專利名稱：雞新城疫油佐劑滅活苗及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有抗原或抗體的醫(yī)制品，具體講是雞新城疫疫苗及其制備方法。
雞新城疫(ND)是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。目前，在養(yǎng)雞生產(chǎn)中主要應(yīng)用ND弱毒凍干苗，該苗免疫效果易受母源抗體影響，免疫后出現(xiàn)雞群抗體不高或參差不齊，并且有相當(dāng)一部分雞抗體水平在免疫保護(hù)的臨界線以下，一旦有強(qiáng)毒侵入便會(huì)導(dǎo)致雞新城疫在雞群中爆發(fā)流行。此外，現(xiàn)有飼料原糧中硒的含量低于0.03～0.05PPm。硒具有加強(qiáng)原發(fā)性免疫反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)物體產(chǎn)生的IgM抗體與中和抗體等功能。
本發(fā)明的目的在于提供一種雞新城疫油佐劑滅活苗及其制備方法，所制得的疫苗給雞注射后在體內(nèi)緩慢釋放，促進(jìn)雞產(chǎn)生免疫反應(yīng)。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種雞新城疫油佐劑滅活苗，該疫苗由礦物油佐劑包裹著含雞新城疫病毒(NDV)抗原的水相。
上述疫苗的制備方法是取雞新城疫病毒(NDV)給健康雞胚(9～10日齡)接種，72小時(shí)后收集雞胚尿囊液，經(jīng)滅活后加入吐溫--80和亞硒酸鈉制成水相，再與礦物油(油相)按1∶3比例經(jīng)膠體磨充分混合后制成油包水乳劑。
將NDV經(jīng)雞胚接種后收集雞胚尿囊液，經(jīng)滅活后加硒，再與油相混合成油包水乳劑，使用本發(fā)明提供的疫苗給雞免疫注射后，乳劑的油滴會(huì)在雞體內(nèi)逐漸釋放出來(lái)，從而起到少量多次抗原刺激作用，增強(qiáng)并維持雞體內(nèi)免疫反應(yīng)。
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例雞新城疫油佐劑滅活苗，是由礦物油佐劑包裹著含雞新城疫病毒(NDV)抗原的水相，該疫苗中含有硒，其外觀特征為白色乳劑，且無(wú)分層現(xiàn)象。
上述雞新城疫油佐劑滅活苗，是采用以下方法制得的取雞新城疫病毒(NDV)給健康雞胚(9～10日齡)接種，72小時(shí)后收集雞胚尿囊液，經(jīng)滅活后加入吐溫--80和亞硒酸鈉制成水相，再與礦物油(油相)按1∶3比例經(jīng)膠體磨充分混合后制成油包水乳劑。
上述制備方法的具體實(shí)施過(guò)程如下步驟一以NDV毒株按常規(guī)法接種9～10齡雞胚，72小時(shí)后收集雞胚尿囊液，加入4％的甲醛滅活，隨加隨搖，使甲醛最終濃度為0.1％。
該步驟主要是用于滅活雞胚尿囊液病毒。另外，還可采用其它一些制劑進(jìn)行滅活，具體內(nèi)容有a:β--丙內(nèi)脂滅活在雞胚尿囊液中加入10％的β--丙內(nèi)脂，使其最終濃度為1/1500；b乙酰苯乙烯亞胺(Acety lethy lenimine-AEI)滅活在尿囊液中加入10％的AEI，使最終濃度為0.1％，置30℃溫箱中滅活8小時(shí)取出，加入20％的Na2SO3·5H2O溶液，使最終含量為0.5％，以中和AEI。
步驟二取滅活后的雞胚尿囊液，該菌液每100份加入4份的吐溫--80，然后加入1％的亞硒酸鈉，使亞硒酸鈉的濃度為5PPm，制成水相。
此過(guò)程一方面用于提供硒源，另一方面，吐溫--80(TWeen--80)屬免疫增強(qiáng)劑、穩(wěn)定劑?；瘜W(xué)名為聚山梨醇脂--80，同類(lèi)品有吐溫--20。
步驟三制備油相，以10#白油94份加6份司本--80混合后，每100毫升混合溶液再加2克硬脂酸鋁為油佐劑。司本--80(SPan)，用作乳化劑和增溶劑，化學(xué)名為失水山梨醇單油酸脂，SPan--80的同類(lèi)品有SPan--20,SPan--40,SPan-60。所述硬脂酸鋁屬油質(zhì)注射劑的助懸劑。
步驟四將上述水相與油相按1∶3的比例經(jīng)膠體磨充分混合制成油包水滅活苗。
本發(fā)明制得的油佐劑滅活苗，使用該疫苗給雞進(jìn)行免疫注射后，乳劑油滴會(huì)在雞體內(nèi)逐漸吸收，從而將抗原緩慢釋放，以達(dá)到刺激和維持雞體免疫反應(yīng)的效果。
權(quán)利要求
1．一種雞新城疫油佐劑滅活苗，其特征在于該疫苗由礦物油佐劑包裹著含雞新城疫病毒(NDV)抗原的水相。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞新城疫油佐劑滅活苗，其特征在于疫苗中含有硒。
3．一種制備權(quán)利要求1所述的雞新城疫油佐劑滅活苗的方法，其特征在于取雞新城疫病毒(NDV)給健康雞胚(9～10日齡)接種，72小時(shí)后收集雞胚尿囊液，經(jīng)滅活后加入吐溫--80和亞硒酸鈉制成水相，再與礦物油(油相)按1∶3比例經(jīng)膠體磨充分混合后制成油包水乳劑。
4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于將收集的雞胚尿囊液，加入4％的甲醛滅活，使甲醛最終濃度為0.1％。
5．根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于取滅活后的雞胚尿囊液，該菌液每100份加入4份的吐溫--80，然后加入1％的亞硒酸鈉并使其最終濃度為5PPm，制成水相；以10#白油94份加6份司本--80混合后，每100毫升混合液再加2克硬脂酸鋁為油佐劑制得油相；將上述水相與油相接1∶3的比例經(jīng)膠體磨充分混合制成油包水滅活苗。
全文摘要
本發(fā)明涉及雞新城免疫苗及其制備方法,該疫苗是一種用含硒的抗原液(水相)與礦物油(油相)按1∶3的比例充分混合后獲得的油包水乳劑,其制備方法主要包括取NDV接種雞胚后回收雞胚尿囊液,經(jīng)滅活后加入吐溫－80和硒,再與礦物油經(jīng)膠體磨充分混合制成乳劑,使用本發(fā)明提供的疫苗給雞注射,乳劑油滴會(huì)在雞體內(nèi)逐漸吸收,從而將抗原緩慢釋放,以達(dá)到刺激和維持雞體免疫反應(yīng)的作用,制備方法操作簡(jiǎn)便,疫苗免疫效果可靠。
文檔編號(hào)A61K39/155GK1210740SQ9811894
公開(kāi)日1999年3月17日 申請(qǐng)日期1998年9月11日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月11日
發(fā)明者曾明華, 魏建忠, 蔡文波 申請(qǐng)人:曾明華, 魏建忠, 蔡文波