一種芫花提取物及其醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種芫花提取物、含有該提取物的藥物制劑及醫(yī) 藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 芫花又稱紫芫花、南芫花、頭痛花、藥魚草等，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品，為 傳統(tǒng)的峻下逐水藥?！侗静菥V目》列入毒草類，按《吳普本草》謂芫花"二月生青葉，加厚則 黑，花有紫、赤、白者，三月實(shí)落盡，葉乃生。"韓保昇《蜀本草》謂"近道處處有之，苗高二三 尺。葉似白前及柳葉，根皮黃似桑根，正月二月花發(fā)，紫碧色，葉未生時(shí)收。"結(jié)合《本草圖經(jīng)》 "安徽滁州芫花"和"四川錦州芫花"附圖看，古今藥用芫花品種一致，其原植物均為Daphne genkwa sieb. Et zucc?無疑。《中國藥典》2010版收載其為瑞香科（Thymelaeaceae)瑞香屬 (Daphne)植物芫花（Daphne genkwa sieb et zucc)的干燥花蕾。謝宗萬曾對(duì)芫花進(jìn)行了 本草學(xué)考證，確證了歷代本草中所記載的芫花應(yīng)該為紫芫花Daphne genkwa sieb. Et zucc 的干燥花蕾。該植物為全國大多數(shù)地區(qū)臨床習(xí)用的品種，其野生主要產(chǎn)于河南、山東、江蘇、 安徽、四川等省，河南省主要分布在信陽、南陽等地的山區(qū)。
[0003] 到目前為止，從芫花的花、花蕾、葉、枝條、根中提取分離出化合物有70多種，其中 含有黃酮類成分、二萜原酸酯類成分、香豆素類成分、綠原酸類成分、木脂素類成分、酚苷類 等多種成分。
[0004] 芫花為傳統(tǒng)的峻下逐水藥，有毒，功能瀉水逐飲，解毒殺蟲，現(xiàn)代研究表明其具有 以下藥理作用：①利尿作用；②鎮(zhèn)咳祛痰作用；③殺蟲、抗寄生蟲作用；④引產(chǎn)作用；⑤抗 炎、抗腫瘤作用；⑥免疫調(diào)節(jié)作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種芫花提取物，該提取物的制備方法和液相分析方法， 含有該提取物的藥物制劑及利用該提取物制備治療膠質(zhì)瘤的藥物的用途。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種芫花提取物，該提取物由以下方法制備：
[0008] (a)將干燥的芫花粉碎；(b)用75 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味 得到濃縮液；（c)對(duì)步驟（b)濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別 得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（d)正丁醇萃取物用大孔樹脂富集， 先用25 %乙醇沖洗8個(gè)柱體積除去多糖，再用60 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集60 %乙醇洗 脫液，減壓濃縮，噴霧干燥。
[0009] 進(jìn)一步地，步驟（d)中所述大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。
[0010] 為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同產(chǎn)地、批次藥材制備的芫花提 取物批間差異，所述提取物的液相分析方法為：
[0011]色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18 柱（4. 6mmX250mm，5 ym);
[0012] 流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.1 %磷酸水溶液；
[0013] 梯度洗脫程序：0.01~151^11，425%~35%;15~25111111，厶35%~50% ;
[0014] 25 ~32min，A 50% ;32 ~35min，A 50%~25% ;35 ~40min，A25%
[0015]流動(dòng)相流速：1.OmL ? min S
[0016] 檢測(cè)波長：255nm;
[0017] 柱溫：30°C;
[0018] 進(jìn)樣量：10 yL。
[0019] 藥物制劑，含有治療有效量的所述芫花提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
[0020] 所述的芫花提取物在制備保護(hù)肝臟的藥物中的應(yīng)用。
[0021] 所述的藥物制劑在制備保護(hù)肝臟的藥物中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明提取物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。
[0023] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明芫花提取物，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0024] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0025] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明通過對(duì)芫花藥材進(jìn)行提取、除雜、富集處理，能得到促進(jìn)膠 質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的提取物；本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物的指紋圖譜， 用于控制不同產(chǎn)地、批次藥材制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0026] 圖1為芫花提取物HPLC液相圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0028] 實(shí)施例1:完花提取物制備
[0029] 將8kg干燥的芫花粉碎，用75%乙醇熱回流提?。?5LX 3次），合并提取液，濃縮 至無醇味得到濃縮液（6L);對(duì)濃縮液依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和 水飽和的正丁醇（6LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物285g，正丁醇萃取物用5L蒸餾水溶解后用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積I. 5L)富集，先用 25%乙醇沖洗8個(gè)柱體積（12L)，再用60%乙醇洗脫10個(gè)柱體積（15L)，收集60 %洗脫液， 減壓濃縮，噴霧干燥得芫花提取物浸膏粉155g。
[0030] 實(shí)施例2 :液相色譜分析
[0031] 供試品溶液配制：取實(shí)施例1方法制得的提取物浸膏粉5mg至50mL棕色容量瓶 中，加30mL 25%乙腈水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加25%乙腈水溶液定容。
[0032] 分析方法：
[0033] 高效液相色譜儀：Agilent 1100,二元栗；
[0034] 色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18 柱（4. 6mmX250mm，5 ym);
[0035] 流動(dòng)相：A為乙腈，B為0. 1 %磷酸水溶液；
[0036] 梯度洗脫程序：0.01~151^11，425%~35%;15~25111111，厶35%~50% ;
[0037] 25~32min，A50%;32~35min，A50%~25%;35~40min，A25%
[0038] 流動(dòng)相流速：1. OmL ? min S
[0039] 檢測(cè)波長：255nm ;
[0040] 柱溫：30 cC ;
[0041] 進(jìn)樣量：IOy L。
[0042] 對(duì)用10批不同產(chǎn)地、批次芫花制備的提取物進(jìn)行分析，建立指紋圖譜進(jìn)行匹配， 結(jié)果1~11號(hào)峰在10批樣品色譜圖中均出現(xiàn)。因此標(biāo)定11個(gè)峰為共有指紋峰，據(jù)此建立 該提取物的HPLC指紋圖譜，結(jié)果見圖1。
[0043] 實(shí)施例3 :芫花提取物藥理試驗(yàn)
[0044] 一、實(shí)驗(yàn)材料
[0045] U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞株；芫花提取物按實(shí)施例1方法制備，使用時(shí)用DMSO稀釋成所需 濃度。人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251購自武漢博士德生物工程有限公司。DMEM高糖培養(yǎng)液、標(biāo) 準(zhǔn)胎牛血清（Featal Bovine Serum，F(xiàn)BS)、胰蛋白酶溶液（Trypsin)和細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒 性檢測(cè)試劑盒（Cell Counting Kit-8, CCK-8)購自武漢博士德生物工程有限公司。細(xì)胞凋 亡與壞死檢測(cè)試劑盒（含Hoechst 33342染色液、碘化丙啶PI染色液、細(xì)胞染色緩沖液） 購自碧云天生物技術(shù)研究所。細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V-FITC、Prop