川陳皮素的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物用途技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及柑橘黃酮類化合物用途技術(shù)領(lǐng) 域，特別涉及川陳皮素在預(yù)防和治療口腔癌保健品和藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 口腔癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，約占全身惡性癌的3%，嚴重危害人類健 康。而口腔鱗狀癌，又名口腔表皮癌，則占口腔癌的90%。目前口腔癌的治療主要是以手術(shù) 為主，輔以放療化療，但這些會引起口腔頌面部組織器官缺損，導致患者語言、咀嚼、吞咽等 功能障礙，嚴重影響了患者的生存質(zhì)量。此外，治療后口腔鱗狀癌患者愈后較差，難以根治， 術(shù)后生存率不高。而天然植物活性成分具有活性好、副作用小等優(yōu)點，因此添加天然植物活 性成分的功能性口腔護理保健品及藥物是當今研究關(guān)注的重點。
[0003]川陳皮素（Nobiletin, 5, 6, 7, 8, 3'，4'_hexamethoxyflavone)是從蕓香科柑橘類 水果（CitrusreticulaiaBlanco)和果皮中提取的一種黃酮化合物，按結(jié)構(gòu)分類，屬多甲 氧基黃酮。川陳皮素、陳皮素及柚皮素的結(jié)構(gòu)式如下：
[0005] 目前，川陳皮素已經(jīng)被證實具有抗腫瘤、抗病毒、降血糖、神經(jīng)保護等生物活性，其 抗癌活性報道的主要針對乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等，但未見其用于口腔腫瘤的預(yù)防和治 療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種川陳皮素的應(yīng)用?；诖惼に鼐哂休^好的抑制人口 腔表皮樣癌細胞增殖活性，可用于制備具有預(yù)防和/或治療口腔癌效果的藥物或保健品， 適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。
[0007] 具體可以將川陳皮素和藥學上可接受的載體制備成注射液、片劑、粉針劑、顆粒 劑、膠囊、膏劑、霜劑或口服液劑型的藥物或保健品，藥物的劑型不限。
[0008] 所述保健品是口腔護理的保健品。
[0009] 所述保健品為牙膏、漱口水、牙粉、潤喉片或口香糖等多種形式。
[0010] 所述的川陳皮素是從蕓香科柑橘類水果（CitrusreticulaiaBlanco)和果皮中 提取的川陳皮素化合物單體。
[0011] 本發(fā)明所述的口腔癌為人口腔表皮癌。
[0012] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點和效果：
[0013] (1)川陳皮素抗口腔表皮癌增殖活性強：經(jīng)陳皮素、柚皮素、川陳皮素對人口腔表 皮癌細胞的抗增殖實驗，結(jié)果顯示川陳皮素對口腔表皮癌細胞具有明顯的抗增殖效果，并 有較好的量效關(guān)系。通過對比EC5。值發(fā)現(xiàn)川陳皮素比陳皮素、柚皮素具有更好的抗口腔表 皮癌細胞增殖活性。
[0014] (2)川陳皮素抑制口腔表皮癌細胞增殖的有效劑量小，潛在副作用也小，使用更安 全。
[0015] (3)川陳皮素資源廣泛，易于獲得，成本較低。
[0016] (4)川陳皮素能和不同的添加劑、賦形劑制備成不同的保健品及藥物劑型，能方便 人們食用及臨床應(yīng)用。
【附圖說明】
[0017] 圖1為不同濃度的川陳皮素對人口腔表皮癌細胞（KB細胞）形態(tài)的影響圖。
[0018]圖2為川陳皮素（a)、陳皮素（b)、柚皮素（c)抑制人口腔表皮癌細胞（KB細胞） 增殖曲線圖。
[0019] 圖3為川陳皮素作用于人口腔表皮癌細胞（KB細胞）的基因表達調(diào)控柱狀圖。同 一基因表達量柱狀圖上的不同字母a-d表示各組間的差異具有顯著性（p〈0. 05)。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例以及附圖對本發(fā)明做進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不 限于此。
[0021] 本發(fā)明是以川陳皮素的濃度均以活性成分>98%純度的提取粉末為例，但并不局 限為提取液或浸膏。當以其他形式如提取液方式應(yīng)用時，使用量應(yīng)折算成本發(fā)明中所公開 的純提取物形式的量。
[0022] 以下實施例所使用的實驗材料如下：
[0023] 細胞株：人口腔表皮細胞由中山大學實驗動物實驗中心提供；改良型a-MEM培養(yǎng) 基購買自Hyclone公司；胎牛血清購自杭州四季青公司；亞甲基藍購自sigma公司；細胞 RNA提取試劑盒購自廣州東勝公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒和實時定量PCR試劑盒購自Takara公 司。
[0024] 以下實施例所使用的實驗方法如下：使用亞甲基藍計數(shù)法對川陳皮素進行細胞毒 性及抗增殖實驗。
[0025] 抗增殖實驗：人口腔表皮樣癌細胞（KB)胰酶消化計數(shù)后，制成2*105個/mL的細 胞懸液。將96孔板中每孔加入100yL細胞懸液，置于細胞培養(yǎng)箱37°C孵育6h。之后，移 去培養(yǎng)基，加l〇〇yL含不同濃度的藥物細胞培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48h。移去培養(yǎng)基，亞甲基藍 染色處理計數(shù)，于595nm波長用酶標儀檢測藥物組和對照組的吸光值，進而計算藥物抑制 增殖活性。
[0026] 實時定量PCR實驗：提取不同濃度川陳皮素處理KB細胞RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，之后 利用實時熒光定量PCR檢測不同基因表達水平。
[0027] 實施例1 :川陳皮素對人口腔表皮樣癌KB細胞形態(tài)的影響
[0028]對川陳皮素作用48h的KB細胞，在倒置顯微鏡下進行觀察，如圖1所示。正常的 未經(jīng)處理的KB細胞呈多角形，胞質(zhì)透亮，細胞生長旺盛。經(jīng)川陳皮素處理48h后，KB細胞數(shù) 目顯著降低，細胞皺縮，體積縮小，細胞形態(tài)無法辨別，且凋亡細胞數(shù)量隨劑量增加而增加。
[0029] 實施例2:川陳皮素、陳皮素、柚皮素對人口腔表皮樣癌細胞KB的抑制作用。
[0030] 按亞甲基藍計數(shù)的實驗方法考察川陳皮素、陳皮素、柚皮素對人口腔表皮樣癌細 胞的抑制作用，各化合物對KB細胞增殖的抑制作用曲線如圖2所示。
[0031] 實驗結(jié)果顯示川陳皮素、陳皮素、柚皮素對人口腔表皮樣癌細胞增殖有較強的抑 制作用，各劑量組顯示較好的量效關(guān)系。各個化合物的EC5。值如表1所示，其中川陳皮素顯 示了最好的抗口腔表皮癌細胞活性，其EC5。值為24. 60 ± 1. 07yM，小于其它各藥物組濃度。
[0032] 表1、川陳皮素、陳皮素、柚皮素對人口腔表皮癌細胞的EC5。值結(jié)果
[0033]
[0034] 實施例3 :川陳皮素對口腔表皮細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
[0035] 通過實時定量PCR實驗檢測川陳皮素對口腔表皮樣癌細胞轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控，有顯著 變化的基因如圖2所示。
[0036] 實驗結(jié)果顯示川陳皮素對抑瘤蛋白p53及蛋白水解酶caspase-3基因表達有顯著 上調(diào)作用，進而啟動細胞程序性死亡，抑制癌細胞增殖。而川陳皮素對炎癥因子IL-8及基 質(zhì)金屬蛋白酶MMP2基因表達則有明顯抑制作用，表明其還能進一步對癌細胞免疫調(diào)節(jié)、侵 襲轉(zhuǎn)移有調(diào)控作用。從結(jié)果中也可以看出川陳皮素對口腔癌細胞的轉(zhuǎn)錄水平有顯著調(diào)控作 用，進而抑制口腔癌細胞增殖，產(chǎn)生預(yù)防和治療口腔癌的效果。
[0037] 實施例4KEGG途徑分析
[0038] 根據(jù)RT-qPCR結(jié)果，在KEGG(京都基因與基因組百科全書）通路數(shù)據(jù)庫中分析川 陳皮素抑制人表皮樣癌細胞KB的相關(guān)信號轉(zhuǎn)導通路。川陳皮素上調(diào)p53信號通路，進而影 響KB細胞增殖；同時上調(diào)蛋白水解酶caspase-3，參與促進KB細胞凋亡途徑。此外，對MAPK 信號通路下游的MMP-2及IL-8也有抑制作用。通過KEGG分析可知，川陳皮素通過參與口 腔癌細胞的多條信號轉(zhuǎn)導通路，進而產(chǎn)生預(yù)防和治療口腔癌的效果。
[0039] 上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 川陳皮素在制備預(yù)防和/或治療口腔癌的保健品或藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，將川陳皮素和藥學上可接受的載體制備 成注射液、片劑、粉針劑、顆粒劑、膠囊、膏劑、霜劑或□服液劑型的藥物或保健品。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述保健品是口腔護理的保健品。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述保健品為牙膏、漱口水、牙粉、潤喉片 或口香糖。
【專利摘要】本發(fā)明公開了川陳皮素的應(yīng)用，具體是在制備預(yù)防和/或治療口腔癌的保健品或藥物中的應(yīng)用。通過蕓香科柑橘類水果和果皮中單體化合物陳皮素、柚皮素、川陳皮素對人口腔表皮樣癌細胞的抗增殖作用實驗表明，陳皮素、柚皮素及川陳皮素對人口腔表皮樣癌細胞增殖有明顯的抑制作用，并且以川陳皮素的抑制口腔癌細胞增殖的作用最為明顯，可用于制備具有預(yù)防和治療口腔癌作用的保健品和藥物，適用于大規(guī)模推廣作用。
【IPC分類】A61P11/04, A23G4/12, A61K9/20, A61Q11/00, A61K8/49, A61K31/352, A61P35/00
【公開號】CN105030559
【申請?zhí)枴緾N201510520595
【發(fā)明人】陳谷, 王宏
【申請人】華南理工大學
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年8月21日