專利名稱：：靈芝α－(1→3)－D－葡聚糖羧甲基化衍生物及其用途和制備方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤活性的α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物及其用途和制備方法，這種衍生物具有明顯的抗腫瘤活性，它屬于高分子化學領域，也屬于分子生物學領域。80年代以來的研究表明，靈芝水不溶性多糖是靈芝多糖的主要成分。Sone等人(Agric.Biol.Chem.49，2641，1985)的研究認為靈芝水不溶性多糖是靈芝子實體β-(1→3)-D-葡聚糖，但不具有抗腫瘤活性且不能被β-(1→3)-D-葡聚糖水解酶水解。通過化學修飾改變多糖生物活性的報道主要有Smith降解(藥學學報21，944，1986)，高碘酸氧化后硼氫化還原(Carbohydr.Res.115，273，1983)，羧甲基化(Eur.J.Cancer15，2110，1978)和硫酸酯化(Antimicrob.AgentsChemother.85，6132，1985；Biochem.Pharmcol.37，2887，1988；J.Immunopharmcol.12，225，1990)等，由此提高多糖在抗腫瘤、抗愛滋病毒及抗凝血等方面生物活性。本發(fā)明的目的是提供一種一種具有抗腫瘤活性的α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物及其用途和制備方法，該方法將利用靈芝子實體中含量最多而又無生物活性的水不溶性α-(1→3)-D-葡聚糖(含量占3％)，通過羧甲基化后變?yōu)樗苄匝苌?，從而使其具有明顯抗腫瘤活性和免疫功能，并可用作保健品，而且可望開發(fā)成天然藥物，是一種科技含量高的產(chǎn)物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下一種靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物，它是將α-(1→3)-D-葡聚糖溶于NaOH水溶液，恒溫80℃，在持續(xù)攪拌下緩慢滴加氯乙酸鈉水溶液，反應6-8小時后，取出反應物溶液用鹽酸中和至中性，并在甲醇中沉淀出產(chǎn)物，分別用甲醇水溶液和無水甲醇洗滌，得到的即為靈芝α-(1→3)D-葡聚糖羧甲基化衍生物。所制得的羧甲基化衍生物對植入小鼠(昆明種小白鼠)體內(nèi)的愛氏腹水腫瘤(EAC)都具有明顯的抑制作用。動物實驗結(jié)果見附表1。因此，本發(fā)明的靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物用于制備抗腫瘤藥物或提高人體免疫機能的保健品。制備本發(fā)明的靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物方法是首先從靈芝子實體中分離出水不溶性線型α-(1→3)-D-葡聚糖。其分子量為19.5×104，在1NNaOH中[α]D=170(degcm2g-1)。將其溶解在NaOH水溶液中，用氯乙酸鈉水溶液于80℃，羧甲基化6-8小時，用甲醇沉淀出產(chǎn)物。接著用甲醇水溶液洗滌，最后用無水甲醇洗滌，真空干燥后得羧甲基化衍生物。本發(fā)明建立了以靈芝子實體水不溶性線型α-(1→3)-D-葡聚糖為原料制備出水溶性羧甲基化衍生物的方法。動物體內(nèi)試驗證明，α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物具有顯著的抗腫瘤EAC活性，且無毒副作用，可用作保健品，作為抗腫瘤天然藥物也具有應用前景。本發(fā)明與已有技術(shù)相比有實質(zhì)性不同，而且有明顯的技術(shù)進步。本發(fā)明首次用靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖為原料，通過羧甲基衍生化使水不溶性且無生物活性的多糖變?yōu)樗苄裕铱鼓[瘤活性明顯的多糖衍生物。此法工藝簡單，操作方便，效果顯著。以下結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的說明實施例1靈芝子實體經(jīng)粉碎、脫脂、再用磷酸鹽緩沖液于100℃下提取出水溶性多糖后，用1MNaOH水溶液提取出水不溶性α-(1→3)-D-葡聚糖。將它的NaOH溶液在流水中透析7天，再對蒸餾水透析3天。此時NaOH被透析掉，多糖沉淀出來。然后將渾濁液進行離心，收集固體并進行真空干燥。由此得到白色粉末狀靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖。靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖1克，溶于50mLNaOH水溶液。恒溫80℃，在持續(xù)攪拌下緩慢滴加氯乙酸鈉水溶液40mL，并于30分鐘內(nèi)滴加完。在反應6小時后取出反應物溶液，用鹽酸中和至中性，在甲醇中沉淀出產(chǎn)物。將所得產(chǎn)物用甲醇水溶液洗滌6次，無水甲醇洗滌6次，真空干燥7天，由此得到白色粉狀的羧甲基化衍生物。產(chǎn)率為80～85％。附表1．靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖及其衍生物抗EAC腫瘤活性<tablesid="table1"num="001"><table>樣品劑量(mg/kg/day)抑制率(％)靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖12.0×70靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物34.7×735.6比較組5-氟尿嘧啶20.0×756.7</table></tables>權(quán)利要求1．一種靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物，其特征在于它是將α-(1→3)-D-葡聚糖溶于NaOH水溶液，恒溫80℃，在持續(xù)攪拌下緩慢滴加氯乙酸鈉水溶液，反應6-8小時后，取出反應物溶液用鹽酸中和至中性，并在甲醇中沉淀出產(chǎn)物，分別用甲醇水溶液和無水甲醇洗滌，得到的即為靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物。2．權(quán)利要求1所述的靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖的羧甲基化衍生物用于制備抗腫瘤藥物或提高人體免疫機能的保健品。3．一種制備權(quán)利要求1所述的靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物的方法，其特征在于它是將α-(1→3)-D-葡聚糖溶于NaOH水溶液，恒溫80℃，在持續(xù)攪拌下緩慢滴加氯乙酸鈉水溶液，反應6-8小時后，取出反應物溶液用鹽酸中和至中性，并在甲醇中沉淀出產(chǎn)物，分別用甲醇水溶液和無水甲醇洗滌，即得到靈芝α-(1→3)-D-葡聚糖羧甲基化衍生物。全文摘要本發(fā)明公開了具有抗腫瘤活性的靈芝α－(1→3)－D一葡聚糖羧甲基化衍生物的制備方法。該方法用堿水溶液首次從靈芝子實體中提取出水不溶性線型α－(1→3)－D－葡聚糖,該多糖不具有抗腫瘤活性。將α－(1→3)－D－葡聚糖溶解在NaOH水溶液中,用氯乙酸鈉水溶液在80℃對其羧甲基化6-8小時制備了該多糖的羧甲基衍生物。這種衍生物是水溶性的,對植入小鼠體內(nèi)的愛氏腹水瘤(EAC)的生長具有明顯的抑制作用,并且無毒副作用。文檔編號A61K31/716GK1283633SQ99116590公開日2001年2月14日申請日期1999年8月5日優(yōu)先權(quán)日1999年8月5日發(fā)明者張俐娜,陳敬華申請人:武漢大學