制備
[0099] 稱取樹莓葉鮮樣,以乙醚為溶劑采用索式提取器,加熱回流去除葉片中的葉綠素, 然后按質(zhì)量比1:15加入濃度為75%的乙醇溶液,80°C下浸提lh,浸提液用真空栗抽濾,將 提取液減壓濃縮,得到粉末狀褐色的樹莓葉黃酮;
[0100] (3)刺莓果浸膏粉的制備
[0101] 稱取刺莓果,機(jī)械粉碎,過(guò)60目篩,按照1:10的比例(刺霉果的質(zhì)量(g)與正己 烷的體積(mL)的比例為1:10)加入正己烷,充分振搖,50°C下超聲波提取50min,重復(fù)3次, 過(guò)濾,合并提取液,在〇_55°C下減壓回收溶劑,得正己烷提取物1 ;正己烷提取后的濾渣按 體積比1:10加入無(wú)水乙醇,50°C下超聲波提取30min,重復(fù)3次,過(guò)濾,合并提取液,減壓回 收溶劑,得乙醇提取物2 ;無(wú)水乙醇提取后的濾渣按體積比1:8加入蒸餾水,充分振搖,50°C 下超聲波提取30min,重復(fù)3次,過(guò)濾,合并提取液,在0-55Γ下減壓回收溶劑,得水提取物 3 ;將得到的3種提取物減壓濃縮冷凍干燥即得刺莓果浸膏粉;
[0102] (4)樺褐孔菌樹莓刺莓復(fù)合口服液的制備
[0103] a按所述重量份稱取各成分;
[0104] b在配置罐中加純化水煮沸,冷卻到50_60°C,加入樺褐孔菌多糖、樹莓葉黃酮以 及刺莓果浸膏粉,攪拌回流使其全部溶解;
[0105] C保持步驟b所得溶液的溫度為50-60°C,加入靈芝多糖、花臉菇多糖以及猴頭菇 多糖,攪拌回流使其全部溶解;
[0106] d保持步驟c所得溶液的溫度為50_60°C,加入山梨酸鉀,加熱煮沸使其全部溶 解;
[0107] e保持步驟c所得溶液的溫度為50-60°C,加入菊糖及檸檬酸,加熱煮沸使其全部 溶解;
[0108] f把步驟e所得的溶液用微濾膜過(guò)濾,收集濾液至儲(chǔ)液罐中,儲(chǔ)液罐中的濾液搖勻 之后灌封、滅菌,即得樺褐孔菌樹莓刺莓復(fù)合口服液。
[0109] 口服液外觀澄明無(wú)沉淀,經(jīng)過(guò)試驗(yàn)保質(zhì)期一年以上無(wú)沉淀。
[0110] 實(shí)施例6本發(fā)明樺褐孔菌樹莓刺莓復(fù)合口服液的制備
[0111] 樺褐孔菌多糖30g、樹莓葉黃酮20g、靈芝多糖7g、刺莓果浸膏粉15g、花臉菇多糖 12. 5g、猴頭菇多糖7g、山梨酸鉀I. 5g、檸檬酸Ig以及菊糖0. 6g,蒸餾水補(bǔ)足1000mL。
[0112] 分別將樺褐孔菌、花臉菇、靈芝和猴頭菇在50°C的烘箱中烘干至恒重后磨成粉末, 加入體積百分比為80%的乙醇,室溫下靜置提取24-72h以去除粉末中的雜質(zhì),對(duì)提取液 離心,收集殘?jiān)?;使用超聲波輔助提取法提取殘?jiān)械亩嗵?,超聲波輔助提取法的條件為: 在80°C下超聲120min,功率為80W,殘?jiān)c蒸餾水的質(zhì)量比為1:40 ;對(duì)超聲提取液過(guò)濾后, 7500rpm室溫下離心30min,收集上清液;上清液使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50°C下濃縮,濃縮液 使用sevage試劑(v/v,氯仿:正丁醇=5:1)去除蛋白,sevage試劑與濃縮液的體積比為 1:5,離心,收集上清液;上清液中加入4倍于上清液體積的無(wú)水乙醇,4°C醇沉1~3次,每 次12h,離心,沉淀冷凍干燥,分別獲得樺褐孔菌多糖、花臉菇多糖、靈芝多糖以及猴頭菇多 糖;
[0113] ⑵樹莓葉黃酮的制備
[0114] 稱取樹莓葉鮮樣,以乙醚為溶劑采用索式提取器,加熱回流去除葉片中的葉綠素, 然后按質(zhì)量比1:16加入濃度為75%的乙醇溶液,80°C下浸提lh,浸提液用真空栗抽濾,將 提取液減壓濃縮,得到粉末狀褐色的樹莓葉黃酮;
[0115] (3)刺莓果浸膏粉的制備
[0116] 稱取刺莓果,機(jī)械粉碎,過(guò)60目篩,按照1:15的比例(刺霉果的質(zhì)量(g)與正己烷 的體積(mL)的比例為1:15)加入正己燒,充分振搖,50°C下超聲波提取50min,重復(fù)3次, 過(guò)濾,合并提取液,在〇_55°C下減壓回收溶劑,得正己烷提取物1 ;正己烷提取后的濾渣按 體積比1:15加入無(wú)水乙醇,50°C下超聲波提取30min,重復(fù)3次,過(guò)濾,合并提取液,減壓回 收溶劑,得乙醇提取物2 ;無(wú)水乙醇提取后的濾渣按體積比1:9加入蒸餾水,充分振搖,50°C 下超聲波提取30min,重復(fù)3次,過(guò)濾,合并提取液,在0-55Γ下減壓回收溶劑,得水提取物 3 ;將得到的3種提取物減壓濃縮冷凍干燥即得刺莓果浸膏粉;
[0117] (4)樺褐孔菌樹莓刺莓復(fù)合口服液的制備
[0118] a按所述重量份稱取各成分;
[0119] b在配置罐中加純化水煮沸,冷卻到50_60°C,加入樺褐孔菌多糖、樹莓葉黃酮以 及刺莓果浸膏粉,攪拌回流使其全部溶解;
[0120] c保持步驟b所得溶液的溫度為50-60°C,加入靈芝多糖、花臉菇多糖以及猴頭菇 多糖,攪拌回流使其全部溶解;
[0121] d保持步驟c所得溶液的溫度為50_60°C,加入山梨酸鉀,加熱煮沸使其全部溶 解;
[0122] e保持步驟c所得溶液的溫度為50-60°C,加入菊糖及檸檬酸,加熱煮沸使其全部 溶解;
[0123] f把步驟e所得的溶液用微濾膜過(guò)濾,收集濾液至儲(chǔ)液罐中,儲(chǔ)液罐中的濾液搖勻 之后灌封、滅菌,即得樺褐孔菌樹莓刺莓復(fù)合口服液。
[0124] 口服液外觀澄明無(wú)沉淀,經(jīng)過(guò)試驗(yàn)保質(zhì)期一年以上無(wú)沉淀。
[0125] 試驗(yàn)例1本發(fā)明樺褐孔菌樹莓刺莓組合物的降血糖藥理活性評(píng)價(jià)
[0126] (I)、試驗(yàn)材料
[0127] 昆明種小鼠,體重18_22g。致病藥物為四氧嘧啶,參比藥物為鹽酸二甲雙胍,為 SIGM公司產(chǎn)品。樺褐孔菌樹莓刺莓組合物粉劑按照實(shí)施例3的方法制備得到。
[0128] (2)、試驗(yàn)方法
[0129] 糖尿病模型的建立及給藥:將小鼠按體重均衡、性別均衡的原則分2組,一組作為 正常對(duì)照組(IV ),各10只,剩余小鼠用于糖尿病造模。糖尿病造模組一次性腹腔注射四氧 嘧啶(200mg/kg);對(duì)照組注射等體積生理鹽水。注射四氧嘧啶后小鼠正常供水60h,之后斷 食不斷水12h,稱重后尾部采血,用血糖儀測(cè)空腹血糖值。以血糖大于11. lmmol/L作為造 模成功標(biāo)準(zhǔn)。
[0130] 按血糖值均衡原則將糖尿病小鼠分成3組,樺褐孔菌樹莓刺莓組合物粉劑治療組 (I ) (300mg/kg/d)、鹽酸二甲雙胍治療組(II ) (300mg/kg/d)、糖尿病模型空白組(III), 每組10只。分組后次日開始對(duì)4組實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃給藥,其中,正常對(duì)照組小鼠和糖尿病模 型組用等體積生理鹽水灌胃。
[0131] (3)、試驗(yàn)效果:給藥前,各組體重?zé)o明顯差別(P>0. 05),給藥后,正常小鼠空白對(duì) 照組(IV)和鹽酸二甲雙胍治療組(II )差異不顯著(Ρ>0· 05),樺褐孔菌樹莓刺莓組合 物粉劑治療組(I )和空白對(duì)照組(IV)相比差異顯著(Ρ〈0· 05),說(shuō)明樺褐孔菌樹莓刺莓 組合物能促進(jìn)糖尿病小鼠體重恢復(fù)(圖1);對(duì)血清、肝臟抗氧化酶的影響結(jié)果見(jiàn)表1和表 2,給藥后,樺褐孔菌樹莓刺莓組血清、肝臟抗氧化酶活性均有顯著提高(Ρ〈0. 05);對(duì)血糖 值的影響,給藥后,樺褐孔菌樹莓刺莓組合物粉劑治療組和鹽酸二甲雙胍治療組血糖含量 均有所下降,但其中樺褐孔菌樹莓刺莓組合物空白對(duì)照組血糖值差異不顯著(Ρ>〇. 05)(圖 2),說(shuō)明本發(fā)明樺褐孔菌樹莓刺莓組合物對(duì)糖尿病有較好的治療,降低血糖含量,甚至能夠 達(dá)到有效治療糖尿病的效果。
[0132] 表1本發(fā)明樺褐孔菌樹莓刺莓組合物對(duì)小鼠血清SOD、GSH、TAOC活性的影響
[0136] 試驗(yàn)例2本發(fā)明樺褐孔菌樹莓刺莓復(fù)合口服液的臨床實(shí)驗(yàn)效果
[0137] 樺褐孔菌樹莓刺莓復(fù)合口服液按照實(shí)施例6的方法制備得到.
[0138] 使用方法:每天服用3次(溫?zé)幔?,每?0-100毫升。
[0139] 患者劉某,餐前血糖值為13-16,頭暈眼花,血壓高,服用該口服液2月后,血糖值 降為6. 5,頭暈眼花癥狀消失,血壓下降,精神狀態(tài)恢復(fù)正常,而且跟蹤1年沒(méi)有復(fù)發(fā)。
[0140] 患者徐某,糖尿病餐前血糖值28,服用該口服液1個(gè)月后血糖值下降到16,頭暈現(xiàn) 象消失。
[0141] 患者劉某,糖尿病餐前值15. 2,出現(xiàn)頭暈、饑餓和手腳麻木等癥狀,服用該口服液 六七個(gè)月后,餐前值降到了 5. 8的正常范圍,起色越來(lái)越好,人也精神了很多。
[0142] 患者康某糖尿病史3年,空腹血糖總在14左右,餐后血糖更高,吃了多種藥沒(méi)啥效 果,服用