專利名稱：：水溶性紫杉醇產(chǎn)品的制作方法
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：本發(fā)明涉及用于治療癌癥、自身免疫疾病和再狹窄的藥學(xué)組合物。還涉及藥用抗癌制劑，例如紫杉醇(紫杉酚)和紫杉酯(taxotere)，尤其涉及通過將此藥物與水溶性部分產(chǎn)生共軛作用來制備水溶性紫杉醇。紫杉醇是一種從太平洋紫杉-短葉紅豆杉的針葉和樹皮中提取的抗微管劑，在Ⅰ期臨床研究和Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗(yàn)早期顯示出對(duì)人類癌癥具有明顯的抗瘤作用(Horwitzetetal.,1993)。這一作用最初是在晚期卵巢和乳腺腫瘤中發(fā)現(xiàn)的。也已有文獻(xiàn)記載它對(duì)小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、頭頸部癌和轉(zhuǎn)移黑素瘤有顯著作用。但是，紫杉醇用于臨床試驗(yàn)開發(fā)的主要難點(diǎn)是其不溶于水的特性。紫杉酯是由10-脫乙酰漿果赤霉素制成的半合成品，10-脫乙酰漿果赤霉素是一種從漿果紅豆杉的針葉提取并經(jīng)化學(xué)合成的側(cè)鏈酯化而得到的無細(xì)胞毒性前體(Cortes和Pazdur,1995)。已知紫杉酯對(duì)各種癌細(xì)胞系，包括乳腺、肺、卵巢和結(jié)腸直腸癌和黑素瘤有治療作用。在臨床實(shí)驗(yàn)中，已將紫杉酯用于乳腺、卵巢、頭頸部癌和惡性黑素瘤以達(dá)到部分或全部的治療效果。有代表性的是將紫杉醇配制成濃縮溶液，即每ml乳浮EL(聚氧乙烯蓖麻油)和脫水乙醇(50％v/v)含6mg紫杉醇，用藥前需將它進(jìn)一步稀釋(Goldspiel,1994)。運(yùn)送所需劑量紫杉醇所需要的乳浮EL的量明顯高于在乳浮(Cremophor)中配制的任何其它藥物的用量。乳浮有一些毒性作用，包括血管舒張、呼吸困難和低血壓。已發(fā)現(xiàn)這種載體也會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人嚴(yán)重的超敏反應(yīng)(Weissetal.,1990)。事實(shí)上，可以給小鼠靜脈注射的紫杉醇的最大劑量是按乳浮載體的急性致死毒性而定的(Eisemanetal.,1994)。另外，已知表面活性劑乳浮EL可以從聚氯乙烯袋和靜脈內(nèi)給藥管中濾去鄰苯二甲酸酯增塑劑，如二(2-乙基己基)鄰苯二甲酸酯(DEHP)。已知DEHP可引起動(dòng)物的肝細(xì)胞毒性，并使嚙齒動(dòng)物致癌。還已知這種紫杉醇制劑經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)形成顆粒物，因此用藥期間需過濾(Goldspiel,1994)。因此，需要對(duì)這種紫杉醇溶液的制備和給藥進(jìn)行特殊預(yù)制，以確保給患者用藥時(shí)的安全，這些預(yù)制毫無疑問成本較高。現(xiàn)有的得到水溶性紫杉醇的試驗(yàn)包括制備紫杉醇的前體藥物，即在2’-羥基或7-羥基位置上加上琥珀酸和氨基酸之類的助溶部分(Deutschelal,1989；Mathewetal.,1992)。但是，還沒有證實(shí)這些前體藥物具有足夠的化學(xué)穩(wěn)定性以用于進(jìn)一步生產(chǎn)。例如，Deutschetal.(1989)報(bào)道了一種紫杉醇的2’-琥珀酸衍生物，但鈉鹽的水溶性僅約為0.1％，三乙醇胺和N-甲基葡糖胺鹽僅約1％可溶解。另外，有報(bào)道認(rèn)為氨基酸酯不穩(wěn)定。Methewetal.,(1992)報(bào)道了類似的結(jié)果。Greenwaldetal．報(bào)道了紫杉酚的高度水溶性2’和7-聚乙二醇酯的合成(Greenwaldetal.,1994),但是沒有記載這些化合物的體內(nèi)抗癌活性的數(shù)據(jù)(Greenwaldetal.,1995)。解決這些問題的其它試驗(yàn)包括將脂質(zhì)體和小球中的紫杉醇制成微型膠囊(Bartoni和Boitard,1990)。已知這種脂質(zhì)體制劑如游離紫杉醇一樣是有效的，但只有僅含少于2％紫杉醇的脂質(zhì)體制劑在物理上是穩(wěn)定的(Sharma和Straubinger,1994)。遺憾的是已證實(shí)小球制劑有毒。因此仍需要有一種能運(yùn)輸有效量紫杉醇的水溶性紫杉醇制劑，它不具有藥物不溶性所帶來的缺陷。另一個(gè)防礙紫杉醇推廣運(yùn)用的原因是生產(chǎn)紫杉醇的來源有限，導(dǎo)致用紫杉醇治療費(fèi)用昂貴。例如一個(gè)療程可能要花幾千美元。另一缺陷是紫杉醇并不是對(duì)所有腫瘤有效，這可能是由于紫杉醇不能進(jìn)入腫瘤中。因此，急需血清半衰期長(zhǎng)、水溶性的紫杉醇的有效制劑和相關(guān)藥物，以用于治療腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎之類的自身免疫疾病，以及用于預(yù)防因創(chuàng)傷而致的血管再狹窄，例如血管成形術(shù)和植入斯坦特印固定模。本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的這些或其它缺陷，即通過提供了包含化療和抗血管原藥物的組合物，例如與聚谷氨酸或聚天冬氨酸之類的水溶性聚合物，或與水溶性金屬螯合劑共軛的紫杉醇或紫杉酯。令人驚奇的是，本文所述的組合物可有效地作為抗典型的腫瘤模型的抗腫瘤劑，并且預(yù)計(jì)至少與紫杉醇或紫杉酯治療的任何疾病或癥狀(已知用紫杉烷或taxoid治療是有效的)是一樣有效的。本發(fā)明組合物提供了克服藥物自身不溶性的水溶性taxoid，還具有控制釋放的優(yōu)點(diǎn)，以便單獨(dú)靜脈注射用藥后使本文所述的動(dòng)物模型中的腫瘤消除。本文所述的方法也可用于制備其它治療劑、造影劑和藥物的水溶性共軛聚合物，包括依托泊甙、替尼泊甙、氟達(dá)拉濱、阿霉素、柔紅霉素、大黃素、5-氟尿嘧啶、5-氟脫氧尿苷(FUDR)、雌二醇、喜樹堿、維生素A酸、維拉帕米、epothilones和環(huán)孢菌素。尤其是這些含游離羥基的藥劑可以按本文所述的與紫杉醇相似的化學(xué)反應(yīng)與聚合物進(jìn)行共軛。這種共軛作用應(yīng)該不超出化學(xué)
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的常規(guī)技術(shù)范圍以及本發(fā)明權(quán)利要求的范圍。這些藥劑包括但不局限于依托泊甙、替尼泊甙、喜樹堿和epothilones。正如本文所述，與水溶性聚合物共軛是指藥物與聚合物或螯合劑的共價(jià)鍵合。還應(yīng)理解本發(fā)明的水溶性共軛物也可以與包括其它抗腫瘤藥或抗癌藥在內(nèi)的藥物一起使用。這種結(jié)合在本
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是公知的。在某些治療中，本發(fā)明的水溶性紫杉醇或紫杉酯可以與含鉑藥物、阿霉素或道諾紅霉素之類的抗生素、或者其它用于與紫杉酚結(jié)合的藥物相結(jié)合使用。化療藥物與聚合物的共軛作用是為了達(dá)到減少系統(tǒng)毒性和提高治療指標(biāo)的目的。分子質(zhì)量大于30KDa的聚合物不容易通過正常毛細(xì)管和小球的內(nèi)皮，因此，使正常組織減少了由藥物介導(dǎo)的不相關(guān)的毒性(Maeda和Matsumura,1989；Regnolds,1995)。另一方面，惡性腫瘤常常使毛細(xì)管內(nèi)皮紊亂，且較正常組織的脈管系統(tǒng)的滲透性更強(qiáng)(Maeda和Matsumura,1989；Fidleretal.,1987)。因此，通常殘留在脈管系統(tǒng)中的聚合物-藥物共軛物會(huì)選擇性地從血管中濾出進(jìn)入腫塊，導(dǎo)致活性治療藥物的腫瘤塊聚集。另外，聚合物-藥物共軛物也可作為藥物持續(xù)釋放的倉庫，對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生長(zhǎng)期的藥物作用。最后，水溶性聚合物可用于使藥物保持穩(wěn)定，以及使其它不溶的化合物加溶。目前，已經(jīng)對(duì)各種合成的和天然的聚合物的促進(jìn)腫瘤專一性藥物的運(yùn)輸?shù)哪芰M(jìn)行了檢測(cè)(Kopecek,1990,Maeda和Matsumura,1989)。但是，目前僅很少一些正進(jìn)行臨床評(píng)定，包括日本的SMANCS和英國(guó)的HPMA-Dox(Maeda,1991；Kopecek和Kopeckoua,1993)。在本說明書中，已知taxoid是指包括紫杉醇和紫杉酯以及其它含紫杉烷結(jié)構(gòu)的化合物在內(nèi)的那些化合物(Cortes和Pazdur,1995)，可以從天然資源如紫杉，或從細(xì)胞培養(yǎng)、或化學(xué)合成分子中分離出來，制劑優(yōu)選化學(xué)通式為C47H51NO14的化合物，包括[2aR-[2aα,4β,4αβ,6β,9α(αR*,βS*),11α,12α,12aα,12bα,]]-β-(苯甲酰氨基)-α-羥基苯丙酸6,12b，雙(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-十二氫-4,11一二羥基-4a,8,13,13-四甲基-5-氧代-7,11-亞甲基-1H-芳癸并[3,4]苯并-[1,2-b]乙氧-9-基酯。已知紫杉醇和紫杉酯分別較其它某些類型抗腫瘤藥更有效，并且在本發(fā)明的實(shí)施中，那些對(duì)特殊的taxoid更敏感的腫瘤將用水溶性的taxoid共軛物進(jìn)行治療。在這些實(shí)施方式中，紫杉醇是與水溶性金屬螯合劑進(jìn)行共軛作用的，該組合物可進(jìn)一步包含螯合的金屬離子。本發(fā)明的螯合金屬離子可以是下面任一金屬的離子形式鋁、硼、鈣、鉻、鈷、銅、鏑、鉺、銪、釓、鎵、鍺、鈥、銦、銥、鐵、鎂、錳、鎳、鉑、錸、銣、釕、釤、鈉、锝、鉈、錫、釔或鋅。在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，螯合金屬離子為放射性核素，如下面所例金屬之一的放射性同位素。優(yōu)選的放射性核素包括，但不局限于，67Ga(鎵)，68Ga,111In(銦)，99mTc(锝)，90Y(釔)，114mIn和193mpt(鉑)。優(yōu)選的用于本發(fā)明實(shí)施例中的水溶性螯合劑包括，但不局限于，二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-N,N',N”,N”’-四乙酸(DOTA)、四氮雜環(huán)十四烷-N,N’,N”,N”’-四乙酸(TETA)、羥基亞乙基二膦酸(HEDP)、二巰基琥珀酸(DMSA)、二亞乙基三胺四亞甲基膦酸(DTTP)和1-(對(duì)-氨基芐基)-DTPA、1,6-二氨基己烷-N,N,N’_,N’-四乙酸、DPDP和亞乙基雙(氧亞乙基次氮基)四乙酸(EGTA),DTPA為最佳優(yōu)選。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式也可以是含111In-DTPA-紫杉醇的組合物。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，紫杉醇或紫杉酯可以與水溶性聚合物共軛，優(yōu)選將聚合物與紫杉醇或紫杉酯兩者的2′-或7-羥基共軛。因此，當(dāng)將功能基團(tuán)(如用上述的紫杉醇的2’-羥基)用于藥物的共軛作用時(shí)，應(yīng)使用一種酯以確?；钚运幬飶木酆衔镙d體釋放。優(yōu)選的聚合物包括，但不局限于聚乙二醇、聚(l-谷氨酸)、聚(d-谷氨酸)、聚(dl-谷氨酸)、聚(l-天冬氨酸)、聚(d-天冬氨酸)、聚(dl-天冬氨酸)、(聚乙二醇)、上述氨基酸與聚乙二醇的共聚物、聚己內(nèi)酯、聚乙醇酸和聚乳酸，以及聚丙烯酸、聚(2-羥乙基l-谷氨酰胺)、羧甲基葡聚糖、透明質(zhì)酸、人血清白蛋白和藻酸，特別優(yōu)選為聚乙二醇、聚天冬氨酸和聚谷氨酸。本發(fā)明的聚谷氨酸或聚天冬氨酸的分子量?jī)?yōu)選約5,000-約100,000，更好的優(yōu)選約為20,000-80,000，或甚至約為30,000-60,000。本發(fā)明組合物可以分散在下面所述的藥用載體溶液中。這種溶液為滅菌或無菌的，可包括水、緩沖液、等滲劑或其它本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的成分，當(dāng)給動(dòng)物或人體使用時(shí)，它們不會(huì)引起過敏或其它有害反應(yīng)。因此，本發(fā)明也描述了一種包含化療或抗癌藥物的藥物組合物，化療或抗癌藥如與高分子量水溶性聚合物或螯合劑共軛的紫杉醇或紫杉酯。此藥物組合物可包括聚乙二醇、聚谷氨酸、聚天冬氨酸或螯合劑，優(yōu)選DTPA。還已知放射性核素也可用作抗腫瘤劑或藥物，且本發(fā)明藥物組合物可包括一種治療量的螯合放射性同位素。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明記載了測(cè)定腫瘤組織攝取紫杉醇或紫杉酯之類的化療藥物的方法。此方法包括，用螯合金屬離子獲得藥物和金屬螯合劑的共軛物，使該組合物與腫瘤組織相接觸，并檢測(cè)腫瘤組織中的螯合金屬離子。腫瘤組織中的這種螯合金屬離子的存在是通過腫瘤組織的攝取表現(xiàn)的。這種螯合金屬離子可以是放射性核素，可用閃爍照相法檢測(cè)。動(dòng)物或人體中也可以出現(xiàn)這種腫瘤組織，然后將此組合物給患者使用。在某些實(shí)施方式中本發(fā)明也記載了治療宿主癌癥的方法。此方法包括獲得含化療藥的組合物，化療藥例如與水溶性聚合物或螯合劑共軛并分散在藥用溶液中的紫杉醇或紫杉酯，以及將有效量這種溶液給藥于要治療腫瘤的患者。優(yōu)選的組合物包括與聚谷氨酸或聚天冬氨酸共軛的紫杉醇或紫杉酯，更好的優(yōu)選為聚(l-谷氨酸)或聚(l-天冬氨酸)。本發(fā)明組合物對(duì)于治療用未共軛的taxoid治療有效的任何類型的癌癥都是有效的，這些癌癥包括，但不局限于乳腺癌、卵巢癌、惡性黑素瘤、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、頭頸部癌或白血病。治療腫瘤的方法可包括某些在給予治療量的藥物或前體藥物之前預(yù)測(cè)腫瘤攝取紫杉醇或紫杉酯的方法。此方法包括上述任何成像技術(shù)，其中將紫杉醇-螯合劑-螯合金屬給宿主使用，并在腫瘤中進(jìn)行檢測(cè)。此步驟提供了一種有效的檢測(cè)途徑，即特殊的腫瘤對(duì)DTPA-紫杉醇療法無反應(yīng)，在這些情況下藥物就無法進(jìn)入腫瘤中。如果能將成像技術(shù)用于預(yù)測(cè)對(duì)紫杉醇的反應(yīng)和確定不會(huì)產(chǎn)生反應(yīng)的病人，那么則可為病人節(jié)省昂貴的開支和起關(guān)鍵作用的時(shí)間。這一假設(shè)也即是說如果在腫瘤中沒有累積適量的化療藥物，則腫瘤對(duì)這種藥物產(chǎn)生反應(yīng)的可能性相對(duì)要小。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明描述了獲得患者的身體圖像的方法。這種身體圖像是通過以下得到的，即給患者使用有效量的與紫杉醇-螯合劑共軛物螯合的放射性金屬離子，然后檢測(cè)放射性金屬的閃爍照相信號(hào)得到一種圖像。本發(fā)明還概括性描述了一種減少系統(tǒng)性自身免疫疾病的至少一種癥狀的方法，此方法包括給患有系統(tǒng)性自身免疫疾病的患者使用有效量的含與聚(l-谷氨酸)或聚(l-天冬氨酸)共軛的紫杉醇或紫杉酯的組合物。在本公開說明書中特別引人注目的是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，當(dāng)在標(biāo)準(zhǔn)的乳浮制劑中給藥時(shí)，這種疾病有時(shí)對(duì)紫杉醇會(huì)產(chǎn)生反應(yīng)(美國(guó)專利5,583,153)。當(dāng)治療腫瘤時(shí)，本發(fā)明的水溶性taxoid的有效性應(yīng)該不會(huì)被與水溶性部分的共軛作用降低，并且水溶性前體藥物可用作一段時(shí)間后釋放活性藥物的控釋劑。因此，預(yù)計(jì)本發(fā)明組合物與抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的紫杉酚同樣有效，例如，還具備控釋的優(yōu)點(diǎn)。還已知本發(fā)明的taxoid組合物可與其它藥物如血管生成抑制劑(AGM-1470)(Oliveretal.,1994)或氨甲喋呤結(jié)合使用。紫杉醇還能防止氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄這一發(fā)現(xiàn)表明，本發(fā)明的水溶性紫杉醇和紫杉酯還有除直接非腸道給藥外的各種用法(WO9625176)。例如，水溶性紫杉醇可用作植入醫(yī)療裝置的涂覆劑，這些裝置如管道、旁路、導(dǎo)管、人工移植物、針、電移植物如起搏器，尤其是動(dòng)脈或靜脈斯坦特固定模，包括可膨脹的氣囊斯坦特固定模。在這些實(shí)施方式中，水溶性紫杉醇可與可植入的醫(yī)療裝置結(jié)合，或者，水溶性紫杉醇可被動(dòng)吸附到可植入裝置的表面。例如，通過將斯坦特固定模浸泡在聚合物-藥物溶液中或?qū)⑦@種溶液噴在斯坦特固定模上，使聚合物-藥物共軛物覆蓋在斯坦特固定模上。適用于可植入裝置的材料應(yīng)是具有生物相容性且無毒性的，可選自金屬，如鎳-鈦合金、鋼，或生物相容性聚合物，水凝膠、聚胺酯、聚乙烯、乙烯乙酸乙烯酯共聚物等。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，將水溶性紫杉醇，尤其是PG-紫杉醇共軛物，涂覆在斯坦特固定模上，以植入到氣囊血管成形術(shù)后的動(dòng)脈或靜脈中。因此，本發(fā)明還涉及一種防止血管損傷后的動(dòng)脈再狹窄或動(dòng)脈閉塞的方法，此方法包括給患者使用含與聚(l-谷氨酸)或聚(l-天冬氨酸)共軛的紫杉醇或紫杉酯的組合物。在應(yīng)用此方法的過程中，患者可以是冠脈分流術(shù)、血管外科、器官移植或者冠脈或動(dòng)脈血管成形術(shù)的病人，可以將本組合物直接、靜脈注射、甚至或涂覆在斯坦特固定模上給藥，將此斯坦特固定模植入在血管損傷部位。因此本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是一種可植入的醫(yī)療裝置，其中該裝置涂覆有抑制平滑肌細(xì)胞增殖的組合物，此組合物包含有效量的與聚谷氨酸或聚天冬氨酸共軛的紫杉醇或紫杉酯。優(yōu)選的裝置是涂覆有本文所述的本發(fā)明組合物的斯坦特固定模，優(yōu)選將斯坦特固定模用于氣囊血管成形術(shù)后，此涂覆層能防止再狹窄。本發(fā)明還優(yōu)選含與紫杉醇2’或7羥基或兩者的共軛的聚谷氨酸的組合物，或含與紫杉醇2′或7羥基或兩者共軛的聚天冬氨酸的組合物。本文所述的“聚谷氨酸”或“聚谷氨酸類”包括聚(l-谷氨酸)、聚(d-谷氨酸)和聚(dl-谷氨酸)，“聚天冬氨酸”或“聚天冬氨酸類”包括聚(l-天冬氨酸)、聚(d-天冬氨酸)和聚(dl-天冬氨酸)。除非另有說明，本文所用的所有技術(shù)詞匯的意思與本發(fā)明所屬
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的普通技術(shù)人員所知道的相同。雖然與本文所述的方法和物質(zhì)類似或相同的任何方法和物質(zhì)都可用于本發(fā)明的實(shí)踐或?qū)嶒?yàn)中，但優(yōu)選的方法和物質(zhì)現(xiàn)都已說明了。圖1A為紫杉醇、PEG-紫杉醇和DTPA-紫杉醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖1B為制備PG紫杉醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)和反應(yīng)式。圖2為紫杉醇、PEG紫杉醇和DAPA-紫杉醇對(duì)B16黑素瘤細(xì)胞增殖的影響。圖3為DTPA-紫杉醇對(duì)MCa-4乳房腫瘤的抗腫瘤作用。圖4為用紫杉醇、DTPA-紫杉醇和PEG-紫杉醇治療后，腫瘤直徑達(dá)到12mm的平均時(shí)間(天)。圖5為靜脈注射111In-DTP-紫杉醇和111In-DTPA后，患MCa-4腫瘤小鼠的γ-閃爍掃描圖。箭頭表示腫瘤。圖6為在37℃、PH7.4的PBS中測(cè)得的PG-紫杉醇的水解降解作用。-□-代表保持與水溶性PG結(jié)合的紫杉醇的百分比，-△-表示釋放的紫杉醇的百分比，-○-表示產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物1的百分比。圖7A為PG-紫杉醇對(duì)患鼠乳腺腫瘤的大鼠的抗腫瘤作用。-□-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量PG(0.3g/kg)的反應(yīng)；-△-表示對(duì)紫杉醇(40mg/kg)的反應(yīng)，-○-表示對(duì)PG-紫杉醇(相當(dāng)于60mg紫杉醇/kg)的反應(yīng)。圖7B為PG-紫杉醇和紫杉醇對(duì)患0Ca-1腫瘤的小鼠的抗腫瘤作用。-□-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量PG(0.8g/kg)的反應(yīng)；-△-表示對(duì)紫杉醇(80mg/kg)的反應(yīng)，-●-表示對(duì)PG-紫杉醇(相當(dāng)于80mg紫杉醇/kg)的反應(yīng)，-○-表示對(duì)PG-紫杉醇(相當(dāng)于160mg紫杉醇/kg)的反應(yīng)。圖7C為PG-紫杉醇對(duì)患Mca-4乳房癌瘤的小鼠的抗腫瘤作用。-□-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量生理鹽水的反應(yīng)，-△-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量PG(0.6g/kg)的反應(yīng)，-◆-表示對(duì)PG-紫杉醇(40mg/kg)的反應(yīng)，-◇-表示對(duì)PG-紫杉醇(相當(dāng)于60mg/kg)的反應(yīng)，-○-表示對(duì)PG-紫杉醇(120mg/kg)的反應(yīng)。圖7D為PG-紫杉醇對(duì)小鼠的軟組織肉瘤(FSa-Ⅱ)的抗腫瘤作用。-□-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量生理鹽水的反應(yīng)，-◇-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量PG(0.8g/kg)的反應(yīng)，-○-表示對(duì)紫杉醇(80mg/kg)的反應(yīng)，-△-表示對(duì)PG-紫杉醇(相當(dāng)于160mg/kg)的反應(yīng)。圖7E為PG-紫杉醇對(duì)小鼠的同源肝癌(Hca-Ⅰ)的抗腫瘤作用。-□-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量生理鹽水的反應(yīng)，-△-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射一定劑量PG(0.8g/kg)的反應(yīng)，-○-表示對(duì)PG-紫杉醇(80mg/kg)的反應(yīng)，-△-表示對(duì)PG-紫杉醇(相當(dāng)于160mg/kg)的反應(yīng)。圖8為紫杉醇從磷酸緩沖液(PH7.4)中的PEG-紫杉醇中釋放的總圖。紫杉醇為-X-,PEG-紫杉醇為-O-。圖9為PG-紫杉醇對(duì)MCa-4乳房瘤的抗腫瘤作用。-□-表示對(duì)單獨(dú)靜脈注射PEG的鹽水溶液的反應(yīng)(60mg/kg),-■-表示對(duì)乳浮/醇載體的反應(yīng)，-○-表示單獨(dú)使用40mg紫杉醇/kg體重，-·-表示按相當(dāng)于40mg紫杉醇/kg體重的量使用PEG-紫杉醇。本發(fā)明來源于一個(gè)新的發(fā)現(xiàn)，即紫杉醇和紫杉酯的水溶性制劑，以及這些制劑對(duì)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的出人意料作用。將聚(l-谷氨酸)與紫杉醇的共軛物(PG-紫杉醇)給患卵巢癌(0Ca-1)的小鼠使用，與同樣劑量不合PG的紫杉醇相比，前者可顯著延遲腫瘤生長(zhǎng)。僅用紫杉醇治療的小鼠或用游離紫杉醇和PG的結(jié)合物治療的小鼠，起初都出現(xiàn)延遲的腫瘤生長(zhǎng)，但十天后，腫瘤又再生到與未治療的對(duì)照組同樣的水平。而且，當(dāng)使用PG-紫杉醇共軛物的最大耐受量(MTD)(160mg當(dāng)量紫杉醇/kg)時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)完全被抑制，腫塊縮小，治療后對(duì)小鼠進(jìn)行了兩個(gè)月的觀察，殘留的腫塊不見了(MTD是指在單獨(dú)靜脈內(nèi)注射后的兩周內(nèi)體重減輕15％或更少的最大劑量)。在類似的研究中，檢測(cè)了PG-紫杉醇對(duì)乳腺癌(13762F)大鼠的抗腫瘤作用。另外，發(fā)現(xiàn)使用劑量(相當(dāng)40-60mg紫杉醇)/kg的PG-紫杉醇可使腫瘤完全消除。這些異外的結(jié)果表明，單獨(dú)靜脈注射聚合物-藥物共軛物、PG-紫杉醇后可成功地消除小鼠和大鼠已有的固體腫塊。而且，PH為7.4、半衰期為40天的PG-紫杉醇是已知的最穩(wěn)定的水溶性紫杉醇衍生物之一(Deutsch,etal.,1989；Mathewetal.,1992；Zhaoandkingston,1991)。本文還發(fā)現(xiàn)在用B16黑素瘤細(xì)胞系進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤能力測(cè)定中，DAPA-紫杉醇與紫杉醇的效果相同。用劑量為40mg/kg體重單獨(dú)注射治療MCa-4乳房腫瘤時(shí)，DTPA紫杉醇與紫杉醇相比在抗腫瘤作用方面沒有任何顯著不同。而且，用γ-閃爍掃描器顯示了在MCa-4中有111In標(biāo)記的DTPA-紫杉醇聚集，這表明本發(fā)明的螯合劑與抗腫瘤藥共軛可有效地用于腫瘤成像。本發(fā)明的新化合物和方法較現(xiàn)有的方法和組合物有明顯的優(yōu)勢(shì)，即通過提供含水溶性的控釋紫杉醇的組合物，使水溶性紫杉醇具有提高基于紫杉醇的抗癌療效的作用。這種組合物不需要帶有在現(xiàn)有紫杉醇組合物中表現(xiàn)出副作用的溶劑。另外，保持有抗腫瘤活性的放射性標(biāo)記的紫杉醇，也可用于腫瘤成像。而且，本發(fā)明閃爍照相、單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)化斷層顯像(SPECT)或正電子發(fā)射斷層顯象(PET)可測(cè)定紫杉醇是否被特殊的腫塊攝取。然后可將這種測(cè)定法用于確定抗癌治療的效果。這些信息對(duì)于指導(dǎo)醫(yī)務(wù)人員選擇施行紫杉醇療法的病人是有益的。有兩種方式可使紫杉醇變成水溶性的將紫杉醇與用作藥物載體的水溶性聚合物共軛，和用水溶性螯合劑衍生抗腫瘤藥物。后者也為用放射性核素(如111In,90Y,116Ho,68Ga,99mTc)標(biāo)記進(jìn)行核成橡和/或進(jìn)行放射性治療研究提供了一個(gè)機(jī)會(huì)。紫杉醇、聚乙二醇-紫杉醇(PEG-紫杉醇)、聚谷氨酸-紫杉醇共軛物(PG-紫杉醇)和二亞乙基三胺五乙酸-紫杉醇(DTPA-紫杉醇)的結(jié)構(gòu)如圖1所示。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，可以以水溶性鹽形式(鈉鹽、鉀鹽、四丁基銨鹽、鈣鹽、正鐵鹽等)制備DTPA-紫杉醇或其它紫杉醇-螯合劑共軛物，如EDTA-紫杉醇、DTTP-紫杉醇或DOTA-紫杉醇。這些鹽可用作腫瘤治療劑。其次，DTPA-紫杉醇或其它紫杉醇-螯合劑可用作診斷試劑，當(dāng)用放射性核素如111In或99mTc進(jìn)行標(biāo)記時(shí)，可作為放射性示蹤劑，與核成像術(shù)一同用于檢測(cè)某些腫瘤。已知除紫杉醇(紫杉酚)和紫杉酯(taxotere)外，其它紫杉醇衍生物也可用于本發(fā)明的組合物和方法中，所有這些組合物和方法都包含在附加的權(quán)利要求書中。DTPA-紫杉醇的毒性研究、藥物動(dòng)力學(xué)和組織分布表明用單劑量靜脈(ⅳ)注射觀察到的小鼠中的DPTA-紫杉醇的LD50(50％致死量)約為110mg/kg體重。由于紫杉醇的有限的溶解性和因靜脈內(nèi)給藥而致的載體毒性而產(chǎn)生的劑量-體積抑制，難以用紫杉醇進(jìn)行直接對(duì)比。但是，根據(jù)本說明書，本化療
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員可確定臨床研究用于病人的有效的最大耐受量。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，用聚合物-紫杉醇共軛物涂覆的斯坦特固定?？捎糜陬A(yù)防氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄、動(dòng)脈閉塞。與標(biāo)準(zhǔn)的氣囊血管成形術(shù)相比，在冠狀血管成形術(shù)中使用可膨脹的氣囊斯坦特固定模的臨床試驗(yàn)的新近結(jié)果在再狹窄的開放和減少方面表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)(Serruysetal.,1994)。根據(jù)損傷應(yīng)答假說，新內(nèi)膜形成伴隨有細(xì)胞增殖的增加。目前，普遍認(rèn)為導(dǎo)致自發(fā)和加速的動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵是平滑肌細(xì)胞(SMC)增殖(Phillips-Hughes和kandarpa,1996)。由于動(dòng)脈損傷后的表型增殖與腫瘤細(xì)胞的相似，因此可以將抗腫瘤藥用于預(yù)防新內(nèi)膜的SMC聚集。使用連接有聚合物的抗增殖劑涂覆的斯坦特固定模，能在較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)釋放足夠濃度的這些藥劑，這樣就可防止增生的內(nèi)膜和血管中層向腔內(nèi)生長(zhǎng)，因而減輕了再狹窄。由于紫杉醇能抑制小鼠模型中膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(Oliveretal.,1994)，本發(fā)明制劑還可用于治療自身免疫性和/或炎性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。與微管蛋白結(jié)合的紫杉醇可改變平衡以穩(wěn)定微管聚合物，并且通過阻斷后期G2有絲分裂期的細(xì)胞，使此藥物抑制真核細(xì)胞復(fù)制。紫杉醇抑制關(guān)節(jié)炎有幾種作用機(jī)制。例如，紫杉醇的時(shí)相特異的細(xì)胞毒作用可迅速作用增殖的炎性細(xì)胞，而且紫杉醇可抑制細(xì)胞有絲分裂、遷移、趨化性、細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和嗜中性白細(xì)胞的H2O2產(chǎn)生。另外，紫杉醇通過阻斷配位的內(nèi)皮細(xì)胞遷移而表現(xiàn)出抗血管原活性(Oliveretal.,1994)。因此，本發(fā)明的聚合物與前體藥物的共軛物與游離紫杉醇一樣可用作治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。本文所公開的聚合物共軛制劑也具有使藥物釋放延遲或持久、以及更好的穩(wěn)定性的優(yōu)點(diǎn)。治療關(guān)節(jié)炎還有一個(gè)方法是可將本制劑注射到或直接植入受影響的關(guān)節(jié)部位。適于注射的紫杉醇或紫杉酯的藥物制劑包括滅菌水溶液或分散體，以及用于制備滅菌注射溶液或分散體的滅菌粉末。所有情況中的劑型必須是無菌的注射用液體。在生產(chǎn)和貯存條件下必須穩(wěn)定，且保存時(shí)必須防止細(xì)菌和真菌之類的微生物的污染。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，包括水、乙醇、多羥基化合物(如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、它們的適當(dāng)混合物，和植物油。各種抗細(xì)菌和抗真菌劑，如對(duì)羥基苯甲酸、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、乙基汞硫代水楊酸鈉，都具有抗微生物作用。在許多情況下，優(yōu)選包括等滲劑，如糖或氯化鈉。制備無菌注射溶液是在適當(dāng)溶劑中將所需量的活性化合物與各種上述的其它成分(按需要)混合，然后過濾滅菌。一般來說，通過將各種已滅菌的活性成分混合在滅菌載體中來制備分散體，這種載體包含基本的分散介質(zhì)和上述的其它所需成分。在用滅菌粉末制備滅菌注射液的情況中，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，這樣就可從前述的滅菌過濾溶液得到活性成分和其它所需的附加成分的粉劑。本文所述的“藥用載體”包括任何或所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌和抗真菌劑以及等滲劑等。這些介質(zhì)和試劑用于藥物活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的。任何常用介質(zhì)或試劑除了與活性成分不相容外，應(yīng)該可用于治療組合物中。組合物中也可加入補(bǔ)充的活性成分?！八幱玫摹币辉~也是指當(dāng)將分子本身和組合物給動(dòng)物或人使用時(shí)，不會(huì)產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)或類似的不良反應(yīng)。對(duì)于水溶液的非腸道給藥，如需要應(yīng)將溶液適當(dāng)緩沖，首先用足量鹽水或葡萄糖將液體稀釋劑變成等滲。這種特殊的水溶液尤其適用于靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥。在這一點(diǎn)上，根據(jù)本說明書本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可知道哪些滅菌含水介質(zhì)可以使用。下面的實(shí)施例是用以證明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該清楚下面實(shí)施例所公開的技術(shù)是本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的、在本發(fā)明實(shí)施中能很好發(fā)揮作用的技術(shù)，因此可將它視為優(yōu)選的實(shí)施方式的一部分。但是，根據(jù)本發(fā)明，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還應(yīng)知道，在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容和范圍的前提下，可以對(duì)所公開的特殊實(shí)施方式進(jìn)行多種修改，但仍可得到相同或相似的結(jié)果。實(shí)施例1DTPA-紫杉醇DTPA-紫杉醇的合成于0℃往紫杉醇(100mg,0.117mmol)無水DMF(2.2ml)溶液中加入二亞乙基三胺五乙酸酐(DTPAA)(210mg,0.585mmol)。在4℃將反應(yīng)混合物攪拌一夜。將懸浮液過濾(0.2umMillipore過濾器)以去除未反應(yīng)的DTPA。將濾液注入蒸餾水中，在4℃攪拌20分鐘，收集沉淀物。通過制備型薄層層析(TLC)的C18硅膠板將粗制品純化，并在乙腈/水(1∶1)中展開。紫杉醇的Rf值為0.34。刮除紫杉醇上面的、Rf值為0.65-0.75的條帶，再用乙腈/水(1∶1)混合物洗脫，去除溶劑得到15mgDTPA-紫杉醇(產(chǎn)率10.4％):mp:＞226℃分解。紫外光譜(鈉鹽溶液)在228nm出現(xiàn)最大吸收，這也是紫杉醇的特征。質(zhì)譜(FAB)m/e1229(M+H)+,1251(M+Na)、1267(M+K)。在’HNMR光譜(DMSO-d6)中，DTPA的NCH2CH2N和CH2OOH的共振分別在2.71-2.96ppm處顯示復(fù)合系列信號(hào)，在3.42ppm處為多種信號(hào)。紫杉醇中4.10ppm處C7H的共振轉(zhuǎn)變?yōu)?.51ppm，這提示在7位點(diǎn)有酯化作用。剩下的光譜是與紫杉醇結(jié)構(gòu)的一致。在0.05M當(dāng)量數(shù)NaHCO3中加入DTPA-紫杉醇的乙醇溶液，也可得到DTPA-紫杉醇的鈉鹽，然后冷凍干燥得到水溶性固體粉末(溶解度＞20mg當(dāng)量紫杉醇/mL)。DTPA-紫杉醇的水解穩(wěn)定性在加速條件下研究DTPA-紫杉醇的水解穩(wěn)定性。簡(jiǎn)而言之，即將1mgDTPA-紫杉醇溶解在1ml0.5MNaHCO3水溶液(PH9.3)中，再用HPLC分析。HPLC系統(tǒng)由以下部分組成一個(gè)填充C184um硅膠的水150×3.9(i.d.)mmNova-Pak柱、一個(gè)Perkin-Elmer無梯度液相層析(LC)泵、一個(gè)PENelson900系列界面、一個(gè)光譜-物理學(xué)UV/Vis檢測(cè)器以及一個(gè)數(shù)據(jù)站。在228nm用UV檢測(cè)，洗脫液(乙腈/甲醇/0.02M乙酸銨=4∶1∶5)以1.0ml/分流動(dòng)。DTPA-紫杉醇和紫杉醇的保留時(shí)間分別為1.38和8.83分鐘。將峰值量化并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比以確定DTPA-紫杉醇和紫杉醇濃度。室溫下所測(cè)得的0.5MNaHCO3溶液中的DTPA-紫杉醇的半衰期為16天。DTPA-紫杉醇對(duì)B16小鼠體內(nèi)黑素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用將細(xì)胞按2.5×104細(xì)胞/ml的濃度種在24孔平板中，并于37℃在含5.5％CO2的97％濕度下在50∶55Delbecco改進(jìn)的最小必需培養(yǎng)基(DEM)和含10％小牛血清的F12培養(yǎng)基中生長(zhǎng)24小時(shí)。然后用含5×10-9M-75×10-9M濃度的紫杉醇或DTPA-紫杉醇的培養(yǎng)基代替此培養(yǎng)基。40小時(shí)后，經(jīng)胰蛋白酶消化使細(xì)胞釋放，并用Coulter計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)基中的DMSO(二甲基亞砜，用于溶解紫杉醇)和0.05MNaHCO3溶液(用于溶解DTPA-紫杉醇)的最終濃度小于0.01％。對(duì)照研究表明這一數(shù)量的溶劑對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不產(chǎn)生任何作用。DTPA-紫杉醇對(duì)B16黑素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用如圖2所示。培養(yǎng)40小時(shí)后，比較各種濃度DTPA-紫杉醇的細(xì)胞毒性。紫杉醇和DTPA-紫杉醇的IC50分別為15nM和7.5nM。對(duì)乳腺癌(MCa-4)腫瘤模型的抗腫瘤作用在雌性(C3Hf/kam)小鼠的右腿肌肉上接種乳腺癌(MCa-4)(5×105細(xì)胞/肌肉)。當(dāng)腫瘤長(zhǎng)至8mm(約2周)時(shí)，給予10,20和40mg當(dāng)量紫杉醇/kg體重的單劑量紫杉醇或DTPA-紫杉醇。對(duì)照研究中，使用鹽水和用鹽水稀釋(1∶4)的無水乙醇/乳浮50/50。每天測(cè)量腫瘤生長(zhǎng)，即測(cè)定三個(gè)正交腫瘤直徑。當(dāng)腫瘤直徑達(dá)12mm時(shí)，計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)延遲。當(dāng)腫瘤直徑約為15mm時(shí)，小鼠就會(huì)死亡。腫瘤生長(zhǎng)曲線如圖3所示。與對(duì)照組相比，紫杉醇和DTPA-紫杉醇的劑量為40mg/kg時(shí)具有抗腫瘤作用。分析數(shù)據(jù)以確定腫塊直徑達(dá)12mm的平均天數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，劑量為40mg/kg時(shí)，與鹽水治療對(duì)照相比，DTPA-紫杉醇延遲的腫瘤生長(zhǎng)有顯著性意義(P＜0.01)。對(duì)DTPA-紫杉醇而言，腫塊直徑達(dá)12mm的平均時(shí)間為12.1天，紫杉醇為9.4天(圖4)。用111In對(duì)DTPA-紫杉醇進(jìn)行放射性標(biāo)記在2ml的V形瓶中連續(xù)加入40ul0.6M乙酸鈉(pH5.3)緩沖液、40ul0.06M檸檬酸鈉(pH5.5)、20ulDTPA-紫杉醇的乙醇溶液(2％W/V)和20ul乙酸鈉緩沖液(pH5.5)中的111InU3溶液(1.0mCi)。在室溫培養(yǎng)30分鐘后，用鹽水和隨后的乙醇作為流動(dòng)相，使混合物通過一個(gè)C18Sep-Pac柱，從而使標(biāo)記的紫杉醇純化。用鹽水去除游離的111In-DTPA(＜3％)，同時(shí)在乙醇洗滌中收集111In紫杉醇。在氮?dú)庵姓舭l(fā)乙醇，鹽水中則再次形成標(biāo)記性產(chǎn)物。放射性化學(xué)試劑產(chǎn)率84％。分析111In-DTPA-紫杉醇用HPLC分析反應(yīng)混合物和111In紫杉醇的純度。此系統(tǒng)由LDC二分泵、填充ODS5um硅膠的100×8.0mm(i.d.)水柱組成。用水和甲醇的梯度混合物(15分鐘后梯度為0％-85％甲醇)以1ml/分的流速洗脫此水柱。用NaI晶體檢測(cè)器和光譜-物理學(xué)UV/Vis檢測(cè)器監(jiān)測(cè)此梯度系統(tǒng)。正如HPLC分析證實(shí)的，用Sep-Pak柱純化去除大多數(shù)111In(保留時(shí)間為2.7分鐘)。111In-DTPA可能是來自DTPA-紫杉醇中的痕量DTPA雜質(zhì)。111In-DTPA紫杉醇的放射性層析譜與其UV層析相一致，這表明12.3分鐘時(shí)的峰值實(shí)際上是靶化合物。在同樣的層析條件下，紫杉醇的保留時(shí)間為17.1分鐘。用HPLC分析測(cè)定的最終制劑的放射性化學(xué)試劑純度為90％。全身閃爍照相在雌性C3Hf/kam小鼠的右腿肌肉中接種乳腺癌(MCa-4)(5×105細(xì)胞)。當(dāng)腫塊直徑長(zhǎng)至12mm時(shí)，將小鼠分成兩組。腹膜內(nèi)注射苯巴比妥鈉使組Ⅰ小鼠麻醉，然后經(jīng)尾靜脈注射111In-DTPA-紫杉醇(100-200mCi)。將裝有中等能量準(zhǔn)直儀的γ-照相機(jī)正對(duì)小鼠安放(3個(gè)/組)。在注射后5,30,60,120,240分鐘和24小時(shí)收集連續(xù)5分鐘所得的圖像。組Ⅱ中，除用111In-DTPA注射作對(duì)照外，過程與組Ⅰ相同。圖5表示用111In-DTPA和111In-DTPA紫杉醇注射的動(dòng)物的γ閃爍照相圖。111In-DTPA具有以下特點(diǎn)，即從血漿中快速清除，在尿中快速而高效排泄，這樣在腎中僅極少保留，在腫塊、肝臟、腸道和其它器官或軀干部位幾乎沒有保留。對(duì)比之下，111In-DTPA-紫杉醇與紫杉醇具有相似的藥理學(xué)特性(Eisemanetal.,1994)。大腦中的放射性幾乎不存在。肝和腎具有最大的組織與血漿比例。藥物從血液清除的一個(gè)主要途徑是放射性標(biāo)記的DTPA-紫杉醇或其代謝產(chǎn)物的肝膽排泄。與紫杉醇不同，相當(dāng)數(shù)量的111In-DTPA-紫杉醇還通過腎臟排泄，這在紫杉醇清除中僅占一小部分。腫瘤對(duì)111In-DTPA-紫杉醇有明顯的攝取作用。這些結(jié)果表明111In-DTPA-紫杉醇可檢測(cè)一些腫瘤，并能定量腫瘤攝取的111In-DTPA-紫杉醇，這樣反過來可幫助選擇用紫杉醇治療的病人。實(shí)施例2聚谷氨酸紫杉醇本實(shí)施例證實(shí)了紫杉醇與水溶性聚合物，聚(L-谷氨酸)(PG)，的共軛作用。用作藥物載體的水溶性聚合物是眾所周知的(kopecek,1990；Maeda和Matsumura,1989)。除了具有使其它不溶性藥物加溶的能力外，藥物一聚合物共軛物還可用作控制藥物釋放的慢釋點(diǎn)。PG-紫杉醇的合成選擇PG作為紫杉醇的載體，這是因?yàn)樗妆蝗苊阁w酶類降解、在血漿中穩(wěn)定且包含足夠的供藥物吸附的功能基團(tuán)。有幾種抗腫瘤藥物已與PG共軛，包括阿霉素(VanHeeswijketal.,1985；Hoesetal.,1985)、環(huán)磷酰胺(Hiranoetal.,1979)和阿糖胞苷。將PG鈉鹽(MW34k,Sigma,0.35g)溶解在水中。用0.2MHCl將水溶液的pH調(diào)至2。收集沉淀物，用雙蒸水滲析，冰凍干燥得到0.29gPG。往PG在干DMF(二甲基甲酰胺)(1.5mL)中的溶液(75mg,重復(fù)單位FW170,0.44mmol)中加入20mg紫杉醇(0.023mmoL,PG/紫杉醇的摩爾比=19)、15mg二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(0.073mmoL)和少量二甲氨基吡啶(DMAP)。在室溫下進(jìn)行4小時(shí)反應(yīng)。薄層層析(TLC，硅膠)顯示紫杉醇(Rf=0.55)完全轉(zhuǎn)變成聚合物共軛物(Rf=0，流動(dòng)相，CHCl3/MeOH=10∶1)將氯仿加入反應(yīng)混合物中。收集所得的沉淀物，并在真空中干燥得到65mg聚合物-藥物共軛物。通過改變起始物質(zhì)中紫杉醇與PG的重量比，可合成含不同濃度紫杉醇的聚合物共軛物。將上述產(chǎn)物溶解在0.5MNaHCO3中得到PG-紫杉醇的鈉鹽。用蒸餾水(MWCO1,000)對(duì)PG-紫杉醇的水溶液進(jìn)行滲析，以去除分子量小的雜質(zhì)和剩余的NaHCO3鹽。將滲析物冰凍干燥得到88.6mg白色粉末。用UV(下述)測(cè)得這種聚合物的共軛物中的紫杉醇的含量為21％(w/w)。產(chǎn)率(轉(zhuǎn)化為結(jié)合聚合物的紫杉醇，UV):93％。用這種方法僅增加所用的紫杉醇與PG的比例，就可合成高紫杉醇含量(達(dá)35％)的PG-紫杉醇。1H-NMR(GE型GN500譜儀，500MHz，在D2O中)δ=7.75-7.36ppm(紫杉醇的芳香族成分)；紫杉醇的脂肪族成分的1H-NMR分布為δ=6.38ppm(C10-H),5.97ppm(C13-H),5.63和4.78ppm(C2’-H),5.55-5.36ppm(C3’-H和C2-H,m),5.10ppm(C5-H),4.39ppm(C7-H),4.10ppm(C20-H),1.97ppm(OCOCH3)，和1.18-1.20pm(C-CH3)。紫杉醇的其它共振被PG的共振掩蓋了。4.27ppm(H-α)、2.21ppm(H-γ)和2.04ppm(H-β)處的PG共振可按純PG光譜。很難準(zhǔn)確分辨和測(cè)定與聚合物共軛的紫杉醇的偶聯(lián)。在水中的溶解度＞20mg紫杉醇/ml。PG-紫杉醇的特征在BeckmanDU-640光譜儀(Fullerton,CA)中得到紫外光譜(UV)。假設(shè)水中的聚合物共軛物和甲醇中的游離藥物具有同樣的摩爾消光系數(shù)，且兩者都遵守朗伯比爾定律(LambertBeer’slaw)，根據(jù)甲醇中已知濃度的紫杉醇(λ=228nm)產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線用UV可測(cè)定與PG共軛的紫杉醇含量。如其UV光譜所示，λ位移從228至230nmPG-紫杉醇有特征性的紫杉醇吸收。假設(shè)230nm時(shí)水中的聚合物共軛物和228nm時(shí)甲醇中的游離藥物具有同樣的摩爾消光系數(shù)，且兩者都遵守朗伯比爾定律(LambertBeer’slaw)，根據(jù)甲醇中已知濃度的紫杉醇(在228nm吸收)產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線可測(cè)定在PG-紫杉醇中的紫杉醇含量。PG-紫杉醇的凝膠滲透色譜研究用凝膠滲透色譜(GPC)來表征PG-紫杉醇的相對(duì)分子量。該GPC系統(tǒng)由以下組成與LDC梯度主導(dǎo)裝置連接的兩個(gè)LDCⅢ型泵、一個(gè)PL凝膠GPC柱和一個(gè)水990光電二極管矩陣檢測(cè)器。洗脫液(DMF)以1.0ml/分流動(dòng)，在270nm進(jìn)行UV測(cè)定。紫杉醇與PG的共軛作用導(dǎo)致PG-紫杉醇的分子量增加，這是通過將PG的保留時(shí)間6.4分轉(zhuǎn)換為PG-紫杉醇共軛物的保留時(shí)間5.0分，用GPC分析得到的結(jié)果。含15-25％紫杉醇(w/w)的PG-紫杉醇的分子量為45-55kDa。將PG-紫杉醇轉(zhuǎn)化為其鈉鹽可有效去除此粗制品中所含的小分子量雜質(zhì)(保留時(shí)間8.0-10-0分，和11.3分)，然后對(duì)粗制品進(jìn)行滲析。PG-紫杉醇共軛物的水解降解將相當(dāng)于濃度0.4mM紫杉醇的PG-紫杉醇溶解在PH6.0、PH7.4和PH9.6的磷酸鹽緩沖溶液(PBS,0.01M)中。將溶液在37℃培養(yǎng)，并輕輕搖動(dòng)。在選定的時(shí)間間隔，去除等分試樣(100μl)，與等體積甲醇混合，高效液相層析(HPLC)進(jìn)行分析。HPLC系統(tǒng)包括反相硅柱(Nova-Pac,水,CA)、以1.0ml/分流速流動(dòng)的甲醇-水(2∶1,v/v)流動(dòng)相和光電二極管檢測(cè)器。假設(shè)228nm處的每一峰值的摩爾消光系數(shù)與紫杉醇的相同，則通過比較單獨(dú)得到的紫杉醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線的峰值面積可計(jì)算出每一樣本中與PG結(jié)合的紫杉醇、游離紫杉醇和其它降解產(chǎn)物的濃度。用線性最小平方回歸分析法測(cè)得共軛物的半衰期在pH6-0、7.4和9.6時(shí)分別為132、40和4天。HPLC分析表明PG-紫杉醇在PBS溶液中培養(yǎng)可生成紫杉醇和包括一種較紫杉醇更有疏水性的物質(zhì)(代謝產(chǎn)物1)在內(nèi)的其它幾種物質(zhì)。實(shí)際上，培養(yǎng)100小時(shí)后，回收在pH7.4的PBS中的代謝產(chǎn)物1(大多數(shù)可能是7-表紫杉醇)的數(shù)量超過了紫杉醇的(圖6)。體外研究將從pH7.4的PBS溶液得到的等分試樣用微管蛋白聚合測(cè)定法進(jìn)行分析。于32℃下在PEM緩沖液(pH6.9)和1.0mMGTP中進(jìn)行微管蛋白合成反應(yīng)，其中試驗(yàn)樣品中(相當(dāng)1.0μM紫杉醇)微管蛋白(牛腦，CytoskeletonInc.,Boulder,CO)的濃度為1mg/ml。一段時(shí)間后在340nm處測(cè)定溶液的吸收，接著進(jìn)行微管蛋白聚合。15分鐘后，加入CaCl2(125mM)以測(cè)定CaCl2誘導(dǎo)的微管解聚。在產(chǎn)生微管的過程中剛?cè)芙庠赑BS中的PG-紫杉醇是無活性的，將PG-紫杉醇的等分試樣培養(yǎng)3天不會(huì)出現(xiàn)微管蛋白聚合。所形成的微管是穩(wěn)定的，不會(huì)出現(xiàn)CaCl2誘導(dǎo)的解聚作用。用四唑鎓鹽(MTT)測(cè)定法(Mosmann,1983)也可檢測(cè)PG-紫杉醇對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。將MCF-7細(xì)胞或13762F細(xì)胞種在2×104細(xì)胞/ml的96孔微滴定盤中，24小時(shí)后加入不同濃度的PG-紫杉醇、紫杉醇或PG，然后再培養(yǎng)72小時(shí)。又在每一孔中加入MTT溶液(20μl,5mg/ml),培養(yǎng)4小時(shí)。吸取上清液，在波長(zhǎng)為590nm處用微盤熒光讀數(shù)器測(cè)定由代謝可見細(xì)胞產(chǎn)生的MTT甲譖。過了3天，PG-紫杉醇對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用與游離紫杉醇的作用極其相似。對(duì)于人類乳腺瘤細(xì)胞系MCF-7，所得到的紫杉醇的IC50值為0.59μM,PG-紫杉醇為0.82μM(按紫杉醇當(dāng)量單位測(cè)定)。相對(duì)于13762F細(xì)胞系，PG-紫杉醇(IC50=1.86μM)的靈敏度可與紫杉醇(IC50=6.79μM)進(jìn)行比較。對(duì)于這兩種細(xì)胞系，單獨(dú)PG的IC50大于100μM。體內(nèi)抗腫瘤活性所有的動(dòng)物研究是根據(jù)制定的原則在M.D.Anderson癌癥中心提供的動(dòng)物設(shè)施中進(jìn)行的。在實(shí)驗(yàn)放射腫瘤學(xué)系的無致病菌設(shè)施中飼養(yǎng)C3H/Kam小鼠。通過在雌性C3H/Kam小鼠(25-30g)的右腿肌肉中注射5×105鼠卵巢癌細(xì)胞(OCa-Ⅰ)、乳腺癌(MCa-4)、肝癌(HCa-Ⅰ)或纖維肉瘤(FSa-Ⅱ)而產(chǎn)生單個(gè)腫瘤。在類似的研究中，對(duì)雌性Fischer344大鼠(125-150g)注射了1.0×1050可見的于0.1mlPBS中的13762F腫瘤細(xì)胞。當(dāng)小鼠中的腫瘤長(zhǎng)至500mm3(直徑10mm)，或大鼠中的腫瘤長(zhǎng)至2400mm3(平均直徑17mm)時(shí)開始治療。給予相當(dāng)40-160mg紫杉醇/kg體重的單劑量于鹽水中的PG-紫杉醇或于乳浮EL載體中的紫杉醇。對(duì)比實(shí)驗(yàn)中，使用鹽水、乳浮載體[用鹽水(1∶4)稀釋的50/50乳浮/乙醇]，鹽水中的PG(MW38K)溶液和紫杉醇/PG混合物。測(cè)量三個(gè)正交腫瘤直徑以確定每天腫瘤的生長(zhǎng)(圖7A、7B、7C、7D和7E)。根據(jù)式(A×B×C)/2計(jì)算腫瘤體積。小鼠中的絕對(duì)生長(zhǎng)延遲(AGD)是指小鼠中用不同藥物治療的腫瘤從500長(zhǎng)至2000mm3的天數(shù)減去用對(duì)照治療的腫瘤從500長(zhǎng)至2000mm3的天數(shù)。表1總結(jié)了大鼠中PG-紫杉醇與紫杉醇/乳浮相比的急性毒性。表2總結(jié)了有關(guān)PG-紫杉醇對(duì)小鼠中的MCa-4、FSa-Ⅱ和HCa-Ⅰ腫瘤的作用的數(shù)據(jù)。此數(shù)據(jù)還可見于圖7A-7F中。表1PG-紫杉醇在Fischer大鼠中的急性毒性*<>*將藥物單獨(dú)靜脈注射到患有13762F腫瘤的Fischer大鼠(雌性,130g)中。a將共軛物溶解在鹽水中制備PG-紫杉醇(相當(dāng)8mg紫杉醇/ml)。在60mg/kg時(shí)注射的體積為0.975ml/只大鼠。b將紫杉醇溶解在1∶1的乙醇和克羅莫佛(30mg/ml)的混合物中制備紫杉醇克羅莫佛溶液。注射前用鹽水(1∶4)進(jìn)一步稀釋此儲(chǔ)備溶液。此溶液中紫杉醇的最終濃度為6mg/ml。在60mg/kg時(shí)注射的體積為1.3ml/只大鼠。c將聚合物溶解在鹽水中制備PG溶液(22mg/ml)。注射劑量為0.3g/kg(1.8ml/只大鼠)，相當(dāng)于60mg紫杉醇/kg。d用鹽水(1∶4)稀釋乙醇和克羅莫佛(Cremophor)(1∶1)的混合物制備克羅莫佛載體。表2PG-紫杉醇對(duì)鼠體內(nèi)不同類型腫瘤的抗腫瘤作用</tables>a用不同劑量的鹽水中的PG-紫杉醇(相當(dāng)40-120mg紫杉醇/kg)或克羅莫佛載體中的紫杉醇單獨(dú)靜脈注射治療右腿有500mm3腫瘤的小鼠。對(duì)照組動(dòng)物用鹽水(0.6ml)，克羅莫佛載體(0.5ml)，鹽水中的PG溶液，或PG(g/kg)+紫杉醇(80mg/kg)治療。b通過用卡尺每天測(cè)量三個(gè)正交直徑來確定腫瘤的生長(zhǎng)，體積計(jì)作(a×b×c)/2?？崭裰兴镜氖敲恳唤M所用的動(dòng)物數(shù)。從500mm3長(zhǎng)至2000mm3的天數(shù)表示為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤。c絕對(duì)生長(zhǎng)延遲(AGD)是指用各種藥物治療的腫瘤從500長(zhǎng)至2000mm3的天數(shù)減去用鹽水作為對(duì)照治療的腫瘤從500長(zhǎng)至2000mm3的天數(shù)。d用Student’st檢驗(yàn)比較治療組和鹽水組腫瘤從500長(zhǎng)至2000mm3的天數(shù)。P值為雙側(cè)，當(dāng)P值小于等于0.05時(shí)，有顯著性差異。實(shí)施例3聚乙二醇-紫杉醇聚乙二醇-紫杉醇(PEG-紫杉醇)的合成此合成分兩步完成。首先根據(jù)已知方法制備2’-琥珀酰-紫杉醇(Deutschetal.,1989)。將紫杉醇(200mg,0.23mmol)和琥珀酸酐(228mg,2.22mmol)在無水吡啶(6ml)中在室溫反應(yīng)3小時(shí)。然后蒸發(fā)吡啶，用水處理殘余物，攪拌20分鐘并過濾。將沉淀物溶解在丙酮中，慢慢加入水，收集最后的結(jié)晶得到180mg2’-琥珀酰-紫杉醇。通過N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氫喹啉(EEDQ)介導(dǎo)的偶聯(lián)反應(yīng)合成PEG-紫杉醇。在2’-琥珀酰-紫杉醇溶液(160mg,0.18mmol)和二氯甲烷中的甲氧聚氧乙烯胺(PEG-NH2,MW5000,900mg,0.18mmol)中加入EEDQ(180mg,0.18mmol)。在室溫將反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)。用乙酸乙酯再用氯仿-甲醇(10∶1)在硅膠上對(duì)粗制品進(jìn)行色譜分析。這樣得到350mg產(chǎn)品。1HNMR(CDCl3)δ2.76(m，琥珀酸，COCH2CH2CO2),δ3.63(PEG,OCH2CH2O),δ4.42(C7-H)和δ5.51(C2’-H)。最大的UV吸收在288nm,這也是紫杉醇的特點(diǎn)。與PEG結(jié)合逐漸增加了紫杉醇的水中溶解性(＞相當(dāng)20mg紫杉醇/ml水)。PEG-紫杉醇的水解穩(wěn)定性將濃度為0.4mM的PEG-紫杉醇溶解在不同pH的磷酸鹽緩沖液(0.01M)中，將溶液在37℃培養(yǎng)，并輕輕搖動(dòng)。在選擇的時(shí)間間隔，去除等份試樣(200μl)并冰凍干燥。將所得到的干燥粉末溶解在二氯甲烷中，進(jìn)行凝膠滲析色譜分析(GPC分析)。GPC系統(tǒng)由以下部分組成Perkin-ElmerPL凝膠混合床柱、Perkin-Elmer無梯度液相層析(LC)泵、PENelson900系列界面、光譜一物理學(xué)UV/Vis檢測(cè)器以及數(shù)據(jù)站。在228nm用UV檢測(cè)，洗脫液(二氯甲烷)以1.0ml/分流動(dòng)。PEG-紫杉醇和紫杉醇的保留時(shí)間分別為6.1和8.2分鐘。將峰值量化，并計(jì)算剩余的PEG-紫杉醇的百分?jǐn)?shù)和釋放的紫杉醇的百分?jǐn)?shù)。在pH7.4用線性最小平方測(cè)得PEG-紫杉醇的半衰期為54分鐘。pH9.0的半衰期為7.6分鐘。PH7.4時(shí)PEG-紫杉醇中的紫杉醇釋放圖如圖8所示。使用B16小鼠黑素瘤細(xì)胞進(jìn)行體外PEG-紫杉醇的細(xì)胞毒性研究根據(jù)在DTPA-紫杉醇的細(xì)胞毒性研究中所述的方法，將黑素瘤細(xì)胞按2.5×104細(xì)胞/ml的濃度種在24孔平板中，并于37℃在含5.5％CO2的97％濕度下在50∶55Delbecco改進(jìn)的極限最小培養(yǎng)基(DEM)和含10％小牛血清的F12培養(yǎng)基中生長(zhǎng)24小時(shí)。然后用含5×10-9M-75×10-9M濃度的紫杉醇或DTPA-紫杉醇的培養(yǎng)基代替化培養(yǎng)基。40小時(shí)后，經(jīng)胰蛋白酶消化使細(xì)胞，并用Coulter計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)基中的DMSO(二甲基亞砜，用于溶解紫杉醇)和0.05MNaHCO3溶液(用于溶解DTPA-紫杉醇)的最終濃度小于0.01％。對(duì)照研究表明這一數(shù)量的溶劑對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不產(chǎn)生任何作用。而且，用于產(chǎn)生5×10-9M至75×10-9M當(dāng)量紫杉醇濃度的PG濃度范圍對(duì)細(xì)胞增殖不產(chǎn)生作用。PEG-紫杉醇對(duì)小鼠的MCa-4腫瘤的抗腫瘤作用為了確定PEG-紫杉醇對(duì)固體乳腺腫瘤的抗腫瘤能力，將MCa-4細(xì)胞(5×105細(xì)胞)注射在雌性C3Hf/Kam小鼠的右腿肌肉中。如實(shí)施例1有關(guān)DTPA-紫杉醇所述，當(dāng)腫瘤長(zhǎng)至8mm(約2周)時(shí)，給予相當(dāng)10,20和40mg紫杉醇/kg體重的單劑量紫杉醇或DTPA-紫杉醇。首先將紫杉醇溶解在與乳浮等體積的無水乙醇中。在15分鐘注射時(shí)間內(nèi)，進(jìn)一步用滅菌生理鹽水稀釋(1∶4體積)這種儲(chǔ)備溶液。將PEG-紫杉醇溶解在鹽水(6mg當(dāng)量紫杉醇/ml)中，通過無菌過濾器(Millipore,4.5μm)過濾。對(duì)照實(shí)驗(yàn)中使用鹽水、紫杉醇載體、用鹽水稀釋(1∶4)的無水乙醇/乳浮(1∶1)和鹽水中的PEG溶液(600mg/kg體重)。每天測(cè)量腫瘤生長(zhǎng)，即測(cè)定三個(gè)正交腫瘤直徑。當(dāng)腫瘤直徑達(dá)12mm時(shí)，計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)延遲。腫瘤生長(zhǎng)曲線如圖9所示。劑量為40mg/kg時(shí)，PEG-紫杉醇和紫杉醇都能有效延遲腫瘤生長(zhǎng)。雖然兩者沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異，但紫杉醇較PEG-紫杉醇更有效。紫杉醇治療腫瘤需要9.4天使腫瘤直徑達(dá)到12mm，而PEG-紫杉醇需要8.5天。從統(tǒng)計(jì)學(xué)上來講，這些數(shù)值與相應(yīng)的對(duì)照組比較沒有顯著性差異(p＞0.05)，對(duì)照組中紫杉醇載體為6.7天，PEG的鹽水溶液為6.5天(圖4)。由于本發(fā)明的組合物和方法已在優(yōu)選的實(shí)施方式中進(jìn)行了說明，因此對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，在不超出本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍的情況下，本文所述的組合物，方法和步驟或該方法的步驟順序可以不同。尤其是，很顯然，可以用某些化學(xué)上和生理上相關(guān)的試劑代替本文所述的試劑，而仍可得到同樣或類似的結(jié)果。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，所有這些替代和修改都應(yīng)在本發(fā)明權(quán)利要求所限定的內(nèi)容和范圍內(nèi)。參考文獻(xiàn)下面的參考文獻(xiàn)在一定程度是對(duì)前面所述文獻(xiàn)進(jìn)行示范性或更詳細(xì)的補(bǔ)充說明，在此作為參考。BartoniandBoitart，“游離和膠囊紫杉酚的體內(nèi)外抗腫瘤活性”7微膠囊雜志，191-197,1990。Cortes,J.E.andPazdur,R.,“Docetaxel”，臨床腫瘤學(xué)雜志13:2643-2655,1995。Deutschetal.，“協(xié)同劑和前體藥物的合成”3.“具有潛在抗腫瘤活性的紫杉酚的水溶性前體藥物”藥物化學(xué)雜志，32:788-792,1989。Eisemanetal.,“PlasmapharmacokineticsandtissuedistributionofpaclitaxelinCD2F1mice,”癌癥化療，藥理學(xué)，34:465-471,1994。Fidler,etal,“癌癥發(fā)病和轉(zhuǎn)移的生物學(xué)，癌癥研究進(jìn)展，28:149-250,1987。Goldspiel,“Taxolpharmaceuticalissues:preparation,administration,stability,andcompatibilitywithothermedications”，藥物療法年刊，28:S23-26,1994。Greenwaldetal.,“HighlywatersolubleTaxolderivatives,7-polyethyleneglycolestersaspotentialproducts”，有機(jī)化學(xué)雜志，60:331-336,1995。Greenwaldetal.,“Highlywatersolubletaxolderivative:2′-polyethyleneglycolestersaspotentialproducts”，生物有機(jī)和藥物化學(xué)通訊，4:2465-2470,1994。Hiranoetal.,“Polymericderivativesofactivatedcyclophosphamideasdrugdeliverysystemsinantitumortherapy，”，大分子化學(xué)，180:1125-1130,1979。Hoesetal.,“Optimizationofmacromolecularprodrugsoftheantitumorantibioticadriamycin,”控制釋放雜志，2:205-213,1985。Hofleetal.,DE38942。Horwitzetal，“紫杉醇，作用和耐藥機(jī)制“J.Natl.CancerInst.MonographsNo.15,PP.55-61,1993。Katoetal.,“antitumoractivityofl-b-arabinofuranosylcytosineconjugatedwithpolyglutamicacidanditsderivative”，癌癥研究，44:25,1984。Kopecek,“thepotentialofwater-solublepolymericcarriersintargetedandsite-specificdrugdelivery”，控制釋放雜志，11:279-290,1990。KopecekandKopeckova，“靶向水溶性聚合物抗癌藥achievementsandunsolvedproblems”,Proceed,InternSymp.Control.Rel.Bioact.Mater.,20:190-191,1993。MaedaandMatsumura,“Tumoritropicandlymphotropicprinciplesofmacromoleculardrugs”，治療藥物載體系統(tǒng)的主要綜述，6:193-210,1989。MagriandKingston，“改進(jìn)的紫杉酚，2，紫杉酚的氧化物”有機(jī)化學(xué)雜志，51:797-702,1986。Mathewetal.,“Synthesisandevaluationofsomewater-solubleprodrugsandderivativesoftaxolwithantitumoractivity”，藥物化學(xué)雜志，35:145-151,1992。Mosmann,T.,“Rapidcolormetricassayforeellulargrowthandsurvival:aplicationtoproliferationandcytotoxicassay”，免疫學(xué)方法雜志，65:55-63,1983。Oliver,S.J.etal.,Suppressionofcollagen-inducedarthritisusinganangiogenesisinhibitor,AGM-1470,andamicrotubulestabilizer,Taxol，”細(xì)胞免疫學(xué)，157:291-299,1994。Phillips-HughesandKandarpa，“再狹窄病理學(xué)生理學(xué)和預(yù)防策略”，JVIR,7:321-333,1996。Reynolds,T.，“聚合物協(xié)助抗癌藥靶向腫瘤并保留它們?cè)谀抢铩盝.Natl,CancerInstitute,87:1582-1584,1995。Scudieroetal.,“evaluationofaSolubleTetrazolium/FormazanAssayforCellGrowthandDrugSensitivityinCultureUsingHumanandOtherTumorCellLines”癌癥研究，48:4827-4833,1988。Serruysetal.,“Acomparisonofballoon-expandable-stentimplantationwithballoonangioplastyinpatientswithcoronaryarterydisease”，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志，331:489-495,1994。SharmaandStraubinger，“新紫杉酚制劑含紫杉酚脂質(zhì)體的制備和特征”，藥理學(xué)研究，11:889-896,1994。美國(guó)專利5,583,153vanHeeswijketal.,“Thesynthesisandcharacterizationofpolypeptide-adriamycinconjugateanditscomplexeswithadriamycin,Part1”，控制釋放雜志，1:301-315,1985。Weissetal.，“紫杉酚的過敏反應(yīng)”臨床腫瘤學(xué)雜志，8:1263-1268,1990。WO96/25176Zhao,Z.andKingston,D.G.I.，“改進(jìn)的紫杉酚，6．水溶性紫杉酸磷酸鹽的制備”，天然產(chǎn)物雜志，54:1607-1611,1991。權(quán)利要求1．含有與水溶性聚合物或金屬螯合劑共軛的抗腫瘤藥的組合物，其中上述抗腫瘤藥為紫杉醇、紫杉酯、依托泊甙、替尼泊甙、喜樹堿、或epothilones。2．權(quán)利要求1所述的組合物，其中抗腫瘤藥為紫杉醇。3．權(quán)利要求1所述的組合物，其中抗腫瘤藥為紫杉酯。4．權(quán)利要求1所述的組合物，其中抗腫瘤藥與水溶性金屬螯合劑共軛。5．權(quán)利要求4所述的組合物，還包括螯合金屬離子。6．權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述的螯合金屬離子選自鋁、硼、鈣、鉻、鈷、銅、鏑、鉺、銪、釓、鎵、鍺、鈥、銦、銥、鐵、鎂、鎳、鉑、錸、銣、釕、釤、鈉、锝、鉈、錫、釔或鋅。7．權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述的螯合金屬離子為放射性核素。8．權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述的放射性核素選自67Ga(鎵)，68Ga,111In(銦)，99mTc(锝)，90Y(釔)，114mIn和193mpt(鉑)。9．含111In-DTPA-紫杉醇的組合物。10．權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述的水溶性螯合劑選自二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、乙二胺四酸(EDTA),1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二酸(TETA)、羥基亞乙基二膦酸(HEDP)、二巰基琥珀酸(DMSA)、二亞乙基三胺四亞甲基膦酸(DTTP)和1-(對(duì)-氨基芐基)-DTPA。11．權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述的螯合劑為二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)。12．權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物選自聚(l-谷氨酸)、聚(d-谷氨酸)、聚(dl-谷氨酸)、聚(l-天冬氨酸)、聚(d-天冬氨酸)、聚(dl-天冬氨酸)、聚乙二醇、聚丙烯酸、聚(2-羥乙基l-谷氨酰胺)、羧甲基葡聚糖、透明質(zhì)酸、人血清白蛋白、藻酸和其混合物。13．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的聚合物還指與聚己內(nèi)酯、聚乙醇酸、聚乳酸、聚丙烯酸、聚(2-羥乙基l-谷氨酰胺)、羧甲基葡聚糖、透明質(zhì)酸、人血清白蛋白、藻酸或其混合物的共聚物。14．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的聚合物的分子量約為5,000-100,000。15．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的聚合物的分子量約為20,000-80,000。16．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的聚合物的分子量約為30,000-60,000。17．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物與紫杉醇或紫杉酯的2｀-和/或7-羥基共軛。18．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物為聚乙二醇。19．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物為聚(l-谷氨酸)。20．權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物為聚(l-天冬氨酸)。21．權(quán)利要求1所述的組合物，其特征是分散在藥用載體溶液中。22．確定腫瘤組織攝取抗腫瘤藥物的方法，包括以下步驟a)獲得包含紫杉醇或紫杉酯與金屬螯合劑和螯合金屬離子的共軛物的組合物；b)將上述組合物用于上述腫瘤組織；c)檢測(cè)上述腫瘤組織中的螯合金屬離子；其中上述腫瘤組織中有螯合金屬離子表明紫杉醇被上述腫瘤組織攝取。23．權(quán)利要求22所述的方法，其中抗腫瘤藥物為紫杉醇。24．權(quán)利要求22所述的方法，其中上述螯合金屬離子為放射性核素，檢測(cè)方法為閃爍照相法。25．權(quán)利要求22所述的方法，其中上述腫瘤組織存在于患者體內(nèi)，且上述組合物是給上述患者使用。26．一種治療患者的癌癥的方法，包括以下步驟a)獲得一種組合物，它含有與水溶性聚合物或螯合劑共軛且分散在藥用溶液中的紫杉醇或紫杉酯；和b)將有效量的上述溶液給上述患者使用以治療上述腫瘤。27．權(quán)利要求26所述的方法，其中所述組合物包括紫杉醇。28．權(quán)利要求26所述的方法，還包括在給藥前檢測(cè)上述腫瘤對(duì)紫杉醇或紫杉酯的攝取，其中所述的檢測(cè)方法是將螯合劑-金屬離子-紫杉醇或紫杉酯共軛物給患者使用，再檢測(cè)上述腫瘤中的金屬離子。29．權(quán)利要求26所述的方法，其中所述的癌癥為乳腺癌、卵巢癌、惡性黑素瘤、肺癌、胃癌、腸癌、頭頸部癌或白血病。30．權(quán)利要求26所述的方法，其中所述的癌癥為乳腺癌。31．權(quán)利要求26所述的方法，其中所述的癌癥為卵巢癌。32．一種減少系統(tǒng)性自身免疫疾病的至少一種癥狀的方法，此方法包括給患有系統(tǒng)性自身免疫疾病的患者使用有效量的含與聚(l-谷氨酸)或聚(l-天冬氨酸)共軛的紫杉醇或紫杉酯的組合物。33．權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的組合物包括紫杉醇。34．權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的組合物包括聚(l-谷氨酸)。35．權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的系統(tǒng)性自身免疫疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。36．一種抑制血管損傷后的動(dòng)脈再狹窄或動(dòng)脈閉塞的方法，包括給患者使用一種含與聚(l-谷氨酸)或聚(l-天冬氨酸)共軛的紫杉醇或紫杉酯的組合物。37．權(quán)利要求36所述的方法，其中所述的組合物包括紫杉醇。38．權(quán)利要求36所述的方法，其中所述的組合物包括聚(l-谷氨酸)。39．權(quán)利要求36所述的方法，其中所述的患者是冠狀動(dòng)脈分流術(shù)、血管外科、器官移植或冠狀動(dòng)脈或動(dòng)脈血管成形術(shù)的患者。40．權(quán)利要求36所述的方法，其中所述的組合物涂覆在斯坦特印固定模上，且上述斯坦特印固定模植在血管損傷部位。41．藥物組合物，它包含與水溶性聚合物或螯合劑共軛的紫杉醇或紫杉酯。42．權(quán)利要求41所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物為聚(l-谷氨酸)或聚(l-天冬氨酸)。43．權(quán)利要求41所述的組合物，其中所述的螯合劑為DTPA。44．權(quán)利要求43所述的組合物，還包括治療量的螯合放射性核素。45．獲得患者的身體圖象的方法，包括a)給患者使用有效量的權(quán)利要求6所述的藥劑；和b)測(cè)定閃爍照相信號(hào)得到圖象。46．一種可植入的醫(yī)療裝置，其中所述裝置涂覆有有效量的組合物以抑制平滑肌細(xì)胞增殖，此組合物包含與聚谷氨酸或聚天冬氨酸共軛的紫杉醇或紫杉酯。47．權(quán)利要求46所述的可植入的醫(yī)療裝置，還可指涂覆有上述組合物的斯坦特印固定模。48．權(quán)利要求47所述的可植入的醫(yī)療裝置，其中所述的斯坦特印固定模適用于氣囊血管成形術(shù)后，上述組合物能有效抑制再狹窄。49．組合物，它包含與紫杉醇的2｀或7羥基共軛的聚谷氨酸。50．組合物，它包含與紫杉醇的2｀或7羥基共軛的聚天冬氨酸。51．權(quán)利要求49所述的組合物，其中所述的聚谷氨酸與紫杉醇的2｀或7羥基共軛。52．權(quán)利要求50所述的組合物，其中所述的聚天冬氨酸與紫杉醇的2｀或7羥基共軛。全文摘要本發(fā)明公開了紫杉醇和紫杉酯的水溶性組合物,它是將紫杉醇或dcetaxel與水溶性螯合劑、聚乙二醇或者聚(1－谷氨酸)或聚(1－天冬氨酸)之類的聚合物共軛而制成的。還公開了用這種組合物治療腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎之類自身免疫疾病,和預(yù)測(cè)腫瘤攝入的紫杉醇,以及用于放射性標(biāo)記的二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)一紫杉醇腫瘤成像。其它實(shí)施方式包括涂覆可植入的斯坦特印固定模以預(yù)防再狹窄。文檔編號(hào)A61K31/7048GK1217662SQ97194360公開日1999年5月26日申請(qǐng)日期1997年3月11日優(yōu)先權(quán)日1996年3月12日發(fā)明者C·李,S·華萊士,D-F·于,D·J·楊申請(qǐng)人:Pg－Txl有限公司