Isopaucifloral F在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及IsopaucifloralF的新藥用用途，具體涉及 IsopaucifloralF在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)有技術(shù)公開了雌激素是通過與雌激素受體（EstrogenReceptor，ER)結(jié)合直接 對成骨細胞抗凋亡、促進破骨細胞凋亡以及骨代謝產(chǎn)生影響。研究顯示，雌激素受體的兩種 亞型ERa和ERP廣泛分布在人和家兔的成骨細胞、骨細胞、髓板的軟骨細胞中。ERa和 ER3作為兩種受體亞型雖然在功能區(qū)域上存在著高度同源性，但研究認(rèn)為兩者在介導(dǎo)雌激 素參與骨代謝過程中可能扮演了不同角色，起著不同的作用。有實驗顯示，在未成熟的大鼠 小梁骨骨細胞ERa水平高于ERP，提示ERa能促進長骨生長；而小鼠和人成骨細胞與骨 核細胞均呈ERP免疫陽性，破骨細胞的胞質(zhì)呈ERP免疫陽性，人和鼠的骨切片均呈ER3 免疫陽性，該結(jié)果顯示ERP參與了骨的形成與重吸收；另有實驗表明，在ERa存在的情況 下，ERP可削弱前者的激活轉(zhuǎn)錄功能，而當(dāng)ERct缺乏的情況下，ERP又可替代其功能。因 此，研究表明，雌激素受體的兩種亞型ERa和ERP是通過相互協(xié)同和相互拮抗的"陰陽"互 補關(guān)系來共同對骨代謝起調(diào)控作用的。
[0003] IsopaucifIoralF是從植物金雀根中分離得到的天然產(chǎn)物，其生物活性尚 未見文獻報道。本申請的發(fā)明人擬提供IsopaucifloralF的新藥用用途，具體涉及 IsopaucifloralF在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供IsopaucifloralF的新藥用用途，具體涉及 IsopaucifloralF在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用途。
[0005] 本發(fā)明經(jīng)藥理實驗證實IsopaucifloralF具有抗骨質(zhì)疏松的藥用用途；藥理研究 顯示IsopaucifIoralF在體外酵母雙雜交雌激素受體競爭結(jié)合性實驗中ERP有激動作用， 進一步的動物實驗表明IsopaucifIoralF具有治療骨質(zhì)疏松的作用。
[0006] 本發(fā)明的IsopaucifloralF是從植物金雀根中分離得到的天然產(chǎn)物，具有如下結(jié) 構(gòu)；
[0008] 本發(fā)明進行了體外酵母雙雜交雌激素受體競爭結(jié)合性實驗，實驗結(jié)果顯示， isopaucifloralF對ERP有激動作用；經(jīng)對去卵巢大鼠長期骨代謝的影響實驗結(jié)果顯 示，所述的isopaucifIoralF高劑量組（HIGH)對去卵巢組（OVX)的骨質(zhì)疏松癥狀有明顯 的改善作用，長時間口服isopaucifloralF(10iig/kg)可以顯著地增加骨密度、骨小梁厚 度、骨體積分?jǐn)?shù)，降低骨小梁分離度，能有效改善去卵巢雌性大鼠的骨質(zhì)疏松癥狀；同時 isopaucifIoralF的LD5q大于有效劑量（10iig/kg)的500倍，證實其使用安全。
[0009] 本發(fā)明的IsopaucifloralF可進一步制成包含安全有效量IsopaucifIoralF及藥 用載體的各種制劑，用于治療骨質(zhì)疏松疾患。
[0010] 所述的"安全有效量"指的是：化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重 的副作用，通常，安全有效量根據(jù)治療對象的年齡、病情、療程等來確定。
[0011] 所述的"藥用載體"指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們 適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性；"相容性"在此指的是組合物中各 組份能和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。
[0012] 本發(fā)明所述的藥學(xué)上可以接受的載體部分例子有糖（如葡萄糖、蔗糖、乳糖等）， 淀粉（如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉等），纖維素及其衍生物（如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素 鈉、纖維素乙酸酯等），明膠，滑石，固體潤滑劑（如硬脂酸、硬脂酸鎂），硫酸鈣，植物油（如 豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等），多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等），乳化劑 (女卩吐溫?)、潤濕劑（如十二烷基硫酸鈉），著色劑，調(diào)味劑，穩(wěn)定劑，抗氧化劑，防腐劑，無 熱原水等。
【附圖說明】
[0013] 圖1給藥6周（A)后去卵巢大鼠胚骨MicroCT掃描結(jié)果。
[0014] 圖2給藥12周⑶后去卵巢大鼠脛骨MicroCT掃描結(jié)果。
[0015] 圖3給藥18周（C)后去卵巢大鼠脛骨MicroCT掃描結(jié)果。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但這些實施例絕不是對本發(fā)明的任何限 制。
[0017] 實施例1:體外酵母雙雜交雌激素受體競爭結(jié)合性實驗
[0018] 以pGADT7和pGBKT7為載體的酵母雙雜交ER競爭結(jié)合性實驗，給藥濃度為25iiM， 以白藜蘆醇為陽性對照，激動活性配體的篩選以InM的雌二醇（E2)激動；拮抗活性配體的 篩選同樣以InM雌二醇激動，以DMSO作空白對照，實驗結(jié)果顯示，isopaucifIoralF對ER3 有激動作用（如表1所示）。
[0019]表1.酵母雙雜交系統(tǒng)雌激素受體競爭結(jié)合實驗
[0020]
[0021] 實施例2 :isopaucifloralF對去卵巢大鼠長期骨代謝的影響實驗
[0022]選取6月齡SD雌性大鼠72只，隨機平均分為假手術(shù)組（SHAM)，去卵巢組（OVX)， 金雀異黃素陽性對照組（IUg/kg，GEN)和低（Iiig/kg，LOW)，中（3iig/kg，MID)，高 (10yg/kg，HIGH)三個給藥組，分別于初次給藥后的6周、12周和18周對每組隨機挑選 6只大鼠的脛骨進行MicroCT掃描，定量分析使用系統(tǒng)自帶的MicroView2. 0和ABA軟件 (GEHealthCareCo.)，分析參數(shù)包括體積骨密度（BMD)，為多孔骨小梁結(jié)構(gòu)的表觀密度，反應(yīng) 所選區(qū)域內(nèi)的總體骨礦鹽密度；骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV)，代表骨性結(jié)構(gòu)體素的總體積與區(qū)域 內(nèi)所有體素的總體積之比，松質(zhì)骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)采用三維直接測量法計算，計算出平均骨小 梁厚度（Tb.Th)和平均骨小梁分離度（Tb.Sp)，用于評價骨小梁的結(jié)構(gòu)形態(tài)，考察骨質(zhì)疏松 癥狀的改善程度（如表2所示）；
[0023] 結(jié)果顯示：
[0024] (1)經(jīng)卵巢切除的雌性大鼠（OVX)的骨密度，骨體積分?jǐn)?shù)，骨小梁厚度顯著下降， 骨小梁分離度上升，出現(xiàn)明顯的骨質(zhì)疏松癥狀；
[0025] (2)給藥6周和12周后，陽性對照組（GEN)和中低劑量給藥組（LOW，MID)對雌 性大鼠的骨質(zhì)疏松癥狀有改善作用，但是該作用不明顯，并且隨著時間的推移，骨質(zhì)疏松癥 狀加劇，IPg/kg的給藥濃度并不能維持骨質(zhì)疏松的改善癥狀，在18周出現(xiàn)了效果減弱的 現(xiàn)象，如陽性對照組（GEN)在18周時的骨代謝數(shù)據(jù)基本和去卵巢組（OVX)相當(dāng)（骨密度： 357. 21vs352. 20 ;骨小梁厚度：45. 13vs48. 38 ;骨體積分?jǐn)?shù)：0. 15vs0. 10 ;骨小梁分離度： 0. 17vs0.18)；
[0026] (3)高劑量組（HIGH)在給藥初期的效果與中低劑量組類似，隨著給藥的持續(xù)，18 周的結(jié)果顯示高劑量組（HIGH)較去卵巢組（OVX)骨密度增加，骨小梁厚度增加，骨體積分 數(shù)升高，骨小梁分離度下降，骨質(zhì)疏松有較為明顯的程度改善；其中較假手術(shù)組，骨密度恢 復(fù)至88% (460. 34vs519. 96)，骨小梁厚度恢復(fù)至78% (66. 62vs85. 16)，骨體積分?jǐn)?shù)恢復(fù)至 78% (0. 21vs0. 27)；
[0027] 表2.不同組大鼠脛骨骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)的比較
[0028]
[0029] 大鼠脛骨的MicroCT的掃描結(jié)果顯示（如圖1-3所示），其中：6周㈧和12周 (B)顯示雖然給藥組較去卵巢組（OVX)的骨質(zhì)疏松癥狀有改善作用，但是效果不明顯；而 從18周（C)的掃描結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高劑量組（HIGH)有明顯的改善作用，表觀上已達到假手術(shù)組 611^)時的狀態(tài)；掃描結(jié)果同樣證實長時間的口服18(^11(^1〇抑]^(1〇1^/1^)可以顯著 地增加骨密度、骨小梁厚度、骨體積分?jǐn)?shù)，降低骨小梁分離度，能有效改善去卵巢雌性大鼠 的骨質(zhì)疏松癥狀；與現(xiàn)有技術(shù)比較，所述的isopaucifloralF對大鼠每天口服的有效劑量 (10yg/kg)僅為陽性藥物醋酸巴多昔芬對大鼠有效劑量的1/30,說明isopaucifloralF較 醋酸巴多昔芬更為安全有效，具有治療骨質(zhì)疏松的藥物潛力。
[0030] 實施例3:isopaucifloralF的急性毒性評價實驗
[0031] 本實施例對該化合物進行進一步的成藥性考察，針對配合物isopaucifloralF進 行急性毒性實驗，經(jīng)對小鼠口服isopaucifloralF,連續(xù)觀察小鼠反應(yīng)14天，記錄死亡率； 本實驗中設(shè)置了 1個給藥劑量組（5000yg/kg)及1個空白對照組，每組12只小鼠，體重 20±2mg，雌雄各半；實驗結(jié)果顯示，14天后所有小鼠均存活，isopaucifloralF的LD5。大于 有效劑量（IOug/kg)的500倍，證實所述的isopaucifloralF使用安全。
【主權(quán)項】
1. IsopaucifloralF在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用途，所述的IsopaucifloralF具有 如下結(jié)構(gòu)；2.按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的Isopaucifloral對雌激素受體亞型 ER3有激動作用。3.按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的Isopaucifloral影響去卵巢大鼠長 期骨代謝。4.按權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述的Isopaucifloral增加去卵巢大鼠骨 密度、骨小梁厚度、骨體積分?jǐn)?shù)，降低骨小梁分離度。5. -種治療骨質(zhì)疏松藥物，其特征在于，其包含安全有效量IsopaucifloralF及藥用 載體。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及Isopaucifloral？F的新藥用用途，具體涉及Isopaucifloral？F在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用途。本發(fā)明提供了Isopaucifloral？F在體外酵母雙雜交雌激素受體競爭結(jié)合性實驗中ERβ有激動作用，進一步的動物實驗表明Isopaucifloral？F能增加去卵巢大鼠的骨密度、骨小梁厚度、骨體積分?jǐn)?shù)，降低骨小梁分離度，具有治療骨質(zhì)疏松的作用。本發(fā)明的Isopaucifloral？F進一步可制備治療骨質(zhì)疏松藥物。
【IPC分類】A61K31/122, A61P19/10
【公開號】CN105078944
【申請?zhí)枴緾N201410198525
【發(fā)明人】孫遜, 鐘晨, 郝曉東, 昌軍, 劉希希, 蔣喆
【申請人】復(fù)旦大學(xué)
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2014年5月11日