10ymol/L、內(nèi)向整流性鉀通道(inward rectifierK+channels, Kir)阻斷劑 BaCl210 μ mol/L 預(yù)處理 15min，加入 I μ mol/L 苯腎上腺素(PE)待收縮至穩(wěn)定后，再逐步累積加入石榴花多酚(PFP)各濃度觀察血管張力變化，以I ymol/L forskolin所致最大舒張率為100% ；
[0033]3.6石榴花多酚(PFP)對無鈣高鉀K-H液刺激下的0&(:12量效曲線的影響:
[0034]去內(nèi)皮血管環(huán)穩(wěn)定后，換成無鈣高鉀K-H液(含100 μ mol/L EGTA和60mmol/LK+)20min后，以后逐步加入CaCl2 (0.4,0.8、1.2、1.6,2.0,2.4)mmol/L取得鈣離子收縮曲線(60mmol/L K+最大收縮為100%對照)，處理組為加入CaCl 2前用82mg/L PFP預(yù)處理1min ；
[0035]3.7石榴花多酚(PFP)對胞質(zhì)內(nèi)鈣釋放的影響:
[0036]去內(nèi)皮主動脈環(huán)在K-H液中穩(wěn)定后，改成無鈣K-H液(含100 μ mol/L雙乙烷四乙酸(EGTA))平衡lOmin，加入I μ mol/L苯腎上腺素(PE)后，平滑肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣釋放而引起血管小幅度、持續(xù)緩慢收縮，藥物處理組血管換成無鈣K-H液孵育5min，加入石榴花多酚(PFP)孵育1min后，再加入I μ mol/L苯腎上腺素(PE)，記錄苯腎上腺素(PE)引起的血管環(huán)收縮張力變化，并比較對照組和石榴花多酚(PFP)組的張力變化；
[0037]4統(tǒng)計學(xué)處理:
[0038]數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，兩樣本比較采用t檢驗(yàn)；
[0039]結(jié)果:
[0040]1、內(nèi)皮對石榴花多酚(PFP)舒張作用的影響:
[0041]石榴花多酚(PFP)在100-900mg/L的濃度范圍內(nèi)對內(nèi)皮完整和去除內(nèi)皮的大鼠離體胸主動脈環(huán)均具有濃度依賴性舒張作用(P < 0.05)，石榴花多酚(PFP)對內(nèi)皮完整組與去內(nèi)皮組血管之間的舒張無顯著差異，內(nèi)皮完整組和去內(nèi)皮組最大舒張效率Emax分別為60.45% ±19.18%和71.20% ± 10.62%說明石榴花多酚(PFP)的血管舒張作用沒有內(nèi)皮依賴性，見圖1 ;
[0042]2、鉀離子通道阻斷劑對石榴花多酚(PFP)舒張作用的影響:
[0043]用3種不同類型的鉀通道阻斷劑預(yù)處理去內(nèi)皮的血管環(huán)，與未經(jīng)鉀通道阻斷劑處理的去內(nèi)皮血管環(huán)相比，石榴花多酚(PFP)對血管環(huán)的舒張作用有明顯差異，見圖2，3，4TEA 阻斷組 Emax = 60.33% ±17.44% ；Glib 阻斷組 Emax = 76.36% ±20.63% ；BaC12阻斷組65.72% ±22.72% ;三種鉀離子通道阻斷劑均可抑制其血管舒張作用，石榴花多酚(PFP)舒張血管與鉀離子通道激活有關(guān)；
[0044]3、石榴花多酚(PFP)對CaCl^效曲線的影響:
[0045]在無鈣高鉀K-H液中，60mmol/L K+去極化的血管環(huán)平滑肌細(xì)胞膜電位發(fā)生變化，電壓依賴性媽通道(voltage dependent calcium channels，VDCCs)開放，血管環(huán)隨著CaCl2&度的增加呈濃度依賴性收縮，石榴花多酚(PFP)處理組CaCl 2量效曲線右移，Ca2+濃度為2和2.4mmol/L這兩個劑量組有顯著性差異，表明石榴花多酚(PFP)作用于血管平滑肌鈣離子通道，抑制鈣離子內(nèi)流，并呈現(xiàn)出劑量依賴效應(yīng)，見圖5 ;
[0046]4、石榴花多酚(PFP)對內(nèi)鈣釋放的影響:
[0047]用無鈣K-H液(100nmol/L雙乙烷四乙酸(EGTA))處理去內(nèi)皮血管環(huán)后，加入lymol/L苯腎上腺素(PE)可以導(dǎo)致小幅度、緩慢而持續(xù)的血管收縮，該收縮主要靠調(diào)動胞質(zhì)內(nèi)1?釋放而引發(fā)，在相同無1? K-H液(100nmol/L EGTA)處理下，加入石植花多酸(PFP)則顯著促進(jìn)了苯腎上腺素(PE)刺激的內(nèi)鈣釋放引起的血管收縮(P < 0.01)，見圖6 ;
[0048]討論:
[0049]本發(fā)明研宄結(jié)果表明:石榴花多酚(PFP)對離體大鼠胸主動脈環(huán)有濃度依賴性舒張作用；內(nèi)皮完整血管與去內(nèi)皮的血管相比，其舒張作用沒有明顯差異，因此，石榴花多酚(PFP)所致的血管舒張直接作用于血管平滑肌而發(fā)揮作用；
[0050]本發(fā)明實(shí)驗(yàn)觀察鉀通道是否參與石榴花多酚(PFP)的舒張血管作用，發(fā)現(xiàn)Katp阻斷劑Glib、BKCa阻斷劑TEA、Kir阻斷劑BaCl2預(yù)處理后石榴花多酚(PFP)的舒張血管作用有明顯下降(圖2)，表明石榴花多酚(PFP)的舒張血管作用與鉀通道有關(guān)；
[0051]血管平滑肌收縮所需要的鈣離子源于細(xì)胞外流入和胞質(zhì)內(nèi)鈣釋放。外鈣內(nèi)流途徑主要通過電壓依賴性I?通道(VDCCs)和受體操控性媽通道(receptor-operatedcalciumchannels，ROCCs)完成；細(xì)胞外高鉀可使平滑肌細(xì)胞膜去極化，激活膜上電壓依賴性鈣通道(VDCCs)，開放鈣離子內(nèi)流從而引起血管收縮；石榴花多酚(PFP)可使無鈣高鉀液中的CaCl2量效曲線右移，說明石榴花多酚(PFP)通過阻滯血管平滑肌上電壓依賴性鈣通道(VDCCs)從而抑制鈣離子內(nèi)流，抑制血管平滑肌收縮；苯腎上腺素(PE)作用于血管平滑肌上的α受體，通過G蛋白偶聯(lián)受體信息途徑而激活下游的磷脂酶C，進(jìn)而生成二酰甘油(diacylglycerol, DAG)和三磷酸肌醇(inositol trisphosphate，IP3)，后者可以誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)的內(nèi)鈣釋放，或者作用于細(xì)胞膜上的電壓依賴性鈣通道(VDCCs)等途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，進(jìn)而影響血管張力；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在正常K-H液中，石榴花多酚(PFP)可以舒張PE預(yù)收縮的血管環(huán)，石榴花多酚(PFP)前處理也可以抑制苯腎上腺素(PE)引起的血管收縮，其作用機(jī)制可能與抑制了經(jīng)由受體操控性鈣通道(ROCCs)的外鈣內(nèi)流有關(guān)；
[0052]胞質(zhì)內(nèi)鈣釋放主要是肌漿網(wǎng)上的IP3系統(tǒng)和ryanodine系統(tǒng)完成，前者通過IP3與其受體結(jié)合后，誘發(fā)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)鈣釋放；后者通過復(fù)雜的機(jī)制調(diào)節(jié)環(huán)腺苷二磷酸核糖(cyclic adenosine diphosphate ribose，cADPR)含量，最終 cADPR 作用于 ryanodine 受體誘發(fā)內(nèi)鈣釋放，在無鈣的K-H液中，苯腎上腺素(PE)引起血管小幅度、緩慢而持續(xù)的收縮主要是IP3調(diào)動的胞質(zhì)內(nèi)鈣釋放而引起，本研宄表明:石榴花多酚(PFP)可以顯著促進(jìn)無鈣K-H液中苯腎上腺素(PE)誘導(dǎo)的血管收縮。
[0053]綜上所述，石榴花多酚(PFP)舒張血管的作用，一是與抑制鉀離子通道活性有關(guān)，二是通過抑制經(jīng)由血管平滑肌細(xì)胞膜受體操控性鈣通道(ROCCs)和電壓依賴性鈣通道(VDCCs)的鈣離子內(nèi)流而發(fā)揮血管舒張作用，其作用的分子機(jī)制還需進(jìn)一步探討。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種石榴花多酚的用途，其特征在于該石榴花多酚在制備舒張血管平滑肌的藥物中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種石榴花多酚在制備舒張血管平滑肌的藥物中的用途，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)研究證明：石榴花多酚（PFP）對離體大鼠胸主動脈環(huán)有濃度依賴性舒張作用。內(nèi)皮完整血管與去內(nèi)皮的血管相比，其舒張作用沒有明顯差異。因此，石榴花多酚（PFP） 所致的血管舒張直接作用于血管平滑肌而發(fā)揮作用。
【IPC分類】A61K133-00, A61P9-08, A61K36-185
【公開號】CN104706693
【申請?zhí)枴緾N201510166360
【發(fā)明人】魏媛媛, 阿吉艾克拜爾·艾薩, 閆冬, 張洪平, 竇清理, 鄔利婭·伊明, 王 忠, 連軍, 阿卜力克木·奧布力
【申請人】新疆醫(yī)科大學(xué)
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2015年4月9日