分離也為陰性;發(fā)病是指攻毒后只發(fā)病不死亡； 對(duì)發(fā)病和死亡的雞不分離病毒；陽性是指攻毒后不發(fā)病不死亡，但病毒分離為陽性。
[0030] 本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，能夠有效抵抗AIV-H5禽流感病毒，保護(hù)率達(dá)80-93.3%，保護(hù)的數(shù)量為（24_28)/30，發(fā)病的數(shù)量為(0_2)/30,死亡數(shù)量為0/30,病毒分咼為 陽性的數(shù)量為(2_4)/30。
[0031 ]實(shí)施例9本發(fā)明所述疫苗對(duì)雞城疫病毒的免疫實(shí)驗(yàn)。
[0032] 采用實(shí)施例8所述實(shí)驗(yàn)方法，改變之處為： (2)LD5Q 檢測(cè) NDV強(qiáng)毒菌株，滴鼻接種6-7周齡的SPF雞后，感染雞均在36小時(shí)內(nèi)死亡，未感染雞觀察 14天，均健活，NDV強(qiáng)毒菌株LD5q為108· V〇 · Iml。
[0033] (4)采取NDV強(qiáng)毒菌株攻毒 對(duì)各免疫組及對(duì)照組SPF雞，采用滴鼻、點(diǎn)眼方式每只分別攻擊IO5LD5q的NDV強(qiáng)毒菌株 (鼻腔O. Iml、角膜O. Iml)。攻毒后每日觀察記錄發(fā)病和死亡情況，以確定疫苗的免疫保護(hù)作 用。
[0034]實(shí)驗(yàn)結(jié)果為： 表3本發(fā)明制備的疫苗接種后的抗體檢測(cè)結(jié)果
本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，21天，NDV抗體為(6.9-8.3) I og2， 20 周，NDV 抗體為（6 · 5-8 · 0) log2，60 周，NDV 抗體為（6 · 3-7 · 5) log2。
[0035]表4本發(fā)明制備的疫苗接種后的免疫保護(hù)效果
保護(hù)是指攻毒后不發(fā)病、不死亡、病毒分離也為陰性;發(fā)病是指攻毒后只發(fā)病不死亡； 對(duì)發(fā)病和死亡的雞不分離病毒；陽性是指攻毒后不發(fā)病不死亡，但病毒分離為陽性。
[0036]本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，能夠有效抵抗NDV雞城疫病毒，保護(hù)率達(dá)76.7-96.7%，保護(hù)的數(shù)量為（23_29)/30，發(fā)病的數(shù)量為(0_3)/30,死亡數(shù)量為0/30,病毒分咼為 陽性的數(shù)量為（1_4)/30。
[0037] 實(shí)施例10 -種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 以重量含量計(jì)，包括海洋藻類糖蛋白2-100份、葡萄糖醛酸1份。
[0038] 所述海洋藻類糖蛋白，以重量含量計(jì)，包括糖5%，蛋白質(zhì)82%， 分子量為6 kDa; 所述海洋藻類為:螺旋藻； 所述糖為多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白質(zhì)，包括:絲氨酸、蘇氨酸、羥基賴氨酸、天冬氨酸； 實(shí)施例11 一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 以重量含量計(jì)，包括海洋藻類糖蛋白50份、葡萄糖醛酸11份。
[0039]所述海洋藻類糖蛋白，以重量含量計(jì)，包括糖17%，蛋白質(zhì)75%， 分子量為20 kDa; 所述海洋藻類為:小球藻； 所述糖為多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白質(zhì)，包括:絲氨酸、蘇氨酸、羥基賴氨酸、天冬氨酸； 實(shí)施例12-種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 以重量含量計(jì)，包括海洋藻類糖蛋白100份、葡萄糖醛酸20份。
[0040] 所述海洋藻類糖蛋白，以重量含量計(jì)，包括糖32%，蛋白質(zhì)60%， 分子量為200 kDa; 所述海洋藻類為:藍(lán)藻； 所述糖為多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白質(zhì)，包括:絲氨酸、蘇氨酸、羥基賴氨酸、天冬氨酸； 實(shí)施例13上述實(shí)施例10-12所述疫苗的制備方法 按照實(shí)施例10-12所述配方，稱取海洋藻類糖蛋白和葡萄糖醛酸，混合，和純水按照質(zhì) 量體積比為1:3(g: ml)，混合，完全溶解后，高速離心15分鐘，轉(zhuǎn)速為15000r/min，取上清液， 得本發(fā)明所述疫苗，-I 〇°C保存。
[0041] 實(shí)施例14上述實(shí)施例10-12所述疫苗的應(yīng)用試驗(yàn) 米取實(shí)施例8和實(shí)施例9所述實(shí)驗(yàn)方法，改變之處為:米用實(shí)施例1〇-12所述疫苗進(jìn)行檢 測(cè)抗體和免疫保護(hù)效果，具體情況見表5、表6。
[0042] (1)本發(fā)明所述疫苗對(duì)禽流感病毒的免疫效果 表5本發(fā)明制備的疫苗接種后的抗體檢測(cè)結(jié)果
本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，21天，AIV-Hdjt體為(8.2-9.2) log2， 20 周，AIV-HdJt體為（7 · 3-8 · 5) log2，60 周，AIV-HdJt體為（7 · 0-8 · 0) log2。
[0043]表6本發(fā)明制備的疫苗接種后的免疫保護(hù)效果
保護(hù)是指攻毒后不發(fā)病、不死亡、病毒分離也為陰性;發(fā)病是指攻毒后只發(fā)病不死亡； 對(duì)發(fā)病和死亡的雞不分離病毒；陽性是指攻毒后不發(fā)病不死亡，但病毒分離為陽性。
[0044]本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，能夠有效抵抗AIV-H5禽流感病毒，保護(hù)率達(dá)90-100%，保護(hù)的數(shù)量為（27_30)/30,發(fā)病的數(shù)量為0/30,死亡數(shù)量為0/30,病毒分尚為陽性的 數(shù)量為(〇_3)/30。
[0045]實(shí)施例10是優(yōu)選實(shí)施例。
[0046] (2)本發(fā)明所述疫苗對(duì)雞城疫病毒的免疫實(shí)驗(yàn)。
[0047] 表7本發(fā)明制備的疫苗接種后的抗體檢測(cè)結(jié)果
本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，21天，NDV抗體為(8.5-9.3) I og2， 20周，NDV 抗體為（7 · 8-8 · 9) log2，60周，NDV 抗體為（7 · 0-8 · 3) log2。
[0048] 表8本發(fā)明制備的疫苗接種后的免疫保護(hù)效果
保護(hù)是指攻毒后不發(fā)病、不死亡、病毒分離也為陰性;發(fā)病是指攻毒后只發(fā)病不死亡； 對(duì)發(fā)病和死亡的雞不分離病毒；陽性是指攻毒后不發(fā)病不死亡，但病毒分離為陽性。
[0049]本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，能夠有效抵抗NDV雞城疫病毒，保護(hù)率達(dá)90-100%，保護(hù)的數(shù)量為（27_30)/30,發(fā)病的數(shù)量為0/30,死亡數(shù)量為0/30,病毒分尚為陽性的 數(shù)量為(〇_3)/30。
[0050]實(shí)施例10是優(yōu)選實(shí)施例。
[0051 ]本發(fā)明所述疫苗，pH為5.3-9.8之間，優(yōu)選為6.5-7.5之間。
[0052] 本發(fā)明經(jīng)過大量試驗(yàn)，我們采取了海洋貝殼類、畜禽類的骨頭、海洋動(dòng)物的骨架中 提取的糖蛋白及多糖、蛋白的混合物進(jìn)行多次試驗(yàn)，也能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的。
[0053] 實(shí)施例15 -種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述藥物，為多糖、蛋白質(zhì)的混合物； 所述藥物，以重量份計(jì)，包括多糖1 -99%、蛋白質(zhì)1 -99%; 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白質(zhì)，包括:天冬酰胺、半胱氨酸、賴氨酸、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、天冬 氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、甘氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、 酪氨酸、纈氨酸。
[0054]所述多糖和蛋白質(zhì)的混合物，多糖的分子量為0.2-3000 kDa，蛋白質(zhì)的分子量為 0.2_3000 kDa〇
[0055] 所述多糖和蛋白的混合物，進(jìn)一步為藻類多糖和藻類蛋白的混合物； 所述藻類多糖和藻類蛋白的混合物，還包括色素； 所述色素為藻類物質(zhì)中含有的天然色素； 所述藻類蛋白可以是藻藍(lán)蛋白、藻紅蛋白或藻黃色蛋白。
[0056] 所述糖蛋白包括合成糖蛋白及合成多糖、蛋白。
[0057] 本發(fā)明所述藥物對(duì)犬經(jīng)口給藥12周無毒性反應(yīng)劑量為1.6g/kg，相當(dāng)于人用等效 劑量的50倍，故可認(rèn)為臨床試驗(yàn)的安全性可以得到保障。
[0058]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變 化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其 等效物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，其特征在于:所述疫苗為糖蛋白 或多糖和蛋白質(zhì)的混合物或多肽或蛋白。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，其特征在 于:所述疫苗為海洋藻類糖蛋白。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，其特征在 于:所述糖蛋白，以重量含量計(jì)，包括糖1-99%，蛋白質(zhì)1-99%;所述海洋藻類糖蛋白，以重量 含量計(jì)，包括糖1 -99%，蛋白質(zhì)1-99%;所述多糖和蛋白質(zhì)的混合物，以重量含量計(jì)，包括糖1 -99%，蛋白質(zhì)1-99%。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，其特征在 于:所述糖蛋白，分子量為0.2-3000 kDa;所述海洋藻類糖蛋白，分子量為0.2-3000 kDa;所 述多糖和蛋白質(zhì)的混合物，多糖的分子量為0.2-3000 kDa，蛋白質(zhì)的分子量為0.2-3000 kDa〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，其特征在 于：以重量含量計(jì)，包括糖蛋白1-100份、葡萄糖醛酸1-20份。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，其特征在 于:所述藻類為藍(lán)藻、綠藻、紅藻中的一種。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，其特征在 于:所述糖蛋白、海洋藻類糖蛋白，以重量含量計(jì)，包括糖1-99%，蛋白質(zhì)1-99%。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，所述疫苗為糖蛋白或多糖和蛋白質(zhì)的混合物或多肽或蛋白。本發(fā)明制備的疫苗，免疫SPF雞后，產(chǎn)生AIV-H5禽流感病毒抗體；免疫SPF雞后，能夠有效抵抗AIV-H5禽流感病毒，保護(hù)率達(dá)80-93.3%；免疫SPF雞后，產(chǎn)生NDV雞城疫抗體；免疫SPF雞后，能夠有效抵抗NDV雞城疫病毒，保護(hù)率達(dá)76.7-96.7%；本發(fā)明所述疫苗，具有預(yù)防、治療呼吸系統(tǒng)疾病的功能，廣譜抗病毒、抗炎癥、抗血凝、抑菌、解熱、免疫調(diào)節(jié)功能；本發(fā)明疫苗特點(diǎn)安全、高效、無副作用，對(duì)預(yù)防治療禽流感有明顯的療效，且禽流感-H5抗體檢測(cè)為陰性，說明該疫苗能殺滅禽流感-H5病毒。
【IPC分類】A61K39/00, A61P11/00, A61P31/16, A61P31/14
【公開號(hào)】CN105535954
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610061754
【發(fā)明人】程龍, 徐寶貞, 程潛
【申請(qǐng)人】程龍
【公開日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年1月29日