藥配方對GK大鼠HbAlc影響；注：與正常組比較*P< 0.05, < 0.01 ;與模 型組比較AP< 0. 〇5，AAP< 0. 01。
[0065] 3. 4DPP-4抑制劑體外篩選模型的優(yōu)化結(jié)果
經(jīng)反復(fù)摸索確定酶濃度為4U/L，底物濃度0. 05mmol/L，緩沖液pH8. 2,溫度37°C，時間 30min。按照上述反應(yīng)體系對不同濃度磷酸西格列汀片抑制率進行測定，抑制率與藥物濃 度呈劑量依賴性，證明反應(yīng)體系穩(wěn)定。
[0066] 3. 5中藥配方及其組成藥物對DPP-4的抑制作用 中藥配方、萊菔子、梔子、菟絲子對DPP-4抑制率> 10%，對其進行復(fù)篩，女貞子、車前 子、決明子、紫蘇子、枸杞子、五味子、茺蔚子的DPP-4抑制作用不明顯，剔除實驗；復(fù)篩結(jié)果 如表3。
[0067] 4 討論 II型糖尿病是多層次、多環(huán)節(jié)代謝紊亂性疾病，其治療也應(yīng)從機體的整體功能調(diào)節(jié)出 發(fā)，開展多靶點、多環(huán)節(jié)的調(diào)控。本研究以腎氣虛弱、氣化不及，痰濁郁熱內(nèi)生而立論，實驗 研究表明中藥配方可以改善GK模型大鼠一般狀態(tài)，降低FBG、HbAlc、GSP水平，說明該方切 合其發(fā)病機制，但從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度分析，其改善糖代謝的機制包括多種，如胰島素促泌、改 善胰島素抵抗、促進肝糖原的合成、抑制糖苷酶等，近年來，抑制DPP-4,提高GLP-1已經(jīng)成 為治療II型糖尿病的新靶向。但本方是通過什么作用機制發(fā)揮作用的尚不清楚。為了闡釋 本方的多靶點作用機制，我們分別從胰島素促泌、改善胰島素抵抗、促進肝糖原的合成、抑 制糖苷酶等方面開展相關(guān)研究。而本研究主要探討該方對DPP-4抑制作用。DPP-4抑制主 要通過延長體內(nèi)GLP-1降解時間發(fā)揮降糖作用。GLP-1是一種腸促胰島素，體內(nèi)外研究顯示 GLP-1具有較好的抗糖尿病效應(yīng)，它具有血糖依賴性的腸促胰島素作用，可以避免餐后高血 糖的風(fēng)險，同時又阻止胰腺β細胞凋亡，促進β細胞的增殖[78]，可改善糖尿患者的血糖代 謝。但是由于GLP-1在體內(nèi)很快被以DPP-4為主的酶降解，因而抑制DPP-4能一定程度延 長GLP-1在體內(nèi)的半衰期，從而有效地發(fā)揮GLP-1降血糖效應(yīng)。
[0068]本實驗選用的自發(fā)性非肥胖型GK大鼠II型糖尿病模型以胰島β細胞胰島素釋放 受損、脂肪和肌肉組織中度胰島素抵抗為特征。β細胞漸進性消失和胰島纖維化并具有中 等程度的胰島素抵抗是該模型的特點，糖尿病發(fā)作后，很快出現(xiàn)高血糖、胰島素分泌減弱等 癥狀，其發(fā)病機理與II型糖尿病機理及其類似[9]。實驗結(jié)果表明，中藥配方可以降低GK大 鼠FBG、HbAlc及GSP水平，在改善糖代謝方面存在劑量依賴性。該方還能增加血清GLP-1 含量，抑制血清DPP-4活性。體外實驗通過對中藥配方及其組成的單味藥物進行篩選，發(fā)現(xiàn) 該方具有DPP-4抑制作用，但較西格列汀片及其組成藥物萊菔子、菟絲子、梔子作用弱，萊 菔子、菟絲子、梔子可能是該方發(fā)揮DPP-4抑制作用的主要藥物，由此推斷DPP-4抑制作用 是該方發(fā)揮降糖作用的有效途徑之一。
[0069]中藥配方中紅景天、菟絲子滋補肝腎二藥合用為補益腎氣，以增氣化為該方主藥， 女貞子、枸杞子益精補血，五味子斂肺補腎，與菟絲子共同補益肺腎之陰。萊菔子下氣除痰， 車前子瀉而通之，瀉有形之濁。蘇子降氣化痰，與萊菔子合用，增加其行氣化痰之力攻補兼 施。方中葛根、丹參、決明子、梔子、茺蔚子兼顧清熱消瘀?，F(xiàn)代藥理也表明該方中多味中藥 可以通過不同途徑發(fā)揮降糖作用，如紅景天苷對H202及高糖誘導(dǎo)的H9c2細胞氧化應(yīng)激損 傷有保護作用，并且這種作用可能是通過PI3K/Akt通路促進其下游因子GSK-3β的磷酸化 并失活，從而抑制mPTP的開放而實現(xiàn)的。菟絲子及其單體成分可能通過抑制α-淀粉酶的 活性、抗氧化應(yīng)激、增強免疫功能等發(fā)揮降糖作用[1314]。五味子通過減輕和修復(fù)β細胞損 傷、增加胰島素含量降低血糖，還能調(diào)節(jié)嘌呤代謝與腸內(nèi)菌代謝治療糖尿病腎病[15 16]。決明 子可以改善氧化應(yīng)激狀態(tài)改善糖代謝[1°]。女貞子提取物及其單體成分降糖作用可能與抑 制α-葡萄糖苷酶、改善胰島素抵抗相關(guān)[11]。梔子提取物能降低血糖，降低同型半胱氨酸 水平 [12]。枸杞子有效成分可以降糖、降脂、改善腎功能、延緩或抑制糖尿病腎病微血管炎癥 過程[17]。萊菔子降糖方面的作用尚未見報道。該方以中醫(yī)傳統(tǒng)理論及現(xiàn)代藥理研究成果 為依據(jù)配伍而成，既能補腎益氣以增氣化，又能祛痰化濕，清熱消瘀，從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度分析， 該方通過作用于不同靶向進而發(fā)揮改善糖代謝作用。
[0070]本實驗結(jié)果表明該中藥配方能改善T2DM大鼠糖代謝，具有一定提高GLP-1作用， 抑制DPP-4可能是該方作用機制之一，初步判斷萊菔子、菟絲子、梔子是該方發(fā)揮DPP-4抑 制作用的主要藥物。體外篩選實驗僅進行了中藥配方及其單味中藥水提物抑制DPP-4研 究，其結(jié)論尚不能全面反應(yīng)各單味中藥抑制DPP-4作用，今后還需進行不同濃度其他溶劑 提取物抑制DPP-4篩選實驗，以為該方提取工藝進一步優(yōu)化提供實驗依據(jù)。
[0071] 此外，我們還通過實驗發(fā)現(xiàn)本配方具有一定的抑制α-葡萄糖苷酶活性、改善胰 島素抵抗作用。
【主權(quán)項】
1. 一種改善糖代謝中藥配方，其特征在于各組分的重量百分比：紅景天15-30%、萊菔 子15-30%、桑螵蛸2-10% ;葛根5-10% ;丹參10-20% ;菟絲子10-30% ;枸杞子5-10% ;五味子 5-10% ;女貞子5-10% ;蘇子5-10% ;車前子5-20% ;茺蔚子5-20% ;梔子5-10% ;決明子5-10%。2. -種改善糖代謝中藥的制備工藝，其特征在于包含如下工藝步驟： ① 分別將紅景天15-30% ;萊菔子15-30% ;葛根5-10% ;丹參10-20% ;菟絲子10-30% ;枸 杞子5-10% ;五味子5-10% ;女貞子5-30% ;蘇子5-30% ;車前子5-20% ;茺蔚子5-20% ;梔子 5-30% ;決明子5-10% ;粉碎過60目篩，取篩下粉料備用，上述百分比為重量百分比； ② 將紅景天、萊菔子、葛根、丹參、英絲子、枸杞子、五味子、女貞子、蘇子、車前子、憲蔚 子、梔子、決明子粉料混合，加料液體積比1:20的65%乙醇浸泡0. 5小時，加熱溫度60度， 超聲振蕩提取1次，提取時間90分鐘，濾過，濾液回收乙醇，干燥浸膏，得醇提取物；過濾后 藥渣進入下一步提?。? ③ 將上述過濾后藥渣混合，加重量比8倍量水，提取1次，提取時間3小時，過濾取水提 液并濃縮干燥，得水提取物；過濾后藥渣棄去； ④ 將桑螵蛸超微粉碎； ⑤ 將水提取物、醇提取物和桑螵蛸超微粉碎物混合，干燥、粉碎后得粉狀物料為提取的 有效成分。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種改善糖代謝中藥的制備工藝，其特征在于提取的有效成 分，最后得到有效成分的粉狀物料，出粉率為25-30%，也就是說，最終提取的有效成分粉狀 物料的重量，是紅景天、萊菔子、葛根、丹參、英絲子、枸杞子、五味子、女貞子、蘇子、車前子、 茺蔚子、梔子、決明子、桑螵蛸原料粉料重量的25- 30%。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種改善糖代謝中藥的制備工藝，其特征在于提取的有效成 分粉狀物料，與藥用輔料配伍，可制成丸劑、膠囊劑、片劑、沖劑及顆粒劑，包裝為每袋3g。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種改善糖代謝中藥配方及制備工藝，屬于中藥改善Ⅱ型糖尿病糖代謝技術(shù)領(lǐng)域。技術(shù)方案是：各組分的重量百分比：紅景天15-30%、萊菔子15-30%、桑螵蛸2-10%；葛根5-10%；丹參10-20%；菟絲子10-30%；枸杞子5-10%；五味子5-10%；女貞子5-10%；蘇子5-10%；車前子5-20%；茺蔚子5-20%；梔子5-10%；決明子5-10%。本發(fā)明針對Ⅱ型糖尿病的病理機制，以補腎、泄?jié)?、化瘀清熱為主，通過補腎以增氣化，通過理氣泄?jié)嵋匀ブ瑵巅辗e，通過化瘀清熱以消瘀瀉熱；促進胰島細胞保護、改善胰島素抵抗、抑制糖吸收、促進胰島素分泌、預(yù)防血管并發(fā)癥等作用；利用優(yōu)化提取工藝將配方制成保存、攜帶、服用方便的現(xiàn)代中藥制劑。
【IPC分類】A61K36/815, A61K35/64, A61P3/10
【公開號】CN105250494
【申請?zhí)枴緾N201510718836
【發(fā)明人】李繼安, 喇孝謹, 田春雨, 高秀娟, 齊峰, 丘昌龍, 崔鵬, 勞鳳云, 周雪梅, 程瑞婷, 董思圻, 張碧溦, 徐雪梅, 焦子珊
【申請人】華北理工大學(xué)
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年10月30日