Zr標(biāo)記地諾單抗的標(biāo)記產(chǎn)物及其制備方法、應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于放射性標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及89Zr標(biāo)記地諾單抗的標(biāo)記產(chǎn)物及其制 備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，臨床上使用的PET骨顯像劑僅有18F-NaF, 18F-NaF是一種親骨性代謝顯像劑， 18F-NaF中的18F離子可與骨骼中羥基磷灰石晶體中的羥基交換，沉積在骨骼中使全身骨骼 顯像，無論是溶骨性還是成骨性病變， 18F-NaF均有積聚，均可實(shí)現(xiàn)PET顯像。但是，若采用 18F標(biāo)記，則存在游離18F在骨中沉積的現(xiàn)象，進(jìn)而無法確定PET顯像中接收到的信號是否為 18F-NaF標(biāo)記所發(fā)出的，即，由于18F-NaF的放射性化學(xué)純度不高，造成顯像結(jié)果不夠客觀、準(zhǔn) 確；并且， 18F的半衰期為llOmin，采用18F進(jìn)行一些時(shí)間跨度超過IOh的實(shí)驗(yàn)和檢查較難。 因此，現(xiàn)有技術(shù)中，采用 18F-NaF進(jìn)行骨顯像具有很大的局限性。
[0003] 地諾單抗（denosumab)，是一種人源性針對核因子kB受體活化因子配基（RANKL) 的單克隆抗體，于2010年6月被FDA批準(zhǔn)用于治療絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松；于2010年11月， 被批準(zhǔn)其用于預(yù)防實(shí)體瘤骨轉(zhuǎn)移患者骨骼相關(guān)性事件。
[0004] 骨質(zhì)疏松（osteoporosis，簡稱0P)是多種原因引起的一組骨病，其特征是骨量下 降和骨的微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞，表現(xiàn)為骨的脆性增加，因而骨折的危險(xiǎn)性大大增加，即使是輕微的 創(chuàng)傷或無外傷的情況下也容易發(fā)生骨折。骨質(zhì)疏松癥的基本病理機(jī)理是骨代謝過程中骨吸 收和骨形成的偶聯(lián)出現(xiàn)缺陷，導(dǎo)致人體內(nèi)的鈣磷代謝不平衡，使骨密度逐漸減少，進(jìn)而引起 的臨床癥狀。骨質(zhì)疏松癥主要分為原發(fā)性O(shè)P和繼發(fā)性0P，原發(fā)性O(shè)P主要可以分為I型和 II型，I型又稱為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松，為高轉(zhuǎn)換型，主要是由于雌性激素缺乏所導(dǎo)致；II型又 稱為老年性骨質(zhì)疏松，為低轉(zhuǎn)換型，是由于年齡的老化所導(dǎo)致。
[0005] 骨轉(zhuǎn)移，是一種原發(fā)病灶通過血行、淋巴途徑轉(zhuǎn)移到骨組織，從而引起的骨組織病 變的疾病。在惡性實(shí)體瘤患者中，約有1/5的患者可發(fā)生腫瘤骨轉(zhuǎn)移，最常見的可引起骨轉(zhuǎn) 移的惡性腫瘤包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌、甲狀腺癌、腎癌等，其中乳腺癌骨轉(zhuǎn)移發(fā)生率可 高達(dá)65% -75%。腫瘤骨轉(zhuǎn)移可導(dǎo)致患者發(fā)生骨痛、病理性骨折、脊髓壓迫、高鈣血癥等一 系列骨相關(guān)事件，嚴(yán)重影響了生活質(zhì)量。因此，腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起的骨骼并發(fā)癥已越來越受到 臨床醫(yī)師的關(guān)注。近年來，國際醫(yī)學(xué)界對于腫瘤骨轉(zhuǎn)移的治療理念正在發(fā)生根本性轉(zhuǎn)變，由 單純減輕疼痛上升為積極預(yù)防和有效治療，減少或推遲骨相關(guān)事件的發(fā)生。
[0006] 地諾單抗用于治療骨質(zhì)疏松，可在早期的骨破壞進(jìn)程中發(fā)揮治療作用，具有抑制 破骨細(xì)胞活化和發(fā)展的作用，在減少骨吸收、增加骨密度、增加骨質(zhì)疏松癥患者的骨礦物質(zhì) 密度（BMD)方面也具有良好的療效。地諾單抗用于治療骨轉(zhuǎn)移時(shí)，發(fā)現(xiàn)針對1900名患者展 開的對比試驗(yàn)中，地諾單抗相比唑來膦酸、狄諾塞麥等常用的抑制骨轉(zhuǎn)移的藥物，可將患者 發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的時(shí)間平均延緩3. 6個(gè)月。不僅對于前列腺癌，還可對乳腺癌、多發(fā)性骨髓癌以 及其他實(shí)體腫瘤產(chǎn)生相同效用。
[0007] 地諾單抗具有上述藥效的作用機(jī)理為：所有骨骼的各部位存在有核因子kappa B 受體活化因子（即RANK)，RANK的配體也稱為骨保護(hù)素（OPG)受體，是破骨細(xì)胞引起骨再吸 收（骨破壞）的關(guān)鍵介質(zhì)，在骨質(zhì)疏松癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種骨病中均過量產(chǎn)生。成骨 細(xì)胞/骨髓基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)RANKL和骨保護(hù)素（OPG)，而破骨細(xì)胞表面則表達(dá)RANK。RANKL結(jié) 合其受體RANK后，可促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化、融合及成熟，并抑制破骨細(xì)胞凋亡。而可溶性 骨保護(hù)素分子作為一種誘餌受體，通過與RANKL或者其他TNF配體家族成員，如TNF相關(guān) 凋亡誘導(dǎo)配體（TNF-relatedapoptosis-inducingligand, TRAIL)等結(jié)合，可阻斷 RANKL 與 RANK結(jié)合，從而阻斷破骨細(xì)胞的形成和成熟過程。所以，骨保護(hù)素（OPG)、RANKL、RANK之間 的比例在破骨細(xì)胞的成熟和功能上起著重要的調(diào)節(jié)作用。骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化 的過程中，RANKL/0PG的值是不斷變化的，隨著成骨細(xì)胞的分化成熟，比值逐漸減小，最后 失去對破骨細(xì)胞的促分化和激活作用，以確保骨吸收和骨形成兩個(gè)過程緊密相連并達(dá)到平 衡。而作為核因子kB受體活化因子配基（RANKL)的單克隆抗體的denosumab可調(diào)節(jié)骨保 護(hù)素（OPG)、RANKL、RANK之間的比例，進(jìn)而對破骨細(xì)胞的成熟和功能進(jìn)行干預(yù)，在骨質(zhì)疏松 癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種骨病中表現(xiàn)出良好的治療效果。并且，由于denosumab能在破骨 細(xì)胞成熟和開始骨再吸收之前對其產(chǎn)生作用，因此，denosumab不像雙膦酸鹽等抑制骨轉(zhuǎn)移 的藥物只靶向完全成熟的破骨細(xì)胞，可較早的作用于破骨細(xì)胞，延緩骨轉(zhuǎn)移。
[0008] 免疫-正電子發(fā)射斷層攝影技術(shù)（Immuno-PET)是用于體內(nèi)追蹤和定量單克隆抗 體（mAb)的新興方法，其有效組合了 PET的高靈敏度和mAb的高特異性，因此，將denosumab 與Immuno-PET技術(shù)相結(jié)合，對于骨質(zhì)疏松、骨轉(zhuǎn)移等骨病的診斷、藥物代謝過程的觀察以 及藥效的評價(jià)等方面將具有積極的意義。對于采用正電子核素標(biāo)記denosumab來說，找到 匹配的、具有合適的半衰期的核素，核素標(biāo)記抗體后不影響抗體的特異性、靶向性，標(biāo)記產(chǎn) 物在體外具有良好的穩(wěn)定性、較高的放射性化學(xué)純度，可滿足使用需要，用于體內(nèi)顯像時(shí)能 夠客觀準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)代謝的情況、實(shí)現(xiàn)良好的成像效果等等，這些均是獲得理想的地諾 單抗的標(biāo)記產(chǎn)物需要綜合考慮與解決的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中的骨顯像劑的放射性化學(xué)純度 不高，造成顯像的結(jié)果不夠準(zhǔn)確、客觀，且半衰期較短，無法實(shí)現(xiàn)時(shí)間跨度長的實(shí)驗(yàn)和檢查 的問題，進(jìn)而提供一種顯像結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，且半衰期合適的標(biāo)記產(chǎn)物。
[0010] 本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是采用正電子核素標(biāo)記地諾單抗需保證所用 的核素具有合適的半衰期并與地諾單抗可較好的匹配、標(biāo)記產(chǎn)物具有良好的特異性、靶向 性、體外穩(wěn)定性以及較高的放射性化學(xué)純度，用于體內(nèi)顯像時(shí)能夠客觀準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)代 謝的情況、實(shí)現(xiàn)良好的成像效果的問題，進(jìn)而提供一種具有合適的半衰期、良好的特異性、 靶向性、體外穩(wěn)定性及較高的放射性化學(xué)純度，且用于顯像時(shí)能客觀準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)代謝 情況、實(shí)現(xiàn)良好的成像效果的 89Zr標(biāo)記地諾單抗的標(biāo)記產(chǎn)物。
[0011] 本發(fā)明還提供了制備上述標(biāo)記產(chǎn)物的方法及其應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的89Zr標(biāo)記地諾單抗的標(biāo)記產(chǎn)物為[89Zr]-Df-Bz-NCS_denosumab。
[0013] 本發(fā)明的89Zr標(biāo)記地諾單抗的方法，采用89Zr標(biāo)記Df-Bz-NCS-denosumab。
[0014] 所述的89Zr標(biāo)記地諾單抗的方法，具體包括以下步驟：取Df-Bz-NCS-denosumab與 含 89Zr4+離子溶液，混合均勻，調(diào)節(jié)混合液的pH值為6. 8-7. 2,形成反應(yīng)液，在20-35°C下反 應(yīng)至生成標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab。需要說明的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù) 實(shí)際情況選擇調(diào)節(jié)混合液的PH調(diào)節(jié)劑，只要使所述反應(yīng)液的pH值在6. 8-7. 2的范圍內(nèi)即 可。
[0015] 所述含89Zr4+離子溶液為89Zr草酸溶液中的一種。
[0016] 進(jìn)一步的，所述的89Zr標(biāo)記地諾單抗的方法，還包括向所述反應(yīng)液中加入絡(luò)合劑 的步驟。優(yōu)選的，所述絡(luò)合劑為醋酸-醋酸鈉緩沖液。
[0017] 所述的89Zr標(biāo)記地諾單抗的方法，還包括將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [ 89Zr] -Df-Bz-NCS-denosumab采用層析柱純化的步驟。進(jìn)一步的，將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr] -Df-Bz-NCS-denosumab層析柱純化后，采用濾膜過濾。
[0018] 本發(fā)明所述的[89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab在制備PET顯像劑中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明提供的PET顯像劑，包含所述[89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab。
[0020] 本發(fā)明所述的Df-Bz-NCS-denosumab，即去鐵敏-苯甲?；?N-氯代丁二酰亞 胺-地諾單抗，其結(jié)構(gòu)式如下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種89Zr標(biāo)記地諾單抗的標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab。
2. 權(quán)利要求1所述的標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr] -Df-Bz-NCS-denosumab的制備方法，其特征在于， 米用 89Zr 標(biāo)記 Df-Bz-NCS-denosumab〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：取 Df-Bz-NCS-denosumab與含89Zr4+離子溶液，混合均勾，調(diào)節(jié)混合液的pH值為6. 8-7. 2,形成 反應(yīng)液，在20-35°C下反應(yīng)至生成標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述含89Zr4+離子溶液為89Zr草酸溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，還包括向所述反應(yīng)液中加入絡(luò)合 劑的步驟。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述絡(luò)合劑為醋酸-醋酸鈉緩沖液、乙二 胺四乙酸鈉緩沖溶液中的一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于，還包括將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab采用層析柱純化的步驟。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr] -Df-Bz-NCS-denosumab層析柱純化后，采用濾膜過濾。
9. 權(quán)利要求1中所述的[89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab在制備PET顯像劑中的應(yīng)用。
10. -種PET顯像劑，其特征在于，包含權(quán)利要求9中所述的 [89Zr] -Df-Bz-NCS-denosumab 〇
【專利摘要】89Zr標(biāo)記地諾單抗的標(biāo)記產(chǎn)物，為[89Zr]-Df-Bz-NCS-denosumab，采用89Zr標(biāo)記Df-Bz-NCS-denosumab。本發(fā)明的標(biāo)記產(chǎn)物，顯像結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，且半衰期合適，具有良好的特異性、靶向性、體外穩(wěn)定性及較高的放射性化學(xué)純度，可實(shí)現(xiàn)良好的成像效果，用于骨顯像時(shí)能客觀準(zhǔn)確的反應(yīng)藥物在體內(nèi)代謝情況，可更加早期的診斷骨質(zhì)疏松和實(shí)體瘤骨轉(zhuǎn)移。
【IPC分類】A61K103-00, A61K51-10
【公開號】CN104645364
【申請?zhí)枴緾N201510042237
【發(fā)明人】王正, 方鵬, 羅志剛, 李世紅
【申請人】南京江原安迪科正電子研究發(fā)展有限公司
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年1月27日