專利名稱：使粘液的粘度最佳化并且刺激腸功能的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物學(xué)領(lǐng)域，更具體地說涉及治療化學(xué)。
本發(fā)明涉及基于酶或含有該酶的酶復(fù)合物的藥物和/或食用組合物，它具有預(yù)防和/或治療疾病的作用。
更具體地說該發(fā)明涉及基于酶或含有該酶的酶復(fù)合物的藥物組合物，該組合物刺激腸功能，因此具有預(yù)防和/或治療與老化相關(guān)的退化疾病的作用。
本發(fā)明特定地涉及含有作為活性成分的一種或多種酶的藥物組合物，所述酶是從通過在以申請(qǐng)人的名義的法國專利2600340定義的條件下培養(yǎng)弗氏鏈霉菌屬獲得酶復(fù)合物提取的或含于所述酶復(fù)合物。
上面提到的專利已經(jīng)描述了從絲狀細(xì)菌，弗氏鏈霉菌屬獲得的新的蛋白水解的復(fù)合物的生產(chǎn)方法以及在畜牧學(xué)中的應(yīng)用；下文中將該復(fù)合物用現(xiàn)在的商品名稱PANSTIMASE命名。
絲狀細(xì)菌同時(shí)產(chǎn)生至少5種蛋白酶和2種肽酶；這7種酶已經(jīng)由K.MORIHARA等人(Biochem.Biophys.Acta,1967,139,382)描述。當(dāng)將他們一起加入到由動(dòng)物消耗的食物時(shí)，這7種酶引起腸粘液的粘度過度降低，并且然后能夠?qū)е履c壁潰瘍。因此如果這7種酶一起使用時(shí)，在畜牧學(xué)中有負(fù)作用。
在上面提到的專利指明的條件下，獲得了僅由3種胞外蛋白酶組成的PANSTIMASE，其中一種占優(yōu)勢(shì)，而且不包括胞內(nèi)蛋白酶和肽酶。當(dāng)加入到動(dòng)物消耗的食物中時(shí)，PANSTIMASE導(dǎo)致腸粘液粘度中等降低，并且不可能夠損壞腸壁。
對(duì)腸粘液的蛋白質(zhì)具有相對(duì)中等的作用的同時(shí)，PANSTIMASE對(duì)用于食物組合物的粗原料蛋白質(zhì)具有更強(qiáng)的作用，這提高了其消化能力。
除了其對(duì)腸道的直接作用以外，PANSTIMASE對(duì)各種器官具有間接的作用，特別是對(duì)胰臟；如在較早的專利中已經(jīng)指明的，已經(jīng)證明它導(dǎo)致該器官的酶濃度或酶原濃度增加50-80％。
由于這些有利的作用，現(xiàn)在將PANSTIMASE用作為加入到計(jì)劃用于動(dòng)物食物的營養(yǎng)補(bǔ)充物以提高其生長或生產(chǎn)能力。因此可以證明它也提高了動(dòng)物對(duì)感染，細(xì)菌或病毒的疾病的抗性，并且降低了老化的不利作用。
這些發(fā)現(xiàn)表明PANSTIMASE可以用于動(dòng)物和人的治療或用作為治療時(shí)的活性成分，也就是說，由弗氏鏈霉菌產(chǎn)生的占優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶或這種占優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶與由弗氏鏈霉菌產(chǎn)生的至少其他兩種胞外蛋白酶之一的混合物具有所述的作用。
與用于動(dòng)物的產(chǎn)品相比，藥物組合物的活性成分需要額外的純化。在較早的專利指明的條件下，獲得了非純化的PANSTIMAS3E，其效價(jià)至少相等于2,000A.U./毫克。
本文中將Anson單位(簡寫為A.U.)定義為當(dāng)在變性的血紅蛋白存在下，在25℃和pH7.5時(shí)培育10分鐘，從該底物釋放1mcg酪氨酸等同物所需要的酶的量，該量是采用分光光度計(jì)在280nm處測(cè)得不能用三氯醋酸沉淀的過濾物的吸收值。
在較早的專利指明的條件進(jìn)行各種調(diào)整可以獲得半純化的PANSTIMASE，其效價(jià)至少相等于4,000A.U./毫克。分步沉淀或在柱上通過的常規(guī)技術(shù)使構(gòu)成PANSTIMASE的3種蛋白酶各個(gè)獲得分離。優(yōu)勢(shì)胞外酶的比活性大于100,000A.U./毫克，并且顯著高于其他2種蛋白酶；其分子量是約32kDa，并且其等電點(diǎn)是約7.0。
該優(yōu)勢(shì)的蛋白酶僅解釋了PANSTIMASE的主要的生理學(xué)特性，特別是由于這樣的事實(shí)它僅對(duì)兩個(gè)重要的蛋白質(zhì)霍亂毒素和膠原具有特征性的作用。
霍亂毒素是由某些致病的大腸桿菌產(chǎn)生的LT毒素的同系物；它是由有侵襲性的亞單位A和有增強(qiáng)免疫性的亞單位B組成的。在相當(dāng)于其存在于接受PANSTIMASE補(bǔ)充的食物的動(dòng)物腸道的低濃度時(shí)，優(yōu)勢(shì)的蛋白酶選擇性地破壞亞單位A，而不破壞亞單位B，因此，保持了增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的能力。
膠原是動(dòng)物界最豐富的蛋白質(zhì)對(duì)于哺乳動(dòng)物，各種類型的膠原占總蛋白的約1/3。已知年幼動(dòng)物的膠原在熱水中的溶解度是高的，而年齡較大的動(dòng)物，則溶解度是低的。
當(dāng)用優(yōu)勢(shì)的蛋白酶處理年齡較大的動(dòng)物的膠原時(shí)，其在熱水中的溶解度增加并且變成相當(dāng)于年幼的動(dòng)物。從此可以總結(jié)出該蛋白酶引起了膠原的“恢復(fù)活力”。
有關(guān)動(dòng)物的大多數(shù)結(jié)果對(duì)應(yīng)于用未純化或半純化的PANSTIMASE進(jìn)行的測(cè)試。對(duì)于人，可以使用半純化PANSTIMASE或者一種或多種其構(gòu)成的純化蛋白酶，就是說優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶或該優(yōu)勢(shì)的胞外酶與其他兩種胞外蛋白酶之一的混合物，或與一種蛋白酶或多種蛋白酶的混合物，其中蛋白酶的氨基酸序列與那些優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶或與那些如上定義的蛋白酶的混合物具有至少60％同源性。
本發(fā)明涉及包括作為活性成分的優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶的藥物和/或食用組合物，所述蛋白酶是通過培養(yǎng)弗氏鏈霉菌產(chǎn)生的，它具有大于100,000A.U./毫克的比活性，分子量介于30-36kDa，優(yōu)選32kDa，等電點(diǎn)約是7.0，并且能夠選擇性地破壞霍亂毒素的亞單位A而不破壞亞單位B，在所述組合物中的蛋白酶是混合物形式或與生理學(xué)可接受的，無毒性和惰性賦形劑或載體結(jié)合。
本發(fā)明還涉及含有作為活性成份的如上定義的優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶或該優(yōu)勢(shì)的胞外酶，與由弗氏鏈霉菌培養(yǎng)產(chǎn)生的至少其他兩種胞外蛋白酶之一的混合物或與一種蛋白酶或多種蛋白酶的混合物的藥物和/或食用組合物，或者，其中一種或多種蛋白酶的氨基酸序列與那些優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶或與那些如上定義的蛋白酶的混合物具有至少60％同源性，在所述組合物中的蛋白酶是混合物形式或與惰性，無毒性，生理學(xué)可接受的賦形劑或載體結(jié)合。同源性的蛋白酶可以是各種微生物特別是弗氏鏈霉菌或灰色鏈霉菌培養(yǎng)物的提取物。
通過口服、肺或生殖器途徑可以將5,000到100,000 A.U.之間的劑量的活性成份給藥。為了該目的，混合或與常規(guī)的賦形劑結(jié)合形式的活性成份制備成適用于這些類型的給藥方式的藥劑形式之一。
在藥物制備技術(shù)中特別將活性成份以常規(guī)形式之一存在，例如片劑，包膜的片劑，明膠膠囊，膠囊，粉劑，溶液或懸浮液，干氣霧劑，橢圓形栓劑和陰道片劑。
每天給藥1-3次，這取決于治療的需要。對(duì)于動(dòng)物獲得的結(jié)果都似乎是具有相同的來源PANSTIMASE對(duì)腸道的基本作用；該作用具有各種方面，將陸續(xù)描述。
本發(fā)明的藥物組合物的藥理學(xué)研究
PANSTIMASE在腸內(nèi)的作用1．絨毛對(duì)相對(duì)年幼的大鼠(約2個(gè)月)，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行檢查發(fā)現(xiàn)在對(duì)照大鼠和治療的大鼠絨毛正常發(fā)育。
對(duì)相對(duì)年老的大鼠(約7個(gè)月)，這些檢查顯示對(duì)照大鼠的絨毛是萎縮的，而那些治療過的大鼠從4周斷奶后，也如2個(gè)月大的大鼠的發(fā)育狀況。因此發(fā)現(xiàn)PANSTIMASE引起腸的“活力恢復(fù)”，其絨毛較長期保持其起始的發(fā)育和快速再生能力。
腸不僅是生理學(xué)非活性濾器；也是最大的內(nèi)分泌腺(B.LEBLANC等人，Rec.Med.Vet.1981,157 629；K.UVNAS-MOBERG，科學(xué)，1989,9月24日)。腸是由在整個(gè)生命期間再生的小細(xì)胞組成，是核酸最豐富的器官DNA+RNA(G.DURAND等人，Ann.Biol.Anim.Biophys.1966,6,389)；因此它具有蛋白質(zhì)合成的最大的潛在能力。
對(duì)腸組織學(xué)切片檢查表明PANSTIMASE允許該潛能更好地表達(dá)，結(jié)果是更大量地生產(chǎn)幾種生理學(xué)活性化合物消化酶。激素(作用于胰腺，肝臟，和腦)，免疫球蛋白，胞質(zhì)分裂素，神經(jīng)遞質(zhì)(例如VIP=作用于血管的腸道肽)，細(xì)胞生長(或生存)因子…。因此，這解釋了為什么直接作用于腸的PANSTIMASE能夠間接作用于器官并且通過上面的化合物影響生理學(xué)癥狀；因此這將可以特定地解釋其對(duì)胰腺的顯著的作用(A.ESTIVAL等人，Communication at the MetabolismConference of Nancy,1979年1月25-26-University of Nancy I)。
腸也是免疫細(xì)胞最豐富的器官，免疫細(xì)胞在血管和淋巴管中循環(huán)，或在PEYER’s斑中收集和增殖。這些免疫細(xì)胞是MALT(與淋巴組織結(jié)合的粘膜)的成份，MALT被再細(xì)分為位于腸中的GALT和位于支氣管中的BALT，它與位于皮膚中的SALT類似。GALT和BALT是互相依存的并且有增效的作用以確保粘膜的免疫防御作用并且導(dǎo)致整體產(chǎn)生免疫防御作用。
腸道的組織學(xué)切片檢查顯示PANSTIMASE直接刺激GALT；因此可以間接刺激通常的免疫防御作用。因此這將可以解釋PANSTIMASE增加了動(dòng)物對(duì)傳染病的抗病性。
2．微絨毛對(duì)于年幼或年老的大鼠，在電子顯微鏡下檢查顯示對(duì)照大鼠的微絨毛被該粘滯性的粘液和微量的食物殘留物包被；相反地，用PANSTIMASE處理的大鼠的微絨毛似乎更清潔，更高和更多。因此PANSTIMASE能夠增加微絨毛的總擴(kuò)散面，就是說其吸收能力。
在“體外”，從對(duì)照大鼠獲取的腸片段用PANSTIMASE處理，發(fā)現(xiàn)沒有損害微絨毛，可以去除包被它們的高粘滯性的粘液；該中等去污作用可以在幾分鐘內(nèi)進(jìn)行。
在“體內(nèi)”，這種對(duì)腸粘膜的清除作用能夠使感染病菌和粘膜之間更緊密地接觸，這可以誘導(dǎo)能夠?qū)Ω哆@些病菌的免疫細(xì)胞在腸內(nèi)增殖。
3．分泌細(xì)胞和外分泌微腺在整個(gè)腸中分布了各種分泌細(xì)胞(粘液，溶菌酶…的產(chǎn)生者)和許多外分泌的微腺，在其中它們排出大量的分泌物(人每天約2,000毫升)。由于粘液微塞的存在抑制或甚至阻止這些分泌物的流動(dòng)。
腸道的組織學(xué)切片檢查顯示PANSTIMASE使這些微塞分解，使這些分泌物重新建立正常的流動(dòng)性，導(dǎo)致其產(chǎn)生量反應(yīng)性地增加。
已知唾液分泌物包括細(xì)胞生長因子表皮生長因子(EGF)；同樣，腸分泌物可能包括能夠作用于腸細(xì)胞、淋巴細(xì)胞…的生長因子。在PANSTIMASE作用下所述因子的產(chǎn)生的增加可以解釋存在于治療過的大鼠腸組織學(xué)切片中的絨毛和GALT的最好發(fā)育。
4．PEYER’s斑在整個(gè)腸分布的免疫細(xì)胞的凝集體PEYER斑在治療的大鼠中更多它們從這些大鼠的十二指腸出現(xiàn)，而僅從對(duì)照大鼠的空腸出現(xiàn)；它們也具有較高的密度它們的淋巴細(xì)胞更小，更緊密，和更有活性(利用組織學(xué)用的試劑使它們更強(qiáng)地著色)。
5．感染病菌不延長附著PANSTIMASE能夠阻止感染病菌在粘膜上，特別是腸道粘膜上延長附著。延長附著是由于固定在這些病菌上的附著素和固定在粘膜上的它們的受體之間的化學(xué)鍵形成的結(jié)果。
“體外”試驗(yàn)已經(jīng)證明PANSTIMASE與復(fù)合蛋白質(zhì)具有一定的親和性，能夠去除附著素或從它們結(jié)合的粘膜上分離受體；結(jié)果經(jīng)常是可以在幾十分鐘內(nèi)進(jìn)行的附著分離。
另外，PANSTIMASE能夠刺激腸道絨毛的再生，就是說去除由于附著感染病菌而異常的或受影響的老細(xì)胞；通過使腸道分泌物的流動(dòng)加強(qiáng)有助于這種去除作用，在PANSTIMASE的作用下分泌物的產(chǎn)生增加。
能夠看到雖然PANSTIMASE首先允許感染病菌和腸道粘液之間更緊密接觸(和誘導(dǎo)能夠抵抗這些病菌的免疫細(xì)胞在腸道增殖)，然后也能夠阻止這些病菌延長附著在粘膜上和穿透到下層組織。
6．蛋白腸毒素的破壞在10到100A.U./毫克之間的濃度時(shí)，并且通過在37℃加熱幾十分鐘，PANSTIMASE破壞了多種蛋白毒素，因此能夠預(yù)防和/或治療腹瀉。在由PANSTIMASE破壞的毒素中，有病原大腸桿菌產(chǎn)生的肉毒桿菌、霍亂、LT毒素，由這些大腸桿菌產(chǎn)生的壞死性胞毒因子…。
在相同條件下，內(nèi)源性的蛋白酶(胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶…)不破壞這些毒素，因此不能預(yù)防和/或治療這些腹瀉。
在LT毒素的情況下，PANSTIMASE破壞了攻擊性的亞單位A，而不破壞免疫刺激性的亞單位B。
7．結(jié)論P(yáng)ANSTIMASE在整個(gè)腸道內(nèi)具有基本的作用，它刺激該關(guān)鍵器官的綜合功能并且因此刺激整個(gè)機(jī)體；于是提供了多種多樣的治療應(yīng)用實(shí)例。
本發(fā)明藥物組合物的治療應(yīng)用PANSTIMASE對(duì)腸道的基本的作用使其能夠用于或組成其的活性成份即優(yōu)勢(shì)胞外蛋白酶或優(yōu)勢(shì)胞外蛋白酶與至少其它兩種胞外蛋白酶之一的混合物，用于預(yù)防或治療疾病。
1．先天性粘液稠厚癥和呼吸疾病先天性粘液稠的特征在于在腸和支氣管同樣大量地分泌太高粘性的的粘液。所有的粘液具有相同類型的生物化學(xué)結(jié)構(gòu)；因此，PANSTIMASE能夠使腸粘液，支氣管粘液或生殖器的粘液的粘性最佳化。
本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備適用于治療先天性粘液稠厚癥和與腸、支氣管和/或生殖器液粘度最佳化的藥物。
本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備適用于治療先天性粘液稠厚癥和與腸、支氣管和/生殖器粘膜分泌物過多，特別是如果其粘性太高時(shí)相關(guān)的疾病的藥物。
2．吸收和血液循環(huán)的改善由于其對(duì)腸壁的中等去污作用，PANSTIMASE改善吸收作用。
測(cè)定通過口服途徑在動(dòng)物的血液給藥的量可以證實(shí)對(duì)吸收的改善。例如，借助于胃管將沒有PANSTIMASE的50毫克的四環(huán)素(對(duì)照組)或與具有400A.U./毫克效價(jià)的3毫克PANSTIMASE結(jié)合的50毫克的四環(huán)素(治療組)給雞給藥；給藥之后2小時(shí)取2.5毫升的血樣，發(fā)現(xiàn)血清中四環(huán)素的平均濃度是對(duì)照組為1.35mcg/毫升，治療組是1.90mcg/毫升。
通過研究各個(gè)器官中固定的藥物可以更精確地分析對(duì)吸收的改善。例如，將含沒有補(bǔ)充PANSTIMASE的(對(duì)照組)或補(bǔ)充300克/千克效價(jià)為400A.U./毫克的PANSTIMASE的4克/千克的氧化四環(huán)素的藥物食品喂養(yǎng)鱒魚2天。然后將這些魚殺死并且測(cè)定肝臟，肌肉和腎臟中的抗生素。發(fā)現(xiàn)PANSTIMASE能夠顯著增加抗生素組織濃度，這很大程度上根據(jù)器官而變化在肝臟內(nèi)為+100％，即治療組為5.75mcg/g，相應(yīng)的對(duì)照組為2.5mcg/g在肌肉內(nèi)為+400％，即治療組為1.75mcg/g，相應(yīng)的對(duì)照組為0.3mcg/g在腎臟內(nèi)為+1000％，即治療組為5.75mcg/g，相應(yīng)的對(duì)照組為0.5mcg/g在整個(gè)生物體中似乎PANSTIMASE引起氧化四環(huán)素更好地吸收和該抗生素更好地分布，這似乎意味著血液循環(huán)的改善。
本發(fā)明的一種或多種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備計(jì)劃用于治療藥物或營養(yǎng)物的吸收障礙和用于治療血液循環(huán)紊亂的藥物；特別是，計(jì)劃用于治療老年人或病人營養(yǎng)缺乏的藥物，所述病人接受了具有影響腸功能副作用的藥物。
3．消化道潰瘍和腸原性毒素血癥消化道潰瘍是由細(xì)菌(幽門螺桿菌)附著到胃壁上引起的，一些腸原性毒素血癥是由各種感染病菌附著到腸壁上引起的。
PANSTIMASE阻止感染病菌與粘膜的延長附著并且破壞了許多腸毒素；因此它具有刺激腸再生并且能夠抑制和/或治療消化道潰瘍和腸原性毒素血癥。
事實(shí)上，對(duì)于商品畜牧業(yè)，發(fā)現(xiàn)PANSTIMASE能夠減少豬的消化道潰瘍癥狀，和由于腸道毒素血癥引起的死亡。
本發(fā)明的一種或多種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療感染病菌在粘膜上延長附著的藥物，促進(jìn)腸粘膜或萎縮的絨毛再生的藥物，和預(yù)防和/或治療消化道潰瘍和腸原性毒素血癥的藥物。
4．糖尿病，肝功能不良和腸傳遞紊亂在較早的專利中，已經(jīng)指明PANSTIMASE刺激胰臟的外分泌功能；事實(shí)上，發(fā)現(xiàn)所分析的所有酶或酶原在胰臟中的濃度顯著增加對(duì)于淀粉酶為+50％，對(duì)于胰蛋白酶原和糜蛋白酶原為+70％，對(duì)于脂酶為+80％(A.ESTIVAL等人，Communication at the MetabolismConference of Nancy,1979年1月25-26-University of NancyI)。
然后胰臟的組織學(xué)切片檢查顯示胰島在治療過的大鼠中更多和具有更好的形狀。這些調(diào)查顯示PANSTIMASE首先刺激胰臟的內(nèi)分泌功能，結(jié)果是蛋白質(zhì)的合成代謝總體改善，導(dǎo)致連續(xù)地刺激外分泌功能。
在胰腺中發(fā)揮的這種刺激作用也在肝臟中出現(xiàn)，結(jié)果是腸道的傳遞作用很大提高。在集約繁殖中，栓住的妊娠母豬經(jīng)常便秘；已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用PANSTIMASE添加到它們的食物中能夠使腸傳遞的損害性失調(diào)得到避免。
本發(fā)明的一種或多種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療糖尿病，肝功能不良和腸傳遞紊亂。
5．傳染病，免疫機(jī)能障礙和疫苗接種已經(jīng)有人指明PANSTIMASE對(duì)GALT具有有利的作用，從而對(duì)整個(gè)免疫系統(tǒng)具有有利的作用。在3個(gè)不同的領(lǐng)域內(nèi)獲得了這種改善。
A．傳染病在集約繁殖中觀察到的結(jié)果已經(jīng)證明PANSTIMASE經(jīng)常能夠改善動(dòng)物的健康狀況，首先歸因于下列事實(shí)它有助于加入到大多數(shù)的商品飼料中的抗生素的吸收。但是，然后發(fā)現(xiàn)在各種病毒感染的情況中這種改善特別顯著，而這些病毒通常對(duì)抗生素的作用不敏感。這些發(fā)現(xiàn)涉及到豬的流感和AUJESKY’s，雞的GUMBORO’s疾病和小山羊的深膿皰皰。
對(duì)于最后的這種情況，在試驗(yàn)站的試驗(yàn)過程中對(duì)于總數(shù)120只試驗(yàn)中的個(gè)體仔細(xì)觀察病毒感染情況，對(duì)照組不受影響的動(dòng)物的百分?jǐn)?shù)是34％，治療組是70％；對(duì)照組嚴(yán)重受影響的動(dòng)物的百分?jǐn)?shù)是28％，而在治療組沒有動(dòng)物嚴(yán)重受影響。
PANSTIMASE能夠增加PEYER(沿整個(gè)腸道分布的免疫細(xì)胞集聚)斑的數(shù)量和密度的事實(shí)可以解釋這種抗病毒作用。
B．免疫機(jī)能障礙在集約繁殖的小豬上看到的其它結(jié)果已經(jīng)證明PANSTIMASE縮短了關(guān)節(jié)炎的持續(xù)時(shí)間，關(guān)節(jié)炎是關(guān)節(jié)連續(xù)受傷產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，使在金屬格子板上飼養(yǎng)的動(dòng)物痛苦不安。在受傷愈合之后，在所謂的抑制性免疫細(xì)胞的作用下，這些炎癥反應(yīng)逐漸地被克服，所述免疫細(xì)胞在腸道中有許多，并且能夠遷移到炎癥區(qū)。PANSTIMASE在腸中刺激這些細(xì)胞的增殖是可能的，并有助于它們遷移，這將能解釋它將關(guān)節(jié)炎的持續(xù)時(shí)間縮短約50％的事實(shí)。
C．疫苗接種根據(jù)接受了補(bǔ)充PANSTIMASE的食物的動(dòng)物對(duì)疫苗接種更好地應(yīng)答可以解釋在集約繁殖中發(fā)現(xiàn)的健康狀況的改善。在實(shí)驗(yàn)室中用幼鼠進(jìn)行的初步試驗(yàn)已經(jīng)有效地證實(shí)PANSTIMASE能夠增加疫苗接種的效率，特別是如果它們是口服途徑給藥的。
本發(fā)明的一種或多種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療傳染病，免疫機(jī)能障礙和用于增加疫苗接種的效率。
6．與老化相關(guān)的激素不足和退化疾病已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對(duì)于年老的有生殖力的豬，PANSTIMASE導(dǎo)致其消瘦產(chǎn)卵界限間隔降低(母豬趨向于增加)并且刺激性熱(公豬趨向于降低)。因此PANSTIMASE能夠補(bǔ)償激素不足，和由于老化可能產(chǎn)生的其它不利影響。
已經(jīng)有效地證明PANSTIMASE導(dǎo)致年老的有生殖力的雌性大鼠“恢復(fù)活力”，并且降低年老的有生殖力的母豬和家禽由于老化產(chǎn)生的不利影響。
A．雌性大鼠的第一次交配通常在將近70天齡時(shí)；當(dāng)在將近140天進(jìn)行交配時(shí)，對(duì)照組生殖能力差，而治療組的情況較好(接受了同樣的效價(jià)為400A.U./毫克的300毫克/千克的補(bǔ)充PANSTIMASE的食物)。<
>發(fā)現(xiàn)在140天交配的對(duì)照雌大鼠獲得結(jié)果差，但是也在140天交配的治療組的雌大鼠獲得的結(jié)果接近于在70天交配的對(duì)照雌大鼠獲得正常的結(jié)果。因此可以說PANSTIMASE導(dǎo)致年齡為140天的雌大鼠“恢復(fù)活力”。
B．有生殖力母豬從出現(xiàn)“差狀態(tài)”時(shí)就淘汰，所述“差狀態(tài)”例如如果育種者估計(jì)它們不再能夠穩(wěn)定地站立，也不能緩慢地躺下(而是重重地躺下，有撞到新生小豬的危險(xiǎn))。在80頭母豬的飼養(yǎng)中，用PANSTIMASE之前，在平均4.4生殖周期之后將母豬淘汰；使用PANSTIMASE之后6個(gè)月，發(fā)現(xiàn)在平均5.8生殖周期之后將母豬淘汰。因此可以認(rèn)為PANSTIMASE能夠使母豬的生殖期延長約30％，而其“好狀態(tài)”和性能沒有不可接受的改變。
產(chǎn)卵母雞隨著衰老趨向產(chǎn)生外殼較脆的雞蛋，以致于在產(chǎn)卵結(jié)束時(shí)破碎的雞蛋的百分?jǐn)?shù)高于10％。PANSTIMASE能夠使該百分?jǐn)?shù)降低一半，這表明它對(duì)磷酸鈣代謝有刺激作用。
本發(fā)明的一種或多種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療與老化相關(guān)的激素不足和退化疾病，例如關(guān)節(jié)炎，關(guān)節(jié)疾病和骨質(zhì)疏松。
對(duì)本發(fā)明的藥物組合物的耐量進(jìn)行初步的評(píng)估毒性研究已經(jīng)證明當(dāng)以高于通常推薦使用的劑量即1個(gè)月20次的劑量給藥時(shí)，PANSTIMASE對(duì)小豬沒有任何毒性，所述劑量是每千克食物40,000A.U.,當(dāng)以高于所使用的劑量即以3個(gè)月200次的劑量給藥時(shí)，PANSTIMASE對(duì)大鼠也沒有任何毒性。
結(jié)果是，用相對(duì)高于現(xiàn)在設(shè)想的劑量的使用劑量已經(jīng)可以對(duì)人進(jìn)行初步的耐量試驗(yàn)；事實(shí)上，已經(jīng)使用了含有750,000A.U.純化的PANSTIMASE的膠囊(即具有15,000A.U./毫克效價(jià)的一批50毫克的產(chǎn)品)，將它們對(duì)病人給藥，每天2-3個(gè)膠囊，2或3星期。
選擇平均年齡為44歲的24個(gè)病人(12個(gè)男性，12個(gè)女性)，，年齡范圍25到70歲；這些病人中17人患有廣義的消化不良，通過臨床調(diào)查顯示出器官的損傷(實(shí)驗(yàn)室測(cè)試，X-射線，在某些情況下內(nèi)窺鏡檢查)；這些病人中的7人有器官損傷3人胰腺損傷，2人胃切除(一個(gè)潰瘍，另一個(gè)腫瘤)，2人結(jié)腸切除術(shù)(一個(gè)潰瘍出血直腸結(jié)腸炎，另一個(gè)腫瘤)。治療開始時(shí)，營養(yǎng)缺乏或不缺乏，體重不夠的情況下，對(duì)24個(gè)病人全體研究癥狀和體重變化的過程。對(duì)于便秘或相反的腹瀉情況下一些患者表現(xiàn)腸道傳遞的調(diào)節(jié)有改善，在營養(yǎng)缺乏的情況下，體重增加。
也在年齡為18歲的先天性粘液稠厚癥病人進(jìn)行了初步的試驗(yàn)，這些病人每天接受了各包括10,000A.U.的PANSTIMASE的2個(gè)膠囊，共3星期；在腸(糞便少并且粘性低)和支氣管(較易于咳痰并且次數(shù)少)發(fā)現(xiàn)癥狀的改善。
結(jié)論是，可以說PANSTIMASE的耐受性好，似乎對(duì)于營養(yǎng)缺乏的情況特別有效。
本發(fā)明的一種或多種胞外蛋白酶，或其氨基酸序列與本發(fā)明的一種或幾種胞外蛋白酶的氨基酸序列至少有60％同源性的一種或幾種胞外蛋白酶可用于制備用于供給體質(zhì)弱或營養(yǎng)缺乏的病人的食用組合物。
權(quán)利要求
1．藥物和/或食用組合物，它包括作為活性成分的通過培養(yǎng)弗氏鏈霉菌產(chǎn)生的優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶，該蛋白酶具有大于100,000A.U./毫克的比活性，分子量是從30-36kDa變化的，等電點(diǎn)接近7.0并且能夠選擇性地破壞霍亂毒素的亞單位A而不破壞亞單位B，在所述組合物中的蛋白酶以混合物形式或與惰性的，無毒的，生理學(xué)可接受的賦形劑或載體結(jié)合。
2．藥物和/或食用組合物，含有作為活性成份的權(quán)利要求1所述的優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶，或該優(yōu)勢(shì)的胞外酶與由弗氏鏈霉菌培養(yǎng)產(chǎn)生的至少其他兩種胞外蛋白酶之一的混合物，或與其氨基酸序列與那些優(yōu)勢(shì)的胞外蛋白酶或與那些如上定義的蛋白酶的混合物具有至少60％同源性的一種或多種蛋白酶的混合物，所述組合物中的蛋白酶以混合物形式或與惰性，無毒的，生理學(xué)可接受的賦形劑或載體結(jié)合。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的藥物和/或食用組合物，其中活性成份是以5,000到100,000A.U.之間的劑量通過口服，肺部和/或生殖器途徑給藥。
4．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備計(jì)劃用于使腸，支氣管和/或生殖器粘液粘性最佳化的藥物。
5．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備計(jì)劃用于治療與腸，支氣管和/或生殖器粘液分泌物過多，特別是如果其粘性太高時(shí)相關(guān)的疾病的藥物。
6．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備計(jì)劃用于治療藥物或營養(yǎng)的異常吸收，和治療血液循環(huán)紊亂的藥物。
7．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療感染病菌與粘膜的延長的附著的藥物，用于促進(jìn)腸道粘膜的萎縮的或破壞的絨毛的再生的藥物，和用于預(yù)防和/或治療消化道潰瘍和腸原性毒血癥的藥物。
8．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療糖尿病，肝功能不良和腸傳遞的紊亂。
9．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療傳染病，免疫機(jī)能障礙和提高疫苗接種效力。
10．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備計(jì)劃用于預(yù)防和/或治療與老化相關(guān)的激素不足和退行性疾病。
11．根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的一種蛋白酶或多種蛋白酶的應(yīng)用，用于制備用于供給體質(zhì)弱或營養(yǎng)缺乏的病人的食用組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物學(xué)領(lǐng)域,更具體地涉及治療化學(xué)。本發(fā)明主題特別是含有作為活性成分的酶或含有所述酶的酶復(fù)合物的藥物組合物,所述酶是通過在由法國專利2600340定義的條件下培養(yǎng)弗氏鏈霉菌獲得的,所述藥物組合物中蛋白酶以混合物形式或者與生理學(xué)可接受的,無毒和惰性賦形劑或載體結(jié)合。這些藥物組合物可用于預(yù)防或治療退化疾病,特別是與腸功能紊亂相關(guān)的疾病。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1221347SQ9719528
公開日1999年6月30日 申請(qǐng)日期1997年4月4日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月5日
發(fā)明者米歇爾·胡亞里曼 申請(qǐng)人:米歇爾·胡亞里曼