專利名稱：高脂血癥的治療藥或預(yù)防藥的制作方法
技術(shù)范圍本發(fā)明涉及高脂血癥的治療藥或預(yù)防藥背景技術(shù)血液中的膽固醇、中性脂肪、磷脂和游離脂肪酸等脂質(zhì)成分在血液中以水溶性的脂蛋白形式存在，脂蛋白根據(jù)其密度的不同可以分為極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等。機體內(nèi)的脂蛋白代謝發(fā)生異常，這些脂質(zhì)成分的血中濃度處于正常值以上的高濃度狀態(tài)稱為高脂血癥。如果長期保持這種高脂血癥的狀態(tài)，膽固醇等就容易在動脈壁上沉積。而且根據(jù)許多研究和流行病學調(diào)查，高脂血癥和心肌梗塞、心絞痛、腦梗塞等動脈硬化性疾病的發(fā)病、發(fā)展有明確的關(guān)系。所以，使這些脂質(zhì)成分的血中濃度降低到正常濃度對于高脂血癥的治療很重要，此外，使其保持正常濃度對高脂血癥的預(yù)防也很重要。
?；撬?氨基乙磺酸)是分子量為125.14、具很簡單化學結(jié)構(gòu)的含硫氨基酸，關(guān)于其藥理作用，已知對包括腦神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、肝膽系統(tǒng)在內(nèi)的全身各器官系統(tǒng)有廣泛的作用。在牛磺酸涉及膽固醇代謝的作用方面，已知它有通過利膽作用而發(fā)揮的降低血清膽固醇和抑制膽固醇性膽結(jié)石的作用。
γ-谷維醇，已知其具有抑制膽固醇吸收、改善脂蛋白代謝的作用。
目前，對于高脂血癥的治療，一般是先進行飲食療法，只是在沒有明顯效果時才應(yīng)用藥物進行治療。
作為目前的高脂血癥治療藥，有多種具不同作用機制(抑制吸收、促進排泄和抑制合成等)的藥物，但是其副作用卻是個問題。作為其主要的副作用，有白細胞減少、肝腫大、胃腸障礙、性欲減退等各種癥狀。所以，人們希望有無副作用的高脂血癥治療藥。
此外，從預(yù)防醫(yī)學的觀點出發(fā)，為預(yù)防高脂血癥的發(fā)生，應(yīng)使膽固醇、中性脂肪、磷脂和游離脂肪酸等脂質(zhì)成分的血中濃度保持低水平，因此希望有無副作用、能夠長期、安全服用的高脂血癥預(yù)防藥。
本方面的目的在于提供可以長期服用、安全的高脂血癥治療藥和預(yù)防藥。
發(fā)明的公開本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，在改善體內(nèi)過剩的膽固醇等脂質(zhì)成分的代謝方面，?；撬岷挺?谷維醇同時給藥的代謝改善作用要比牛磺酸或γ-谷維醇分別單獨給藥時的代謝改善作用強，基于這一認識，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明高脂血癥治療藥或預(yù)防藥，其特征在于含有牛磺酸和γ-谷維醇作為有效成分。
本發(fā)明的高脂血癥治療藥或預(yù)防藥能夠降低體內(nèi)過剩的膽固醇、中性脂肪、磷脂和游離脂肪酸等脂質(zhì)成分的血中濃度，還顯示出改善脂蛋白代謝的作用，可用作為高脂血癥的治療藥或預(yù)防藥。特別是作為無副作用、能夠長期安全服用的高脂血癥預(yù)防藥非常有用。
在本發(fā)明中，?；撬岬挠行Ыo藥量為健康成人每天100mg～6000mg，優(yōu)選1000mg～3000mg。γ-谷維醇的有效給藥量為健康成人每天1mg～6000mg，優(yōu)選5mg～500mg。牛磺酸和γ-谷維醇的配比為?；撬帷忙?谷維醇=300∶1～30。
本發(fā)明的高脂血癥治療藥或預(yù)防藥可以根據(jù)需要，和其它已知的添加劑，例如賦形劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、矯味劑、表面活性劑、增塑劑等混合，按通常的方法制成顆粒劑、散劑、膠囊劑、片劑、干糖漿劑、溶液劑等制劑。
本發(fā)明中的含有?；撬岷挺?谷維醇為有效成分的制劑可以和潘特生(雙泛酰硫乙胺)和煙酸等配合，制成對高脂血癥的治療和預(yù)防有效的制劑。
更進一步，還可根據(jù)需要加入1種或2種以上的維生素類、其它的生理活性物質(zhì)、激素、營養(yǎng)成分、香料等。產(chǎn)業(yè)上的利用可能性本發(fā)明中的含有?；撬岷挺?谷維醇為有效成分的制劑能夠降低膽固醇、中性脂肪的血中濃度，還顯示出改善脂蛋白代謝的作用，作為高脂血癥的治療藥或預(yù)防藥很有用。特別是作為無副作用、能夠長期安全服用的高脂血癥預(yù)防藥非常有用。
實施發(fā)明的最佳形式下面就實施例和實驗例對本發(fā)明進行具體的說明。實施例1?；撬?000mgγ-谷維醇 10mg糖粉 600mg氣溶膠36mg阿斯巴甜精9mg低取代羥丙基纖維素54mg按常規(guī)方法將上述組分制成顆粒劑。實施例2?；撬?000mgγ-谷維醇 10mg維生素E 100mg糖粉 600mg氣溶膠600mg阿斯巴甜精9mg低取代羥丙基纖維素54mg硬脂酸鎂 24mg色素 微量香料 微量按常規(guī)方法將上述組分制成顆粒劑。實施例3牛磺酸3000mg潘特生 50mgγ-谷維醇 10mg糖粉 600mg氣溶膠 36mg阿斯巴甜精 9mg低取代羥基丙基纖維素54mg按常規(guī)方法將上述組分制成顆粒劑。實施例4?；撬?000mgγ-谷維醇 10mg維生素E100mg維生素B110mg維生素B220mg維生素B610mg維生素C600mg煙酸10mg潘特生 50mg淀粉 600mg低取代羥丙基纖維素 12mg阿斯巴甜精 12mg硬脂酸鎂24mg按常規(guī)方法將上述組分制成顆粒劑。實驗例1對SHRSP(腦卒中易發(fā)大鼠)高脂肪負荷飲食的影響[實驗動物]3月齡雄性SHRSP每組6只[實驗分組]每天給予實施例1的顆粒劑的實施例1給藥組、每天給予3000mg?；撬岬呐；撬峤o藥組、每天給予300mgγ-谷維醇的γ-谷維醇給藥組、不給藥的高脂肪負荷飲食組。[飼料]各組分別給予高脂肪負荷飲食。高脂肪飲食是在正常飲食中負荷5％膽固醇、2％膽酸和20％牛油。這里所說的正常飲食有下述所示的組成。維生素混合物和礦物質(zhì)混合物按Harper方法(《營養(yǎng)學雜志》J.Nutr.,67,109(1959))配制。正常飲食的組成酪蛋白 18.0％脂肪5.0％維生素混合物1.0％礦物質(zhì)混合物4.0％氯化膽堿0.2％纖維素 9.6％蔗糖 62.2％合計 100.0％[實驗方法]各組分別給予飼料飼養(yǎng)45天。飼食后，從尾靜脈采血，測定血清膽固醇的濃度。飼養(yǎng)結(jié)束后，摘取肝臟，測定膽固醇濃度。
此外，摘取腸系膜動脈，除去周圍的脂肪，用蘇丹Ⅲ染色，在顯微鏡下測定脂肪沉積數(shù)，求出對腸系膜動脈的脂肪沉積抑制率。[結(jié)果]血清膽固醇濃度如表1所示。實施例1給藥組和其它各組比較，可見血清膽固醇保持較低水平。按下式從肝臟的膽固醇濃度值求出肝臟的膽固醇抑制率。
肝臟的膽固醇濃度和肝臟的膽固醇抑制率如表2所示。實施例1給藥組和其它各組比較，可見肝臟膽固醇濃度保持較低水平，顯示出較高的脂肪沉積抑制率。
此外，脂肪沉積的判定分為四級，沉積數(shù)0～20作為1分，20～100作為2分，100～200作為3分，200以上作為4分，按此標準決定各個得分，求出各組的平均分，用下式求出各組腸系膜動脈的脂肪沉積抑制率。
各組脂肪沉積判定的平均分和對腸系膜動脈的脂肪沉積抑制率如表3所示。實施例1給藥組和其它各組比較顯示出較高的脂肪沉積抑制率。
表1
表2
<p>表3
實施例2對HepG2細胞脂質(zhì)分泌的影響[實驗分組]添加2.0mM?；撬岷?.05mM γ-谷維醇的T+γ組、只添加2.0mM?；撬岬腡組、沒有添加藥物作為對照的C組。[實驗方法]實施例2的實驗方法用《當代治療研究》CURRENTTHERAPEUTIC RESEARCH,Vol.58,No.8 787-795(1995)所示的方法。
1．實驗培養(yǎng)基的調(diào)配和藥物的添加方法把含有脂蛋白耗竭血清(LPDS)的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM(葡萄糖濃度為4500mg/ml))用作基本培養(yǎng)基。將牛磺酸用磷酸緩沖生理鹽水(PBS)溶解，濾過除菌后，使之濃度為2.0mM，添加入基本培養(yǎng)基制成實驗培養(yǎng)基。γ-谷維醇用二甲基亞砜(DMSO)溶解，使之濃度為0.05mM，添加入基本培養(yǎng)基。作為對照，使用以含有PBS(濃度1％)的培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞。
2．細胞的培養(yǎng)方法以及細胞和培養(yǎng)基的回收方法將HepG2細胞(ゥィスタ-研究所生產(chǎn))在含有10％FCS、青霉素(100000單位/L)和鏈霉素(100mg/L)的DMEM(低葡萄糖，1500mg/L)中進行預(yù)培養(yǎng)。HepG2細胞的培養(yǎng)在37℃下、95％空氣、5％二氧化碳中進行，培養(yǎng)基每2～3天更新一次。HepG2細胞到達匯合(コンフルェント)狀態(tài)后，按下述方法進行傳代培養(yǎng)。除去培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，將HepG2細胞用0.25％胰蛋白酶液(含0.1％EDTA)迅速洗凈后，加入適當量的胰蛋白酶液，在37℃下孵育約5分鐘。然后加入適當量含10％FCS的培養(yǎng)基，終止胰蛋白酶的反應(yīng)。將HepG2細胞均勻混懸，離心分離(1000rpm,5分鐘)，回收HepG2細胞。將細胞分成2～3份后，用DMEM(含有l(wèi)0％FCS)培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。用細胞計計測細胞數(shù)目，將HepG2細胞(85×104個/皿)接種到3．5厘米的培養(yǎng)皿中，每皿用l毫升含高葡萄糖(4500mg/ml)的DMEM進行培養(yǎng)。當HepG2細胞到達匯合(コンフルェント)狀態(tài)(約100×104個/皿)時，將培養(yǎng)基換成實驗培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24小時。將HepG2細胞用PBS清洗1次后，加入1毫升的PBS，用淀帚(policeman)回收。還有，作為放射性脂質(zhì)前體，在實驗開始時往各皿中加入0.5μCi[3H]甘油或[14C]醋酸。
3．HepG2細胞內(nèi)和培養(yǎng)基中脂質(zhì)的提取方法細胞內(nèi)和培養(yǎng)基中的脂質(zhì)按Bligh&Dyer法提取。將回收的HepG2細胞溶解后，用超聲波發(fā)生器(Sonifier 250,Bronson公司制造)粉碎，調(diào)制成細胞勻漿。取細胞勻漿的一部分裝入帶有螺帽的施皮茨(Spitz’s)管中，加入3ml甲醇和1.5ml氯仿，充分攪拌，在37℃下加熱40分鐘，接著加入1.5ml氯仿和1.6ml水，作成氯仿∶甲醇∶水=1∶1∶0.8的混合液，再進行離心分離(3000rpm,15分鐘)?；厥障聦拥穆确?，在氮氣下濃縮后，用一定量的石油醚溶解，提取細胞內(nèi)的脂質(zhì)。此外，培養(yǎng)基中的脂質(zhì)按相同操作進行提取。
4．脂質(zhì)的分析方法提取出的脂質(zhì)用0.25mm厚的硅膠G薄層色譜(TLC)進行分離，分成游離膽固醇、酯型膽固醇、甘油二酯和甘油三酯等部分。作為展開劑，用石油醚∶乙醚(シェスチルェ-テル)∶乙酸=82∶18∶1。展開結(jié)束后，用碘蒸氣顯色，檢測脂質(zhì)各部分。用TLC分離后，將薄層板上各部分的硅膠移入計測管，以閃爍醇(シンチゾ-ル)EX-H(同仁化學公司制造)溶解，用液體閃爍計數(shù)器(WALLAC 1410,Pharamacia公司制造)測定各部分的放射活性。阻尼(quenching)用背景值和硅膠校正。
5．細胞蛋白質(zhì)的定量用細胞勻漿的一部分進行蛋白質(zhì)的定量。蛋白質(zhì)的定量按Lowry法進行。
6．統(tǒng)計分析將實驗所得的數(shù)據(jù)用Duncan多元檢驗進行統(tǒng)計處理。[結(jié)果]以[14C]醋酸計的24小時后對HepG2細胞脂質(zhì)培養(yǎng)基中標記脂質(zhì)(總脂質(zhì)、甘油三酯、甘油二酯)分泌的影響如表4所示。T+γ組和其它組相比表現(xiàn)出抑制標記脂質(zhì)的分泌。
此外，以[3H]甘油計的24小時后對HepG2細胞脂質(zhì)培養(yǎng)基中標記脂質(zhì)(總脂質(zhì)、甘油三酯、甘油二酯)分泌的影響如表5所示。T+γ組和其它組相比表現(xiàn)出抑制標記脂質(zhì)的分泌。
表
權(quán)利要求
1．一種高脂血癥的治療藥或預(yù)防藥，其特征在于含有?；撬岷挺?谷維醇作為有效成分。
2．牛磺酸和γ-谷維醇在制備高脂血癥的治療藥或預(yù)防藥中的應(yīng)用。
3．一種高脂血癥的治療方法或預(yù)防方法，其特征在于使用含有牛磺酸和γ-谷維醇作為有效成分的制劑。
全文摘要
具有降低血中膽固醇、中性脂肪,和改善脂蛋白代謝作用的高脂血癥治療或預(yù)防藥,含有?；撬岷挺茫染S醇作為有效成分。
文檔編號A61K31/215GK1219873SQ96180315
公開日1999年6月16日 申請日期1996年5月29日 優(yōu)先權(quán)日1996年5月29日
發(fā)明者北島秀明, 角田健司, 村上茂, 柳田晃良 申請人:大正制藥株式會社