在癌癥免疫療法中有用的生物標(biāo)記的制作方法
【專利說明】在癌癥免疫療法中有用的生物標(biāo)記
[00011本申請是分案申請，其原申請的國際申請?zhí)枮镻CT/KR2014/005031，中國國家申請 號為201480001504.3,申請日為2014年6月5日，發(fā)明名稱為"在癌癥免疫療法中有用的生物 標(biāo)記"。 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明有關(guān)癌癥免疫療法及抗發(fā)炎藥物的技術(shù)領(lǐng)域。特別是，本發(fā)明是關(guān)于利用 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白（eotaxin)及C-反應(yīng)蛋白的診斷/預(yù)測價值的治療用方法及試劑盒。 【【背景技術(shù)】】
[0003] 16肽（16-mer peptide)EARPALLTSRLRFIPK(序列編號：1，亦稱為「GV1001」）是人類 端粒酶的其中一段片段(W0 00/02581) XV1001能與多種第II型人類白血球抗原(HLA)分子 結(jié)合并包含推定的第I型HLA表位。該肽因此被認(rèn)為能夠引發(fā)復(fù)合型CD4/CD8T-細(xì)胞反應(yīng)，而 復(fù)合型CD4/CD8T-細(xì)胞反應(yīng)在引發(fā)腫瘤撲殺作用及長期記憶方面上很重要。晚期胰腺癌及 肺癌患者的臨床研究顯示在超過50%的受試者身上引發(fā)GV1001專一 1性T-細(xì)胞反應(yīng)且在臨 床上沒有顯著毒性（請見2009，Kyte JA發(fā)表，Expert Opin Investig Drugs期刊18卷5期： 687-94頁）。
[0004] 延壽基金會(Life Extension foundation)在2013年6月6日刊載一篇有關(guān)慢性發(fā) 炎的在線公開文獻(xiàn)(WWW. lef.org)，該篇文獻(xiàn)集中討論有關(guān)慢性低度發(fā)炎的長期健康影響， 并回顧各種發(fā)炎標(biāo)記及介導(dǎo)物質(zhì)，例如，腫瘤壞死因子(TNFa)、核因子-kB(NF-kB)、介白素、 C-反應(yīng)蛋白（CRP)、類花生酸、及環(huán)氧合酶(COX)及各種其它引發(fā)因子。
[0005] Guo等人(J 11111111111〇1，2001年166卷:5208-5218頁）發(fā)現(xiàn)當(dāng)受到急性炎性損傷的小 鼠模型產(chǎn)生發(fā)炎反應(yīng)時，嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白的mRNA與蛋白質(zhì)的表現(xiàn)提高(upregulated)， 并探討嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白在嗜中性白血球招集作用中所扮演的角色為何。
[0006] 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白-1、嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白-2及嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白-3 (亦稱 為CCL11、CCL24及CCL26)是已知能招集嗜酸性白血球(eosinophil)及其它白血球的趨化因 子，并借著與細(xì)胞表面的趨化因子受體(例如，CCR3)結(jié)合而引起該等趨化因子作用。
[0007] 本發(fā)明實施方式的目的是提供預(yù)測GV1001衍生藥物的醫(yī)療功效及預(yù)測罹癌患者 (尤其是胰腺癌患者)的患者存活期的方法。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0008] TeloVac，一項針對晚期及轉(zhuǎn)移型胰腺癌進(jìn)行多機(jī)構(gòu)合作的GV1001疫苗第三期臨 床試驗，該項臨床試驗?zāi)壳坝蓜P爾杰姆維克斯公司(KaeI-GemVax)的子公司杰姆維克斯有 限公司(GemVax AS)資助并由英國癌癥研究中心利物浦臨床試驗研究單位所主導(dǎo)進(jìn)行。
[0009] 該項試驗在全英國52個機(jī)構(gòu)募集1062個患者接受試驗。盡管接受注射疫苗的試驗 組與接受化療的對照組之間的總體存活期無明顯差異，然而該項試驗還包括了宏遠(yuǎn)的轉(zhuǎn)譯 研究計劃。初步研究結(jié)果顯示該疫苗產(chǎn)生顯著的抗發(fā)炎反應(yīng)，此結(jié)果與母公司凱爾杰姆維 克斯公司正在主導(dǎo)的新研究高度吻合。此外，在患者子群組中鑒別出三種可能作為提高存 活期指針的生物標(biāo)記：嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白（eotaxin)、巨·細(xì)胞發(fā)炎蛋白la(MIPla)及 Κ應(yīng)蛋白 （CRP) 。
[0010] 因此，就其最廣方面而言，本發(fā)明是關(guān)于使用嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白及/或MIPla及/ 或CRP作為可用于以GV1001衍生物質(zhì)進(jìn)行治療處理的預(yù)后工具。 【【附圖說明】】
[0011] 第1圖圖示第2組基期（baseline)、第3組基期、第2組7周及第3組10周的患者血清 中的IL-4、IL-5、IL-7、IL-17、PDGF及VEGF含量(p值，未修正的克-瓦二氏檢定法）。
[0012] 第2圖：圖示第2組及第3組的IFNy、IL-10、IL-7、PDGF、RANTES、TNFα及VEGF的含量 變化。圖中亦示出正(+ve)變化與負(fù)(-ve)變化的數(shù)目及p值。
[0013] 第3圖：第2組患者和第3組患者在基期及在后續(xù)治療時的CRP含量。
[0014] 第4圖：第2組患者（左圖）和第3組患者（右圖）在基期及后續(xù)治療時的C R P成對分 析。圖中亦示出正(+ve)變化與負(fù)(_ve)變化的數(shù)目及p值。
[0015] 第5圖：針對基期的IL-8含量、治療后的IL-8含量及從基期到治療后的IL-8絕對變 化值以中位數(shù)為準(zhǔn)分成兩部分所繪示的存活期曲線圖。
[0016] 第6圖：針對基期的嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白含量、治療后的嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白含量 及從基期到治療后的嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白絕對變化值以中位數(shù)為準(zhǔn)分成兩部分所繪示的 存活期曲線圖。
[0017] 第7圖：針對基期的MIPla含量、治療后的MIPla含量及從基期到治療后的MIPla絕 對變化值以中位數(shù)為準(zhǔn)分成兩部分所繪示的存活期曲線圖。
[0018] 第8圖：針對基期的ΜΙΡΙβ含量、治療后的ΜΙΡΙβ含量及從基期到治療后的ΜΙΡΙβ絕 對變化值以中位數(shù)為準(zhǔn)分成兩部分所繪示的存活期曲線圖。
[0019] 第9圖：針對基期的VEGF含量、治療后的VEGF含量及從基期到治療后的VEGF絕對變 化值以中位數(shù)為準(zhǔn)分成兩部分所繪示的存活期曲線圖。
[0020] 第10圖：針對基期的CRP含量、治療后的CRP含量及從基期到治療后的CRP絕對變化 值以中位數(shù)為準(zhǔn)分成兩部分所繪示的存活期曲線圖。
[0021] 第11圖：針對第3組在治療后的CRP含量以中位數(shù)為準(zhǔn)分成兩部分所繪示的存活期 曲線圖。
[0022]第11圖為第3組CRP的存活期曲線
[0023] 第12圖：（A)嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白的存活期曲線（高：中位存活期為493天，η = 16; 低：中位存活期為239天，n = 25) dBhCRP的存活期曲線（高：中位存活期為222天，η = 20; 低：中位存活期為486天，η = 21)。
[0024] 第13圖圖示第2組的基期血清細(xì)胞因子數(shù)據(jù)及治療后血清細(xì)胞因子數(shù)據(jù)的對數(shù) (log)平均數(shù)的測線圖。
[0025] 第14圖圖示第3組的基期血清細(xì)胞因子數(shù)據(jù)及治療后血清細(xì)胞因子數(shù)據(jù)的對數(shù)平 均數(shù)。
[0026] 第15圖圖示各組血清中的細(xì)胞因子平均差（治療后-基期）的測線圖。值得注意的 是，結(jié)果顯示在第2組中有19種細(xì)胞因子在基期與在治療后之間表現(xiàn)出具有統(tǒng)計意義的下 降情形（該 19 種細(xì)胞因子為?〇6卩、11^10、11^-1抑、11^-2、11^-4、11^-5、11^-7、11^-1〇、11^-12、11^-13、IL-17、G-CSF、IFNy、嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白、FGFb、MIPlβ、RANTES、TNFα、VEGF ;而非CRP、 IL-6、IL-8、IL-9、IL-15、GM-CSF、IP10、MCPl、MIPla)，且在第 3 組中沒有一個細(xì)胞因子表現(xiàn) 出具有統(tǒng)計意義的下降情形
[0027] 第16圖示出針對各組的血清中的各種細(xì)胞因子使用魏克遜符號排序檢定法 (Wilcoxon signed-rank test)所獲得的p值，該方法是用以檢定由基期到治療后的數(shù)值升 高/下降情形。如圖中所見，有顯著差異者(P〈〇.05)以灰色粗體字型表示。第2組中的該等細(xì) 胞因子的降幅大于第3組，并指出在第2組中有19種細(xì)胞因子明顯降低，但第3組中則無。
[0028] 第17圖是針對該項研究中各組的各種細(xì)胞因子，示出治療后血清中的細(xì)胞因子含 量減去基期血清中的細(xì)胞因子含量所得的差值中位數(shù)。含量下降者以淺灰色表示，及含量 升高/不變者則以深灰色表示。
[0029] 第18圖圖示針對該項研究中各組的血清中的每種細(xì)胞因子基期數(shù)據(jù)所建立的考 氏比例風(fēng)險模型(Cox proportional hazards model)。該表給出該基期數(shù)據(jù)的單變量分析 結(jié)果并示出具有95%信賴區(qū)間的風(fēng)險比率及p值。就第2組而言，CRP、IL-lra、IL-2、IL-10、 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白及IFNy具有顯著意義(p〈0.1)，就第3組而言則是CRP、IL-lra及嗜酸 粒細(xì)胞趨化蛋白具有顯著意義。
[0030] 第19a圖及第19b圖示出第2組及第3組處于基期時的CRP含量。就第2組而言，低CRP 含量得到337天的中位存活期，及對于第3組而言，低CRP含量得到373天的中位存活期?；?CRP含量預(yù)測出第3組中的中位(95%CI)總體存活期（高CRP = 250[132~451]天；低CRP = 372.5[229~517]天;？ = 0.0500)，但未能預(yù)測第2組的中位總體存活期(高0^=195[140~ 262]天；低〇^ = 337[167~366]天卬=0.2534)。
[0031 ]第20a圖及第20b圖示第2組及第3組處于基期時的嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白含量。就第 2組而言，高的血清嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白含量得到300天的中位存活期，及對于第3組而言， 高的血清嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白含量得到451天的中位存活期。