一種雙光子激光橫斷幼年斑馬魚脊髓的方法
【技術領域】
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[0001]醫(yī)學神經生物學研究【背景技術】:
[0002]斑馬魚因其強大的脊髓損傷后自行修復的特點為脊髓損傷修復研究提供了一個理想動物模型。目前成年斑馬魚的脊髓損傷模型已經很成熟，包括完全橫斷模型和擠壓損傷模型。而幼年斑馬魚的脊髓損傷至今未有報道。與成年斑馬魚脊髓相比，幼年斑馬魚的脊髓損傷模型具有身體透明，研究周期短，可以活體追蹤優(yōu)勢。脊髓完全橫斷后的成年斑馬魚，在六周后可以完全自主恢復到損傷前的運動水平，而幼年斑馬魚相對于成年斑馬魚具有更快的脊髓損傷后修復能力，研究表明一周左右的斑馬魚在切斷脊髓后，3天即可恢復運動能力，使得幼年斑馬魚成為研究脊髓損傷修復中目的基因作用機制的絕佳模型。

【發(fā)明內容】

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[0003]本發(fā)明選擇健康狀態(tài)良好的斑馬魚幼魚，于出生后24h內加入色素抑制劑，抑制色素的形成獲得身體透明的斑馬魚，常規(guī)飼養(yǎng)，給與14小時的光照和10小時的黑暗周期。出生后第七天進行脊髓橫斷。實驗方法:將幼魚用麻醉劑進行麻醉，待幼魚完全麻醉后，將幼魚用8%的瓊脂糖包裹固定在直徑為5cm培養(yǎng)皿底部，在顯微鏡下可以看到其心臟跳動，固定好的幼魚側面向上。在雙光子顯微鏡下，用波長為800nm、能量為45%的雙光子激光切斷幼魚的脊髓。激光手術后可以在顯微鏡下看到明顯端口，表明脊髓被完全橫斷。用手術刀片切開凝膠釋放斑馬魚幼魚。斑馬魚身體維持直線形并喪失了游泳能力，表明造模成功。術后將每條斑馬魚單獨放入六孔板中單獨飼養(yǎng)，進行實驗研究。實驗結果表明，在組織學上，幼年斑馬魚在激光損傷手術后，脊髓被完全橫斷，3天后幼魚即可完全恢復運動能力。
[0004]與傳統(tǒng)機械損傷模型相比，激光損傷幼魚的模型可以完全的橫斷脊髓并造成對脊髓毗鄰組織最微小的損傷，而且可以活體追蹤斑馬魚脊髓損傷修復的過程的優(yōu)勢，對深入的闡明脊髓損傷后修復的機理具有重要的意義。
【具體實施方式】
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[0005]下面通過具體實施進一步闡述本發(fā)明方法。
[0006]選用出生后七天的斑馬魚，將幼魚用8%的瓊脂糖包裹固定在直徑為5cm培養(yǎng)皿底部，固定好的幼魚側面向上。在雙光子顯微鏡下，用波長為800nm、能量為45%的雙光子激光切斷幼魚的脊髓。操作完成后，用手術刀片切開凝膠，將斑馬魚從凝膠中釋放開來。術后將每條斑馬魚單獨放入六孔板中單獨飼養(yǎng)，進行實驗研究。
【主權項】
1.一種雙光子激光橫斷幼年斑馬魚脊髓的方法，其特征是雙光子激光采用波長為800nm能量為45%切斷幼魚的脊髓。2.根據權利要求書1所述雙光子激光橫斷幼年斑馬魚脊髓的方法，其特征是選用出生后七天的斑馬魚。
【專利摘要】本發(fā)明為一種雙光子激光橫斷幼年斑馬魚脊髓的方法。選擇出生后24h幼年斑馬魚，加入色素抑制劑，抑制色素的形成獲得身體透明的斑馬魚。出生后第七天進行脊髓橫斷。實驗方法：將幼魚用麻醉劑進行麻醉，待幼魚完全麻醉后，將幼魚用8％的瓊脂糖包裹固定在直徑為5cm培養(yǎng)皿底部，在顯微鏡下可以看到其心臟跳動，固定好的幼魚側面向上。在雙光子顯微鏡下，用波長為800nm、能量為45％的雙光子激光切斷幼魚的脊髓。激光手術后可以在顯微鏡下看到明顯端口，表明脊髓被完全橫斷。用手術刀片切開凝膠釋放斑馬魚幼魚。斑馬魚身體維持直線形并喪失了游泳能力，表明造模成功。術后將每條斑馬魚單獨放入六孔板中單獨飼養(yǎng)，進行實驗研究。
【IPC分類】A61D1/00
【公開號】CN105266918
【申請?zhí)枴緾N201410338568
【發(fā)明人】申延琴, 張治華, 林金飛, 李英
【申請人】江南大學
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2014年7月14日