長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]膀胱癌(Bladder Cancer)是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率居世界惡性腫瘤第九位、居我國(guó)泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤第一位。雖然70-80%的初發(fā)膀胱癌為非浸潤(rùn)性(也稱(chēng)為表淺性)，但術(shù)后易復(fù)發(fā)，其復(fù)發(fā)率高達(dá)70%，并有約15%的患者發(fā)展為浸潤(rùn)性膀胱癌。目前臨床上主要采用經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)(TUR-BT)后定期膀胱灌注絲裂霉素(MMC)等化療藥物來(lái)預(yù)防非浸潤(rùn)性膀胱癌的復(fù)發(fā)與進(jìn)展，但存在有效率低(僅為30-50%)和毒副作用大等問(wèn)題。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)新的高效低毒的抗膀胱癌藥物來(lái)提高膀胱癌的化療效果并降低毒副作用。
[0003]從植物中提取的紫杉醇、喜樹(shù)堿、長(zhǎng)春新堿等抗癌藥物由于作用機(jī)制獨(dú)特、抗癌療效顯著已成為許多癌癥治療的首選藥，約占抗癌藥30%的市場(chǎng)份額。因此從植物資源中尋找新型抗癌藥或先導(dǎo)化合物，已成為當(dāng)今癌癥治療研宄領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。從有毒植物中尋找抗癌新藥被視為一條捷徑。
[0004]長(zhǎng)果種黃麻(Corchorus capsularis)屬椴樹(shù)科黃麻屬韌皮纖維作物，為一年生草本植物，別名火麻、綠麻、絡(luò)麻、水絡(luò)麻、野洋麻、長(zhǎng)果黃麻、長(zhǎng)蒴黃麻、苦麻葉、牛泥茨、三珠草、天紫蘇和麻骨頭等。長(zhǎng)果種黃麻原產(chǎn)亞洲熱帶，中國(guó)長(zhǎng)江以南廣泛栽培，其韌皮纖維具有吸濕性能好、散失水分快等特點(diǎn)，主要用于紡織麻袋、粗麻布等。長(zhǎng)果種黃麻種子有毒，在民間有被作為治療腹瀉痢疾和瘡癤腫毒，具有清熱解暑、拔毒消腫的功效。
[0005]經(jīng)文獻(xiàn)檢索，迄今尚未見(jiàn)有長(zhǎng)果種黃麻種子提取物用于抑制膀胱癌細(xì)胞增殖及其相關(guān)疾病方面的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種療效更好、且對(duì)正常膀胱上皮細(xì)胞影響小的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法及應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
[0008]長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，采用以下步驟:
[0009](I)將長(zhǎng)果種黃麻種子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室溫條件下浸提脫脂；
[0010](2)脫脂完成后，利用5-10倍重量的乙醇水溶液對(duì)長(zhǎng)果種黃麻種子進(jìn)行回流提取I?3次，每次I?3h，收集所得到的浸膏，即為長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物，于-20°c保存。
[0011]粉碎后的長(zhǎng)果種黃麻種子在石油醚中浸提脫脂48h。
[0012]利用乙醇水溶液在室溫下密閉浸泡脫脂后的長(zhǎng)果種黃麻種子2h，然后水浴加熱至回流溫度進(jìn)行回流，過(guò)濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮獲得浸膏。
[0013]所述的乙醇水溶液的體積分?jǐn)?shù)為60-90 %。
[0014]優(yōu)選地，采用的乙醇水溶液的體積分?jǐn)?shù)為70-80 %。
[0015]所述的長(zhǎng)果種黃麻種子為野生或栽培長(zhǎng)果種黃麻種子。
[0016]制備得到長(zhǎng)果種黃麻種子提取物可以應(yīng)用于對(duì)人膀胱癌細(xì)胞增殖的抑制，采用以下步驟:
[0017](I)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞:將人膀胱癌細(xì)胞T24以每孔10000個(gè)細(xì)胞濃度接種于96孔板中；
[0018](2)過(guò)夜貼壁后，以0.1,0.5、1、5和10ug/ml濃度的長(zhǎng)果種黃麻種子乙醇提取物給藥，并以5、10、50和lOOug/ml絲裂霉素為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)處理設(shè)6個(gè)重復(fù)孔，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次；
[0019](3)在給藥24h后采用MTT法檢測(cè)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖生長(zhǎng)率，并計(jì)算IC50值，并與絲裂霉素的結(jié)果進(jìn)行比較，獲得長(zhǎng)果種黃麻種子提取物對(duì)人膀胱癌細(xì)胞T24增殖的抑制結(jié)果。
[0020]所述的人膀胱癌細(xì)胞T24購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。
[0021]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過(guò)體外MTT抗癌活性評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)果種黃麻種子提取物對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用比臨床一線藥物絲裂霉素更高效，且對(duì)正常膀胱上皮細(xì)胞影響小。因此長(zhǎng)果種黃麻種子提取物能用于制備抗膀胱癌藥物，具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。
[0022]長(zhǎng)果種黃麻種子提取物在制備抗膀胱癌藥物中的用途屬于首次公開(kāi)，且長(zhǎng)果種黃麻種子乙醇提取物對(duì)膀胱癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率比目前臨床一線藥物絲裂霉素更高效，并對(duì)正常膀胱上皮細(xì)胞影響小。因此長(zhǎng)果種黃麻種子乙醇提取物能用于制備高效低毒的抗膀胱癌藥物，具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景，對(duì)膀胱癌治療、我國(guó)黃麻種質(zhì)資源的綜合利用及增加麻農(nóng)收入均具有重要意義，在制備過(guò)程中采用石油醚浸提脫脂使得生長(zhǎng)抑制率有進(jìn)一步的提尚O
【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1為長(zhǎng)果種黃麻種子提取物及絲裂霉素作用T24細(xì)胞24h后的IC50值。
[0024]圖2為5ug/ml長(zhǎng)果種黃麻種子提取物及絲裂霉素作用24h后對(duì)T24細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制情況。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0026]實(shí)施例1
[0027]制備長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物
[0028]取10g長(zhǎng)果種黃麻種子，粉碎，加500ml的石油醚室溫浸提脫脂48h，再用1000ml70%的乙醇水溶液，室溫下密閉浸泡2h后，水浴加熱到回流，每次回流提取3h，共回流提取2次。收集2次的乙醇提取物，過(guò)濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得浸膏。收集浸膏(即為長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物)，_20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0029]實(shí)施例2
[0030]長(zhǎng)果種黃麻種子乙醇提取物對(duì)人膀胱癌細(xì)胞增殖的抑制作用實(shí)驗(yàn)
[0031 ] 處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞:人膀胱癌細(xì)胞T24 (購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù))以每孔
10000個(gè)細(xì)胞濃度接種于96孔板中。
[0032]過(guò)夜貼壁后，以0.1,0.5、1、5和10ug/ml濃度的長(zhǎng)果種黃麻種子乙醇提取物給藥，并以5、10、50和lOOug/ml絲裂霉素為陽(yáng)性對(duì)照。每個(gè)處理設(shè)6個(gè)重復(fù)孔，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。
[0033]在給藥24h后采用MTT法檢測(cè)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖生長(zhǎng)率，并計(jì)算IC50值。
[0034]圖1為長(zhǎng)果種黃麻種子提取物及絲裂霉素作用T24細(xì)胞24h后的IC50值，如圖所示，作用T24細(xì)胞24h后，長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的IC50 (生長(zhǎng)半抑制)劑量為1.20ug/ml，只是絲裂霉素14.70ug/ml的8.2%，達(dá)到極顯著差異。
[0035]圖2為5ug/ml長(zhǎng)果種黃麻種子提取物及絲裂霉素作用24h后對(duì)T24細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制情況，如圖所示，作用24h后，5ug/ml長(zhǎng)果種黃麻種子提取物對(duì)T24細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率為71.56%，是絲裂霉素30.39%的2.35倍，達(dá)到極顯著差異。以上結(jié)果說(shuō)明長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的抗膀胱癌活性比目前臨床一線藥物絲裂霉素更高效，能用于制備抗膀胱癌藥物，具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。
[0036]實(shí)施例3
[0037]長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，采用以下步驟:
[0038](I)將野生長(zhǎng)果種黃麻種子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室溫條件下浸提脫脂 48h ；
[0039](2)脫脂完成后，利用5倍重量，體積分?jǐn)?shù)為90%乙醇水溶液在室溫下密閉浸泡脫脂后的長(zhǎng)果種黃麻種子2h，然后水浴加熱至回流溫度進(jìn)行回流提取I次，提取時(shí)間為3h，收集所得到的浸膏，即為長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物，于-20°C保存。
[0040]實(shí)施例4
[0041]長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，采用以下步驟:
[0042](I)將栽培長(zhǎng)果種黃麻種子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室溫條件下浸提脫脂 48h ；
[0043](2)脫脂完成后，利用10倍重量，體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇水溶液在室溫下密閉浸泡脫脂后的長(zhǎng)果種黃麻種子2h，然后水浴加熱至回流溫度進(jìn)行回流提取I次，提取時(shí)間為3h，收集所得到的浸膏，即為長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物，于-20°C保存。
[0044]實(shí)施例5
[0045]長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，采用以下步驟:
[0046](I)將栽培長(zhǎng)果種黃麻種子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室溫條件下浸提脫脂 48h ；
[0047](2)脫脂完成后，利用8倍重量，體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇水溶液在室溫下密閉浸泡脫脂后的長(zhǎng)果種黃麻種子2h，然后水浴加熱至回流溫度進(jìn)行回流提取2次，提取時(shí)間為2h，收集所得到的浸膏，即為長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物，于-20°C保存。
[0048]最后有必要在此說(shuō)明的是:以上實(shí)施例只用于對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容作出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，其特征在于，采用以下步驟: (1)將長(zhǎng)果種黃麻種子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室溫條件下浸提脫脂； (2)脫脂完成后，利用5-10倍重量的乙醇水溶液對(duì)長(zhǎng)果種黃麻種子進(jìn)行回流提取I?3次，每次I?3h，收集所得到的浸膏，即為長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物，于-20°C保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，其特征在于，粉碎后的長(zhǎng)果種黃麻種子在石油醚中浸提脫脂48h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，其特征在于，利用乙醇水溶液在室溫下密閉浸泡脫脂后的長(zhǎng)果種黃麻種子2h，然后水浴加熱至回流溫度進(jìn)行回流，過(guò)濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮獲得浸膏。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液的體積分?jǐn)?shù)為60-90%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液的體積分?jǐn)?shù)為70-80%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法，其特征在于，所述的長(zhǎng)果種黃麻種子為野生或栽培長(zhǎng)果種黃麻種子。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備得到長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的應(yīng)用，其特征在于，該提取物應(yīng)用于對(duì)人膀胱癌細(xì)胞增殖的抑制。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的應(yīng)用，其特征在于，采用以下步驟: (1)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞:將人膀胱癌細(xì)胞T24以每孔10000個(gè)細(xì)胞濃度接種于96孔板中； (2)過(guò)夜貼壁后，以0.1,0.5、1、5和10ug/ml濃度的長(zhǎng)果種黃麻種子乙醇提取物給藥，并以5、10、50和lOOug/ml絲裂霉素為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)處理設(shè)6個(gè)重復(fù)孔，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次； (3)在給藥24h后采用MTT法檢測(cè)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖生長(zhǎng)率，并計(jì)算IC50值，并與絲裂霉素的結(jié)果進(jìn)行比較，獲得長(zhǎng)果種黃麻種子提取物對(duì)人膀胱癌細(xì)胞T24增殖的抑制結(jié)果O
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的人膀胱癌細(xì)胞T24購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及長(zhǎng)果種黃麻種子提取物的制備方法及應(yīng)用，將長(zhǎng)果種黃麻種子粉碎，加入其5倍重量的石油醚在室溫條件下浸提脫脂；脫脂完成后，利用5-10倍重量的乙醇水溶液對(duì)長(zhǎng)果種黃麻種子進(jìn)行回流提取1～3次，每次1～3h，收集所得到的浸膏，即為長(zhǎng)果種黃麻種子的乙醇提取物，于-20℃保存，該提取物應(yīng)用于對(duì)人膀胱癌細(xì)胞增殖的抑制。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株T24的生長(zhǎng)抑制更高效，且對(duì)正常膀胱上皮細(xì)胞影響小，對(duì)膀胱癌治療、我國(guó)黃麻種質(zhì)資源的綜合利用及增加麻農(nóng)收入均具有重要意義。
【IPC分類(lèi)】A61P35-00, A61P13-10, A61K36-185, A61K131-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104857038
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510228923
【發(fā)明人】朱云國(guó), 程舟, 李珊, 楊曉伶, 李德芳, 龔友才, 肖愛(ài)平
【申請(qǐng)人】同濟(jì)大學(xué), 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類(lèi)研究所
【公開(kāi)日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年5月7日