一種治療缺血性腦卒中的藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療缺血性腦卒中的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 腦血管疾?。X卒中）為腦血管阻塞或破裂引起腦部血流受阻所致病癥，分缺血 性腦卒中和出血性腦卒中。據(jù)報(bào)道我國城鎮(zhèn)和鄉(xiāng)村人群抽樣調(diào)查結(jié)果表明，年發(fā)病率分別 為219/10萬和185/10萬，死亡率為116/10萬和141. 8/10萬，且趨年輕化。我國每年新發(fā) 腦卒中病人約150~200萬人，其中缺血性腦卒中約占腦卒中病例的60~80%。1992年 我國城鄉(xiāng)人口死亡原因中，腦卒中均排在第二位，占死亡總?cè)藬?shù)的21. 13%和16. 18%。北 京地區(qū)缺血性腦卒中的比例1999年達(dá)81. 6%。我國死于腦血管病多于死于心臟病及癌癥， 位于三大死因之首。腦卒中不但以高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率危害人民健康，而且在存 活下來的占80%的中風(fēng)患者中，僅有10%左右能完全恢復(fù)正常功能，絕大多數(shù)患者都留有 偏癱，失語等后遺癥，從而對社會及家庭造成極嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。其它國家的狀況也大致相似。 因此對腦血管病的防治為全社會所關(guān)注。各國藥物學(xué)家和醫(yī)療專家及各方力量（政府、社 會團(tuán)體）將研發(fā)防治腦血管病的藥物視為迫切使命，但國內(nèi)外尚無理想的治療藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種治療缺血性腦卒中的藥物。
[0004] 本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：
[0005] 一種治療缺血性腦卒中的藥物，其有效成分包括有效劑量為80~250mg/kg的 Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺，且其給藥途徑為口服。
[0006] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述有效劑量為100~200mg/kg。
[0007] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述有效劑量為200mg/kg。
[0008] 一種Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺在制備治療缺血性腦卒中的口服藥物中的應(yīng)用。
[0009] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺的有效劑量為 80 ~250mg/kg。
[0010] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺的有效劑量為100~200mg/kg。
[0011] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述Z-十八碳-9-稀-丙磺酰胺的有效劑量為200mg/kg。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是：
[0013] 1、本發(fā)明的藥物的有效成分為Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺，具有明顯治療缺血性 腦中風(fēng)的功效，可改善小鼠神經(jīng)功能缺失，減小腦梗死體積，減輕腦水腫程度；
[0014] 2、本發(fā)明的藥物對腦缺血后血腦屏障（BBB)的損傷具有保護(hù)作用；
[0015] 3、本發(fā)明的藥物可以有效促進(jìn)抗炎因子PPARa和PPARY的表達(dá)，降低促炎因子 TLR4的表達(dá)；
[0016] 4、本發(fā)明的藥物可以有效降低腦組織內(nèi)TNFa、IL-1 0、IL-6、COX-2、iNOS、MMP-2、 MMP-9等炎癥因子的表達(dá)，減輕腦缺血后的炎癥損傷；
[0017] 5、本發(fā)明的藥物可有效抑制腦缺血引起的小Jj父質(zhì)細(xì)胞的激活；
[0018] 6、本發(fā)明的藥物與OEA相比，降低腦水腫程度及血腦屏障的通透性比OEA強(qiáng)。另 外，與OEA相比其溶解性好，不易被胃腸道消化降解。
【附圖說明】
[0019] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中N15對小鼠局灶性腦缺血再灌注24h后神經(jīng)功能缺 失Bederson評分（A)的影響（i±s,n= 12)#P〈0. 05, ##P〈0. 01 與sham組比較；*P〈0. 05， **P〈0. 01 與Vehicle組比較。
[0020] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中N15對小鼠局灶性腦缺血再灌注24h后腦梗死體積（B)， 腦水腫程度（C)的影響（i±s，n= 10) ; (A) 1%TTC染色后的腦冠狀切片。n= 12)##P〈0. 01 與sham組比較；**P〈0. 01與Vehiclel組比較。
[0021] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中N15對小鼠局灶性腦缺血再灌注6h后血腦屏障通透性 的影響（i土s，n= 12)#P〈0. 01，*#P〈0. 001 與vehicle組比較。
[0022] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例1中N15對缺血再灌注后炎癥反應(yīng)的影響（S±s，n= 5)。 P〈0. 001 與sham組比較；#P〈0. 01，*#P〈0. 001 與Vehiclel組比較。
[0023] 圖5為本發(fā)明實(shí)施例1中N15促進(jìn)腦缺血后抗炎因子PPARa和PPARy的表達(dá) ([土s，n= 5)? ?#P〈0. 05, ##P〈0.OlvsSham組，*P〈0. 05, **P〈0.OlvsVehicle組。
[0024] 圖6為本發(fā)明實(shí)施例I中N15抑制腦缺血后促炎因子TLR4的表達(dá)（S±s，n= 6)。
[0025] 圖7為本發(fā)明實(shí)施例1中N15抑制腦缺血半暗帶小膠質(zhì)細(xì)胞的激活（S±s,n= 6)〇
【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下通過【具體實(shí)施方式】結(jié)合附圖對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的說明和描述。 [00 27] 實(shí)施例1
[0028] 下述N15即為Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺。
[0029] 1、實(shí)驗(yàn)材料與方法
[0030] 1)實(shí)驗(yàn)動物和試劑
[0031] 健康昆明種小鼠，6，體重25~30g，由廈門大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供【合格證號： SYXK(閩）2013-0003】。自然光照周期飼養(yǎng)，術(shù)前12h禁食，自由飲水。N15,本課題組合成。
[0032] 2)動物處理方法
[0033] 實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為五組，每組12只：
[0034] ①假手術(shù)組（Sham組）：僅手術(shù)暴露右側(cè)頸總動脈及頸內(nèi)動脈，不做缺血處理。
[0035] ②溶媒組（Vehicle組），給予含10%吐溫20的生理鹽水，方式：灌胃；
[0036] ③再灌同時(shí)給予N15-50mg?kg'方式：灌胃；
[0037] ④再灌同時(shí)給予N15-100mg?kg-1，方式：灌胃；
[0038] ⑤再灌同時(shí)給予N15-200mg?kg'方式：灌胃；
[0039]統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)米用GraphpadPrism5 軟件（GraphPadSoftwareInc，USA)進(jìn) 行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較用單因素方差分析，當(dāng)方差分析差異有顯著性時(shí)，進(jìn)一步用q檢驗(yàn) 作兩兩比較。
[0040] 2、結(jié)果與分析
[0041] 2. 1N15對小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后行為學(xué)的影響
[0042] 缺血再灌注后，小鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺失癥狀，主要表現(xiàn)為提尾懸空時(shí)的強(qiáng) 迫體態(tài)-左前肢緊貼軀體向左側(cè)扭轉(zhuǎn)以及運(yùn)動時(shí)的追尾征一向左側(cè)旋轉(zhuǎn)或傾倒。缺血再灌 同時(shí)給予N15 (200mg/kg)與溶媒組和N15 (100mg/kg)組相比，能夠明顯減少Bederson評分 (p〈0.05)，見圖 1。
[0043] 2. 2N15對小鼠腦缺血再灌注后腦梗死體積及水腫程度的影響
[0044] 缺血再灌注后24h，小鼠缺血側(cè)額頂葉皮層和皮層下區(qū)（紋狀體、海馬等）可見明 顯的蒼白梗死灶，損傷側(cè)腦組織可見明顯水腫。與溶媒組相比，N15(10mg/kg)治療組能減 小80%的梗死體積，顯著減少皮層、紋狀體部位的梗死灶，見圖2 (A、B)。損傷側(cè)腦體積較正 常側(cè)增加約17. 46 %，該指標(biāo)顯示水腫程度，而N15 (10mg/kg)治療組與溶媒組相比，能夠?qū)?水腫程度降低約81 %，見圖2 (C)。
[0045] 2. 3N15對小鼠腦缺血再灌注后BBB通透性的影響
[0046] 應(yīng)用EB滲漏法觀察腦缺血再灌注后小鼠BBB通透性的變化，結(jié)果表明腦缺血再灌 注后6h，腦內(nèi)EB滲漏量明顯增大，見圖3 (A)。N15 (10mg/kg)治療組明顯減少EB的滲漏體 積（p〈0. 05)，見圖3 (B)。說明N15可減少EB在腦內(nèi)的滲漏，減輕腦缺血再灌注后BBB的破 壞程度。
[0047] 2. 4N15可顯著降低腦缺血后梗死半暗帶炎癥因子的表達(dá)：
[0048] 通過Westernblot發(fā)現(xiàn)，N15顯著降低腦缺血后梗死半暗帶TNFa，IL-1 0，IL-6， C0X-2,MMP-9,MMP-2蛋白的表達(dá)（圖4)。以上結(jié)果說明N15抑制腦缺血引起的炎癥反應(yīng)。
[0049] 2. 5N15可顯著提高腦缺血后梗死半暗帶PPARa、PPARy的表達(dá)：
[0050] N15再灌注同時(shí)給藥，腦缺血后24hr，通過Westernblot發(fā)現(xiàn)，N15顯著提高腦缺 血后梗死半暗帶抗炎因子PPARa、PPARy蛋白的表達(dá)（圖7)，說明N15可能通過PPARa、 PPARy抑制腦缺血引起的炎癥反應(yīng)。
[0051] 2. 6N15降低腦缺血梗死半暗帶TLR4的表達(dá)：
[0052] 通過免疫熒光發(fā)現(xiàn)，腦缺血損傷后TLR4受體表達(dá)增強(qiáng)，而且主要分布與小膠質(zhì)細(xì) 胞上。N15干預(yù)后可明顯抑制TLR4的表達(dá)，同時(shí)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活（圖6)。以上結(jié)果 說明N15抑制腦缺血后的炎癥反應(yīng)有可能是通過抑制小I父質(zhì)細(xì)胞的激活和TLR4受體的表 達(dá)。
[0053] 2. 7N15抑制腦缺血后梗死半暗帶小膠質(zhì)細(xì)胞的激活：
[0054] 通過免疫熒光發(fā)現(xiàn)，靜息態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞為分支狀，胞體小，具有向各個方向的細(xì) 胞突起。腦缺血后損傷半暗帶小膠質(zhì)細(xì)胞胞體呈圓形，突起消失，呈"阿米巴樣"的激活狀 態(tài)，而N15干預(yù)以后小膠質(zhì)細(xì)胞胞體變小，具有少量突起（圖5)。以上結(jié)果說明腦缺血損傷 可以引起小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，N15抑制腦缺血引起的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。
[0055] 3、結(jié)論
[0056] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，N15對急性腦缺血具有保護(hù)作用，其可改善急性腦缺血神經(jīng)功能損 傷、減輕腦水腫、減小腦梗死體積、降低血腦屏障的通透性，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，降低腦 缺血后損傷側(cè)皮層炎癥反應(yīng)，促進(jìn)抗炎因子PPARa和PPARy蛋白的表達(dá)?？梢蚤_發(fā)N15 作為抗急性腦缺血藥物的用途。
[0057] 以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即 依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療缺血性腦卒中的藥物，其特征在于：其有效成分包括有效劑量為80~ 250mg/kg的Z-十八碳-9-稀-丙磺酰胺，且其給藥途徑為口服。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種治療缺血性腦卒中的藥物，其特征在于：所述有效劑量為 100 ~200mg/kg。
3. 如權(quán)利要求2所述的一種治療缺血性腦卒中的藥物，其特征在于：所述有效劑量為 200mg/kg。
4. 一種Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺在制備治療缺血性腦卒中的口服藥物中的應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺的有效劑 量為 80 ~250mg/kg。
6. 如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于：所述Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺的有效劑 量為 100 ~200mg/kg。
7. 如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于：所述Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺的有效劑 量為 200mg/kg。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療缺血性腦卒中的藥物，其有效成分包括有效劑量為80～250mg/kg的Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺，且其給藥途徑為口服。本發(fā)明的藥物的有效成分為Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺，具有明顯治療缺血性腦中風(fēng)的功效，可改善小鼠神經(jīng)功能缺失，減小腦梗死體積，減輕腦水腫程度。
【IPC分類】A61P9-10, A61K31-18
【公開號】CN104758276
【申請?zhí)枴緾N201510108387
【發(fā)明人】金鑫, 楊立朝, 周宇, 周灝, 郭涵
【申請人】廈門大學(xué)
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年3月12日