，B :0. 1% TFAA80%乙腈加20%水）；20分鐘內的梯度 26%-36% B ;流速：1. 0 mL/ 分鐘；柱：Phenomenex C18 (2) 4. 6 X 150mm，5 y，100A ;檢測器： UV@220nm;樣品注射體積：100.0 yL)。相應的HPLC色譜圖見圖4。此外，根據用于肽序列合 成的相應氨基酸的逐步加入，通過電噴霧質譜法測定純化的化合物2的分子量為625. 3amu (理論質量：625. 77amu)，證實了化合物2的身份。化合物2的電噴霧質譜圖見圖5。
[0052] 抑制細朐粘附的方法 本發(fā)明還提供通過給予受試者有效量的R-G-磺基丙氨酸（即R-G-NH-CH(CH2-S03H)cooh的線性形式或r-g-nh-ch(ch2-so3h)cooh的環(huán)狀形式）或其衍生物（包括藥學上可接 受的鹽、水合物、立體異構體、多聚體、環(huán)狀形式、線性形式、藥物綴合物、前藥及其衍生物） 而在人或動物受試者中抑制細胞粘附至RGD結合位點的方法。
[0053] 申請人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的合成R-G-磺基丙氨酸肽通過競爭性抑制細胞與ECM組分附 著而誘導細胞凋亡。因此，本發(fā)明的合成R-G-磺基丙氨酸肽及其衍生物可用作有效的整聯(lián) 蛋白拮抗劑，如針對血管生成、炎癥、癌癥轉移、血栓形成、預防和治療瘢痕形成的治療劑以 及藥理學玻璃體溶解劑。此外，在本發(fā)明的一個重要方面，設想使用多聚化和放射性標記的 R-G-磺基丙氨酸肽的a，0整聯(lián)蛋白的改進靶向法用作檢測腫瘤（診斷劑或成像劑）和治 療腫瘤的內部放射治療劑。在另一個重要方面，改進的R-G-磺基丙氨酸肽綴合物或多聚體 R-G-磺基丙氨酸肽綴合物起藥物載體的作用，例如作為有效靶向腫瘤的抗癌藥物載體。
[0054] 如本文其它部分的描述一樣，與RDG-肽中的相應羧酸相比，R-G-磺基丙氨酸-肽 中的磺酸是較強酸?；撬峄鶊F的這種較高極性導致較強的分子間結合。例如，R-G-磺基丙 氨酸（其具有更極化的0-H鍵），可與整聯(lián)蛋白結合位點中蛋白質的氨基酸的酰胺基和/或 側鏈形成比R-G-天冬氨酸（其具有相對較不極化的0-H鍵）強的氫鍵和/或與整聯(lián)蛋白 結合位點中絡合的金屬離子有較強的相互作用。因此，本發(fā)明的新的R-G-磺基丙氨酸肽及 其衍生物提供在整聯(lián)蛋白受體識別和結合方面優(yōu)于相應RGD肽的改良的化合物和組合物。
[0055] 此外，在患有慢性高血糖癥伴發(fā)I0P升高的糖尿病患者中，特別報道了開角型 青光眼與纖連蛋白在小梁網組織中蓄積有關，且認為纖連蛋白過量抑制房水流出（參 見Oshitari，T等，Am.J.Ophthalmol. (2007) 143:363-365)。纖連蛋白在小梁網中 參與細胞-ECM相互作用表明原發(fā)性開角型青光眼（參見Marks.Filla等，Invest. Ophthalmol.Vis.Sci. (2002) 43:151-161;以及CherylR.Hann等，Ophthalmic Res. (2001) 33:314-324)。另據報道，在影響流出能力方面，鞏膜靜脈竇的內皮細胞與胞 外基質相互作用（參見CindyK.Bahler等，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. (2004) 45 :2246-2254)。根據房水流出受存在的過量胞外基質組分（例如纖連蛋白）抑制，應用 R-G-磺基丙氨酸肽及其衍生物治療糖尿病患者的I0P升高可能極有益于糖尿病患者。
[0056] 優(yōu)選的R-G-磺基丙氨酸肽可以是融合多肽、環(huán)狀或線性多肽、衍生化多肽（包括 用/與藥物遞送系統(tǒng)或其它藥物（例如抗癌藥物）衍生化或締合或偶聯(lián)的R-G-磺基丙氨 酸肽）、多聚化R-G-磺基丙氨酸肽、與整聯(lián)蛋白的結合位點或其功能片段免疫反應的含有 R-G-磺基丙氨酸序列的單克隆抗體。
[0057] 含有R-G-磺基丙氨酸的多肽可具有與天然整聯(lián)蛋白粘附結合區(qū)的氨基酸殘基序 列相當?shù)男蛄?，所述結合區(qū)為例如血纖蛋白原、纖連蛋白、玻連蛋白、馮維勒布蘭德因子、層 粘連蛋白、血小板反應蛋白等配體中存在的結合區(qū)。
[0058] 本發(fā)明的肽序列由具有末端胍基、磺酸基和羧基的3個氨基酸及其與藥物遞送系 統(tǒng)偶聯(lián)和/或締合的衍生物組成，所述藥物遞送系統(tǒng)包括肽片段、糖蛋白和聚合物基團（例 如PEG、Pluronic和其它聚合物基團）以及脂質體和納米粒。包含所述肽序列以治療各種 病理病癥的藥物組合物包括可注射劑、凝膠劑、混懸劑、軟膏劑、固體劑型和液體劑型。
[0059] 與細胞粘附基序（例如纖連蛋白、玻連蛋白、層粘連蛋白、血纖蛋白原、血小板反 應蛋白和馮維勒布蘭德因子）締合的整聯(lián)蛋白受體是R-G-磺基丙氨酸肽及其衍生物的靶 表位。已經發(fā)現(xiàn)三肽R-G-磺基丙氨酸為可被細胞結合結構域識別的最小氨基酸序列。該 序列還可干擾與整聯(lián)蛋白無關的免疫功能。因此，發(fā)現(xiàn)合成的R-G-磺基丙氨酸序列模擬 RGD細胞結合結構域，且天冬氨酸a -碳的取代提供與靶標整聯(lián)蛋白更強的結合親和力。與 RDG-肽中的相應羧酸相比，R-G-磺基丙氨酸-肽中的磺酸是較強的酸。磺酸基團的這種較 高極性導致更強的分子間結合。例如R-G-磺基丙氨酸（其具有更極化的0-H鍵）可與整聯(lián) 蛋白結合位點的氨基酸的酰胺基和/或側鏈形成比R-G-天冬氨酸（其具有相對較不極化 的0-H鍵）強的氫鍵和/或與整聯(lián)蛋白結合位點中絡合的金屬離子具有較強的相互作用。
[0060] 本發(fā)明的R-G-磺基丙氨酸序列的大部分通式如下： 式A:
其中 X^CHO^-SbOh-Y; -CHCR^-SH ； -CHCR^-OZ ； -CHO^SbOK; -CHO^-O-SbOh-OXijP -CHO^-O-PbOh-OXijP 其中Y = OX^NHyXi = 鏈烷基、苯基； 札=H、CrC6直鏈烷基、苯基或S03H Z = H、S03H 式B:
其中 X ^CHO^-SbOh-Y; -CH(R!)-SH； -CH(R!)-〇Z ； -CHO^SbOn; -CHO^-O-SbOh-OXijP -CHO^-O-PbOh-OXijP 其中Y = OXpNHyXi = 鏈烷基、苯基； 札=H、CfC6直鏈烷基、苯基或S03HZ=H、S03H;和 A2 選自廣Phe-Val-Ala、-Phe-Leu-Ala、-Phe-Val-Gly、-Phe-Leu-Gly、-Phe-Pr〇-Gly、-Phe-Pro_Ala、-Phe-Val或其鹽或N-烷基化衍生物?？梢允褂肁rg、Gly、磺基丙氨酸、Phe、Val、Ala、Leu、Pro、Thr的D-形式或L-形式的任何組合以及上述序列的環(huán)狀形式。
[0061] 環(huán)狀形式的實例包括： 式C:
其中X'選自：H、Ci-C6烷基、Ph、S03H;Y=0H、NH2;Z=H、CH3。
[0062] 環(huán)狀形式還包括五肽和七肽，例如通式C的具體化合物即化合物2(環(huán)狀-R-G-磺 基丙氨酸fN(CH3)V)，表示如下：
化合物2 式A包括本文其它部分描述的通式I-VI。式B包括本文其它部分描述的通式VII。
[0063]式D: Ai-Arg-Gly-NH-CH(X)-CO-A2 其中X^CHO^-SbOh-Y; -CH(R!)-SH ； -CH(R!)-〇Z ； -CHO^SbOn; -CHO^-O-SbOh-OXijP-CHO^-O-PbOh-OXijP 其中Y=OXpNHyXi= 鏈烷基、苯基； 札=H、CfC6直鏈烷基、苯基或S03H Z = H、S03H ;和 AjPI A2選自：-Phe-Val-Ala、-Phe-Leu-Ala、-Phe-Val-Gly、-Phe-Leu-Gly、-Phe-Pr〇-G ly、-Phe-Pr〇-Ala、-Phe_Val或其鹽或N-烷基化衍生物?？梢允褂肁rg、Gly、磺基丙氨酸、 Phe、Val、Ala、Leu、Pro、Thr的D-形式或L-形式的任何組合以及上述序列的環(huán)狀形式。 [0064] 取代R-G-磺基丙氨酸序列包括環(huán)狀R-G-磺基丙氨酸類似物。
[0065] 可通過使用藥物遞送系統(tǒng)或注射制劑或固體制劑或軟膏制劑的任何藥學上可接 受的劑型，經皮下、皮膚、眼和全身進行R-G-磺基丙氨酸及其衍生物的施用。
[0066] 本發(fā)明的化合物可通過適于產生預期治療效果的任何途徑給予，包括但不限于： 口服、直腸、靜脈內、動脈內、真皮內、皮下、肌內、鞘內、舌下、口腔、鼻內、經粘膜、經皮、局 部、眼內、玻璃體內、其它腸內、其它胃腸外和/或其它可行的給藥途徑。
[0067] 可以提供預期治療效果同時避免不當作用或毒性作用的任何劑量給予本發(fā)明的 化合物?？山o予人受試者的本發(fā)明化合物的典型劑量的范圍為約lng/kg-約1.0g/kg。 [0068] 如可行和適當時，本發(fā)明的化合物可任選以脂質體或納米粒的形式（例如納米 囊）制備。脂質體的形成和使用一般為本領域技術人員所知。脂質體由磷脂形成，所述磷脂 分散在含水介質中，使得它們自發(fā)地形成多層同心雙層囊泡，有時稱為多層囊泡（MLV)。MLV 的直徑通常為25 nm-4 y m。超聲處理時，MLV形成直徑約200-500埃的小多層囊泡（SUV)， 具有含有水溶液的核心。一般而言，當分散在含水介質中時，磷脂可形成非脂質體的各種結 構，這取決于脂質與水的摩爾比率。在脂質與水的低摩爾比率下，可形成脂質體。脂質體的 物理特性取決于pH、張力和二價陽離子存在與否。脂質體可通過不同機制與細胞相互作用， 所述機制包括1)胞吞（例如脂質體被巨噬細胞和嗜中性粒細胞等細胞吞噬）、吸附在細胞 表面，2)與細胞-表面組分相互作用，3)通過將脂質體的脂質雙層插入血漿膜中而與血漿 細胞膜融合，或4)脂質體脂質轉移到細胞膜或亞細胞膜，反之亦然。改變脂質體制劑可改 變脂質體賴以與鼻旁竇、鼻黏膜等中的細胞相互作用的機制。
[0069] 納米囊是由殼和在其中可置入所需物質的空間組成的任何納米粒。用于形成納米 囊的技術是本領域已知的。可以特殊尺寸和形狀制備聚合物納米囊。它們可作為單分散 粒子產生，所述粒子具有精確界定的理化性質，因此，可以訂制成在響應特定的雙分子引發(fā) 機制時利于治療物質或診斷物質的釋放，所述引發(fā)機制為例如鼻旁竇或其中植入了裝置的 耳、鼻或喉的其它區(qū)域內存在的PH、粘液流量或其它條件。納米囊可用于本發(fā)明，作為具有 可與特定靶細胞（例如癌細胞或炎癥病況相關細胞）結合的特異性化學受體或結合位點的 "聰明藥（smart drug)"。
[0070] 下面是含有本發(fā)明化合物的藥物制備物的非限制性制劑實例。還包括在抑制細 胞粘附中使用示例性R-G-磺基丙氨酸肽或衍生物證實的安全性和/或功效的實例。本文 所用術語"R-G-磺基丙氨酸肽"、"RGCys-肽"和"本發(fā)明的化合物"應同義地意指含有序 列R-G-磺基丙氨酸及其衍生物的組合物，包括但不限于本文所述通式I-VII和化合物1和 3-5界定的組合物。
[0071] 實施例1 藥物制劑 下面是藥物制劑I-X的實例，其含有本發(fā)明的R-G-磺基丙氨酸肽，例如本文所述通式 I-VII或化合物1-5任一種界定的任何R-G-磺基丙氨酸肽。
[0072]制劑 I R-G-磺基丙氨酸肽（RGCys-肽） 0? 0001mg-10g NaCl 0. 01mg-〇. 9g 水 適量至100.0 mL 制劑ii R-G-磺基丙氨酸肽（RGCys-肽） 0? OOOlmg-lOg EDTA 0.0 Olmg-lOOmg NaCl 0. 01mg-〇. 9g 水 適量至100.0 mL 制劑III R-G-磺基丙氨酸-肽 0.0 OOlmg-lOg EDTA 0.0 Olmg-lOOmg NaCl 0. 01mg-〇. 9g 朽1 樣酸 0? 0001mg-500mg 水 適量至100.0 mL 制劑IV R-G-磺基丙氨酸-肽 0.0 OOlmg-lOg NaCl 0. 01mg-〇.9g 磷酸鹽緩沖液至 pH = 3. 0 - 9. 0 水 適量至100.0 mL 制劑V R-G-磺基丙氨酸-肽 0. 0001mg-10g EDTA 0.0 Olmg-lOOmg NaCl 0. 01mg-〇. 9g 磷酸鹽緩沖液至 pH = 3. 0 - 9. 0 水 適量至100.0 mL 制劑VI R-G-磺基丙氨酸-肽 0. 0001mg-10g NaCl 0. 01mg-〇.9g 硼酸鹽緩沖液至 pH = 3. 0 - 9. 0 水 適量至100.0 mL 制劑VII R-G-磺基丙氨酸-肽 0. 0001mg-10g 透明質酸鈉鹽 0. 01-10% 硼酸 0? 01-1. 0% 聚乙二醇（PEG 8000) 0. 01-10% 氯化鈉 0? 10-0. 9% 氯化鉀 0? 01-0. 20% 氯化鈣二水合物 0. 001-0. 05% 氯化鎂六水合物 0. 01-0. 20% 防腐劑 pH 4.0 - 8.0 水 適量至100.0 mL 制劑VIII R-G-磺基丙氨酸-肽 0. 0001mg-10g 透明質酸鈉鹽 0. 01-10% 羧甲基纖維素 0.01-10% 硼酸 0? 01-1. 0% 聚乙二醇（PEG 8000) 0. 01-10% 氯化鈉 0? 10-0. 9% 氯化鉀 0? 01-0. 20% 氯化鈣二水合物 0. 001-0. 05% 氯化鎂六水合物 0. 01-0. 20% 防腐劑 pH 4.0 - 8.0 水 適量至100.0 mL 制劑IX R-G-磺基丙氨酸-肽 0. 0001mg-10g 透明質酸鈉鹽 0. 01-10% 藻酸鈉 0.01-10% 硼酸 0? 01-1. 0% 聚乙二醇（PEG 8000) 0. 01-10% 氯化鈉 0? 10-0. 9% 氯化鉀 0? 01-0. 20% 氯化鈣二水合物 0. 001-0. 05% 氯化鎂六水合物 0. 01-0. 20% 防腐劑 pH 3.0 - 8.0 水 適量至100.0 mL 制劑X R-G-磺基丙氨酸-肽 0. 0001mg-10g 透明質酸鈉鹽 0. 01-10% 海藻酸 0.01-10% 硼酸 0? 01-1. 0% 聚乙二醇（PEG 8000) 0. 01-10% 氯化鈉 0? 10-0. 9% 氯化鉀 0? 01-0. 20% 氯化鈣二水合物 0. 00