一種趕黃草的提取物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種趕黃草提取及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 常見的肝損傷包括缺血再灌注肝損傷和化學(xué)性肝損傷。其中缺血再灌注損傷 (ischemia reperfusion injury, IRI)是外科臨床最常見的問題之一。各種原因造成組 織器官血液灌流量減少時發(fā)生缺血性損傷，而恢復(fù)血液灌流后，細(xì)胞功能代謝及結(jié)構(gòu)破壞 反而加重，出現(xiàn)缺血再灌注損傷。在肝移植技術(shù)日趨成熟的今天，移植肝經(jīng)受缺血損傷后， 隨著血液的開放，又會經(jīng)歷再灌注損傷二次打擊，這一過程在臨床上因損傷程度不同可有 多種表現(xiàn)（從無癥狀、輕度肝功能異常到肝功能衰竭等），但愈來愈多的研究顯示，缺血再 灌注損傷是導(dǎo)致肝切除后肝功能衰竭和肝移植后移植物早期非免疫性失活的重要原因， 同時還可以增加移植器官隨后發(fā)生急性和慢性排斥反應(yīng)的機(jī)會，引起晚期的免疫性失活 (燈盞花素預(yù)適應(yīng)對大鼠肢體缺血再灌注肝損傷的保護(hù)作用，實用醫(yī)學(xué)雜志，2013,9(4)， 543-545)〇
[0003] 化學(xué)性肝損傷是指由化學(xué)性肝毒物質(zhì)所誘導(dǎo)的肝損傷，包括酒精、環(huán)境中的化學(xué) 毒物及某些藥物等。肝臟作為人體的重要解毒器官，具有肝動脈和肝靜脈雙重血液供應(yīng)?；?學(xué)性肝毒物質(zhì)可通過胃腸道門靜脈或體循環(huán)進(jìn)入肝臟進(jìn)行轉(zhuǎn)化，因此肝臟容易受到化學(xué)性 肝毒物質(zhì)的損害，進(jìn)一步可引起肝臟不同程度的肝細(xì)胞壞死、脂肪變形、肝硬化和肝癌（葡 萄籽原花青素減輕小鼠急性化學(xué)性肝損傷，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2012, 32 (10) ,1198-1201)。 CC14誘導(dǎo)的化學(xué)性肝損傷動物模型被廣泛用于化學(xué)性肝損傷保護(hù)藥物和保健食品的研發(fā) (沙棘籽油對四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用研究，中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2010,11 (5)，513-516)。 CC14進(jìn)入機(jī)體后，能被肝臟內(nèi)的肝微粒體色素 P450激活，產(chǎn)生三氯甲基自由基（· CC1，） 和氯自由基（· Cl)，這些自由基攻擊肝細(xì)胞膜的多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA)引發(fā)脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性強(qiáng)，嚴(yán)重的則使肝細(xì)胞變性壞死， 胞衆(zhòng)內(nèi)車專氨酉每滲出(Mechanism of carbon tetrachloride induced hepatotoxicity, Z Naturforsch C, 2011, 56(728) :649-659 ；Biochemical and cellular mechanisms of toxic liver injury, Semin Liver Dis,2002 ；22 (2) :137-13)〇
[0004] 隨著肝缺血再灌注損傷機(jī)制的逐步明確，各種預(yù)防及治療措施日益增多，但大 部分都在實驗階段。1、缺血預(yù)處理（ischemic preconditioning，IPC) :Murry等發(fā)現(xiàn)缺 血預(yù)處理能夠增加夠心臟對缺血的耐受性以來，IPC的保護(hù)作用在很多器官中都得到了 證實。2、減輕肝臟缺血再損傷的藥物：如抗氧化劑、黏附分子拮抗劑、PAF拮抗劑、細(xì)胞 因子活性抑制劑、蛋白酶抑制劑以及FK506、Cyclosporine等等（肝缺血再灌注損傷，醫(yī) 學(xué)臨床研究，2005，22 (3)，397-400)。而對于化學(xué)性肝損傷治療主要包括：聯(lián)苯雙酯、輔 酶A，肌酐等西藥（糖肝康對CCld肝損傷模型肝功能影響機(jī)制研究，中華全科醫(yī)學(xué)，2012， 10(12)，1829-1830 ;D-阿洛糖對急性化學(xué)性肝損傷小鼠的保護(hù)作用研究，中國醫(yī)療前沿， 2013, 8(24)，7-8)。
[0005] 趕黃草（Penthorum chinense Pursh)又名扯根菜、水澤蘭、山珍珠等，據(jù)《天寶本 草》、《救荒本草》等記載，趕黃草具有通絡(luò)活血、祛瘀除濕、活血散瘀等作用。文獻(xiàn)報道趕黃 草具有防治肝炎、肝保護(hù)的藥理活性，但至今尚未見趕黃草關(guān)于防治缺血再灌注肝損傷及 化學(xué)性肝損傷活性成分的報道。另外，目前臨床使用的趕黃草成方制劑"肝蘇顆粒"系列產(chǎn) 品，由于生產(chǎn)工藝仍為傳統(tǒng)的水提醇沉，活性成分未能充分的富集，臨床多用于肝病的輔助 治療，因此需要進(jìn)一步的提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種新的保肝效果更佳的趕黃草提取物及其制 備方法和用途。
[0007] 本發(fā)明趕黃草提取物：其HPLC指紋圖譜的特征如下：包含4個特征峰，其中，
[0008] 1號峰的保留時間為1(λ 4±0· 25min，峰面積為1682000±8000 ;
[0009] 2號峰的保留時間為12. 5 ±0. 25min，峰面積為36750 ±700 ;
[0010] 3號峰的保留時間為13. 0±0· 25min，峰面積為2461000±3000 ;
[0011] 4號峰的保留時間為14. 9±0· 25min，峰面積為1831000±5000。
[0012] HPLC指紋圖譜的色譜條件如下：
[0013] 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；
[0014] 檢測波長：280nm;
[0015] 流動相：A相為乙腈，B相為0. 2%甲酸水溶液，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫：采用梯 度洗脫，洗脫程序如下：從〇分鐘開始至20分鐘，流動相A由35%變?yōu)?5%，從20分鐘開 始至25分鐘，流動相A由65%變?yōu)?0%，從25分鐘開始至35分鐘，流動相A由80%變?yōu)?35%〇
[0016] 優(yōu)選地，所述提取物的HPLC指紋圖譜如圖2所示。
[0017] 優(yōu)選地，所述提取物采用如下方法制備：
[0018] (1)取趕黃草藥材，粉碎，用30~95%乙醇提取，減壓濃縮，得粗提取浸膏；
[0019] ⑵往步驟⑴所得浸膏中加入1~2倍體積的水，過濾或者離心，所得濾液或者 上清液通過HPD-400、D-101或AB-8大孔樹脂柱，上樣體積是柱體積的1/2-2/3,依次用水、 10%乙醇、30%乙醇、50 %乙醇和95%乙醇洗脫，洗脫液為柱體積的5-7倍，分別得到水、 10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、50 %乙醇和95 %乙醇洗脫液，取95%乙醇洗脫液，濃縮，干 燥，即得。
[0020] 步驟（1)中，所述提取是熱回流提取或者浸潤提取。
[0021] 優(yōu)選地，所述熱回流提取的方法如下：用30-95%的乙醇熱回流提取兩次，每次提 取時間為2小時，每次加入的乙醇的量為原藥材重量的8-15倍V/W，合并提取液。
[0022] 優(yōu)選地，所述浸潤提取的方法如下：用原藥材重量10-15倍體積（V/W)的40-60% 乙醇浸潤24小時后滲漉提取，收集20-25倍體積的滲漉液。
[0023] 本發(fā)明趕黃草提取物的制備方法，它包括如下步驟：
[0024] (1)取趕黃草藥材，粉碎，用30~95%乙醇提取，減壓濃縮，得粗提取浸膏；
[0025] (2)往步驟⑴所得浸膏中加入1~2倍體積的水，過濾或者離心，所得濾液或者 上清液通過HPD-400、D-101、AB-8大孔樹脂柱，上樣體積是柱體積的1/2-2/3,依次用水、 10%乙醇、30%乙醇、50 %乙醇和95%乙醇洗脫，洗脫液為柱體積的5-7倍，分別得到水、 10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、50 %乙醇和95 %乙醇洗脫液，取95%乙醇洗脫液，濃縮，干 燥，即得。
[0026] 步驟（1)中，所述提取是熱回流提取或者浸潤提取。
[0027] 優(yōu)選地，所述熱回流提取的方法如下：用30-95%的乙醇熱回流提取兩次，每次提 取時間為2小時，每次加入的乙醇的量為原藥材重量的8-15倍V/W，合并提取液。
[0028] 優(yōu)選地，所述浸潤提取的方法如下：用原藥材重量10-15倍體積（V/W)的40-60% 乙醇浸潤24小時后滲漉提取，收集20-25倍體積的滲漉液。
[0029] 本發(fā)明還提供了前述趕黃草提取物在制備肝保護(hù)藥物中的用途。
[0030] 其中，所述藥物是預(yù)防和/或治療肝損傷的藥物。
[0031] 其中，所述藥物是預(yù)防和/或治療肝缺血再灌注肝損傷及化學(xué)性肝損傷的藥物。
[0032] 本發(fā)明還提供了一種保肝藥物，它是前述趕黃草提取物為活性成分，加上藥學(xué)上 可接受的輔料或者輔助性載體制備而成的制劑。
[0033] 優(yōu)選地，所述劑型為經(jīng)胃腸道給藥劑型。
[0034] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述經(jīng)胃腸道給藥劑型為顆粒劑、散劑、片劑、丸劑、膠囊劑、茶劑、 酒劑或口服液
[0035] 綜上，本發(fā)明趕黃草大環(huán)多酚提取物具有保肝作用，能夠預(yù)防和治療肝損傷，對肝 缺血再灌注損傷、急性肝損傷和慢性肝損傷有確切療效，而且效果優(yōu)于陽性藥物肝蘇顆粒， 可以替代肝蘇顆粒使用，具有良好的臨床應(yīng)用前景。
[0036] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0037] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0038] 圖1本發(fā)明實施例1-5制備的趕黃草大環(huán)多酚提取物的HPLC圖譜。Sl :實施例1 ; S2 :實施例2 ;S3 :實施例3 ;S4 :實施例4 ;S5 :實施例5。
[0039] 圖2本發(fā)明趕黃草大環(huán)多酚提取物的指紋圖譜。
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