專利名稱：具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由下式(Ⅰ)表示的具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3-二苯基丙烷衍生物

其中=表示雙鍵或單鍵，R1表示氫或C1-C10烷基，R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元雜環(huán)，且該雜環(huán)包含氧作為雜原子，R3表示氫或C1-C7烷基，R4表示氫、羥基、或氧代，和R5和R6彼此獨(dú)立地表示氫或C1-C5烷基。
本發(fā)明還涉及制備如上定義的式(Ⅰ)化合物的新方法。
背景技術(shù)：
黑素是通過位于色素細(xì)胞中的酪氨酸酶的作用將酪氨酸轉(zhuǎn)化成多巴(氨基二氧環(huán)己二烯丙酸)，然后通過非酶氧化而形成。黑素分布在整個(gè)皮膚中，并具有保護(hù)身體不受各種刺激的重要功能。然而，據(jù)報(bào)導(dǎo)黑素瘤與黑素的過量產(chǎn)生有密切關(guān)系，并且還可能導(dǎo)致黑化皮膚、雀斑等等。因此，近些年防止黑素過量形成的各種化妝品和藥物得到廣泛的開發(fā)。
氫醌是迄今主要使用的用于黑素過量形成的防止劑。但是這種化合物還表現(xiàn)出諸如使黑素退化或致死突變、細(xì)胞功能破壞等副作用，因此目前在韓國(guó)、日本等國(guó)氫醌被禁止在化妝品中使用(參見J.Soc.CosmetChem.,42,361,1991)。此外，一種氫醌的糖衍生物，熊果苷已被開發(fā)成為商品，但被認(rèn)為具有很小的增白效果，而抗壞血酸、曲酸等具有較差的產(chǎn)品穩(wěn)定性以致使用范圍受到限制。自古以來(lái)，眾所周知，甘草根、桑白皮等等的提取物具有皮膚增白的效果。但是，這些提取物根據(jù)產(chǎn)地會(huì)非經(jīng)常性地表示出較差的效果，以致難于保持產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定(參見Fragrance J.,6,59,1990)。從構(gòu)樹中提取的Carzinol F(參見Chem.Parm,Bull.,34(5),1968,1986；Cosmetics & Toiletries,101,51,1995)由于對(duì)酪氨酸酶具有良好的抑制活性而被商品化。但該物質(zhì)也具有難以保持產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的問題，因?yàn)镃arzinol F也是一種提取物。具體說(shuō)，無(wú)法獲得足夠的Carzinol F的刺激性和穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，并且它屬于異戊二烯基兒茶酚族的化合物而具有不易合成的缺點(diǎn)。
發(fā)明公開因此，本發(fā)明者作了深入的研究，以便開發(fā)出一種具有通過少量便能產(chǎn)生卓越酪氨酸酶抑制活性的新化合物。而且所希望的化合物應(yīng)當(dāng)由起始原料容易合成并且穩(wěn)定。在研究過程中，本發(fā)明者分析了已知具有增白作用的各種天然物質(zhì)的效果和結(jié)構(gòu)。結(jié)果，我們開發(fā)出式(Ⅰ)的新1,3-二苯基丙烷衍生物，它能夠滿足上述目的，由此完成本發(fā)明。
本發(fā)明的目的是提供一種由下式(Ⅰ)表示的新1,3-二苯基丙烷衍生物

其中=表示雙鍵或單鍵；R1表示氫或C1-C10烷基；R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元雜環(huán)，且該雜環(huán)包含氧作為雜原子，R3表示氫或C1-C7烷基；R4表示氫、羥基、或氧代，并且R5和R6彼此獨(dú)立地表示氫或C1-C5烷基。
在對(duì)上式(Ⅰ)化合物取代基的定義中，單獨(dú)使用的或以復(fù)合形式如“烷氧基”或“烷氧基烷基”中使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指直鏈或支鏈的飽和烴基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基或幾種丁基異構(gòu)體。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備式(Ⅰ)化合物的新方法。發(fā)明的最佳實(shí)施方式在如上定義的式(Ⅰ)的新化合物中，優(yōu)選的化合物包括其中R1表示氫、甲基或乙基，R2表示甲基，或R1和R2一起表示

，R3表示氫或甲基，R4表示氫或羥基，R5和R6彼此獨(dú)立地表示甲基的化合物。
在式(Ⅰ)的化合物中，由下式(Ⅰa)表示的化合物，其中R4是氫，可以按下面的反應(yīng)式1來(lái)方便地制得，該反應(yīng)式為將下式(Ⅳ)表示的化合物在溶劑中還原成下式(Ⅴ)表示的化合物，然后去除保護(hù)基。
反應(yīng)式1

其中P1、P2和P3是羥基保護(hù)基，即P1表示芐基、甲基、乙基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或?qū)籽趸S基，
P2表示芐基、甲基或乙基，P3表示芐基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或?qū)籽趸S基，R1-R3、R5和R6如前述定義。
下面將較具體解釋上述反應(yīng)式1的過程。
在將化合物(Ⅳ)還原制備成化合物(Ⅴ)的反應(yīng)步驟中，可以優(yōu)選使用醚如乙醚、四氫呋喃(THF)作為溶劑，并且可以優(yōu)選使用氫化鋁鋰作為還原劑。最好在-30至30℃的溫度范圍下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)完成之后，將化合物(Ⅴ)中包含的保護(hù)基去除，得到化合物(Ⅰa)。根據(jù)所要去除的保護(hù)基，通過常規(guī)已知的方法可方便地將保護(hù)基去除。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以選擇出合適的保護(hù)條件。具體說(shuō)，當(dāng)保護(hù)基是芐基時(shí)，可以通過在乙酸乙酯中進(jìn)行氫化反應(yīng)或通過在鹽酸和乙酸的溶劑混合物中回流制備化合物(Ⅰa)。
化合物(Ⅳ)至化合物(Ⅴ)的還原反應(yīng)通?？梢愿鶕?jù)前述過程進(jìn)行。然而，化合物(Ⅴ)還可以通過預(yù)先將化合物(Ⅳ)的雙鍵經(jīng)過氫化(H2,Pd-C)還原得到下式(Ⅴ′)表示的酮化合物，然后將化合物(Ⅴ′)的酮基轉(zhuǎn)化成化合物(Ⅴ)的醇基而制備。
另一方面，由下式(Ⅰb)表示的化合物(其中R4是氧代)可以通過將化合物(Ⅴ′)包含的保護(hù)基去除而不是將其還原而制得?；衔?Ⅰb)還可以在氫硼化鈉或氫化鋁鋰存在下還原成化合物(Ⅰa)。
上述解釋的過程可以總結(jié)成下面的反應(yīng)式2。
反應(yīng)式2

其中P1、P2、P3、R1-R3、R5和R6如前述所定義。
在上述反應(yīng)式2中，化合物(Ⅳ)還原成化合物(Ⅴ′)可以通過在常溫常壓下將化合物(Ⅳ)包含的雙鍵在如乙酸乙酯的溶劑中氫化2小時(shí)而實(shí)現(xiàn)。通過氫硼化鈉或氫化鋁鋰處理，將酮化合物(Ⅴ′)還原成醇化合物(Ⅴ)。通過在化合物(Ⅴ′)上實(shí)行脫保護(hù)而獲得化合物(Ⅰb)的過程和上述反應(yīng)式1的過程一樣。具體說(shuō)，當(dāng)保護(hù)基是芐基時(shí)，化合物(Ⅰb)可以通過(ⅰ)在常溫和2-4大氣壓下將化合物(Ⅴ′)在乙酸乙酯溶劑中氫化10-15小時(shí)，或者通過(ⅱ)在35-55℃和常壓下于鹽酸和低級(jí)醇(甲醇、乙醇、異丙醇等)的溶劑混合物中氫化20分鐘-1小時(shí)而制備，或者還可以通過在條件(ⅰ)和(ⅱ)條件下將化合物(Ⅳ)氫化而直接獲得化合物(Ⅰb)。
在反應(yīng)式1中作為起始原料使用的化合物(Ⅳ)可以按照下面描述的反應(yīng)式3制備，該反應(yīng)式是通過將式(Ⅱ)化合物和式(Ⅲ)化合物在堿的存在下在溶劑中縮合。
反應(yīng)式3

其中P1、P2、P3、R2、R5和R6如前述所定義。
在該反應(yīng)中，優(yōu)選使用選自乙醇、四氫呋喃和二甲基甲酰胺的一種或幾種作為溶劑，并且使用選自氫氧化鈉、氫氧化鉀和氫化鈉中的一種或幾種作為堿。通過攪拌反應(yīng)物約5-24小時(shí)獲得所需產(chǎn)物。當(dāng)P1和P2各自不同時(shí)，化合物(Ⅱ)可由現(xiàn)有的化合物容易制得(參見Chem.Ber.,95.1413,1962；J.Med.Chem.,34,2152,1991)。
在式(Ⅰa)的化合物中，其中R1和R2一起形成雜環(huán)的化合物可以通過使用下式(Ⅱa)表示的化合物代替使用式(Ⅱ)的化合物，按照上述相同的過程制備(參見J.Chem.Soc.Perkin Trans I,1437,1981)。

最后，由下式(Ⅰc)表示的化合物，其中R4是氫，可以按照下面描述的反應(yīng)式4進(jìn)行制備，該反應(yīng)式是通過將化合物(Ⅴ)在酸的存在下于溶劑中脫水，形成由下式(Ⅵ)表示的化合物，然后將這樣制成的化合物(Ⅵ)還原和脫保護(hù)。
反應(yīng)式4

其中P1-P3、R1-R3、R5和R6如前述所定義。
下面將較具體解釋反應(yīng)式4描述的過程。
在選自硫酸、磷酸和對(duì)甲苯磺酸的一種或幾種酸的存在下，將化合物(Ⅴ)在選自苯、甲苯和二甲苯的一種或幾種溶劑中脫水，得到化合物(Ⅵ)。這個(gè)脫水過程優(yōu)選在80-100℃下進(jìn)行。將化合物(Ⅵ)通過氫化反應(yīng)，然后通過去除保護(hù)基，獲得所需化合物(Ⅰc)。去除保護(hù)基的過程按照反應(yīng)式1的相同過程進(jìn)行。
根據(jù)上述過程制備的化合物(Ⅰ)的典型實(shí)例在下表中列出。
表1

以下，本發(fā)明者按照下述過程鑒別了本發(fā)明的化合物(Ⅰ)對(duì)酪氨酸酶的抑制活性。所說(shuō)過程是，將樣品引入微板上，向其中加入磷酸緩沖液(pH6.8)和L-酪氨酸溶液。向上述混合物添加酪氨酸酶溶液開始酶反應(yīng)，然后在475nm吸光度下測(cè)定，計(jì)算酪氨酸酶抑制率(％)(參見實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1)。
另外，為測(cè)定化合物(Ⅰ)對(duì)黑素生物合成的抑制活性，將該化合物添加到包含B-16黑素瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基中并且培養(yǎng)。然后，將細(xì)胞離心提取黑素，并根據(jù)吸光度測(cè)定黑素的產(chǎn)生量(參見實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2)。
結(jié)果，鑒定出本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物對(duì)酪氨酸酶和黑素生物合成具有比現(xiàn)有增白物質(zhì)更優(yōu)越或相似的抑制作用。因此，具有這種效果的本發(fā)明的化合物可以應(yīng)用于藥品、非藥用供給品和化妝品。化合物(Ⅰ)的使用劑量可以隨制劑的類型、使用目的等有所不同。
本發(fā)明將通過以下制備例、實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)實(shí)施例作更具體的解釋。但應(yīng)當(dāng)指出這些實(shí)例旨在舉例說(shuō)明，而沒有以任何方式限制本發(fā)明范圍的目的。制備例1合成3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將1.7g(4.54mmol)的1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和2.9g(9.08mmol)的2,4-二芐氧基-苯甲醛溶解于32ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v))，向其中緩慢滴加6ml的50％氫氧化鈉水溶液。添加完畢之后，將反應(yīng)混合物在常溫下攪拌16小時(shí)。通過減壓蒸餾除去溶劑，并將所得殘余物用25ml水稀釋，然后用10％鹽酸水溶液中和至pH 7。用乙酸乙酯萃取該反應(yīng)溶液，然后減壓蒸餾除去包含在其中的溶劑。將所得的具有高粘度的混合物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得1.8g(2.61mmol，產(chǎn)率58％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例1合成4-[3-羥基-3-(2,5-二羥基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚步驟1制備3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙-1-醇

方法1將0.57g(0.83mmol)制備例1制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在5ml無(wú)水四氫呋喃中，并在-30℃下一點(diǎn)一點(diǎn)加入0.1g(2.52mmol)氫化鋁鋰(LAH)，同時(shí)攪拌。將反應(yīng)溶液攪拌1小時(shí)，將0.1ml水、0.1ml的15％氫氧化鈉水溶液和0.3ml水依次加入溶液中，然后將整個(gè)混合物攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉淀物并將濾液蒸餾，獲得白色固體，然后通過硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得0.56g(產(chǎn)率98％)的標(biāo)題化合物。方法2將0.15g(0.22mmol)制備例1制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在4ml乙酸乙酯(EtOAc)中。向該溶液緩慢添加5ml的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(2大氣壓)下反應(yīng)30分鐘。用50ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，然后過濾。將濾液減壓蒸餾，得到0.17g的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙酮。將0.17g(0.22mmol)這樣獲得的化合物溶解在2ml甲醇中，0℃下向其中一點(diǎn)一點(diǎn)加入20mg(0.53mmol)的氫硼化鈉(NaBH4)。混合物在0℃下攪拌10分鐘，然后通過減壓蒸餾除去溶劑。殘余物用10ml水稀釋，用乙酸乙酯萃取并通過無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾掉溶劑，并對(duì)殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，獲得0.1g(產(chǎn)率66％)的標(biāo)題化合物。
步驟2制備4-[3-羥基-3-(2,5-二羥基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將0.31g(0.45mmol)的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙-1-醇溶解在6ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加10mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應(yīng)12.5小時(shí)。反應(yīng)溶液用50ml乙酸乙酯稀釋，然后過濾。將濾液減壓蒸餾，獲得0.14g(產(chǎn)率100％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例2合成4-[3-(2,5-二羥基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將2.39g(3.46mmol)的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙-1-醇用100ml無(wú)水苯稀釋，并加入30mg對(duì)甲苯磺酸。在回流下將混合物攪拌4小時(shí)，將水除去。將這樣制得的溶液冷卻至室溫，并用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。用二氯甲烷萃取洗液，并將萃取物和原始有機(jī)層合并。然后，將合并的混合物干燥，減壓蒸餾并進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，得到2.1g(產(chǎn)率90％)4-[3-(2,5-二芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二芐氧基苯。將2.1g(3.12mmol)這樣獲得的化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入45mg的10％鈀催化劑。所得溶液在60psi氫氣壓下攪拌72小時(shí)，用50ml乙酸乙酯稀釋，然后過濾。濾液減壓蒸餾并進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到0.74g(產(chǎn)率79％)標(biāo)題化合物。制備例2合成3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(5-芐氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將0.23g(0.77mmol)的1-(5-芐氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和0.62g(1.94mmol)的2,4-二芐氧基-苯甲醛溶解于7ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，然后將1.5ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之后，混合物在常溫下攪拌16小時(shí)。除去包含在其中的溶劑，用水稀釋殘余物，并使用10％鹽酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取該溶液，并減壓蒸餾除去溶劑。將所得的具有高粘度的殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得0.30g(產(chǎn)率65％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例3合成4-[3-羥基-3-(5-羥基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-
合成4-[3-羥基-3-(5-羥基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將290mg(0.48mmol)制備例2制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(5-芐氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在5ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應(yīng)12小時(shí)。用100ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，然后過濾。將濾液減壓蒸餾獲得160mg(0.48mmol，產(chǎn)率98％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(5-羥基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將160mg(0.48mmol)這樣獲得的化合物溶解在2ml乙醚中，并在0℃下一點(diǎn)一點(diǎn)加入160mg(4.21mmol)氫化鋁鋰。攪拌1小時(shí)后，依次加入0.1ml水、0.1ml的15％氫氧化鈉水溶液和0.3ml水，并且將混合物攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉淀物，并將濾液蒸餾獲得白色固體，然后進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得158mg(產(chǎn)率98％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例4合成4-[3-(2-甲氧基-5-羥基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將550mg(0.92mmol)3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(5-芐氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在7ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，并在常壓的氫氣氛(1大氣壓)下反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)溶液用15ml乙酸乙酯稀釋，然后過濾。將濾液減壓蒸餾獲得552mg(產(chǎn)率100％)3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2-甲氧基-5-芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將225mg(0.37mmol)這樣獲得的化合物用NaBH4還原成醇化合物，然后用10ml無(wú)水苯稀釋。加入30mg對(duì)甲苯磺酸，并在回流下將混合物攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用飽和的含碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。洗液再用二氯甲烷萃取，并將萃取物和原始有機(jī)層合并。然后將合并的混合物干燥，減壓蒸餾，并進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，獲得169mg(0.29mmol,產(chǎn)率78％)4-[3-(2-甲氧基-5-芐氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二芐氧基苯。將160mg(0.27mmol)這樣獲得的化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入45mg的10％的鈀催化劑。所得混合物在60psi氫氣壓下攪拌48小時(shí)，用10ml乙酸乙酯稀釋，然后過濾。將濾液減壓蒸餾并將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到74mg(0.234mmol，產(chǎn)率86％)標(biāo)題化合物。制備例3合成3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2-芐氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將1.22g(4.09mmol)的1-(2-芐氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和2.8g(9mmol)的2,4-二芐氧基-苯甲醛溶解于40ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，然后將10ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之后，混合物在常溫下攪拌16小時(shí)。通過減壓蒸餾除去包含在其中的溶劑，用40ml水稀釋所得的殘余物，然后使用10％鹽酸水溶液中和至pH 7。用乙酸乙酯萃取該溶液，并減壓蒸餾除去萃取物中包含的溶劑。將所得的具有高粘度的混合物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得2.37g(產(chǎn)率97％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例5合成4-[3-羥基-3-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將1.28g(0.21mmol)制備例3制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2-芐氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在6ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加45mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下蒸餾獲得660mg(產(chǎn)率95％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將660mg(2mmol)這樣獲得的化合物溶解在12ml乙醚中，并在0℃下一點(diǎn)一點(diǎn)加入750mg氫化鋁鋰，然后將混合物攪拌1小時(shí)。之后依次將1ml水、1ml的15％氫氧化鈉水溶液和3ml水加入反應(yīng)溶液中，并且將混合物攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉淀物，并將濾液蒸餾獲得白色固體，然后進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得524mg(1.58mmol，產(chǎn)率79％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例6合成4-[3-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將300mg(0.50mmol)3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2-芐氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在3ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，在常壓氫氣氛(1大氣壓)下反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)溶液用20ml乙酸乙酯稀釋，然后過濾。將濾液減壓蒸餾獲得3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2-芐氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。這樣獲得的化合物不進(jìn)行進(jìn)一步純化，而用40mg NaBH4的5ml甲醇溶液還原成醇化合物。將包含醇化合物的反應(yīng)溶液減壓蒸餾，除去甲醇，并用二氯甲烷萃取，獲得277mg(產(chǎn)率92％)的醇化合物，然后用10ml無(wú)水苯進(jìn)行稀釋。加入30mg對(duì)甲苯磺酸，并在回流下將混合物攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。洗液再用二氯甲烷萃取，并將萃取物和原始有機(jī)層合并。然后，將合并的混合物干燥，減壓蒸餾，并進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，獲得244mg(0.42mmol，產(chǎn)率91％)4-[3-(2-芐氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二芐氧基苯。將這樣獲得的化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入45mg的10％鈀催化劑。所得混合物在60psi氫氣氛下攪拌20小時(shí)，用10ml乙酸乙酯稀釋，然后過濾。將濾液減壓蒸餾并將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到118mg(產(chǎn)率88％)標(biāo)題化合物。制備例4制備例4合成3-(2，4-二芐氧基-苯基)-1-(2-芐氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

將310mg(1mmol)的l-(2-芐氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和650mg(2.1mmol)的2,4-二芐氧基-苯甲醛溶解于15ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，然后將5ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之后，混合物在常溫下攪拌24小時(shí)。通過減壓蒸餾除去包含在反應(yīng)溶液中的溶劑，用10ml水稀釋所得的殘余物，然后使用10％鹽酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取該溶液，并減壓蒸餾除去萃取物中包含的溶劑。將所得的殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得440mg(產(chǎn)率72％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例7合成4-[3-羥基-3-(2-羥基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將440mg(0.72mmol)制備例4制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2-芐氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在6ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加15mg的10％鈀-碳催化劑，在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應(yīng)15小時(shí)。用30ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，然后過濾。將濾液減壓蒸餾獲得205mg(產(chǎn)率91％)3-(2,4-二羥基-苯基)-l-(2-羥基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將205mg(0.66mmol)這樣獲得的化合物溶解在12ml乙醚中，并在0℃下一點(diǎn)一點(diǎn)加入200mg氫化鋁鋰，然后將混合物攪拌1小時(shí)。之后依次將0.2ml水、0.2ml的15％氫氧化鈉水溶液和0 6ml水加入反應(yīng)溶液中，所得溶液攪拌另外30分鐘。濾掉所得的沉淀物，并將濾液蒸餾獲得白色固體，然后進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得160mg(產(chǎn)率70％)標(biāo)題化合物。制備例5合成3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(6-芐氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-丙烯酮

將1.69g(5mmol)的1-(6-芐氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-乙酮和3.2g(10.5mmol)的2,4-二芐氧基-苯甲醛溶解于50ml乙醇和四氫呋喃的混合溶劑中(1/1,v/v)，將10ml的50％氫氧化鈉水溶液緩慢滴加在其中。添加完畢之后，混合物在常溫下攪拌16小時(shí)。通過減壓蒸餾除去包含在反應(yīng)溶液中的溶劑，用50ml水稀釋所得的殘余物，然后使用10％鹽酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取該溶液，并減壓蒸餾除去萃取物中包含的溶劑。將所得的殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，獲得2.13g(產(chǎn)率68％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例8合成4-[3-羥基-3-(6-羥基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將2.13g(3.33mmol)制備例5制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(6-芐氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-丙烯酮溶解在50ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加30ml的10％鈀-碳催化劑，然后在加壓的氫氣氛(4大氣壓)下反應(yīng)12小時(shí)。用50ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，然后過濾。將濾液減壓蒸餾獲得1.14g(0.31mmol，產(chǎn)率94％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(6-羥基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-丙酮。將1.14g這樣獲得的化合物溶解在10ml乙醚中，并在0℃下一點(diǎn)一點(diǎn)加入1.0g氫化鋁鋰，然后將混合物攪拌1小時(shí)。之后依次將1ml水、1ml的15％氫氧化鈉水的沉淀物，并將濾液蒸餾獲得白色固體，然后進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，獲得1.04g(2.80mmol，產(chǎn)率90％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例9合成4-[3-(6-羥基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將550mg(0.86mmol)制備例5制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(6-芐氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-丙烯酮溶解在7ml乙酸乙酯中。向該溶液緩慢添加10mg的10％鈀-碳催化劑，然后在常壓氫氣氛(1大氣壓)下反應(yīng)2小時(shí)。用50ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，然后過濾。將濾液減壓蒸餾獲得478mg(0.75mmol，產(chǎn)率87％)3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(6-芐氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氫吡喃-5-基)-丙酮。將200mg(0.31mmol)這樣獲得的化合物用125mgNaBH4還原成醇化合物，然后用無(wú)水苯稀釋。其中加入30mg對(duì)甲苯磺酸，并將混合物攪拌4小時(shí)，同時(shí)回流。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。洗液再用二氯甲烷萃取，并將萃取物和原始有機(jī)層合并。然后，將合并的混合物干燥，減壓蒸餾，并進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，獲得169mg(0.271mmol，產(chǎn)率88％)的烯化合物。將160mg(0.26mmol)這樣獲得的烯化合物用30ml乙酸乙酯稀釋，向其中緩慢加入4.5mg的10％鈀催化劑。所得混合物在60psi氫氣壓下攪拌48小時(shí)，用10ml乙酸乙酯稀釋，然后過濾。將濾液減壓蒸餾并將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=3/1,v/v)，得到74mg(0.21mmol，產(chǎn)率80％)標(biāo)題化合物。實(shí)施例10合成4-[3-羥基-3-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

將5.5g(9.2mmol)制備例3制備的3-(2,4-二芐氧基-苯基)-1-(2-芐氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在20ml乙醇和乙酸乙酯的混合溶劑(1/3,v/v)中，向該溶液緩慢添加50mg的10％鈀-碳催化劑。將混合物溫度升至40℃，然后在常壓下進(jìn)行0.5小時(shí)的氫化。用60ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，過濾，然后將濾液減壓蒸餾。殘余物用乙醚稀釋，用碳酸氫鈉水溶液洗滌，通過無(wú)水硫酸鈉干燥，然后過濾。濾液減壓蒸餾獲得2.88g(8.73mmol，產(chǎn)率95％)3-(2,4-二羥基-苯基)-1-(2-羥基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。將2.88g(8.73mmol)這樣獲得的化合物溶解在12ml甲醇中，并在0℃下一點(diǎn)一點(diǎn)加入165mg(4.37mmol)氫化鋁鋰?；旌衔镌诔叵聰嚢?小時(shí)，減壓蒸餾，用10ml乙酸乙酯稀釋，然后用10ml水洗滌三次。將分離的有機(jī)層通過無(wú)水硫酸鈉干燥，然后過濾。濾液減壓蒸餾并將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜純化(洗脫液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，獲得767mg(2.31mmol，產(chǎn)率80％)標(biāo)題化合物。
根據(jù)上面制備例和實(shí)施例，合成表1列出的化合物，且其物化性質(zhì)在下表2中給出。
表2

根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1和2測(cè)定本發(fā)明化合物(Ⅰ)對(duì)酪氨酸酶和黑素生物合成的抑制效果。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1酪氨酸酶抑制活性本實(shí)驗(yàn)使用從蘑菇中提取的酪氨酸酶(Sigma生產(chǎn))。首先，將底物L(fēng)-酪氨酸溶解在磷酸緩沖液(0.05M,pH6.8)中達(dá)到1.5mM濃度，然后將0.01ml的該溶液放入分光光度計(jì)的0.3ml比色杯中。將作為輔助因子(cofacter)的多巴制備成濃度0.06mM的溶液，并且將0.01ml的多巴溶液添加到底物溶液中。向所得的混合物添加式(Ⅰ)的抑制劑和磷酸緩沖液，達(dá)到總共0.31ml體積。通過添加0.1ml酶溶液開始反應(yīng)，其中所說(shuō)的酶溶液是將酪氨酸酶溶解在磷酸緩沖液中達(dá)到60U/ml的濃度。用0.1ml磷酸緩沖溶液代替酶溶液添加到空白樣品中。反應(yīng)在37℃下進(jìn)行10分鐘，然后使用分光光度計(jì)(Beckman DU-7500)在475nm下測(cè)定吸光度。
根據(jù)在475nm下的吸光度計(jì)算化合物(Ⅰ)對(duì)酪氨酸酶的抑制率(％)，并且將酶活性抑制率(％)達(dá)到50％時(shí)抑制劑的濃度測(cè)定為IC50值。抑制率(％)可以根據(jù)下式進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果示于下表3中。
抑制率(％)=(A-B)/A×100上式中，A表示添加抑制劑時(shí)475nm下的吸光度，B表示未加抑制劑時(shí)475nm下的吸光度。
表3酪氨酸酶的抑制活性

正如從表3結(jié)果中看出的，本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物表現(xiàn)出比現(xiàn)有抑制劑更優(yōu)越或相似的酪氨酸酶抑制活性。因此，將本發(fā)明化合物用于這種用途是有利的。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2對(duì)B-16小鼠黑素瘤細(xì)胞中黑素生物合成的抑制效果將本發(fā)明的化合物添加到B-16小鼠黑素瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基中，并進(jìn)行觀察，以便實(shí)驗(yàn)其細(xì)胞水平的增白效果。
將B-16小鼠黑素瘤細(xì)胞在培養(yǎng)基中培養(yǎng)成密度為106細(xì)胞/皿，分別加入各種濃度的化合物，并且培養(yǎng)3天。用胰蛋白酶處理從培養(yǎng)皿中分離細(xì)胞，然后離心以提取黑素(其中小丸用2N高氯酸提取)。將1ml的1N氫氧化鈉水溶液添加到提取的黑素中，并將所得混合物加熱至將黑素溶解。通過分光光度計(jì)在400nm下測(cè)定吸光度，并用吸光度/單元細(xì)胞數(shù)(106細(xì)胞)來(lái)表示黑素所產(chǎn)生的數(shù)量。將酶活性抑制率(％)達(dá)到50％時(shí)的抑制劑濃度測(cè)定作為IC50值，結(jié)果示于下表4中。
表4

從表4結(jié)果中可以看出本發(fā)明的化合物對(duì)小鼠黑素瘤細(xì)胞中的黑素生物合成表現(xiàn)出卓越的抑制活性。因此，可以認(rèn)為本發(fā)明的化合物通過防止黑素的合成表現(xiàn)出突出的增白活性，這主要是由于對(duì)酪氨酸酶的抑制活性。
權(quán)利要求
1．一種由下式(Ⅰ)表示的1,3-二苯基丙烷衍生物
其中=表示雙鍵或單鍵，R1表示氫或C1-C10烷基，R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元雜環(huán)，且該雜環(huán)包含氧作為雜原子，R3表示氫或C1-C7烷基，R4表示氫、羥基、或氧代，并且R5和R6彼此獨(dú)立地表示氫或C1-C5烷基。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R1表示氫、甲基或乙基，R2表示甲基，或R1和R2一起表示
，R3表示氫或甲基，R4表示氫或羥基，以及R5和R6彼此獨(dú)立地表示甲基。
3．一種下式(Ⅰa)所示化合物的制備方法，
其中R1-R3、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，該方法包括，在溶劑中將下式(Ⅳ)表示的化合物還原，
其中P1表示芐基、甲基、乙基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或?qū)籽趸S基，P2表示芐基、甲基或乙基，P3表示芐基、四氫吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或?qū)籽趸S基，R2、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，得到下式(Ⅴ)表示的化合物，
其中P1-P3如上所定義，R2、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，然后除去式(Ⅴ)化合物中的保護(hù)基。
4．權(quán)利要求3的方法，其中還原是在選自乙醚和四氫呋喃(THF)的溶劑中在氫化鋁鋰(LAH)的存在下進(jìn)行。
5．權(quán)利要求4的方法，其中還原是在-30至30℃下進(jìn)行。
6．一種下式(Ⅰb)所示化合物的制備方法，
其中R1-R3、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，該方法包括，在溶劑中將下式(Ⅳ)所示化合物的雙鍵氫化
其中P1-P3如權(quán)利要求3所定義，R2、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，以便得到下式(Ⅴ′)表示的化合物，
其中P1-P3如權(quán)利要求3所定義，R2、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，然后除去式(Ⅴ′)化合物中的保護(hù)基。
7．權(quán)利要求6的方法，其中溶劑是乙酸乙酯。
8．權(quán)利要求6的方法，其中保護(hù)基是芐基，且式(Ⅰb)的化合物從式(Ⅴ′)化合物中獲得，或者通過在乙酸乙酯或者乙酸乙酯和低級(jí)醇的混合溶劑中進(jìn)行氫化由化合物(Ⅳ)直接獲得。
9．權(quán)利要求8的方法，其中溶劑是乙酸乙酯，且氫化在常溫和2-4大氣壓下進(jìn)行10-15小時(shí)。
10．權(quán)利要求8的方法，其中溶劑是乙酸乙酯和低級(jí)醇的混合物，且氫化在35-55℃和常壓下進(jìn)行20分鐘-1小時(shí)。
11．一種下式(Ⅰc)所示化合物的制備方法，
其中R1-R3、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，該方法包括，在酸的存在下于溶劑中將下式(Ⅴ)表示的化合物脫水，
其中P1-P3如權(quán)利要求3所定義，R2、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，得到下式(Ⅵ)表示的化合物，
其中P1-P3如權(quán)利要求3所定義，R2、R5和R6如權(quán)利要求1所定義，然后將所得式(Ⅵ)的化合物還原和脫保護(hù)。
12．權(quán)利要求11的方法，其中脫水在選自苯、甲苯和二甲苯的溶劑中，在選自硫酸、磷酸和對(duì)甲苯磺酸的酸的存在下進(jìn)行。
13．權(quán)利要求12的方法，其中脫水在80-100℃下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有酪氨酸酶抑制活性的由式(Ⅰ)表示的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其制備方法:其中－表示雙鍵或單鍵;R
文檔編號(hào)A61K8/00GK1217709SQ98800210
公開日1999年5月26日 申請(qǐng)日期1998年3月2日 優(yōu)先權(quán)日1997年3月6日
發(fā)明者李映昊, 金京愛, 李賢浩, 崔鍾權(quán), 李相和 申請(qǐng)人:Lg化學(xué)株式會(huì)社