黃酮醇、黃烷醇類化合物的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體是黃酬醇、黃燒醇類化合物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] R-spondin(Rspo)是近年來新發(fā)現(xiàn)的蛋白家族，包括4個(gè)成員（Rspol~4)。已報(bào)道 Rspo蛋白家族所有成員均為分泌性蛋白，均有兩個(gè)富含半脫氨酸的化rin-like結(jié)構(gòu)域、1 個(gè)TSPl結(jié)構(gòu)域和富含堿性氨基酸的C端區(qū)域。Rspos通過激活并協(xié)同Wnt/0-catenin信 號(hào)通路參與對(duì)細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控，影響骨骼、肌肉、血管等組織的發(fā)育W及肢體和性腺 的形成，并在多種疾病的發(fā)生過程中起重要作用。
[0003] 近年來研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過化療藥物5-氣尿喀晚（5-FU，5-flurouracil)處理的小鼠 腫瘤模型服用Rspol后，黏膜炎和體重失重癥狀明顯減輕。研究發(fā)現(xiàn)，Rspol可W促進(jìn)小鼠 舌黏膜上皮細(xì)胞增殖，減輕由化療藥物和/或福射引起的口腔黏膜炎乃至舌潰瘍癥狀。此 夕h最新研究發(fā)現(xiàn)Rspol的治療處理可W促進(jìn)成骨細(xì)胞分化，減輕關(guān)節(jié)炎小鼠模型中的骨質(zhì) 損害癥狀。鑒于Rspo可W促進(jìn)成骨細(xì)胞分化、幫助骨骼修復(fù)和重塑的作用，Rspo有望應(yīng)用于 多種骨髓瘤的治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃燒醇、黃酬醇類化合物能顯著上調(diào)因化、NO等損傷因素導(dǎo) 致的R-spondin蛋白下調(diào)，從而減輕該信號(hào)通路引起的細(xì)胞調(diào)亡和組織損傷?；邳S燒醇、 黃酬醇類化合物天然、綠色、安全的特性，該類化合物為因R-spondin蛋白素亂引起的疾病 治療提供了可能，特別在相關(guān)疾病的臨床藥物開發(fā)有著潛在的應(yīng)用。
[000引本發(fā)明提供黃燒醇類化合物、黃酬醇類化合物在制備調(diào)控R-spondin蛋白藥物中 的用途。
[0006] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案之一黃燒醇類化合物、黃酬醇類化合物在制備內(nèi)皮損傷型 高血壓病癥藥物中對(duì)R-spondin蛋白分泌調(diào)控作用。
[0007] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案之二黃燒醇類化合物、黃酬醇類化合物在制備放射治療腸 屏障損傷藥物中對(duì)R-spondin蛋白分泌調(diào)控作用。
[0008] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案之=黃燒醇類化合物、黃酬醇類化合物降低腹部脂肪藥物 中的用途。
[0009] 本發(fā)明的有益效果在于:黃燒醇、黃酬醇類的化合物具有調(diào)控R-spondin蛋白的作 用，是一種安全、高效治療血管內(nèi)皮損傷(導(dǎo)致的高血壓、屯、腦血管疾病）、粘膜損傷(導(dǎo)致的 消化道疾?。?、骨損傷、脂代謝素亂等疾病的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0011] 實(shí)施例1:觀察黃燒醇類化合物、黃酬醇類化合物在制備內(nèi)皮損傷型高血壓病癥藥 物中對(duì)R-spondin蛋白分泌調(diào)控作用。黃燒醇類化合物W矢車菊素為例，黃酬醇類化合物W 山奈酪為例。
[0012] 1.1試驗(yàn)動(dòng)物:SD大鼠，雌雄兼用，由武漢大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中屯、提供；180-250g，常規(guī) 飼料，許可證號(hào)：SCXK(鄂）2008-0004。
[0013] 1.2試驗(yàn)材料:矢車菊素，醫(yī)用級(jí)，浙江天然產(chǎn)物化學(xué)有限公司，批號(hào):020150507; 山奈酪，醫(yī)用級(jí)，浙江天然產(chǎn)物化學(xué)有限公司，批號(hào)：20150302; N-硝基一L-精氨酸甲醋 a-NAME)，Sigma產(chǎn)品，批號(hào)：20150308。
[0014] 1.3試驗(yàn)方法:SD大鼠130只，隨機(jī)分組，每組10只，分為如下十S組， 正常組； kNAME 組，腹腔注射（ip)L-NAME 125mg/k，一天一次； kNAME+矢車菊素組，ip L-NAME 125mg/k，ig灌胃矢車菊素50mg/kg，一天一次； kNAME+山奈酪組，ip L-NAME 125mg/k，ig灌山奈酪50mg/kg，一天一次； 高巧組，ig氯化巧50mg/k，一天一次； 高巧+矢車菊素組，ig氯化巧50mg/k，g灌胃矢車菊素50mg/kg，一天一次； 高巧+山奈酪組，ig氯化巧50mg/k，ig灌胃山奈酪50mg/kg，一天一次； 高鋼組，ig氯化鋼300mg/k，一天一次； 高鋼+矢車菊素組，ig氯化鋼300mg/k，g灌胃矢車菊素50mg/kg，一天一次； 高鋼+山奈酪組，ig氯化鋼300mg/k，ig灌胃山奈酪50mg/kg，一天一次； 高鐵組，ig硫酸亞鐵lOmg/k，一天一次； 高鐵+矢車菊素組，ig硫酸亞鐵lOmg/k，g灌胃矢車菊素50mg/kg，一天一次； 高鐵+山奈酪組，ig硫酸亞鐵lOmg/k，ig灌胃山奈酪50mg/kg，一天一次； 于造模給藥4周后，無創(chuàng)測定血壓;SD大鼠斷頭處死，取胸主動(dòng)脈勻漿，ELISA檢測胸主 動(dòng)脈勻漿 RSpol (R-spondinl)。
[0015] 雙抗夾屯、檢測RSpol大鼠抗小鼠R-Spondinl單抗（1:20000稀釋)每孔200 iU，4 °C過夜包被酶標(biāo)板;PBST洗板3次，5 min/次;5%脫脂奶粉溶液每孔300山，37°C封閉1 h; 取小腸勻漿上清稀釋1500倍后，每孔加200山，4°C解育過夜;PBST洗板3次，5min/次；山羊 抗小鼠R-Spondinl多抗（1 μg/ml)每孔100山，4°C解育過夜，PBST洗板3次，5 min/次;過 氧化物酶標(biāo)記兔抗山羊IgG抗體（1:30000稀釋)每孔100山，37°C解育2 h，PBST洗板3次 后，加入TMB顯色液每孔100 yl，37°C解育0.5 h，然后加入等體積0.5 mol/L硫酸終止反 應(yīng)，最后在酶標(biāo)儀上取450 nm處讀數(shù)。樣本、陰性對(duì)照和空白對(duì)照均做兩孔，共104孔。陰性 對(duì)照為小牛血清白蛋白溶液(6 mg/ml)，空白對(duì)照為憐酸鹽緩沖液(0.2 mol/L，pH=7.2)。取 每個(gè)樣本2孔吸光度均值為該樣本吸光度值，大于陰性對(duì)照2倍為有效。
[0016] 1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS10.0如見進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料W(x±S)表示，結(jié)果 進(jìn)行t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。P<0.05為差異顯著。
[0017] 1.5試驗(yàn)結(jié)果:結(jié)果可見，低的NO、高巧、高鋼、高鐵均可導(dǎo)致收縮壓升高，損傷上 動(dòng)脈內(nèi)皮，血管中RSpol的表達(dá)，與血壓呈負(fù)相關(guān)，矢車菊素、山奈酪可提升RSpol的表達(dá)，減 輕內(nèi)皮損傷。結(jié)果見表1。
[0018] 表1不同因素對(duì)血壓的影響及RSpol蛋白表達(dá)的影響
[0019] 實(shí)施例2:黃燒醇類化合物、黃酬醇類化合物在制備放射治療腸屏障損傷藥物中對(duì) R-spondin蛋白分泌調(diào)控作用。黃燒醇類化合物W兒茶素為例、黃酬醇類化合物W搬皮素為 例。
[0020] 2.1實(shí)驗(yàn)材料:SD大鼠；甲醒;水合氯醒;兒茶素，醫(yī)用級(jí)，浙江天然產(chǎn)物化學(xué)有限 公司，批號(hào):020150507;搬皮素，醫(yī)用級(jí)，浙江天然產(chǎn)物化學(xué)有限公司，批號(hào):20150302。
[0021 ] 2.2實(shí)驗(yàn)方法。
[0022] (1)模型制備:模型制備參考化ssatt等。SD大鼠10%水合氯醒腹腔注射麻醉，采用 加速器6MVx線，源皮距100cm，機(jī)架角180,照射野IOcmX IOcm,單次20Gy照射腹部，其余部位 鉛皮防護(hù)。
[0023] (2)觀察指標(biāo)：照射后7日，SD大鼠斷頭處死，取結(jié)腸，進(jìn)行炎癥評(píng)分，稱重，計(jì)算臟 器指數(shù)。
[0024] 參照WHO分級(jí)法[13]對(duì)各組SD大鼠OM程度進(jìn)行分級(jí)。0級(jí)：無癥狀；I級(jí):紅腫； n級(jí)：潰瘍；m級(jí)：大面積潰瘍；IV級(jí)：巨結(jié)腸。
[002引（3)處理方法:SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組，每組10只，雌雄各半，分別為，正常組;模 型組;模型+兒茶素50mg/kg組，于造模前3天，ig兒茶素，一天一次，連續(xù)10天;模型+搬皮素 50mg/kg組，于造模前3天，ig搬皮素，一天一次，連續(xù)10天。
[0026] 取結(jié)腸勻漿，ELISA檢測結(jié)腸勻漿RSpo2(R-spondin2)。
[0027] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果可見，福照后，SD大鼠結(jié)腸系數(shù)顯著下降，炎癥評(píng)分明顯升高， RSpo2蛋白表達(dá)下降;兒茶素、搬皮素可逆轉(zhuǎn)上述改變。結(jié)果見表2. 表2.福照對(duì)結(jié)腸指數(shù)、結(jié)腸炎癥評(píng)分的影響及RSpo2蛋白表達(dá)的影響
[0028] 實(shí)施例3:黃燒醇類化合物、黃酬醇類化合物在制備降低腹部脂肪藥物中的用途。 黃燒醇類化合物W矢車菊素為例，黃酬醇類化合物W楊梅素為例。
[0029] 3.1實(shí)驗(yàn)材料：SD大鼠；兒茶素，醫(yī)用級(jí)，浙江天然產(chǎn)物化學(xué)有限公司，批號(hào)： D20150507;楊梅素，醫(yī)用級(jí)，浙江天然產(chǎn)物化學(xué)有限公司，批號(hào):20150302。
[0030] 3.2實(shí)驗(yàn)方法：SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組，每組10只，雌雄各半，分別為，正常組； 模型組;模型+兒茶素50mg/kg組，ig兒茶素，一天一次，連續(xù)30天;模型+楊梅素50mg/kg組， ig楊梅素，一天一次，連續(xù)30天。
[0031] 模型及給藥組SD大鼠同時(shí)喂高脂飼料，一個(gè)月后，斷頭處死SD大鼠，取腹部脂肪， 計(jì)算腹部脂肪系數(shù);脂肪勻漿，ELISA檢測腹部脂肪勻漿RSpo3(R-spondin3)。
[0032] 3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果可見，高脂飲食后，SD大鼠體重?zé)o顯著變化，但腹部脂肪明顯 增加，RSpo3蛋白表達(dá)上調(diào)，兒茶素、楊梅素可逆轉(zhuǎn)上述變化，結(jié)果見表3。
[0033] 表3.高脂飲食對(duì)腹部脂肪及其RSpo3蛋白表達(dá)的影響
[0034] W上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可W做出若干改進(jìn)或變形，運(yùn)些改進(jìn)或變形也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 黃烷醇類化合物、黃酮醇類化合物在制備調(diào)控R-spondin蛋白藥物中的用途。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:所述黃烷醇類化合物、黃酮醇類化合物在 制備內(nèi)皮損傷型高血壓病癥藥物中的用途。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:所述黃烷醇類化合物、黃酮醇類化合物在 制備放射治療腸屏障損傷藥物中的用途。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:所述黃烷醇類化合物、黃酮醇類化合物在 制備降低腹部脂肪藥物中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體是黃酮醇、黃烷醇類化合物的用途，即黃烷醇類化合物、黃酮醇類化合物在制備調(diào)控R-spondin蛋白藥物中的用途。本發(fā)明首次提出將黃烷醇類化合物、黃酮醇類化合物用于制備內(nèi)皮損傷型高血壓病癥、放射治療腸屏障損傷、降低腹部脂肪等疾病的藥物，能夠安全、高效治療血管內(nèi)皮損傷（導(dǎo)致的高血壓、心腦血管疾?。?、粘膜損傷（導(dǎo)致的消化道疾病）、骨損傷、脂代謝紊亂等疾病。
【IPC分類】A61P9/12, A61P9/10, A61P19/08, A61P9/00, A61K31/352, A61K31/353, A61P1/00, A61P3/04
【公開號(hào)】CN105497006
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510928373
【發(fā)明人】李建, 李曉斐, 牛云輝, 杜思達(dá), 翁麗霞, 丁虹
【申請(qǐng)人】武漢華納聯(lián)合藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2015年12月15日