專利名稱：致免疫的tlp組合物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及腫瘤疾病的免疫治療領(lǐng)域?，F(xiàn)有技術(shù)腫瘤學(xué)研究已經(jīng)多次致力于腫瘤疾病的免疫治療問題，這些研究是基于一個合理的可能性通過控制人體能自發(fā)形成的免疫腫瘤學(xué)反應(yīng)，可尋找到一條有用的治療途徑。在早期的文獻(xiàn)中(I.S.Irlin，病毒學(xué)(Virology)1967 32725；E.Klen等，自然癌癥協(xié)會(Nat.CancerInst).1964 32547；G.J.Pasternak，自然癌癥協(xié)會雜志(J.Nat.CancerInst.)1965，3471，S.S.Tevethia等，免疫學(xué)(Immunol.)1968，100358；R.Nishioka等，專題論文(Monograph)1968，749)，可找到趨向這種科學(xué)研究的強烈需要，這些研究是關(guān)于人體和動物贅生性細(xì)胞抗原刺激特定的體液和細(xì)胞抗體產(chǎn)生。
迄今為止所進(jìn)行的作為免疫治療途徑的免疫控制一方面反映了不斷獲得的關(guān)于宿主免疫系統(tǒng)和癌癥的生理病理學(xué)知識，另一方面，又遇到了缺少合適的致免疫試劑或者對于除掉癌癥病人的細(xì)胞免疫障礙有難度的問題。
實際上，最初有下列兩種途徑a)非特異性地活化宿主的免疫，目的是加強免疫腫瘤反應(yīng)(免疫佐劑)；b)特異性地活化宿主的免疫，目的是選擇性地刺激具有溶腫瘤作用的抗體的產(chǎn)生。
上述特異性途徑的優(yōu)點是對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生更特異性的和更有效的免疫反應(yīng)，免疫效果增強。
在所有情況下，免疫系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞通過兩種機理介導(dǎo)直接的細(xì)胞毒機理(NK細(xì)胞)和更復(fù)雜但更有效并且更特異性的細(xì)胞毒機理，后一種機理包括腫瘤細(xì)胞表面抗原的識別和抗體的出現(xiàn)(ADCC細(xì)胞毒性，普遍由CD8＋細(xì)胞介導(dǎo))。免疫系統(tǒng)一直通過復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)起作用，這樣通過抑制和刺激，以“級聯(lián)”方式調(diào)節(jié)效應(yīng)器細(xì)胞的作用。
迄今為止，通過非特異性方式擴(kuò)大(胸腺激素、IL-2)或活化(BCG，PPD，IFNs，IL-2，TNFs等)淋巴細(xì)胞種群，免疫治療一直著眼于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的放大。還通過應(yīng)用單種物質(zhì)(IL-2，IFN等)對這種效應(yīng)進(jìn)行研究，其中，為了引起必要的功能，上述物質(zhì)需要以高劑量給藥，從而帶來較大的毒性作用和人們難以承受的高費用(Mule JJ，Shu S.，Swarz SL.，Rosenberg SA.，科學(xué)(Science)2251478，1984；HaddenJW.，《免疫調(diào)節(jié)進(jìn)展》，(“Advances inimmunomudulation”)，1988，B.Bizzini和E.Bonmassar編，Pitagora出版，羅馬)。
以前的研究表明對于某些體外腫瘤細(xì)胞，組合的免疫治療(胸腺激素和低劑量給藥的細(xì)胞因子，α-IFN或IL-2)能夠?qū)α馨图?xì)胞的細(xì)胞毒活性(NK，LAK，CTL活性)產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)(Favalli，C，.Mastino，A.，Jezzi，T，Grelli，S.，Goldestein，A.L.和Garaci，E.，國際免疫藥學(xué)雜志(Int.J.Immunopharmacol.)，11，443-450，1989；Mastino，A.，F(xiàn)avalli，C.，Grelli，S.，Innocenti，F(xiàn).和Garaci，E.，細(xì)胞免疫(Ccll Immunol.)，133，196-205，1991)。
然而，細(xì)胞毒活性的增加既不相應(yīng)于體內(nèi)足夠的抗腫瘤反應(yīng)，也不相應(yīng)于增加的存活率。(Favalli，C.，Mastino，A.，Grelli，S.，Pica，F(xiàn).，Rasi，G.，Garaci，E.，組合治療(Combination Therapies)，第275-280頁，A.Goldstein和E.Garaci編，Plenum出版社，紐約，1992；Mastino，A.，F(xiàn)avalli，C.，Grelli，S.，Rasi，G.，Pica，F(xiàn).，Goldestein，A.L.和Garaci，E.，國際癌癥雜志(Int.J.Cancer).50，493-499，1992；Garaci，E.，Pica，F(xiàn).，Mastmo，A.，Palamara，A.T，.Belardelli，F(xiàn).和Favalli，C.，免疫治療雜志(J.Immunother.)，13，7-17，1993)。相反地，當(dāng)化療(盡管應(yīng)用無效的劑量)后進(jìn)行組合的免疫治療時，在另一方面能使腫瘤完全愈痊(Mastino，A.，F(xiàn)avalli，C.，Grelli，S.，Rasi，G.，Pica.，F(xiàn).，Goldestein，A.L.和Garaci，E.，國際腫瘤雜志(Int.J.Cancer，50，493-499，1992；Garaci，E.，Pica，F(xiàn).，Mastino，A.，Palamara，A.T.，Belardelli，F(xiàn).和Favalli，C.，免疫治療雜志(J.Immunother.)，13，7-17，1993；Rasi，G.，Sinibaldi-Vallebona P.，F(xiàn)avalli，C.，Pierimarchi，P等，第2屆國際組合治療研討會(2nd International Symposium on Combination Therapies)文件，1992年5月1-3日，Santa Tecla，CT)。
對實驗?zāi)Ｐ偷倪M(jìn)一步研究表明免疫治療只對致免疫的瘤形成有效，而且，化療(應(yīng)用無效劑量)的主要作用是使瘤形成致免疫(Rasi，G.，Sinibaldi-Vallebona P.，F(xiàn)avalli，C，.Pierimarchi，P等，第2屆國際組合治療研討會(2nd International Symposium on Combination Therapies)文件，1992年5月1-3日，Santa Tecla，CT；Sinibaldi-Vallebona P.，Pierimarchi，P.，Ravagnan，G.P.，Rasi，G.，等，第3屆國際組合治療研討會(Third International Symposium on Combination Therapies)文件，1993年10月29-31日，休斯敦，德克薩斯；Sinibaldi-Vallebona P.，Pierimarchi，P.，Lucertini，L.，Ravagnan，G.P.，Rasi，G.，第4屆國際組合治療研討會(Forth International Symposium on Combination Therapies)文件，P.105，1994年6月14-17日；Rasi，G.，Silecchia，G.F.，Sinibaldi-Vallebona P.，Pierimarchi，P.，Sivilia，M.，Tremiterra，S.，Garaci，E.，國際癌癥雜志(Int.J.Cancer)，57，701-705，1994)。近來，發(fā)現(xiàn)該策略對治療人固形腫瘤有效(Rasi，G.，F(xiàn)avalli，C.，Terzoli，E.，Izzo，F(xiàn).，Sinibaldi-Vallebona P.，Pierimarchi，P.，Sivilia，M.，Garaci，E.，生物藥和藥物治療(Biomedicine & pharmacotherapy)，47-292，1993)。在實驗?zāi)Ｐ椭?，我們已?jīng)證明單個治療(化療、胸腺激素、細(xì)胞因子)效應(yīng)低或沒有效應(yīng)；即使在細(xì)胞免疫活性水平有較大增加的情況下也沒有抗腫瘤效應(yīng)；只有對贅生性細(xì)胞存在特異性細(xì)胞調(diào)節(jié)的細(xì)胞毒活性時腫瘤細(xì)胞才溶解。根據(jù)這些研究可以得出結(jié)論為了誘發(fā)具有顯著抗腫瘤效應(yīng)的細(xì)胞毒免疫反應(yīng)，抗原的作用是決定性的。
當(dāng)試圖擴(kuò)大抗腫瘤免疫反應(yīng)時，用來誘發(fā)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的抗原的可利用性，以及關(guān)于每個“靶/效應(yīng)器”系統(tǒng)(腫瘤細(xì)胞/淋巴細(xì)胞)中免疫學(xué)關(guān)系的了解，顯得是必要的。
TLP復(fù)合物是人體腫瘤細(xì)胞中存在的蛋白質(zhì)復(fù)合物。在這些TLP蛋白質(zhì)中已有人描述了一種240Kda的蛋白質(zhì)(Tarro G.，腫瘤學(xué)(Oncology)40，248-253，1983)。如EP0283443所述從腫瘤組織中分離TLP。EP649433鑒定了一種從肺癌中得到的TLP蛋白質(zhì)。意大利專利申請RM96A000496表明與以前鑒定的TLP相比，從泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤得到的TLP含有不同的肽序列。還可應(yīng)用已知方法來合成產(chǎn)生TLP蛋白質(zhì)的蛋白片段。
1983年，鑒定出了一種240Kda的新腫瘤抗原，該抗原從非小細(xì)胞(non-small cell)肺癌腫瘤性轉(zhuǎn)化組織(NSCLC)中提取得到，被命名為TLP(腫瘤釋放顆粒)。在冷泉港實驗室(美國紐約)，最近進(jìn)行了該肺癌抗原的結(jié)構(gòu)分析，并提取出100kDa的抗原，然后鑒定出一種主要的TLP表位序列，合成了該多肽(一種九肽，CSH275)，并制備出了相關(guān)的抗體(CSH419)。
在免疫沉淀和免疫組織化學(xué)(PAP)分析之后應(yīng)用Western印跡分析，證明了該抗體(CSH419)能識別由考慮到的所有腫瘤性轉(zhuǎn)化組織(NSCLC)制得的組織勻漿中的抗原序列。
如SEQ ID NO.1序列所列的該多肽和其它來源于TLP抗原區(qū)域的多肽，都曾記載在EP649433(相應(yīng)于國際申請WO-A-001458)中并要求權(quán)利保護(hù)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及一種用于治療和致免疫作用的藥物組合物，該組合物含有TLP(腫瘤釋放顆粒)復(fù)合物中的至少一種蛋白質(zhì)。
TLP作為一種免疫調(diào)節(jié)劑(能夠刺激宿主的免疫反應(yīng))，其既能對抗已診斷出的腫瘤(免疫治療)，也能防止癌癥形成(疫苗)；關(guān)于TLP的這種臨床應(yīng)用，本發(fā)明作者現(xiàn)在進(jìn)行充分并準(zhǔn)確的描述。
在對實驗?zāi)Ｐ脱芯科陂g獲得的經(jīng)驗基礎(chǔ)上，從治療的觀點出發(fā)，使類似TLP的抗原能得到應(yīng)用，必須具備下列必要條件1、 腫瘤細(xì)胞表面存有抗原；2、 有藥理上誘導(dǎo)或增加細(xì)胞表面抗原表達(dá)的能力；3、 所述抗原有刺激淋巴細(xì)胞具有特異性抗腫瘤活性的能力(母細(xì)胞形成能力和CTL(細(xì)胞毒性胸腺依賴性淋巴細(xì)胞)活性)；4、 血清中存在TLP(顯示血清中的含量和抗原在細(xì)胞表面的表達(dá)可能相關(guān)，以及系統(tǒng)(腎或其它排泄系統(tǒng)例如皮膚或腸)沒有從循環(huán)中快速清除該抗原的能力)。
這四種作用的存在表明由于顯示強的致免疫活性，其適合作為治療試劑和作疫苗。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種致免疫組合物，以及該組合物在作為疫苗和藥物分別防止和治療癌癥特別是肺癌和泌尿生殖癌方面的應(yīng)用，其中的組合物含有至少一種來源于TLP的蛋白質(zhì)或該蛋白質(zhì)的至少一種致免疫片段。
該TLP蛋白質(zhì)的致免疫片段優(yōu)選含有至少一種下述氨基酸序列ArgThrAsnLysGluAlaSerIle(WO-A-001458中的SEQ ID NO.1序列)
GlySerAlaXPheThrAsn(WO-A-001458中的SEQ ID NO.2序列)AsnGlnArgAsnArgAsp(WO-A-001458中的SEQ ID NO.3序列)或者，根據(jù)本發(fā)明，該致免疫組合物包括一種含有下列氨基酸序列的致免疫片段GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn(意大利專利申請RM96A000496中的SEQ ID NO.1序列)。附圖的簡要說明
圖1表示應(yīng)用流式細(xì)胞熒光分析技術(shù)(Facscan-BD)，對來源于NSCLC外植塊的贅生性細(xì)胞進(jìn)行實驗的結(jié)果。
該直方圖右邊的峰值顯示抗TLP抗體與相應(yīng)的細(xì)胞表面抗原的結(jié)合。
圖2表示如圖1所述相同的實驗結(jié)果，其中進(jìn)行實驗的細(xì)胞來源于圖1中的外植塊，應(yīng)用免前血清作為陰性對照。
圖1中顯示的峰值，含有103-104的熒光，表明不存在抗原與抗TLP抗體的結(jié)合。實驗描述腫瘤細(xì)胞表面存在TLP抗原應(yīng)用流式細(xì)胞熒光分析技術(shù)(Facscan-BD)，在來源于非小肺癌細(xì)胞外植塊(NSCLC)的新鮮贅生性細(xì)胞的表面尋找TLP抗原。
通過加入單克隆抗TLP抗體(CSH#419，冷泉港實驗室，美國紐約)，并結(jié)合(第二步)第二山羊抗兔IgG-RPE，對上述細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。
應(yīng)用非特異性抗血清或免前血清，對TLP-抗TLP的結(jié)合特異性進(jìn)行評價。應(yīng)用抗TLP標(biāo)記穩(wěn)定的腫瘤系細(xì)胞或來源于非NSCLC的新鮮贅生性細(xì)胞來評價所述細(xì)胞的表現(xiàn)型特異性。藥物學(xué)上誘導(dǎo)或增加細(xì)胞表面抗原表達(dá)的能力經(jīng)首次培養(yǎng)(完全的RPMI 1640培養(yǎng)基，并加入FCS10％)前、后，對細(xì)胞進(jìn)行處理。
不但研究了TLP的變化，對由單個或組合試劑處理所誘導(dǎo)的其它可能的表現(xiàn)型改變(IL-2 rec(白介素受體)、HLA-Dr(人白細(xì)胞抗原)、CD16(淋巴細(xì)胞亞群)等)也進(jìn)行了研究。
對于TLP來說，從手術(shù)NSCLC病人分離得到新鮮的腫瘤細(xì)胞；經(jīng)24次培養(yǎng)和成纖維細(xì)胞分離后，使細(xì)胞重新懸浮，直接用于免疫組織化學(xué)和細(xì)胞熒光分析測定；CSH419抗血清用結(jié)合抗兔IgG的PE標(biāo)記并與細(xì)胞一起培養(yǎng)。通過應(yīng)用兔免前血清得到陰性對照，對于免疫組織化學(xué)測定還通過系列稀釋到500倍用于陽性樣品得到陰性對照；通過染色或結(jié)合K562和2種女人黑素瘤細(xì)胞系，沒有觀察到任何反應(yīng)。在所研究的NCLC系中，有75％顯示有TLP。
共焦顯微鏡的最初研究顯示了腫瘤細(xì)胞TLP的細(xì)胞質(zhì)和膜定位。顯示TLP抗原的表達(dá)能被體外化療增強或誘導(dǎo)；經(jīng)順鉑或依托泊苷處理后，最初的NSCLC培養(yǎng)細(xì)胞變成了TLP陽性。
應(yīng)用ELISA試驗檢查釋放到培養(yǎng)物上清液中的TLP。
同時，對服用順鉑或依托泊苷的血清陰性病人進(jìn)行實驗以測試體內(nèi)產(chǎn)生TP的反應(yīng)。Ag刺激淋巴細(xì)胞具有特異性抗腫瘤活性的能力(母細(xì)胞形成性能力和CTL活性)
從移植出贅生性細(xì)胞的病人的外周血流中獲得淋巴細(xì)胞(自身固有的淋巴細(xì)胞)，在體外單獨應(yīng)用TLP以及用TLP結(jié)合化療和/或細(xì)胞因子處理前和處理后，用流式細(xì)胞熒光分析對上述得到的淋巴細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記(CD4/CD25，CD8/CD25，CD56-16-3±/CD25表現(xiàn)型)。
4小時后，通過測試釋放出的51CR來確定自體固有淋巴細(xì)胞(處理的或未處理的)的細(xì)胞毒活性，其中測試使用來源于相同患者的腫瘤外植塊的腫瘤細(xì)胞來作為靶細(xì)胞。
用從健康個體和患有其它腫瘤形成病變的病人得到的淋巴細(xì)胞(作為效應(yīng)器)來對抗贅生性細(xì)胞系(NK靶敏感的和抗性的)(作為對照)，以確立腫瘤溶解的特異性質(zhì)。血清中存有TLP進(jìn)行夾心式ELISA試驗，以確定TLP的存在及存在于NSCLC病人血清中，患有其它病變(與NSCLC不同的腫瘤形成病變；肺部非腫瘤形成病變)患者的血清中，和其它對照組中。結(jié)果TLP抗原存在于腫瘤細(xì)胞表面應(yīng)用已描述的方法證明了TLP存在于肺癌細(xì)胞(NSCLC)表面。作為陽性腫瘤的實施例，報道了圖1中顯示的數(shù)據(jù)?？赡茏⒁獾降氖怯妹馇把鍢?biāo)記沒有得到信號，而用抗TLP#419則明顯顯示TLP陽性群。藥學(xué)上誘導(dǎo)或增加細(xì)胞表面抗原表達(dá)的能力用順鉑或依托泊苷(10μg/ml)處理兩種TLP-陽性腫瘤細(xì)胞群48小時經(jīng)依托泊苷處理后，2種TLP陰性細(xì)胞群變成TLP陽性；經(jīng)順鉑處理后，1種TLP陰性細(xì)胞群變成TLP陽性；經(jīng)依托泊苷和順泊處理后，TLP陽性細(xì)胞群保持TLP陽性。
用于檢查釋放到培養(yǎng)物上清液中的TLP的ELISA試驗結(jié)果與表II-IV所示結(jié)果相一致，表明TLP存在于NSCLC病人血清中。
對TLP血清陰性病人進(jìn)行同樣的化療給藥，只需兩個療程，用ELISA檢查發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了強TLP陽性反應(yīng)。Ag以特異性抗腫瘤活性(母細(xì)胞形成能力和CTL活性)刺激淋巴細(xì)胞的能力。
對于患有NSCLC的病人的淋巴細(xì)胞用TLP進(jìn)行體外處理，誘導(dǎo)出母細(xì)胞形成活性，特別是針對某些表現(xiàn)型表達(dá)對IL-2有高度親和力受體的活化細(xì)胞(CD3＋/CD25＋)；NK細(xì)胞(CD56＋/CD16＋/CD3±)；活化的細(xì)胞毒性細(xì)胞CD25＋/CD8＋。
表1表現(xiàn)型 CD25 NK CD25/CD8未處理的淋巴細(xì)胞3.3-4.6 10.1-18.93.5-5.3淋巴細(xì)胞＋TPL*5.5-16.121.4-32.28.6-11.3***μg/ml**TLP加入到培養(yǎng)基中觀察到的劑量依賴性效應(yīng)和CD8＋細(xì)胞的活化(可達(dá)到整個培養(yǎng)群的20％)用TLP處理淋巴細(xì)胞還能誘導(dǎo)NK型(天然殺傷細(xì)胞，靶細(xì)胞K562)和CTL型(在自身腫瘤細(xì)胞之上)的溶解活性。該NK活性顯示與在CD8＋CD25＋細(xì)胞中見到的相同的劑量依賴性，同時表現(xiàn)出與所述細(xì)胞數(shù)目密切相關(guān)。這些結(jié)果以及LAK型(淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞，靶向NK抗性細(xì)胞，Daudi)溶解活性(自發(fā)的或TLP誘導(dǎo)的)的缺乏，可能顯示出活化的特異性質(zhì)。
這些被認(rèn)可的淋巴細(xì)胞，在用TLP處理時，還顯示出它們對由NSCLC引起的腦轉(zhuǎn)移細(xì)胞有活性。TLP存在于血清中夾心式ELISA試驗得到如下所述的結(jié)果表2NSCLC組織類型N/POS％表皮樣 40/2255腺癌12/7 58總量52/2956表3NSCLC的不同瘤形成組織類型 NEG ％SCLC 15/15100不確定 7/7 100癌肉瘤 1/1 100類癌 1/1 100卵巢癌肺轉(zhuǎn)移 1/0*黑瘤 3/3 100胃癌 2/2 100總量30/29 97*邊界線表4非瘤形成性肺病變病變 N/NEG％BOC 21/1886TBC 2/1 50
總量23/1982表5其它對照病例 N/Neg％健康者 11/11100懷孕者 2/1 50總量 13/1292而且，對NSCLC病人中TLP水平測定給出的結(jié)果為56％(見表2)，該數(shù)據(jù)必須同從“cyfra”(肺癌中另一種單獨的標(biāo)記)中得到的35-40％進(jìn)行比較。并且，關(guān)于結(jié)合特異性的數(shù)據(jù)顯示約100％的TLP特異性，而“cyfra”只有60-70％的特異性。
通過類似的方式，合成多肽(W-A-001458中的SEQ ID NO.1序列)顯示良好的致免疫能力，實際上，研究表明所述細(xì)胞毒性CD8淋巴細(xì)胞的特異性刺激只存在于患有NSCLS瘤形成的病人中。
對“skid小鼠”進(jìn)行實驗時表明用W-A-001458的SEQ ID NO.1序列進(jìn)行疫苗免疫處理可以防止動物中1,800,000至6,000,000腫瘤細(xì)胞的生長。
對于要求保護(hù)的其它多肽也得到類似結(jié)果。最后結(jié)論對TLP、其肽類衍生物和從泌尿生殖腫瘤中提取的類似蛋白質(zhì)的肽GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn進(jìn)行研究，得到的結(jié)果顯示有一種針對它們的免疫抗腫瘤作用。
在NSCLC細(xì)胞表面存在TLP的事實，以及它顯示出的刺激淋巴細(xì)胞具有特異性抗腫瘤活性的能力(母細(xì)胞形成性能力和CTL活性)，清楚地表明該蛋白質(zhì)的致免疫性。同樣原因，對于衍生的肽類，W-A-001458中的SEQ ID NO.1序列和另兩種肽序列SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3(都是從TLP蛋白質(zhì)的抗原區(qū)衍生的)也是有價值的。
這種途徑的價值由以下事實得到證實已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TLP相應(yīng)地存在于NSCLC病人的血清中，表明腫瘤的存在與血液中TLP水平有緊密的聯(lián)系。因此，以給藥TLP或其肽類為基礎(chǔ)的途徑是合適的和有效的途徑，因為它的致免疫活性序列顯示與其它人蛋白質(zhì)沒有同源性。
因此，與非特異性活化宿主免疫系統(tǒng)的途徑相比，給藥TLP或其肽類的途徑是更專一的和更有效的；與單獨進(jìn)行化療相比，該途徑破壞性更小。
然而，進(jìn)行化療還能加強TLP的治療效果，因為化療顯示出這樣一種能力在細(xì)胞培養(yǎng)物中以及在最初TLP血清陰性的NSCLC病人中，它能誘導(dǎo)Ag的產(chǎn)生。
這是從用單個或組合化療試劑進(jìn)行實驗時得到的直接結(jié)果。如前所述，在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)物中，給予依托泊苷和順鉑時，顯示能夠刺激TLP的產(chǎn)生，其水平相當(dāng)于NSCLC血清陽性病人的記錄水平；如果對那些最初TLP血清陰性(ELISA)的病人進(jìn)行同樣的化療給藥，經(jīng)兩個化療周期后，病人變成強陽性。
對于從泌尿生殖腫瘤中提取的類似于TLP的蛋白質(zhì)的衍生的肽GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn，進(jìn)行實驗后顯示有一種類似的適合用作所有泌尿生殖腫瘤的免疫治療試劑的作用。
上述所有的數(shù)據(jù)表明由于所有這些分子的強致免疫性能，它們可適合用于治療和免疫用途。一般地說，對于從TLP及其類似物得到的蛋白質(zhì)，上述用途適合于人和哺乳動物。同樣，對于那些實驗中所列舉的肽類，其情況也是一樣的。
事實上，該免疫反應(yīng)既能控制腫瘤生長和擴(kuò)散(如前述，對轉(zhuǎn)移瘤metastasis也能有效地治療)，又能保護(hù)健康人不患該疾病。前面從“skid小鼠”得到的數(shù)據(jù)尤其支持這些結(jié)論。
權(quán)利要求
1. 一種致免疫組合物，包含藥學(xué)上有效和可接受劑量的來源于TLP的至少一種蛋白質(zhì)或該蛋白質(zhì)的至少一種致免疫片段。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的致免疫組合物，其中所述的致免疫片段包括至少一個選自下組的氨基酸序列ArgThrAsnLysGluAlaSerIle (WO-A-001458中的SEQ ID NO.1序列)GlySerAlaXPheThrAsn(WO-A-001458中的SEQ ID NO.2序列)AsnGlnArgAsnArgAsp(WO-A-001458中的SEQ ID NO.3序列)
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的致免疫組合物，其中所述的致免疫片段包括下列氨基酸序列GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn(意大利專利申請RM96A000496中的SEQ ID NO.1序列)。
4. 一種TLP蛋白質(zhì)或至少其致免疫片段的用途，用于制備對哺乳動物癌癥進(jìn)行預(yù)防性治療的疫苗。
5. 一種TLP蛋白質(zhì)或至少其致免疫片段的用途，用于制備對哺乳動物癌癥進(jìn)行特異性的自動免疫治療的致免疫藥物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用途，其中的癌癥為肺癌。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中的癌癥為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用途，其中的癌癥是泌尿生殖癌。
9. 包含至少一種選自ArgThrAsnLysGluAlaSerlle (WO-A-001458中的SEQ ID NO.1序列)GlySerAlaXPheThrAsn(WO-A-001458中的SEQ ID NO.2序列)AsnGlnArgAsnArgAsp(WO-A-001458中的SEQ ID NO.3序列)的氨基酸序列的TLP致免疫片段的用途，用于制備對哺乳動物肺癌進(jìn)行預(yù)防性治療的疫苗，所述疫苗可有效地使所述哺乳動物產(chǎn)生免疫反應(yīng)來抵抗所述肺癌。
10. 包含至少一種選自ArgThrAsnLysGluAlaSerIle (WO-A-001458中的SEQ ID NO.1序列)GlySerAlaXPheThrAsn(WO-A-001458中的SEQ ID NO.2序列)AsnGlnArgAsnArgAsp(WO-A-001458中的SEQ ID NO.3序列)的氨基酸序列的TLP致免疫片段的用途，用于制備對哺乳動物肺癌進(jìn)行特異性的自動免疫治療的致免疫藥物，所述藥物能有效地使所述哺乳動物產(chǎn)生特異性的自動免疫反應(yīng)來抵抗所述肺癌。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的用途，其中所述的癌癥為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。
12. 含有下列氨基酸序列GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn(意大利專利申請RM96A000496中的SEQ ID NO.1序列)的TLP致免疫片段的用途，用于制備對哺乳動物泌尿生殖癌進(jìn)行預(yù)防性治療的疫苗。
13. 含有下列氨基酸序列GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn(意大利專利申請RM96A000496中的SEQ ID NO.1序列)的TLP致免疫片段的用途，用于制備對哺乳動物泌尿生殖癌進(jìn)行特異性的自動免疫治療的致免疫藥物，所述藥物能有效地使所述哺乳動物產(chǎn)生特異性的自動免疫反應(yīng)來抵抗所述癌癥。
14. 一種對哺乳動物接種疫苗用于抵抗癌癥的方法，包括對哺乳動物給予一定量TLP蛋白質(zhì)或該蛋白質(zhì)的至少一種致免疫片段，其中的給藥量能在藥學(xué)上有效地使哺乳動物產(chǎn)生免疫反應(yīng)抵抗所述的癌癥。
15. 一種通過特異性自動療法來治療哺乳動物癌癥的方法，包括對需要治療的哺乳動物給予一定量TLP蛋白質(zhì)或該蛋白質(zhì)的至少一種致免疫片段，其中的給藥量能在藥學(xué)上有效地使哺乳動物產(chǎn)生特異性的自動免疫反應(yīng)抵抗所述癌癥。
16. 根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的方法，其中所述的癌癥為肺癌。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述的癌癥為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。
18. 根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的方法，其中所述的癌癥是泌尿生殖癌。
19. 一種給哺乳動物接種疫苗來抵抗肺癌的方法，包括給予哺乳動物一定量的TLP的致免疫片段，該片段包含至少一種選自下組的氨基酸序列ArgThrAsnLysGluAlaSerIle(WO-A-001458中的SEQ ID NO.1序列)GlySerAlaXPheThrAsn(WO-A-001458中的SEQ ID NO.2序列)AsnGlnArgAsnArgAsp (WO-A-001458中的SEQ ID NO.3序列)其中的給藥量能在藥學(xué)上有效地使哺乳動物產(chǎn)生免疫反應(yīng)抵抗所述肺癌。
20. 一種以特異性的自動療法治療哺乳動物肺癌的方法，包括對需要治療的哺乳動物給予一定量的TLP的致免疫片段，該片段包含選自下組的至少一種氨基酸序列ArgThrAsnLysGluAlaSerIle(WO-A-001458中的SEQ ID NO.1序列)GlySerAlaXPheThrAsn(WO-A-001458中的SEQ ID NO.2序列)AsnGlnArgAsnArgAsp(WO-A-001458中的SEQ ID NO.3序列)其中的給藥量能在藥學(xué)上有效地使哺乳動物產(chǎn)生特異性的自動免疫反應(yīng)抵抗所述的肺癌。
21. 根據(jù)權(quán)利要求19或20所述的方法，其中所述的癌癥為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。
22. 一種給哺乳動物接種疫苗來抵抗泌尿生殖癌的方法，包括給予哺乳動物一定量TLP的致免疫片段，該片段包含下述氨基酸序列GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn(意大利專利申請RM96A000496中的SEQ ID NO.1序列)其中的給藥量能在藥學(xué)上有效地使哺乳動物產(chǎn)生免疫反應(yīng)抵抗所述的泌尿生殖癌。
23. 一種以特異性的自動療法治療哺乳動物泌尿生殖癌的方法，包括給予需要治療的哺乳動物一定量的TLP的致免疫片段，該片段包含下述氨基酸序列GlyProProGluValGlnAsnAlaAsn(意大利專利申請RM96A000496中的SEQ ID NO.1序列)其中的給藥量能在藥學(xué)上有效地使哺乳動物產(chǎn)生特異性的自動免疫反應(yīng)抵抗所述的泌尿生殖癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種免疫組合物，包括至少一種來源于TLP的蛋白質(zhì)或該蛋白質(zhì)的一個片段特別是這樣一種組合物，其中所述片段含有至少一種在EP93916141.0中要求保護(hù)的肽類SEQ ID NO.1序列、SEQID NO.2序列和SEQ ID NO.3序列，或者意大利專利申請RM96A000496要求保護(hù)的SEQ ID NO.1序列的肽類；所述組合物適合治療腫瘤，特別是NSCLC和泌尿生殖癌。
文檔編號A61K38/03GK1239431SQ97180260
公開日1999年12月22日 申請日期1997年10月9日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月9日
發(fā)明者朱利奧·塔若爾 申請人:尤尼哈特公司