短效因子vii多肽的制作方法
【專利說明】
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用 本申請(qǐng)要求2012年12月24日提交的美國(guó)申請(qǐng)序號(hào)61/745, 674和2013年3月15日 提交的美國(guó)申請(qǐng)序號(hào)61/787, 026的優(yōu)先權(quán)，它們?cè)诖送ㄟ^引用整體并入。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本文中提供了人凝固因子VII變體和編碼這樣的變體的多核苷酸，包含和表達(dá)這 樣的變體的載體和宿主細(xì)胞，得到這樣的變體的方法，使用這樣的變體的方法，所述變體的 組合物，和與之相關(guān)的額外發(fā)明特征。
【背景技術(shù)】
[0003] 血液凝固是由各種血液組分（或因子）的復(fù)雜相互作用組成的過程，所述復(fù)雜相 互作用最終產(chǎn)生纖維蛋白凝塊。通常，參與已被稱為凝固"級(jí)聯(lián)"的血液組分是在酶促方面 失活的蛋白質(zhì)（前酶或酶原），其通過活化劑（其自身是活化的凝固因子）的作用而轉(zhuǎn)化成 蛋白水解酶。已經(jīng)經(jīng)歷這樣的轉(zhuǎn)化的凝固因子一般被稱為"活性因子"，并且通過向凝固因 子的名稱添加字母"a"來命名（例如，因子Vila)。
[0004] 止血過程的開始由組織因子（其在血管壁損傷以后暴露于循環(huán)血液）和因子 Vila(其以對(duì)應(yīng)于總因子VII蛋白質(zhì)量的約1%的量存在于循環(huán)中）之間的復(fù)合物的形成介 導(dǎo)。該復(fù)合物錨定至帶有組織因子的細(xì)胞并在細(xì)胞表面上將因子IX和X轉(zhuǎn)化成它們的活 性形式因子IXa和因子Xa。因子Xa在帶有組織因子的細(xì)胞上將凝血酶原轉(zhuǎn)化成凝血酶，所 述凝血酶活化因子VIII、因子V、因子XI和因子XIII。此外，在止血的該初始步驟中形成的 有限量的凝血酶也活化血小板。在凝血酶作用于血小板以后，血小板改變形狀并將帶電荷 的磷脂暴露在它們的表面上。該活化的血小板表面形成其它因子X活化和完整凝血酶產(chǎn)生 的模板。在活化的血小板表面上的其它因子X活化經(jīng)由在活化的血小板的表面上形成的因 子IXa和因子Villa復(fù)合物而發(fā)生，且因子Xa然后將凝血酶原轉(zhuǎn)化成凝血酶，同時(shí)仍然在 表面上。凝血酶然后將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白，所述纖維蛋白是不溶性的且穩(wěn)定化最 初的血小板栓。該過程定位至組織因子暴露部位，由此使凝固系統(tǒng)的全身活化的風(fēng)險(xiǎn)最小 化。近年來，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)因子VII和組織因子是血液凝固的主要引發(fā)劑。
[0005] 因子Vila從它的前體因子VII產(chǎn)生，所述因子VII是在肝臟中合成并分泌進(jìn)血液 中，它在血液中作為單鏈糖蛋白（約50, 000 Da的分子量）進(jìn)行循環(huán)。本文中使用的野生 型因子VII具有在圖1和2中公開的氨基酸序列和核苷酸序列。術(shù)語"因子VII"意在包括 處于它們的未切割形式（酶原形式）的因子VII多肽以及已經(jīng)蛋白水解地或以其它方式加 工以產(chǎn)生它們各自的生物活性形式（其可以被稱作因子Vila)的那些。野生型因子VII通 常在殘基152和153之間被切割以產(chǎn)生因子Vila。
[0006] 因子VII在體外被因子Xa、因子Xlla、因子IXa或凝血酶轉(zhuǎn)化成雙鏈形式因子 Vila。象參與止血的幾種其它血漿蛋白一樣，因子VII的活性依賴于維生素K，其是簇集在 該蛋白的氨基端附近的多個(gè)谷氨酸殘基的Y-羧基化所必需的。這些Y-羧化的谷氨酸是 金屬離子誘導(dǎo)的因子VII與磷脂的相互作用所必需的。在有組織因子、磷脂和鈣離子存在 下，雙鏈因子Vila通過有限的蛋白酶解快速地活化因子X或因子IX。因子Vila易于發(fā)生 蛋白水解性裂解，從而產(chǎn)生許多不具有凝固活性的降解產(chǎn)物。
[0007] 已經(jīng)公開了因子VII變體，其具有通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、缺失和/或插入 而從野生型因子VII衍生出的氨基酸序列。例如，Dickinson等人（Proc. Natl. Acad. Sci USA (1996) 93，14379-14384)涉及因子 VII 變體，其中 Lysl57、Vall58、Glu296、Met298、 Asp334、Ser336 或 Lys227 已經(jīng)個(gè)別地被 Ala 替換。Iwanaga 等人（Thromb. Haemost. (1999年8月增刊），466，摘要1474)涉及因子Vila變體，其中殘基316-320缺失或殘基 311-322被得自胰蛋白酶的對(duì)應(yīng)殘基替換。Bolt等人的美國(guó)專利申請(qǐng)公開2008/0058255 A1涉及在N145或N322處、或者在N145和N322二者處具有破壞糖基化的取代的因子VII 變體。Toso等人報(bào)道了一系列基于天然存在的突變的因子VII結(jié)構(gòu)-功能研究。突變 體重組因子VII蛋白包括T324M、E385K和兩種在因子VII重鏈（N322Q)或因子VII輕鏈 (N145Q)中缺少糖基化核心序列的突變體因子VII蛋白。Toso等人，"Lack of Heavy Chain Glycosylation in Patient with Factor VII Deficiency Not Responsible for Mutant FVIIa Activity,'Blood,第96 卷，第 11 期，第 2 部分（2000 年 11 月 16 日）， 第 79b 頁(yè)（美國(guó)血液學(xué)會(huì)第 42 屆年會(huì)（42nd Annual Meeting of the American Society of Hematology))。
[0008] 大多數(shù)天然存在的肽和蛋白含有碳水化合物部分，所述碳水化合物部分沿著肽或 蛋白主鏈的長(zhǎng)度經(jīng)由與選定數(shù)目的氨基酸的特定鍵而連接至所述肽或蛋白。因而，許多天 然存在的肽和蛋白分別被稱作"糖肽"或"糖蛋白"。在任何給定的肽或蛋白上的糖基化模 式的變異性可以影響該肽或蛋白的功能。例如，在肽或蛋白上的N-連接的聚糖的結(jié)構(gòu)可以 影響肽或蛋白的多種特征，包括蛋白酶易感性、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸、分泌、組織靶向、生物半衰期以 及所述肽或蛋白在細(xì)胞或生物體中的抗原性。這些特征中的一種或多種的改變可以影響肽 或蛋白在它的天然場(chǎng)合中的效力，且也可以影響肽或蛋白作為治療劑的效力（在所述肽或 蛋白已經(jīng)為該目的而制備的情況下）。
[0009] 與肽或蛋白鏈連接的碳水化合物結(jié)構(gòu)被稱作"聚糖"分子。存在于肽或蛋白上的 具體聚糖結(jié)構(gòu)影響肽或蛋白的可溶性和聚集特征、肽或蛋白主鏈的折疊，且因此影響它的 功能或酶活性、肽或蛋白對(duì)蛋白水解性攻擊的抵抗力、以及導(dǎo)致無活性形式的肽或蛋白向 活性形式的轉(zhuǎn)化的蛋白酶解的控制。例如，存在于聚糖分子上的末端唾液酸殘基影響肽或 蛋白在哺乳動(dòng)物循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期的長(zhǎng)度。其聚糖不含有末端唾液酸殘基的肽和蛋白通 常被肝臟更快速地從循環(huán)中除去。
[0010] 在天然存在的糖肽和糖蛋白中發(fā)現(xiàn)的聚糖結(jié)構(gòu)通常分成兩類：N-連接的聚糖和 〇-連接的聚糖。野生型因子Vila含有兩個(gè)N-連接的糖基化位點(diǎn)和兩個(gè)0-連接的糖基化 位點(diǎn)。N-連接的糖基化是在真核生物中最常見的共價(jià)修飾。N-連接的糖基化發(fā)生在共有 序列Asn-X-Ser/Thr處，在該處聚糖連接至天冬酰胺的胺基，且X代表除了脯氨酸以外的任 何氨基酸。N-連接的聚糖是基于共同核心戊糖Man 3(GlcNAc)2，其可以通過添加單糖（諸如 N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖、神經(jīng)氨酸、N-乙?；咸前?、果糖、甘露糖和巖藻糖）而進(jìn)一步 修飾。具有不同單糖（包括末端唾液酸）的Man 3(GlcNAc)^心可以經(jīng)由N-乙?；咸前?連接在Asn-X-Ser/Thr共有序列的Asn處。該化學(xué)上復(fù)雜的共翻譯修飾用于多個(gè)目的，并 以多種方式（包括適當(dāng)折疊、官能團(tuán)取向和清除率）影響蛋白的生物學(xué)。
[0011] 在本領(lǐng)域中已經(jīng)提出了多種定制肽或蛋白的糖基化模式的方法，包括在DeFrees 等人的美國(guó)專利號(hào)8, 008, 252中描述的那些。
[0012] 經(jīng)常期望，刺激或提高受試者中的凝固級(jí)聯(lián)。已經(jīng)使用因子Vila來控制由凝固因 子缺乏（例如，A和B型血友病，或凝固因子XI或VII的缺乏）或凝固因子抑制劑造成的出 血障礙。重組因子Vila(由Novo Nordisk在商業(yè)名稱NovoSeven?下制造和銷售）被批準(zhǔn) 用于治療具有因子VIII或因子IX的抑制劑的A或B型血友病患者中和具有獲得性血友病 的患者中的出血發(fā)作；預(yù)防具有因子VIII或因子IX的抑制劑的A或B型血友病患者中和 具有獲得性血友病的患者中在外科手術(shù)干預(yù)或侵入性手術(shù)中的出血；治療具有先天性因子 VII缺乏的患者中的出血發(fā)作和預(yù)防具有先天性因子VII缺乏的患者中在外科手術(shù)干預(yù)或 侵入性手術(shù)中的出血。Hedner的美國(guó)專利號(hào)5, 180, 583公開了使用因子Vila來控制并非 由凝固因子缺陷或凝固因子抑制劑造成的情形下的過度出血。Hedner公開了治療例如由缺 陷性血小板功能、血小板減少癥或馮威里氏病造成的出血障礙和用于那些用途的組合物。
[0013] 需要治療并非由先天性的或發(fā)展的凝固因子缺乏或凝固因子抑制劑引起的障礙 的出血。幾個(gè)臨床試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)了重組因子Vila用于控制出血的效力。但是，存在關(guān)于使 用該分子引起的不希望的血栓栓塞性事件的增加的擔(dān)憂。出血在許多障礙中是一個(gè)重大問 題，諸如關(guān)于外科手術(shù)、外科手術(shù)以后的并發(fā)癥、干（stem)和器官移植物、顱內(nèi)出血、主動(dòng) 脈瘤和創(chuàng)傷或某些抗凝劑的劑量過量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 一個(gè)目的是用短效的因子VII多肽治療出血障礙和發(fā)作。本工作的一個(gè)目的是， 提供短效的因子VII多肽（野生型或變體）的組合物，其特征在于一個(gè)或多個(gè)藥代動(dòng)力學(xué) 特性，諸如縮短的半衰期。一個(gè)目的是提供這樣的因子VII分子，其在靶位和治療時(shí)間范圍 以外具有減小的血栓性事件的機(jī)會(huì)。一個(gè)目的是提供由于改變的糖基化模式而具有增強(qiáng)的 清除率的因子VII多肽（野生型或變體）。
[0015] 本文描述了變體因子VII多肽的組合物，其中所述變體因子VII多肽包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸序列相比具有至少2個(gè)序列改變的氨基酸序列，其中所述至少2個(gè)序列 改變是（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，和（2)谷氨酸殘基取代位置32的賴 氨酸殘基；且其中所述組合物中綴合的唾液酸的摩爾數(shù)與N-連接的聚糖的摩爾數(shù)的比率 小于0. 05、小于0. 1、小于1. 0、小于2. 0、小于3. 0、小于4. 0、小于5. 0或小于6. 0。本文還 描述了變體因子VII多肽的組合物，其中所述變體因子VII多肽包含與SEQ ID N0: 16的 氨基酸序列相比具有至少2個(gè)序列改變的氨基酸序列，其中所述至少2個(gè)序列改變是（1) 谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，和（2)谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基；且 其中綴合的唾液酸的摩爾數(shù)與N-連接的聚糖的摩爾數(shù)的比率是在選自以下的范圍內(nèi)：（1) 0-5; (2) 0-4; (3) 0-3; (4) 0-2; (5) 0-1 和（6) 0-0.5。
[0016] 本文還描述了一種分離的變體因子VII多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸 序列相比具有至少2個(gè)序列改變的氨基酸序列，其中所述至少2個(gè)序列改變是（1)谷氨酰 胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，和（2)谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基，其中所述 多肽具有小于〇. 05、小于0. 1、小于1. 0、小于2. 0、小于3. 0、小于4. 0、小于5. 0或小于6. 0 的綴合的唾液酸的摩爾數(shù)與N-連接的聚糖的摩爾數(shù)的比率。本文還描述了因子VII多肽的 組合物，其中所述因子VII多肽包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列（野生型因子VII)且所 述組合物中綴合的唾液酸的摩爾數(shù)與N-連接的聚糖的摩爾數(shù)的比率是在選自以下的范圍 內(nèi)：⑴1-5;⑵1-4; (3) 1-3;⑷1-2;和（5) 0.5-1;或綴合的唾液酸是不可檢測(cè)的。
[0017] 本文還描述了一種分離的變體因子VII多肽，其選自： (1) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的序列相比具有序列改變的因子VII氨基酸序列， 其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，（2)谷氨酸 殘基取代位置32的賴氨酸殘基，和（3)使得在位置145處的N-連接的糖基化被破壞的序 列改變； (2) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的序列相比具有序列改變的因子VII氨基酸序列， 其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，（2)谷氨酸 殘基取代位置32的賴氨酸殘基，和（3)使得在位置322處的N-連接的糖基化被破壞的序 列改變； (3) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸序列相比具有序列改變的因子VII氨基 酸序列，其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，和 (2)谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基，和（3)使得在位置145和322處的N-連接的 糖基化被破壞的序列改變； (4) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸序列相比具有序列改變的因子VII氨基 酸序列，其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，和 (2)谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基，其中位置145和322是天冬酰胺且具有連接的 N-連接的糖基化； (5) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸序列相比具有序列改變的因子VII氨基 酸序列，其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，（2) 谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基，（3)谷氨酸殘基取代位置34的丙氨酸殘基，（4)谷 氨酸殘基取代位置36的精氨酸殘基，和（5)使得在位置145處的N-連接的糖基化被破壞 的序列改變； (6) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸序列相比具有序列改變的因子VII氨基 酸序列，其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，（2) 谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基，（3)谷氨酸殘基取代位置34的丙氨酸殘基，（4)谷 氨酸殘基取代位置36的精氨酸殘基，和（5)使得在位置322處的N-連接的糖基化被破壞 的序列改變； (7) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸序列相比具有序列改變的因子VII氨基 酸序列，其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，（2) 谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基，（3)谷氨酸殘基取代位置34的丙氨酸殘基，（4)谷 氨酸殘基取代位置36的精氨酸殘基，和（5)使得在位置145和322處的N-連接的糖基化 被破壞的序列改變；和 (8) 多肽，其包含與SEQ ID N0: 16的氨基酸序列相比具有序列改變的因子VII氨基 酸序列，其中所述序列改變由以下組成：（1)谷氨酰胺殘基取代位置10的脯氨酸殘基，（2) 谷氨酸殘基取代位置32的賴氨酸殘基，（3)谷氨酸殘基取代位置34的丙氨酸殘基，和（4) 谷氨酸殘基取代位置36的精氨酸殘基，其中位置145和322是天冬酰胺且具有連接的N-連 接的糖基化。
[0018] 本文還描述了具有減少的唾液酸與因子VII多肽的綴合的因子VII多肽。在某些 實(shí)施例中，所述因子VII多肽是產(chǎn)生改變的糖基化模式的變體多肽。在其它實(shí)施例中，所 述因子VII多肽是具有減少的唾液酸綴合的野生型因子VII多肽。在某些實(shí)施方案中，減 少的唾液酸綴合可以通過用唾液酸酶處理多肽來實(shí)現(xiàn)。在其它實(shí)施方案中，減少的唾液酸 綴合可以如下實(shí)現(xiàn)：在部分地或完全地缺乏肽的唾液酸化的細(xì)胞系中生產(chǎn)重組因子VII多 肽。在其它實(shí)施方案中，減少的唾液酸綴合可以如下實(shí)現(xiàn)：在細(xì)胞系中共表達(dá)重組因子VII 多肽和重組的或外源的唾液酸酶。
[0019] 還描述了一種用于治療患有需要血塊形成的疾病或障礙的哺乳動(dòng)物的方法，所述 方法包括：給有此需要的哺乳動(dòng)物施用有效量的具有減少的唾液酸綴合的因子VII多肽。 在某些實(shí)施方案中，綴合的唾液酸的摩爾數(shù)與N-連接的聚糖的摩爾數(shù)的比率小于0. 05。在 其它實(shí)施方案中，所述因子VII多肽包含SEQ ID N0: 16的氨基酸序列。在其它實(shí)施方案 中，所述因子VII多肽包含野生型因子VII。在其它實(shí)施方案中，要治療的疾病或障礙選自： 出血、胃腸出血、失控的出血、經(jīng)歷移植或切除術(shù)或外科手術(shù)的哺乳動(dòng)物中的出血、靜脈曲 張所致的出血、血小板減少癥、血友病、顱內(nèi)出血、主動(dòng)脈瘤和抗凝血?jiǎng)┑倪^度施用。
[0020] 在下面詳細(xì)公開了其它變體、組合物、方法和有關(guān)的產(chǎn)品和工藝。
【附圖說明】
[0021] 圖1A-1H顯示了在本申請(qǐng)中使用的三種因子VII分子的核苷酸序列。"VI"是與 SEQ ID N0: 16的野生型人氨基酸序列相比具有4個(gè)氨基酸突變的人因子VII變體：(P10Q、 K32E、T106N和V253N)。"V2"是與SEQ ID NO: 16的野生型人氨基酸序列相比具有6個(gè)氨 基酸突變的人因子￥11變體：（？100、1(32￡、六34￡、1?36￡、1'106~和￥253吣。圖1還顯示了在 實(shí)施例中使用的各種構(gòu)建體的核苷酸序列。
[0022] 圖2顯示了在本申請(qǐng)中使用的三種因子VII分子的氨基酸序列。本文中使用的野 生型人因子VII具有SEQ ID N0: 16的氨基酸序列。VI具有SEQ ID N0: 17的氨基酸序 列。V2具有SEQ ID N0: 18的氨基酸序列。在VI和V2中，SEQ ID N0: 16的野生型因子 VII的變化以粗體顯示。
[0023] 圖3的圖示描繪了在本申請(qǐng)的實(shí)施例中使用的三種因子VII分子。顯示了聚糖在 N-糖基化位點(diǎn)處的連接。為了描述聚糖，實(shí)心框代表N-乙酰基葡糖胺，帶陰影的橢圓形代 表甘露糖，空心橢圓形代表半乳糖，黑色菱形代表唾液酸（也被稱作N-乙酰基神經(jīng)氨酸）， 且封閉的三角形代表巖藻糖。用聚糖的一種可能變體描繪聚糖結(jié)構(gòu)，且不代表實(shí)際測(cè)量的 聚糖。
[0024] 圖4的圖示描繪了 N-連接的聚糖，其顯示了在Asn-X-Ser/Thr共有序列中的Asn 處的連接。顯示了具有不同單糖（包括末端唾液酸）的Man 3(GlcNAc)2核心。
[0025]圖5的圖示描繪了參考V2舉例說明的在本公開內(nèi)容中使用的兩個(gè)方案，其用于減 小因子VII變體的半衰期。
[0026] 圖6是低糖基化的因子VII分子的表格。
[0027] 圖7顯示了根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件去唾液酸化以后，用LC-MS方法鑒別在V2的重鏈上剩余 的唾液酸的結(jié)果。
[0028] 圖8顯示了去唾液酸化的V2的唾液酸含量分析。
[0029] 圖9顯示了磷脂F(xiàn)X活化測(cè)定的結(jié)果。
[0030] 圖10顯示了關(guān)于去唾液酸化的蛋白的PL-TGA測(cè)定的結(jié)果。
[0031] 圖11顯示了低糖基化的因子VII變體的表達(dá)。
[0032] 圖12的表格顯示了使用轉(zhuǎn)染上清液確定低糖基化的FVII變體的"比活性"。
[0033] 圖13顯示了關(guān)于純化的低糖基化的變體pMB121的PL-TGA測(cè)定的結(jié)果。
[0034] 圖14顯示了去唾液酸化的V2相對(duì)于野生型因子VII的體外肝細(xì)胞清除。
[0035] 圖15顯示了使用因子VII變體的體外肝細(xì)胞清除的結(jié)果。低糖基化的變體在該 模型中沒有顯示出清除的增加。該結(jié)果提示這些分子的清除機(jī)制不同于去唾液酸化的V2 所利用的清除機(jī)制。
[0036] 圖16顯示了在大鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果。如通過因子VII ELISA所測(cè)得的， 在Sprague Dawley大鼠中，去唾液酸化的V2和VI的半衰期顯著低于它們的未修飾的母體 分子。
[0037] 圖17顯示了在HemA小鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果。
[0038] 圖18顯示了在HemA小鼠中的去唾液酸化的V2效力研究。
[0039] 圖19顯示了在TVT HemA模型中的去唾液酸化的V2效力研究。
[0040] 圖20顯示了與因子VII相比，用去唾液酸化的V2在HemA小鼠中制備凝血酶-抗 凝血酶（"TAT"）的結(jié)果。
[0041] 圖21顯示了在凝固活性的小鼠中的去唾液酸化的V2效力研究。
[0042] 圖22顯示了與具有正常唾液酸綴合的野生型因子VII相比，去唾液酸化的野生型 因子VII (dWT Vila)的體外肝細(xì)胞清除。
[0043] 圖23顯示了與野生型因子VII相比，在人組織因子敲入（knock-in) (TFKI)小鼠 中關(guān)于dWT Vila的尾巴切割研究結(jié)果。發(fā)現(xiàn)去唾液酸化的因子VII比野生型因子VII明 顯更有效。
[0044] 圖24顯示了施用dWT Vila或野生型因子VII以后，凝血酶-抗凝血酶（TAT)復(fù) 合物的ELISA分析的結(jié)果。
[0045] 圖25顯示了在？冗13血栓形成模型中血栓形成分析的結(jié)果。與野生型因子VII相 比，給定劑量的dWT Vila產(chǎn)生了極大減少的血栓形成。
[0046] 圖26顯示了用發(fā)熒光的底物測(cè)得的，dWT Vila和野生型因子VII對(duì)可溶性組織 因子的表觀結(jié)合親合力。
[0047] 圖27顯示了可溶性組織因子與dWT Vila或野生型因子VII的復(fù)合物將因子X轉(zhuǎn) 化為因子Xa。
【具體實(shí)施方式】
[0048] 本文描述了用于調(diào)節(jié)重組因