銀杏素在制備治療豬鏈球菌感染藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及銀杏素在制備治療豬鏈球菌感染藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀杏素存在于銀杏科植物銀杏的葉和外種皮中。銀杏素具有多種生物學(xué)活性，還 具有擴(kuò)張血管和治療心絞痛等作用。作為新型的天然功效因子，銀杏素在食品工業(yè)、醫(yī)藥工 業(yè)等方面具有重要的作用。但截至目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)銀杏素治療豬鏈球菌感染的報(bào)道。
[0003] 豬鏈球菌病是一種嚴(yán)重的世界范圍內(nèi)流行的人畜共患傳染病原菌，可導(dǎo)致人和動(dòng) 物的腦膜炎、敗血癥和心內(nèi)膜炎；此外，也可引起腎臟、肝臟、肺臟和心臟等多臟器功能衰竭 和死亡以及聽(tīng)力永久喪失。OIE將豬鏈球菌感染定為B類疾病，對(duì)公眾健康造成很大的威 脅。豬鏈球菌的致病力與其毒力因子密切相關(guān)，其中豬鏈球菌分泌的溶血素可使得病原菌 逃逸宿主免疫系統(tǒng)攻擊以及突破血腦屏障而引起腦膜炎，甚至是死亡。因此溶血素是豬鏈 球菌感染抗毒力藥物研發(fā)的潛在靶標(biāo)。近年來(lái)由于抗生素的濫用以及其不可避免地易誘導(dǎo) 耐藥性的發(fā)生和發(fā)展，因此迫切需要尋求新型、毒性小和選擇壓力小的抗感染藥物。本發(fā)明 首次發(fā)現(xiàn)無(wú)抗菌活性的銀杏素可直接中和豬鏈球菌溶血素的成孔活性并體內(nèi)外抑制豬鏈 球菌的致病力。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)豬鏈球菌感染具有治療作用的抗毒力藥物。
[0005] 銀杏素的分子結(jié)構(gòu)如下：
[0006]
[0007] 本發(fā)明通過(guò)家兔紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)、巨噬細(xì)胞（J774)損傷的保護(hù)試驗(yàn)以及小鼠豬 鏈球菌感染的治療作用試驗(yàn)，證實(shí)銀杏素可抑制豬鏈球菌溶血素的成孔活性以及其對(duì)豬鏈 球菌感染具有治療作用。
【具體實(shí)施方式】
[0008] 1 ?溶血試驗(yàn)
[0009] 純化的豬鏈球菌溶血素于96孔板中作連續(xù)的二倍稀釋，每個(gè)孔中加入IO7個(gè)家 兔紅細(xì)胞，于37°C中孵育30min后離心。其中使紅細(xì)胞溶解的最高稀釋倍數(shù)視為溶血滴度 (Hemolysis titre)〇
[0010] 不同濃度銀杏素處理下豬鏈球菌溶血素的溶血滴度如表1 :
[0011] 表1.銀杏素對(duì)豬鏈球菌溶血素溶血活性的抑制作用
[0012]
[0013] 2.銀杏素對(duì)豬鏈球菌介導(dǎo)J774細(xì)胞損傷作用的保護(hù)性試驗(yàn)
[0014] 豬鏈球菌于THB培養(yǎng)基中培養(yǎng)至0D600nm = 0. 8,取5ml的細(xì)菌培養(yǎng)物，離心并重 懸于IOml的DMEM培養(yǎng)基中。J774細(xì)胞于DMEM培養(yǎng)基（加入10%胎牛血清）中于37°C， 5 % CO2培養(yǎng)24h后，以2 X 10 4個(gè)細(xì)胞/孔鋪于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔200 y 1。細(xì)胞貼 壁后，加入豬鏈球菌菌懸液（細(xì)菌：細(xì)胞=5:1)，并加入不同濃度的銀杏素，置于細(xì)胞培養(yǎng) 箱中于37°C，5% CO2共培養(yǎng)5h。離心取IOOyl上清，并加入LDH試劑100yl，37°C孵育 30min，后用酶標(biāo)儀測(cè)570nm吸光值，計(jì)算不同濃度銀杏素處理組細(xì)胞的存活率（表2)。結(jié) 果表明銀杏素能夠保護(hù)豬鏈球菌對(duì)J774介導(dǎo)的細(xì)胞損傷，且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。
[0015] 表2.銀杏素抑制豬鏈球菌對(duì)J774介導(dǎo)的細(xì)胞損傷
[0016]
[0017] 3.小鼠豬鏈球菌感染的實(shí)驗(yàn)治療學(xué)研究
[0018] 3. 1小鼠豬鏈球菌感染模型
[0019] BALB/c小鼠（雄性，18-22g)經(jīng)腹腔注射200 y 1豬鏈球菌懸液（IOwCFUAiI)，建 立小鼠豬鏈球菌感染模型。
[0020] 3. 2保護(hù)率試驗(yàn)
[0021] 小鼠接種豬鏈球菌后2h分別皮下注射100、50和25mg/kg(100 y 1)的銀杏素，每 間隔6h給藥一次。不給藥對(duì)照組同時(shí)間皮下注射IOOiil生理鹽水，每組50只小鼠。按給 藥方案給藥后，分別記錄小鼠感染豬鏈球菌24h、48h和72h后的死亡率。結(jié)果表明（表3)， 經(jīng)銀杏素給藥治療后，顯著降低小鼠豬鏈球菌感染的死亡率（P < 0. 05)。
[0022] 表3.銀杏素降低小鼠豬鏈球菌感染死亡率
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 銀杏素在制備治療豬鏈球菌感染藥物中的應(yīng)用。2. 如權(quán)利要求1所述的銀杏素在制備治療豬鏈球菌感染藥物中的應(yīng)用，其特征在于所 述的豬鏈球菌感染是指由鏈球菌屬細(xì)菌引起的細(xì)菌性感染，其中細(xì)菌性感染是指由豬鏈球 菌引起的感染。3. 如權(quán)利要求1所述的銀杏素在制備治療豬鏈球菌感染藥物中的應(yīng)用，其特征在于所 述的銀杏素制劑為適合臨床使用的抗豬鏈球菌感染的藥物制劑，包括注射劑、膠囊劑、片劑 或粉針劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了銀杏素在制備治療豬鏈球菌感染藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)家兔紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)、巨噬細(xì)胞(J774)損傷的保護(hù)試驗(yàn)以及小鼠豬鏈球菌感染的治療作用試驗(yàn)證實(shí)了銀杏素對(duì)豬鏈球菌感染具有較好的治療效果。本發(fā)明用銀杏素治療豬鏈球菌感染，與用抗生素治療相比較，具有無(wú)耐藥性，治愈率高的優(yōu)點(diǎn)。因此銀杏素可以用于抗豬鏈球菌感染新藥開(kāi)發(fā),并對(duì)藥物靶標(biāo)確認(rèn)有著重要意義。
【IPC分類】A61K31/352, A61P31/04
【公開(kāi)號(hào)】CN105193784
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510680558
【發(fā)明人】鄧旭明, 王建鋒, 李 根, 盧葛錦, 張冰
【申請(qǐng)人】吉林大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年10月20日