一種石斛發(fā)酵原漿及其制備方法與應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種石解發(fā)酵原漿及其制備方法與應用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 鐵皮石解(Den化obium off icinale Kimura et Migo)是我國名貴中草藥，系蘭 科石解屬植物，因表皮呈鐵綠色而得名，具有生津滋陰、明目養(yǎng)胃、補腎強身等功效。據(jù)文獻 報道，石解屬植物中的主要藥效成分為多糖、生物堿、糖巧、菲類、聯(lián)節(jié)類和氨基酸等。多糖 在鐵皮石解中的含量高，且具有良好的抗腫瘤、抗氧化、增強免疫力W及降低血糖等生理功 能。
[0003] 國內(nèi)外對于石解研究中，石解活性物質(zhì)的提取方法W水提醇沉法為主，還有酶法 提取和超聲波輔助提取等方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種石解發(fā)酵原漿及其制備方法與應用。本發(fā)明方法利用發(fā) 酵工程技術(shù)從石解中提取活性物質(zhì)，操作簡單，且由于不添加任何外來物質(zhì)，制備得到的石 解發(fā)酵原漿對皮膚安全無傷害，將其應用于化妝品中具有很高的抗衰老活性。
[0005] 本發(fā)明提供的一種石解發(fā)酵原漿的制備方法，包括如下步驟:將石解干粉、水和發(fā) 酵菌混合得到初始體系，并對所述初始體系進行發(fā)酵培養(yǎng)，即得到石解發(fā)酵原漿。
[0006] 本發(fā)明中，所述石解干粉采用石解的莖部制成。
[0007] 上述的制備方法中，所述石解干粉、所述水和所述發(fā)酵菌的配比可為Ig: (9~20) 1111^:(0.1~1)1111^，具體可為1邑：121111^:0.61111^或1邑：（12~20)1111^:(0.6~1)1111^;
[000引所述發(fā)酵菌的濃度可為（IO5~108)CFU/mL。
[0009] 上述的制備方法中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度可為35~50°C，具體可為38°C、35~40 °C、35~38°C或38~50°C;所述發(fā)酵培養(yǎng)的時間可為4.5~6.化，具體可為化、4.5~化或6~ 6. Sho
[0010] 上述的制備方法中，所述石解干粉的粒徑可為20~50目，具體可為40目或40~50 目，所述石解干粉可由粉碎機粉碎后過篩得到；
[0011] 所述發(fā)酵菌可為乳桿菌，具體可為德氏乳桿菌，更具體可為德氏乳桿菌保加利亞 亞種Lactobacillus delbrueckii bulgaricus。
[0012] 上述的制備方法中，所述發(fā)酵菌可W其培養(yǎng)液或懸浮液的形式存在，所述發(fā)酵菌 的培養(yǎng)液或懸浮液的pH值可為4.0~7.0，具體可為5.0、4.0~5.0或5.0~7.0。
[0013] 上述的制備方法中，所述方法中在所述發(fā)酵培養(yǎng)之后，還可包括對發(fā)酵液依次進 行滅菌、離屯、和取上清液的步驟。
[0014] 上述的制備方法中，所述滅菌的條件如下:所述滅菌的溫度可為115~12rC，具體 可為115°C;所述滅菌的時間可為15~25min，具體可為20min;
[0015] 所述離屯、的條件如下：離屯、轉(zhuǎn)速可為3000~4000r/min，具體可為3800r/min或 3800~4000r/min;離屯、時間可為15~30min，具體可為20min或20~30min;離屯、半徑可為 9cm〇
[0016] 本發(fā)明還提供了由上述的制備方法制備得到的石解發(fā)酵原漿。
[0017] 本發(fā)明進一步提供了上述的石解發(fā)酵原漿在制備具有下述1)和/或2)中功能的產(chǎn) 品中的應用：
[001引1)清除自由基；
[0019] 2)抗衰老。
[0020] 上述的應用中，所述產(chǎn)品可為化妝品、食品和保健品中的至少一種；
[0021] 所述化妝品可為面膜、精華液和爽膚水中的至少一種；
[0022] 所述自由基為DPPH自由基、超氧陰離子和徑基自由基中的至少一種。
[0023] 本發(fā)明具有如下有益效果：
[0024] (1)本發(fā)明提供的石解發(fā)酵原漿的制備方法采用發(fā)酵工程技術(shù)，通過選擇合適的 菌種及發(fā)酵條件，從石解中提取得到活性物質(zhì)即石解發(fā)酵原漿。一方面，可最大程度保留植 物中的活性成分，且相對與傳統(tǒng)的水提法，避免了有機溶劑的引入，安全環(huán)保;另一方面，不 需要添加酶等外來物質(zhì)，不僅節(jié)約生產(chǎn)成本，而且最大化的簡化了生產(chǎn)步驟，使該發(fā)酵技術(shù) 能夠?qū)崿F(xiàn)大量生產(chǎn)、工業(yè)化生產(chǎn)，并能夠充分保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
[0025] (2)本發(fā)明提供的石解發(fā)酵原漿富含石解多糖，且由于在制備過程中未引入外來 物質(zhì)，不含任何化學成分，可W直接作為面膜、精華液或爽膚水的成品使用，更加天然，不會 給肌膚造成任何負作用。
[0026] (3)本發(fā)明提供的石解發(fā)酵原漿，具有較強的抗氧化能力可清除自由基和超氧陰 離子，促進細胞代謝，增強細胞活力，改善機體的結(jié)構(gòu)和功能，提高機體生命力，從而延緩細 胞老化，具有抗衰老的功效。
【附圖說明】
[0027] 圖1為不同體積百分濃度的石解發(fā)酵原漿與DPKl自由基清除率的關(guān)系曲線。
[0028] 圖2為不同體積百分濃度的石解發(fā)酵原漿與徑基自由基清除率的關(guān)系曲線。
[0029] 圖3為不同體積百分濃度的石解發(fā)酵原漿與超氧陰離子清除率的關(guān)系曲線。
【具體實施方式】
[0030] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0031] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0032] 下述實施例中的液體培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液體培養(yǎng) 基中的濃度為:蛋白腺10.Og,牛肉膏10.Og,酵母膏5.Og,巧樣酸氨二錠2.Og,葡萄糖20.Og, 吐溫801.01111^，乙酸鋼（邸3(：0(^3?3肥0)5.0旨，憐酸氨二鐘化2冊04?3肥0)2.0旨，硫酸儀 (MgS04?7H20)0.58g，硫酸儘(MnS04?H20)0.25g，瓊脂18.0g，蒸饋水1000mL，pH6.2~ 6.6。
[0033] 下述實施例中的石解(莖部)來自浙江義烏鮮禾有限公司，粉碎過40目篩。
[0034] 下述實施例中的德氏乳桿菌保加利亞亞種化actobacillus delbrueckii bulgaricus)的ATCC編號為11842，可從ATCC購買得到。
[0035] 下述實施例中的發(fā)酵菌菌液按照如下步驟制得：
[0036] 1、菌種的活化
[0037] 挑取德氏乳桿菌保加利亞亞種(Xactobacillus de化rueckii bulgaricus)菌落 一環(huán)于液體培養(yǎng)基中，放入搖床中將菌種活化，得到活化后德氏乳桿菌保加利亞亞種菌液。 [003引 2、菌種的純化
[0039] 將步驟1得到的活化后的菌液梯度稀釋鋪板，W便獲取單菌落，得到純化后德氏乳 桿困。
[0040] 3、菌種的擴大培養(yǎng)
[0041 ]將步驟2得到的純化后的菌種接種到MRS培養(yǎng)基(pH值為7.0)中，在25°C的搖床中 培養(yǎng)，當OD值=0.5-1.0時，得到發(fā)酵菌菌液(菌種處在對數(shù)期，濃度為IO5~IO8CFlVmL)。
[0042] 實施例1、制備石解發(fā)酵原漿
[0043] 按照如下步驟制備石解發(fā)酵原漿：
[0044] (1)將20mL的9mL濃度為IO5~IO8CFlVmL的發(fā)酵菌菌液接種到15g的石解干粉和 ISOmL的水中，得到發(fā)酵體系；
[0045] (2)將上述發(fā)酵體系在38°C搖床中發(fā)酵6小時，得到發(fā)酵產(chǎn)物；
[0046] (3)將上述發(fā)酵產(chǎn)物115°C下滅菌20min，使菌失活，得到滅菌后的發(fā)酵產(chǎn)物;將滅 菌后的發(fā)酵產(chǎn)物在3800r/min，離屯、半徑為9cm的條件下離屯、20min，棄沉淀，收集上清液，即 得到石解發(fā)酵原漿。
[0047] 實施例2、石解發(fā)酵原漿在作為化妝品中的應用
[0048] 一、石解發(fā)酵原漿化妝品的性質(zhì)
[0049] 將本發(fā)明實施例1所制備所得的發(fā)酵提取物經(jīng)活性炭脫色、去味后，制得石解發(fā)酵 原漿化妝品。其外觀為粘稠液體、顏色為淡黃色至棟黃色。pH值5.0-6.1，粘度200-500CP，可 溶性固含物含量2.0-6.0 %，菌落總數(shù)小于50CFU/mL，無致病菌檢出。根據(jù)化妝品衛(wèi)生標準 GB7916-87，化妝品細菌總數(shù)不高于1 OOOCFU/ml，所W此發(fā)酵原漿符合化妝品質(zhì)量要求。
[0050] 對該石解發(fā)酵原漿化妝品的主要功效成分石解多糖含量進行測量，檢測方法參照 GB/T 5009.8-2008，測得石解多糖含量為