常發(fā)育，有部分發(fā)育滯后(圖2中的C2，C3)，48h體節(jié)對(duì)數(shù)與正常組相比減少(p〈0.01，圖2中的G);并且有的雞胚出現(xiàn)了嚴(yán)重畸形(圖2中的H-1)，12.5μΜ黃芩苷嚴(yán)重畸形率為33.33%, 25μΜ黃芩苷的嚴(yán)重畸形率為50 % (圖2中的J)。
[0025]實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在雞胚模型中，6.25μΜ以下濃度的黃芩苷不影響胚胎早期發(fā)育。
[0026]實(shí)施例2:黃芩苷會(huì)顯著改善高糖環(huán)境導(dǎo)致的胚胎死亡及發(fā)育畸形。
[0027]基于我們已經(jīng)建立的妊娠糖尿病雞胚模型(Cell Cycle: 14(5):772-783.2015)，我們?cè)O(shè)立雞胚正常組(0.1 %DMS0)，高糖組(50mM葡萄糖)，黃芩苷低濃度組(6.25μΜ)，黃芩苷中濃度組(6.25μΜ)4組(n = 10)，在4組EC Culture中培養(yǎng)雞胚至HHlI期，進(jìn)行發(fā)育時(shí)期和畸形率的統(tǒng)計(jì)。從圖3中的A-Al我們可以觀察到正常組胚胎發(fā)育良好，形態(tài)正常；高糖處理組的部分胚胎(圖3中的B-B3)在48h明顯觀察到嚴(yán)重的畸形(50%，圖3中的B3)，胚胎發(fā)育滯后(圖3中的E)，體節(jié)對(duì)數(shù)與正常組相比減少(p〈0.001);高糖環(huán)境下，3.125μΜ黃芩苷處理的胚胎(圖3中的C-C3)也有較嚴(yán)重的畸形，發(fā)生率為50%，胚胎發(fā)育滯后并未得到恢復(fù)(圖3中的E-F)，體節(jié)對(duì)數(shù)與正常組相比減少(ρ〈0.001)；高糖環(huán)境下，6.25μΜ黃芩苷處理的胚胎(圖3中的D-D3)大部分可以看到胚胎發(fā)育時(shí)期和形態(tài)的恢復(fù)，嚴(yán)重畸形率為20% (圖3中的E-F)，體節(jié)對(duì)數(shù)與正常組相比無(wú)顯著性差異(ρ>0.05)。
[0028]實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在雞胚模型中，6.25μΜ濃度的黃芩苷顯著改善高糖環(huán)境導(dǎo)致的胚胎發(fā)育不良。
[0029]實(shí)施例3:黃芩苷會(huì)顯著改善高糖環(huán)境導(dǎo)致的心管發(fā)育畸形，調(diào)節(jié)相應(yīng)心管發(fā)育基因。
[0030]采用MF-20的免疫熒光對(duì)雞胚心管形態(tài)進(jìn)行觀察。我們可以看到正常組和6.25μΜ黃芩苷處理的胚胎在HHll+心管呈現(xiàn)C形環(huán)化(圖4中的A-B)，而高糖處理組嚴(yán)重畸形的胚胎出現(xiàn)了心管融合異常(圖4中的C)，應(yīng)用黃芩苷處理后得到恢復(fù)的胚胎，其心管呈現(xiàn)正常C形環(huán)化。隨后我們采用RT-PCR的方法檢測(cè)了心管分化基因VMHC，中胚層粘附基因N-Cadherin和心管分化調(diào)控基因ΒΜΡ2的mRNA水平，我們發(fā)現(xiàn)6.25μΜ黃芩苷對(duì)VMHC，N-Cadherin和ΒΜΡ2的mRNA水平并沒(méi)有明顯影響(p>0.05)，而高糖環(huán)境會(huì)抑制以上基因的表達(dá)(p〈0.01)。在高糖環(huán)境下，應(yīng)用黃芩苷干預(yù)可以顯著恢復(fù)VMHC，N-Cadherin和BMP2的mRNA表達(dá)水平(p〈0.0I，圖4中的E-EI)。采用We s t ern b I ο t的方法，我們檢測(cè)了 GATA4的表達(dá)情況，我們發(fā)現(xiàn)
6.25μΜ黃芩苷對(duì)GATA4的蛋白水平并沒(méi)有明顯影響(ρ>0.05)，而高糖環(huán)境會(huì)抑制GATA4表達(dá)(ρ〈0.05)。在高糖環(huán)境下，應(yīng)用黃芩苷干預(yù)可以顯著恢復(fù)GATA4的表達(dá)水平(ρ〈0.01，圖4中的F-Fl)。
[0031]實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在雞胚模型中，6.25μΜ濃度的黃芩苷顯著改善高糖環(huán)境導(dǎo)致的胚胎發(fā)心管畸形和心管發(fā)育重要基因表達(dá)。
[0032]實(shí)施例4:黃芩苷會(huì)顯著改善高糖環(huán)境誘導(dǎo)的雞胚細(xì)胞凋亡
[0033]基于高糖環(huán)境會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞自噬水平和細(xì)胞凋亡的增加，應(yīng)用Western blot的方法，檢測(cè)細(xì)胞自噬蛋白LC3B和Beclini的表達(dá)情況，我們發(fā)現(xiàn)6.25μΜ黃芩苷雖然會(huì)促進(jìn)LC3BΠ/ΙΧ3ΒΙ和Beclinl，但是結(jié)果并沒(méi)有顯著性差異(圖5，Ρ>0.05)，而高糖環(huán)境會(huì)顯著促進(jìn)會(huì)促進(jìn)LC3B Π /LC3BI和Beclinl (圖5，Ρ〈0.0l，Ρ〈0.05)。在高糖環(huán)境下，應(yīng)用黃芩苷干預(yù)抑制LC3B Π /LC3BI和Becl ini，雖然與高糖組相比，結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是與正常組相比，差異也不顯著(P>0.05)。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)高糖環(huán)境會(huì)顯著促進(jìn)C-caSpaSe3的表達(dá)(圖5，P〈
0.001)，黃苳苷不影響C_caspase3的表達(dá)(圖5，P>0.05),在高糖環(huán)境下應(yīng)用黃苳苷干預(yù)后，C_caspase3的表達(dá)明顯降低(圖5，P〈0.01)。
[0034]實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在雞胚模型中，6.25μΜ濃度的黃芩苷顯著改善高糖環(huán)境誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
[0035]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.黃芩苷在制備妊娠合并糖尿病胎兒心臟發(fā)育保護(hù)藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為藥學(xué)上可接受的任何劑型，所述藥物可含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK105853453SQ201610290853
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月4日
【發(fā)明人】王廣, 楊雪松, 陸大祥, 梁健欣, 高麟芮, 李帥, 鐘山, 張?jiān)姮?
【申請(qǐng)人】暨南大學(xué)