專利名稱：應(yīng)用某些藥物治療神經(jīng)根損傷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用TNF-α抑制劑制備治療神經(jīng)根損傷的藥用組合物以及治療神經(jīng)根損傷的方法。
本發(fā)明的目的是希望可通過阻斷椎間盤有關(guān)的細(xì)胞因子治療椎間盤突出(disk herniation)引起的神經(jīng)根損傷，該損傷表現(xiàn)為手臂和腿(坐骨神經(jīng)痛)的放射性疼痛。
US-A-5,703,092公開了異羥肟酸化合物和碳環(huán)酸用作金屬蛋白酶和TNF抑制劑，而且特別用于治療關(guān)節(jié)炎和其它相關(guān)炎性疾病。未公開或暗示這類化合物用于治療神經(jīng)根損傷。
US-A-4,925,833公開了使用四環(huán)素促進(jìn)骨蛋白的合成以及治療骨質(zhì)疏松。
US-A-4,666,897公開了用四環(huán)素抑制哺乳動物溶膠原酶。溶膠原活性表現(xiàn)為過度的骨重吸收、牙周病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、角膜潰瘍或皮膚或其它結(jié)締組織膠原的重吸收。
上述后兩個文獻(xiàn)均未提及神經(jīng)根損傷或其治療。
有效治療量為使用這類化合物作其它治療之用時通常使用的劑量。這類藥物中許多藥物是已知的市售注冊藥物。
具有這種活性的化合物為四環(huán)素類如四環(huán)素、多西環(huán)素、賴甲四環(huán)素、土霉素、米諾環(huán)素及化學(xué)修飾的四環(huán)素類去二甲基氨基四環(huán)素(dedimethylaminotetracycline)、異羥肟酸化合物、碳環(huán)酸及其衍生物、肽胺哌啶酮、拉扎洛依類(lazaroides)、己酮可可堿、napthopyrans、可溶性細(xì)胞因子受體、抗TNF-α單克隆抗體、氨力農(nóng)、匹莫苯、維司力農(nóng)、磷酸二酯酶III抑制劑、乳鐵蛋白和乳鐵蛋白衍生的類似物、褪黑激素、諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、gatifloxacine、培氟沙星、洛美沙星(lemefloxacine)及替馬氟沙星。這些化合物可以堿或加成鹽形式存在，無論哪種形式均具有最佳的藥物學(xué)作用及最佳的性質(zhì)以加入適當(dāng)?shù)乃幱媒M合物。
此外，所述活性組分包括抑制TNF-α釋放激發(fā)產(chǎn)生的化合物的物質(zhì)，這類物質(zhì)為堿或加成鹽形式，例如γ-干擾素、白介素-1以及一氧化氮(NO)。
本發(fā)明還涉及抑制神經(jīng)根損傷癥狀的方法。
已研究了多西環(huán)素、可溶性細(xì)胞因子受體及單克隆細(xì)胞因子抗體的作用，并將所用方法及所獲結(jié)果公開如下。
系列-2從13只豬的腰椎間盤收集髓核并將其應(yīng)用到13只豬的自體骶尾的馬尾(sacrococcygeal carda equina)。給4只豬靜脈注射100mg多西環(huán)素，給5只豬在髓核局部應(yīng)用阻斷性TNF-α單克隆抗體，并保留4只豬不作處理而形成對照。應(yīng)用3天后通過局部電刺激測定應(yīng)用區(qū)域神經(jīng)根傳導(dǎo)速率。
系列-3類似于系列2，將13只豬自體髓核置于它們的骶尾馬尾。5只豬(體重25kg)術(shù)前靜脈注射100mg RemicadeR(infliximab)，給8只豬在術(shù)前皮下注射12.5mg EnbrelR(etanercept)，并于術(shù)后3天再皮下注射12.5mg EnbrelR。應(yīng)用髓核后7天按照系列-2通過局部電刺激檢測應(yīng)用區(qū)域神經(jīng)根傳導(dǎo)速率。
結(jié)果系列-1發(fā)現(xiàn)TNF-α存在于髓核細(xì)胞中。
系列-2TNF-α選擇性抗體限制了神經(jīng)傳導(dǎo)速率的降低，但是與對照系列相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，用多西環(huán)素治療顯著阻斷了髓核誘導(dǎo)的傳導(dǎo)速率的降低。
系列-3用這兩種藥物治療后發(fā)現(xiàn)兩種藥物(infliximab和etanercept)有效阻斷髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷并觀察到正常的平均神經(jīng)傳導(dǎo)速率。結(jié)論首次發(fā)現(xiàn)，一種特異性物質(zhì)即腫瘤壞死因子-α與局部應(yīng)用髓核后對神經(jīng)根產(chǎn)生的作用有關(guān)。雖然該物質(zhì)的此類作用可與其它類似物質(zhì)協(xié)同發(fā)生，但是本研究的數(shù)據(jù)可能對繼續(xù)了解髓核的生物活性具有重要意義，并且可能對將來的坐骨神經(jīng)痛治療策略也具有潛在的用途。
以前認(rèn)為髓核在椎間盤突出處僅作為非生物活性組織組分壓迫脊神經(jīng)根，最近發(fā)現(xiàn)它具有高度活性，當(dāng)在硬膜外應(yīng)用(24，37，38，41，42)時引起鄰近神經(jīng)根的結(jié)構(gòu)和功能的雙重變化。因此確證自體髓核可能誘導(dǎo)軸索變化和特征性髓磷脂損傷(24，38，41，42)、增加血管滲透性(9，44)、血管內(nèi)凝血作用(24，36)，并且確證髓核細(xì)胞的膜結(jié)合結(jié)構(gòu)或物質(zhì)與這些作用有關(guān)(24，37)。還發(fā)現(xiàn)甲基強(qiáng)的松龍和環(huán)孢菌素A(2，38)有效阻斷這些作用。嚴(yán)格考察這些數(shù)據(jù)，人們認(rèn)識到至少有一種細(xì)胞因子即腫瘤壞死因子α(TNF-α)與所有這些作用有關(guān)。為了判定TNF-α是否參與髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)根損傷，鑒定TNF-α存在于髓核細(xì)胞中并研究髓核誘導(dǎo)作用是否能夠被多西環(huán)素、可溶性TNF-受體以及選擇性TNF單克隆抗體所阻斷，將后者同時局部應(yīng)用于髓核和全身應(yīng)用。材料和方法系列-1，在豬髓核細(xì)胞中存在TNf-α。
從取自一只作它用豬的腰椎和胸椎椎間盤(總數(shù)為13)獲得髓核(NP)。將NP在Ham’s F12培養(yǎng)基(Gibco BRL，Paisley Scotland)中洗滌一次，然后離心并在37℃下于25cm2組織培養(yǎng)瓶中以5ml膠原酶的Ham’s F12培養(yǎng)基(0.8mg/ml，Sigma Chemical Co.，St Louis，MO，USA)溶液中懸浮40分鐘。將分離的NP-細(xì)胞團(tuán)懸浮于補(bǔ)充1％的200mM L-谷氨酰胺(Gibco BRL，Paisley，Scotland)、50μg/ml硫酸慶大霉素(GibcoBRL，Paisley，Scotland)及10％胎牛血清(FCS)的DMEM/F12 1∶1培養(yǎng)基(Gibco BRL，Paisley，Scotland)中。將細(xì)胞在37℃及5％CO2的空氣中培養(yǎng)3-4周，然后直接培養(yǎng)于經(jīng)組織培養(yǎng)基處理的載玻片上(BectonDickinson & Co Labware，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ，美國)。在載玻片上培養(yǎng)5天后用丙酮將細(xì)胞原位固定10分鐘。將不相關(guān)抗原用3％H2O2(SigmaChemical Co.，St Louis，MO，美國)封閉30分鐘及用馬血清(ImmunoPureABC，過氧化酶鼠IgG染色試劑盒nr.32028，Pierce，Rockford，IL)封閉20分鐘后，加入1∶10、1∶20及1∶40稀釋的一抗(抗豬TNF-α單克隆純化抗體，Endogen，Cambridge，MA，美國)在+40℃下過夜。作為對照，以同樣的方式應(yīng)用懸于PBS(磷酸鹽緩沖鹽水，Merck，Darmstadt，德國)中的BSA(牛血清白蛋白，Intergen Co，New York，美國)。次日用含1％BSA的PBS洗滌這些細(xì)胞并加入二抗(ImmunoPture ABC，過氧化酶鼠IgG染色試劑盒nr.32028，Pierce，Rockford，IL)處理30分鐘。為促進(jìn)該反應(yīng)，再使這些細(xì)胞與抗生物素蛋白-生物素(Avidin-Biotin)復(fù)合物作用30分鐘(ImmunoPure ABC，過氧化酶鼠IgG染色試劑盒nr.32028，Pierce，Rockford，IL)。然后將這些細(xì)胞在含20mg DAB(3，3-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽nr.D-5905，Sigma Chemical Co.，St Louis，MO，美國)和0.033ml3％H2O2的10ml鹽水中反應(yīng)10分鐘。將細(xì)胞用PBS洗滌，在系列乙醇中脫水，在消除系統(tǒng)誤差的情況下置于光學(xué)顯微鏡下由觀察者觀測，出現(xiàn)褐色著色表明存在TNF-α。系列-2，神經(jīng)生理學(xué)評價
給13只豬(體重25-30kg)肌內(nèi)注射20mg/kg體重的KetalarR(氯胺酮50mg/ml，Parke-Davis，Morris Plains，New Jersey)以及靜脈注射4mg/kg體重的HypnodilR(methomidate chloride50mg/ml，AB Leo，Helsingborg，瑞典)和0.1mg/kg體重的StresnilR(阿扎哌隆2mg/ml，Janssen Pharmaceutica，Beerse，比利時)。通過額外靜脈注射2mg/kg體重HypnodilR和0.05mg/kg體重StresnilR維持麻醉。術(shù)后還給這些豬靜脈注射0.1mg/kg Stesolid NovumR(安定，Dumex，Helsingborg，瑞典)。
通過腹膜后方法(42)從第5腰椎椎間盤收集髓核。通過對第一尾椎的中線切口及椎板切除術(shù)將約40mg髓核應(yīng)用于骶尾的馬尾。4只豬未予進(jìn)行任何處理(未處理)。給另外4只豬在1小時內(nèi)靜脈滴注含100mg多西環(huán)素(Vibramycino，Pfizer Inc.，New York，USA)的100ml鹽溶液。對于5只豬，應(yīng)用髓核前，將其與100gl系列1中所用1，11mg/ml抗TNF-α抗體懸浮液混合。
應(yīng)用后3天，通過肌內(nèi)注射20mg/kg體重KetalarR及靜脈內(nèi)注射35mg/kg體重PentothalR(硫噴妥鈉，Abbott實(shí)驗(yàn)室，芝加哥，IL)將這些豬再麻醉。這些豬利用人工呼吸裝置換氣。通過靜脈大量注射100mg/kg體重氯醛糖(α)-D(+)-葡萄糖-氯醛糖(Merck，Darmstadt，德國)及連續(xù)供給30mg/kg/小時氯醛糖維持麻醉。進(jìn)行第4骶椎至第3尾椎的椎板切除術(shù)。將這些神經(jīng)根用SpongostaneR(Ferrosan，丹麥)覆蓋。持續(xù)監(jiān)測局部組織溫度并用加熱燈將溫度保持在37.5-38.0℃。
用兩個與Grass SD9刺激器(Grass Instrument Co.，Quincy，MA)相連的E2皮下鉑針電極(Grass Instrument Co.，Quincy，MA)刺激馬尾，所述電極輕輕地首先置于馬尾的顱側(cè)前10mm，然后間斷性置于尾側(cè)距暴露區(qū)10mm處。為確保只記錄源自暴露神經(jīng)纖維的脈沖，切斷源自兩個刺激位點(diǎn)之間的椎管神經(jīng)根。通過置入尾部脊柱旁肌肉的兩個相距約10mm的皮下鉑針電極記錄EMG。該方法具有可重復(fù)性并測量馬尾神經(jīng)根運(yùn)動神經(jīng)纖維機(jī)能。使用帶有Superscope軟件和MacAdiosII AID轉(zhuǎn)換器(GW Instrument，Sommerville，MA)及Grass P18前置放大器(Grass Instrument Co.，Quincy，MA)的MacintoshIIci計(jì)算機(jī)觀察EMG。測定兩次記錄的第一EMG峰之間的距離，并用卡鉗測量馬尾上兩個刺激位點(diǎn)間的距離。由此從這兩個測量值計(jì)算這兩個刺激位點(diǎn)之間的神經(jīng)傳導(dǎo)速率。
進(jìn)行神經(jīng)生理學(xué)分析的人員不知道各動物的實(shí)驗(yàn)方案，并在完成全部研究后將數(shù)據(jù)分成三個實(shí)驗(yàn)組并通過Student’s t檢驗(yàn)判定各組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。該實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方案得到當(dāng)?shù)貏游镅芯總惱砦瘑T會許可。
系列-3類似系列-2，將13只豬自體髓核置于其骶尾的馬尾。5只豬(體重25kg)在術(shù)前靜脈注射100mg人/鼠單克隆抗體RemicadeR(infliximab，Immunex Coporation，Seattle，WA98101，美國)，給8只豬術(shù)前皮下注射12.5mg EnbrelR(etanercept，Centocor B.V.，Leiden，荷蘭)及在術(shù)后3天再皮下注射12.5mg EnbrelR。應(yīng)用髓核后7天按照系列-2通過局部電刺激檢測應(yīng)用區(qū)域神經(jīng)根傳導(dǎo)速率。為作雙盲研究，神經(jīng)生理學(xué)評價與另外一個研究并列進(jìn)行，并且進(jìn)行所述分析的人員不知道每只特定動物接受哪種研究及何種處理。由于預(yù)先已知應(yīng)用髓核或脂肪(對照)7天后的神經(jīng)傳導(dǎo)速率，所以在系列-3中不包括未處理動物。通過使用ANOVA和Fisher’s PLSD評價infliximab和etanercept、未治療的髓核(源自先前數(shù)據(jù)的陽性對照)以及腹膜后應(yīng)用脂肪(源自先前數(shù)據(jù)的陰性對照)的各組之間的5％的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果系列-1，在豬髓核細(xì)胞中存在TNF-α染色載玻片的光學(xué)顯微鏡觀察實(shí)例。在以溶于PBS的BSA作為“一抗”(對照)的切片中未觀察到染色，證實(shí)沒有標(biāo)記或顯現(xiàn)不相關(guān)抗原。當(dāng)以1∶40稀釋液應(yīng)用抗TNF-α抗體時只有較弱的染色。然而隨抗體稀釋度的減少染色增強(qiáng)。染色見于細(xì)胞體中，而無法區(qū)分TNF-α是位于胞漿、還是在細(xì)胞表面結(jié)合于細(xì)胞膜或兩種并存。
系列-2，神經(jīng)生理學(xué)評價與上述試驗(yàn)相似，應(yīng)用未修飾的髓核而且未作任何處理時引起神經(jīng)傳導(dǎo)速率的降低(表1)，而用多西環(huán)素處理完全阻斷了這種降低(Student’s t檢驗(yàn)，p＜0.01)。局部應(yīng)用抗TNF-α抗體也部分阻止這種減少，但是不象多西環(huán)素完全阻斷且與未處理系列相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
系列-3，因?yàn)檫@兩個處理組的平均神經(jīng)傳導(dǎo)速率與先前研究中所見的脂肪-應(yīng)用系列的平均傳導(dǎo)速率(表2)接近，所以用這兩種藥物治療似乎阻止了髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)根傳導(dǎo)速率的降低。這兩種藥物與應(yīng)用髓核但是沒有作任何治療的組相比，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1-系列-2治療nNCV(m/s＋SD)局部應(yīng)用抗TNF-α 5 64±28多西環(huán)素4 76±9未治療 4 46±12表2-系列-3治療nNCV(m/s＋SD)脂肪* 5 76±11EmbrelR 8 78±14RemicadeR 5 79±15未治療* 5 45±19*包括參考文獻(xiàn)第42條Olmarker等，1993數(shù)據(jù)討論本研究的數(shù)據(jù)證實(shí)，TNF-α可見于豬的髓核細(xì)胞。如果局部應(yīng)用選擇性單克隆抗體阻斷TNF-α，則部分阻斷所述髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)根傳導(dǎo)速率的降低，但是與未治療動物系列相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，如果用多西環(huán)素、infliximab及etanercept全身治療以抑制TNF-α，則顯著阻止神經(jīng)傳導(dǎo)速率的降低。
近幾年，已證實(shí)局部應(yīng)用自體髓核可損傷鄰近的神經(jīng)根。因此椎間盤突出中所見到的神經(jīng)根損傷顯然不可能僅僅是由于神經(jīng)根的機(jī)械變形，而且也可能由于未知的與硬膜外存在的髓核突出相關(guān)的“生化作用”所致。雖然這一新的研究領(lǐng)域進(jìn)行了許多實(shí)驗(yàn)研究，但是對所涉及的機(jī)理和物質(zhì)尚未完全了解。已發(fā)現(xiàn)局部應(yīng)用自體髓核可誘導(dǎo)軸索損傷(24，37，38，40-42)、髓磷脂鞘的特征性損傷(24，38，40-42)、局部血管滲透性增加(9，36，44)、血管內(nèi)凝血作用、神經(jīng)內(nèi)血流減少(43)以及白細(xì)胞趨向性(36)。已發(fā)現(xiàn)髓核相關(guān)作用可被甲潑尼龍(38)和環(huán)孢菌素A(2)有效阻斷，以及被消炎痛(3)和利多卡因(69)輕度有效阻斷。此外，已知這些作用由髓核細(xì)胞介導(dǎo)(37)，尤其是由與細(xì)胞膜結(jié)合的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)介導(dǎo)(25)。當(dāng)嚴(yán)格考察這些數(shù)據(jù)時，顯然至少一種特異的細(xì)胞因子，即腫瘤壞死因子α(TNF-α)可能與所觀察的這些作用相關(guān)。TNF-α可誘導(dǎo)神經(jīng)損傷(29，31，45，50，66)，主要表現(xiàn)為特征性髓磷脂損傷，該損傷與髓核誘導(dǎo)的髓磷脂損傷(29，47，51，54，62，64，66，70)非常相似。TNF-α還可導(dǎo)致血管滲透性增加(47，66)及啟動凝血反應(yīng)(22，34，63)。此外，TNF-α可被類固醇(4，8，21，61，68)及環(huán)孢菌素A(11，55，67，68)阻斷。然而NSAID對TNF-α的阻斷作用不是如此顯著(14，17，20)，而利多卡因的阻斷作用非常弱或相反(5，32，46，60)。最近觀察到局部應(yīng)用髓核可引起大鼠疼痛相關(guān)性作用，尤其是熱痛覺過敏(23，40)。還發(fā)現(xiàn)TNF-α與這類疼痛作用的變化相關(guān)(12，35，56，66)，并且還與一般神經(jīng)病相關(guān)(30，54，56，57)。然而沒有評價TNF-α可能存在于髓核細(xì)胞的研究。
為了評價TNF-α是否與所觀察到的髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)根傳導(dǎo)速率的降低相關(guān)，有必要首先分析髓核細(xì)胞中是否存在TNF-α。所述數(shù)據(jù)清楚地表明TNF-α存在于這些細(xì)胞中。TNF-α作為與膜結(jié)合的前體(前TNF)產(chǎn)生，該前體由鋅依賴性金屬內(nèi)肽酶(TNF-α轉(zhuǎn)化酶，TACE)裂解細(xì)胞膜激活(6，15，16，48，49)。因此這可能與僅應(yīng)用自體髓核細(xì)胞的細(xì)胞膜誘導(dǎo)神經(jīng)傳導(dǎo)速率降低的實(shí)驗(yàn)結(jié)果密切相關(guān)，此結(jié)果表明該作用通過膜結(jié)合物質(zhì)介導(dǎo)。其次，TNF-α的作用得以調(diào)控的方式阻斷。那么應(yīng)用前我們首先選擇將與系列-1免疫組化所用抗體相同的選擇性抗體用于髓核，已知該抗體還可阻斷TNF-α的作用。我們還選擇用多西環(huán)素治療所述豬，已知多西環(huán)素阻斷TNF-α(26，27，33，52，53)。然而由于多西環(huán)素制劑的pH值低，所以選擇它通過靜脈注射治療這些豬，而不是局部加入應(yīng)用于髓核，因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)低pH髓核加強(qiáng)髓核的作用(38，39)。
本研究還包括兩種最近開發(fā)的特異性抑制TNF-α的藥物。Infliximab是由人抗體恒定區(qū)和鼠抗體的可變區(qū)組成的單克隆抗體，它特異性結(jié)合人TNF-α。與在系列-2中3天觀察期內(nèi)所使用的單克隆抗體相反，Infliximab不是局部應(yīng)用于自體移植的髓核，而是以臨床推薦劑量(4mg/kg)全身給予。Etanercept是由人IgG Fc部分組成的二聚體二融合蛋白。該藥物以與小兒科推薦使用劑量(0.5mg/kg，一周兩次)相當(dāng)?shù)膭┝拷o藥。
關(guān)于神經(jīng)傳導(dǎo)速率的數(shù)據(jù)表明，所述神經(jīng)傳導(dǎo)速率的降低完全被全身性治療阻斷，并且這些系列中的神經(jīng)傳導(dǎo)速率與先前研究中應(yīng)用對照物質(zhì)(腹膜后脂肪)后的傳導(dǎo)速率(42)接近。將抗TNF-α抗體應(yīng)用于髓核還部分阻止了神經(jīng)傳導(dǎo)速率的降低，然而不如多西環(huán)素顯著，并且由于數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差較大，該系列中的速率與未處理動物系列中的速率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
局部抗TNF-α抗體治療只部分阻斷髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)傳導(dǎo)速率的降低以及這些數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)差高的事實(shí)可能至少有三種不同的解釋。首先，如果看一下該組內(nèi)的具體數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)2只動物神經(jīng)傳導(dǎo)速率低(平均37.5m/s)而3只動物神經(jīng)傳導(dǎo)速率高(平均81.3m/s)。因此在抗TNF-α治療系列中有兩組明顯不同的數(shù)據(jù)。這將說明高標(biāo)準(zhǔn)差的原因并可能提示在3只動物中阻斷作用是充分的而在2只動物中阻斷作用是不充分的。這些動物中阻斷作用的缺乏可能只是基于與TNF-α分子相關(guān)的抗體量不充足，而且使用更高劑量的抗體時，甚至在這些動物中TNF-α作用會因此被阻斷。那么這種情況理論上可能提示TNF-α單獨(dú)與所觀察的髓核誘導(dǎo)作用有關(guān)，并且由于抗體量太低以至這一點(diǎn)不能由實(shí)驗(yàn)證實(shí)。
其次，還已知四環(huán)素如多西環(huán)素和米諾環(huán)素可阻斷許多細(xì)胞因子和其它物質(zhì)。例如它們可阻斷IL-1(1，28，58)、IFNγ(27)、NO合成酶以及金屬蛋白酶(1，53，58)。尤其是已知IL-1和IFγ與TNF-α協(xié)同作用，而且已知它們或多或少具有神經(jīng)毒性(7，10，13，18，19，56，59)。類固醇和環(huán)孢菌素A也阻斷這些物質(zhì)，這與先前對髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)根損傷的觀察結(jié)果非常一致，證實(shí)髓核誘導(dǎo)的作用可被這些物質(zhì)阻斷(8，67)。因此還可以考慮選擇性阻斷TNF-α可能不足以完全阻斷髓核誘導(dǎo)的對神經(jīng)功能的作用的可能性，從而其它協(xié)同物質(zhì)的同時阻斷也是必要的。因此，另一方面，該情況提示不僅僅是TNF-α影響髓核誘導(dǎo)的作用，而且被多西環(huán)素阻斷的其它協(xié)同物質(zhì)可能是必需的。
第三種解釋可能是髓核中TNF含量可能足以啟動神經(jīng)根局部病理生理級聯(lián)反應(yīng)，包括血管滲透性增加和全身白細(xì)胞的聚集以及募集作用。然而正是這些白細(xì)胞含有大量TNF-α，而足夠劑量的全身治療阻斷這些白細(xì)胞的作用，并由此也阻斷導(dǎo)致神經(jīng)損傷的過程是必需的。
TNF-α可具有各種病理生理作用。它可直接作用于組織如神經(jīng)組織和血管，它可觸發(fā)其它細(xì)胞生成其它致病物質(zhì)，并可觸發(fā)炎性細(xì)胞和神經(jīng)組織局部的Schwann細(xì)胞釋放更多的TNF-α(65)。因此就是這個原因使人們相信即使少量TNF-α可能足以啟動這些過程，以及存在著細(xì)胞因子生成細(xì)胞的局部募集，然后使其它細(xì)胞因子以及TNF-α的產(chǎn)生和釋放增加。因此TNF-α可能起作病理生理過程的“點(diǎn)火鍵”作用并對髓核誘導(dǎo)神經(jīng)損傷之后的病理生理級聯(lián)反應(yīng)的啟動起重要作用。然而TNF-α的主要作用可能來自募集、聚集甚至可能是滲出的白細(xì)胞，并且只有通過全身治療才可能實(shí)現(xiàn)成功的藥理阻斷。
總之，雖然從所述實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能完全了解TNF-α的確切作用，但是我們可以得出的結(jié)論是首次提出一種特異性物質(zhì)(TNF-α)與髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)根損傷有關(guān)。這一新的信息可能對繼續(xù)了解髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷以及提出干預(yù)TNF-α和相關(guān)物質(zhì)的藥理作用以治療坐骨神經(jīng)痛在將來臨床使用中的潛力問題是非常重要的。
因此，免疫組化證實(shí)在豬髓核細(xì)胞中存在TNF-α。局部應(yīng)用單克隆抗體阻斷TNF-α部分限制了髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)根傳導(dǎo)速率的降低，而用多西環(huán)素、infliximab及etanercept靜脈內(nèi)注射治療顯著阻斷這種降低作用。這些數(shù)據(jù)首次將一特異性物質(zhì)TNF-α與髓核誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷聯(lián)系起來。
已證實(shí)氨基胍通過抑制可誘導(dǎo)的一氧化氮合成酶從而抑制在神經(jīng)根損傷部位釋放一氧化氮(NO)，因此氨基胍是抑制TNF-α的釋放激發(fā)產(chǎn)生的化合物的一種化合物。
本發(fā)明的化合物可以各種劑型給予，如以片劑、膠囊劑、糖或膜包衣片劑、液體溶液劑的形式口服；以栓劑形式由直腸給藥；胃腸外給藥如肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)注射或滴注。對不同臨床綜合癥的治療方案必須適合于通常需要考慮的病理類型，還有給藥途徑、所述化合物的給藥形式以及受治患者的年齡、體重及病情。
通常對需要這類化合物的所有疾病采用口服途徑。在緊急情況下優(yōu)選靜脈內(nèi)注射。為此本發(fā)明的化合物可以約20-1500mg/天的劑量口服給藥。當(dāng)然可調(diào)節(jié)這些劑量方案以獲得最佳的治療反應(yīng)。
當(dāng)然，包含本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥用組合物的性質(zhì)取決于所需要的給藥途徑。該組合物可用常用成分以常規(guī)方式配制。例如本發(fā)明的組合物可以水溶液劑或油溶液劑或懸浮劑、片劑、小丸劑、明膠膠囊劑(硬膠囊或軟膠囊)、糖漿劑、滴劑或栓劑的形式給予。
因此，對于口服給藥，包含本發(fā)明化合物的藥用組合物優(yōu)選為片劑、小丸劑或明膠膠囊劑，它們含有所述活性物質(zhì)以及稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素；潤滑劑如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇；或者它們也可包含粘合劑如淀粉、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素、阿拉伯膠、黃芪膠、聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑如淀粉、海藻酸、海藻鹽、淀粉羥乙酸鈉、微晶纖維素；泡騰劑如碳酸鹽和碳酸；染料；甜料；濕潤劑如卵磷脂、聚山梨醇酯、十二烷基硫酸鹽以及用于配制藥用組合物的基本無毒的藥學(xué)惰性物質(zhì)。所述藥用組合物可以已知的方式生產(chǎn)，例如通過混合、成粒、制片、糖包衣或膜包衣工藝方法。在膜包衣情況下可選擇化合物以在腸道吸收的適當(dāng)部位釋放并獲得最大功效。因此可用pH依賴性膜形成劑以使其照此在腸道內(nèi)吸收，所以通常使用不同的鄰苯二甲酸鹽或丙烯酸/甲基丙烯酸衍生物以及聚合物。
用于口服給藥的液體分散劑可以是如糖漿劑、乳劑及懸浮劑。
所述糖漿劑可包含如蔗糖、蔗糖和甘油和/或甘露醇和/或山梨醇作為載體。
所述懸浮劑和乳劑可包含例如天然膠，如阿拉伯膠、黃原膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素、聚乙烯醇作為載體。
所述肌肉內(nèi)注射的懸浮劑或溶液劑可包含所述活性化合物以及藥學(xué)上可接受的載體如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二元醇如丙二醇，而且如果有此需要，可包含適當(dāng)量的利多卡因鹽酸鹽。也可加入激發(fā)注射效果的輔助劑。
所述靜脈內(nèi)注射或滴注的溶液劑可包含如無菌水或最好是無菌等滲鹽溶液作為載體以及用于活性化合物注射劑領(lǐng)域的輔助劑。
所述栓劑可包含所述活性化合物以及藥學(xué)上可接受的載體如可可油聚乙二醇、聚乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯表面活性劑或卵磷脂。
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權(quán)利要求
1. TNF-α抑制劑的用途，用于制備通過抑制椎間盤TNF-α治療脊柱病癥的藥用組合物，所述病癥例如為TNF-α釋放以及TNF-α釋放或存在激發(fā)產(chǎn)生的化合物引起的神經(jīng)根損傷，所述TNF-α選自堿或其加成鹽形式的除外甲潑尼龍的金屬蛋白酶抑制劑、包括化學(xué)修飾四環(huán)素的四環(huán)素類、喹諾酮、皮質(zhì)類固醇、肽胺哌啶酮、拉扎洛依類、己酮可可堿、異羥肟酸衍生物、碳環(huán)酸、napthopyrans、可溶性細(xì)胞因子受體、抗TNF-α單克隆抗體、氨力農(nóng)、匹莫苯、維司力農(nóng)、磷酸二酯酶III抑制劑、乳鐵蛋白和乳鐵蛋白衍生的類似物以及褪黑激素。
2. 按照權(quán)利要求1的用途，其中所述活性組分選自堿或加成鹽形式的四環(huán)素、多西環(huán)素、賴四甲環(huán)素、土霉素、米諾環(huán)素及化學(xué)修飾的四環(huán)素類去二甲基氨基四環(huán)素。
3. 按照權(quán)利要求2的用途，其中所述活性組分為多西環(huán)素。
4. 按照權(quán)利要求1的用途，其中所述活性組分選自堿或加成鹽形式的異羥肟酸化合物、碳環(huán)酸及其衍生物、肽胺哌啶酮、拉扎洛依類、己酮可可堿、napthopyrans、可溶性細(xì)胞因子受體、抗TNF-α單克隆抗體、氨力農(nóng)、匹莫苯、維司力農(nóng)、磷酸二酯酶III抑制劑、褪黑激素。
5. 按照權(quán)利要求1的用途，其中所述活性組分選自堿或加成鹽形式的諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、gatifloxacine、培氟沙星、洛美沙星及替馬氟沙星。
6. 按照權(quán)利要求1的用途，其中所述活性組分為堿或加成鹽形式的金屬蛋白酶抑制劑。
7. 按照權(quán)利要求1的用途，其中所述活性組分包括抑制由TNF-α的釋放激發(fā)產(chǎn)生的化合物的物質(zhì)，該物質(zhì)為堿或加成鹽形式，例如γ-干擾素、白介素-1及一氧化氮(NO)。
8. 治療包括人類在內(nèi)的哺乳動物脊柱病癥如TNF-α釋放引起的神經(jīng)根損傷的方法，包括給予藥學(xué)有效量的TNF-α抑制劑，該抑制劑選自堿或其加成鹽形式的除外甲潑尼龍的金屬蛋白酶抑制劑、包括化學(xué)修飾四環(huán)素的四環(huán)素類、喹諾酮、皮質(zhì)類固醇、肽胺哌啶酮、拉扎洛依類、己酮可可堿、異羥肟酸衍生物、碳環(huán)酸、napthopyrans、可溶性細(xì)胞因子受體、抗TNF-α單克隆抗體、氨力農(nóng)、匹莫苯、維司力農(nóng)、磷酸二酯酶III抑制劑、乳鐵蛋白和乳鐵蛋白衍生的類似物以及褪黑激素。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療TNF－α釋放引起的脊柱病癥的藥用組合物,該組合物包含有效量TNF－α抑制劑,本發(fā)明還涉及治療這類病癥的方法和應(yīng)用TNF－α抑制劑制備用于所述治療的藥用組合物。
文檔編號A61K39/395GK1326351SQ99813548
公開日2001年12月12日 申請日期1999年9月23日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月25日
發(fā)明者K·奧爾馬克, B·賴德維克 申請人:A+科學(xué)投資有限公司