專利名稱：玻連蛋白受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的范圍本發(fā)明涉及抑制玻連蛋白受體和用于治療顯示玻連蛋白受體被抑制的疾病例如炎癥、癌、血管生成、動脈粥樣硬化、再狹窄、以及骨吸收為誘因的疾病的藥學(xué)活性化合物。
本發(fā)明的背景整聯(lián)蛋白為一類超家族細(xì)胞粘附受體，它們?yōu)楸磉_(dá)在各類細(xì)胞上的透膜糖蛋白。這些細(xì)胞表面粘附受體包括gpⅡb/Ⅲa，即纖維蛋白原受體和αvβ3，即玻連蛋白受體。纖維蛋白原受體gpⅡb/Ⅲa表達(dá)在血小板表面上，它介導(dǎo)血小板的聚集并在出血傷口部位形成止血凝塊(Philips,et,al.,Blood.,1988,71,831.)。
玻連蛋白受體αvβ3可表達(dá)在多種細(xì)胞上，包括內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、破骨細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞，因而它具有廣泛的功能。據(jù)認(rèn)為，表達(dá)在破骨細(xì)胞膜上的αvβ3受體在骨質(zhì)吸收過程中起作用并且與骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生有關(guān)(Ross,et al.,J.Biol,Chem.,1987,262,7703；Fisher,et al.,Endocrinology 1993,132,1411；Bertolini et al.,J.Bone Min.Res.,6,Sup.,1,S146,252；EP 528587和528586)。表達(dá)在人主動脈平滑肌細(xì)胞上的αvβ3受體刺激其游走進(jìn)入新血管內(nèi)膜，從而導(dǎo)致動脈粥樣硬化和血管成形術(shù)后再狹窄的形成(Brown,et al.,Cardiovascular Res.,1994,28,1815)。此外，一項(xiàng)最近的研究表明αvβ3拮抗劑能夠通過誘導(dǎo)血管原的吞噬作用以促進(jìn)腫瘤消退(Brooks,et al,Cell,1994,79,1157)。因此，能夠阻斷玻連蛋白受體的制劑可用于治療該受體介導(dǎo)的疾病如骨質(zhì)疏松癥、動脈粥樣硬化、再狹窄和癌癥。
Alig等(歐洲專利號0381033)、Hartman等(歐洲專利號0540334)、Blackburn等(世界專利號93/08174)、Bondinell等(世界專利號95/18619)、Bondinell等(世界專利號94/14776)、Blackburn等(世界專利號94/04057)、Egbertson等(歐洲專利號0478328)、Sugihara等(歐洲專利號529858)、Porter等(歐洲專利號0542363)及Fisher等(歐洲專利號0635492)和其他許多的人公開了部分用于選擇抑制纖維蛋白原受體的化合物。PCT/US95/08306(申請日為1995年6月29日，Smithkline Boecham Corp)和PCT/US 95/08146(Smithikline beecham corp)公開了玻連蛋白受體的選擇性拮抗劑。然而，有效的玻連蛋白受體拮抗劑化合物的報(bào)道極少。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其某些被適當(dāng)取代的氨基吡啶化合物是有效的玻連蛋白受體抑制劑。特別是，已發(fā)現(xiàn)氨基吡啶部分可與纖維蛋白原拮抗劑模板結(jié)合以制備比抑制纖維蛋白原受體更有效的抑制玻連蛋白受體的化合物。
本發(fā)明的概述本發(fā)明包括如下文所述的式(Ⅰ)化合物，它具有抑制玻連蛋白受體的藥理學(xué)活性并用于治療炎癥、癌癥、心血管紊亂如動脈粥樣硬化和再狹窄，以及由骨質(zhì)吸收為誘因的疾病如骨質(zhì)疏松癥。
本發(fā)明也是一種藥用組合物，它包括根據(jù)式(Ⅰ)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還是一種治療由玻連蛋白受體介導(dǎo)的疾病的方法。具體地說，本發(fā)明的化合物可用于治療動脈粥樣硬化、再狹窄、癌癥和骨質(zhì)疏松癥。
發(fā)明詳述本發(fā)明包括比抑制纖維蛋白原更為有效的抑制玻連蛋白受體的新化合物。本發(fā)明的化合物包括一種纖維蛋白原受體拮抗劑模板，它與根據(jù)式(Ⅰ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
的任選取代的2-吡啶基-氨基部分相連接，其中A為纖維蛋白原拮抗劑模板；W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-V-形式的連接部分；Q1、Q2和Q3獨(dú)立為N或C-Ry，只要Q1、Q2、Q3、Q4不超過一個(gè)為N；R1為H或C1-6烷基，C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；R8為H或C1-6烷基，Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg,-C(O)Rg或-C(O)RgR1為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基-U’-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基-U’-C1-6烷基或Ar-C0-6烷基-U’-C1-6烷基；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、-CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2或可選為鹵素、-ORg、-SRg、-CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)3、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2取代的C1-6烷基；U和V不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)c、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、NRgCRg2、CRg2O、OCRg2、CRg=CRg、C≡C、Ar或Het；a為0、1、2或3；b為0、1或2；c為0、1或2；u為0或1。
優(yōu)選Q1、Q2、Q3和Q4均為CH，和u為0。
R’適合為H和R”適合為H或C1-4烷基。
W適合為-(CHRg)a-CONRi-或-(CHRg)a-NRiCO-纖維蛋白原受體拮抗劑為抑制纖維蛋白原結(jié)合到血小板-結(jié)合的纖維蛋白原受體GPⅡb-Ⅲa上的制劑。許多纖維蛋白原拮抗劑已為本領(lǐng)域內(nèi)所周知。如本文所使用的，術(shù)語“纖維蛋白原受體拮抗劑模板”意指纖維蛋白原受體拮抗劑的核心結(jié)構(gòu)，即所述核心含有酸性團(tuán)并被連接到堿性氮部分取代的有機(jī)基團(tuán)上。典型地，該核心結(jié)構(gòu)在酸性部分和堿性氮部分之間加入一些形式的剛性空間結(jié)構(gòu)，并且含有一個(gè)或多個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)或酰胺鍵以影響它。優(yōu)選在纖維蛋白原受體拮抗劑模板的酸性團(tuán)和在式(Ⅰ)吡啶部分的鄰-氨基取代基的氮之間通過最短的分子內(nèi)路徑插入大約12至15個(gè)(更優(yōu)選13或14個(gè))共價(jià)鍵。本發(fā)明的目的是通過用任選取代的吡啶-2-基-氨基替代纖維蛋白原受體拮抗劑的堿性氮基團(tuán)使纖維蛋白原受體拮抗劑轉(zhuǎn)化為玻連蛋白受體拮抗劑。此外，在酸性部分和吡啶環(huán)上鄰-氨基取代基的氮之間插入共價(jià)鍵的數(shù)目約為2至5(優(yōu)選3或4)個(gè)共價(jià)鍵，比在纖維蛋白原的酸性部分和堿性氮基之間插入的共價(jià)鍵數(shù)少些。可以選擇連接部分W的同一性以在纖維蛋白原拮抗劑模板的酸性部分和吡啶的氮原子之間取得合適的空間間距。一般來說，纖維蛋白原拮抗劑的酸性部分(即給出質(zhì)子或接受電子對的原子)和堿性部分(即接受質(zhì)子或給出電子對)之間約有16埃的分子內(nèi)距離，即玻連蛋白拮抗劑在個(gè)別的酸性和堿性中心之間約有14埃的間距。
為便于說明，采用WO 93/08174公開的7-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-甲基-苯并二氮雜纖維蛋白原拮抗模板作為適合的纖維蛋白拮抗劑模板，通過使(吡啶-2-基)乙基部分替代4-(氨基亞氨基甲基)苯基部分將化合物(R,S)-7-[[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]氨基]羰基]-4-(2-苯基乙基)-1,3,4,5-四氫-3-氧代-2H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸(一種有效的和選擇性的纖維蛋白原拮抗劑)轉(zhuǎn)化為一種有效的和選擇性的玻連蛋白受體拮抗劑。如下文

圖1所示，在前一個(gè)例子中，纖維蛋白原拮抗劑的酸性部分和堿性部分之間共有16個(gè)插入的共價(jià)鍵；而在后一例子中，本發(fā)明的玻連蛋白受體共有13個(gè)插入的共價(jià)鍵。圖1
事實(shí)上，4-(氨基亞氨基甲基)苯基部分為該領(lǐng)域內(nèi)所周知的纖維蛋白原拮抗劑模板上的常見取代基，用任選取代的(吡啶-2-基)氨基乙基部分簡單替換該部分可以使含有已知纖維蛋白原拮抗劑模板的化合物轉(zhuǎn)化成玻連蛋白受體拮抗劑的指導(dǎo)。
藥學(xué)上可接受的加成鹽，復(fù)合物和本發(fā)明化合物的前體藥物也包括在本發(fā)明中。前體藥物被認(rèn)為是能夠在體內(nèi)釋放根據(jù)式(Ⅰ)的活性母藥的任何共價(jià)鍵合的載體藥物。在本發(fā)明的化合物可以有一個(gè)或多個(gè)手性中心的情況下，除非特別指明，本發(fā)明包括可用常規(guī)技術(shù)合成和拆分的各自單一的非外消旋化合物。如果這些化合物具有不飽和的碳-碳雙鍵，則順式(Z)和反式(E)兩種異構(gòu)體均在本發(fā)明范圍內(nèi)。如果其中化合物存在互變異構(gòu)形式，如酮-烯醇互變異構(gòu)體，如
和
則每種互變異構(gòu)形式被認(rèn)為包括在本發(fā)明中，不管是以平衡形式存在，或是通過R’的適當(dāng)取代閉鎖在一種形式中。
式(Ⅰ)化合物抑制玻連蛋白和其它含RGD的肽結(jié)合到玻連蛋白(αvβ3)受體上。對破骨細(xì)胞上玻連蛋白受體的抑制作用抑制了破骨的再吸收并被用于治療與骨的再吸收有關(guān)的病理性疾病如骨質(zhì)疏松癥。此外，因?yàn)楸景l(fā)明的化合物抑制多種不同類型細(xì)胞的玻連蛋白受體，故而所述化合物將可用于治療炎癥和心血管疾病如動脈粥樣硬化和再狹窄，并且還可用作抗轉(zhuǎn)移和抗腫瘤劑。
下面表1描述了某些纖維蛋白原受體拮抗劑，其核心結(jié)構(gòu)已用于實(shí)施本發(fā)明。參考文獻(xiàn)應(yīng)與專利申請和其它出版物結(jié)合以便全面公開，包括制備所述模板和包含所述模板的特異性化合物的方法。通過全面的闡述使已注明的專利申請和其它出版物的完全公開結(jié)合在此作為參考。下列目錄并非意在限制本發(fā)明的范圍，僅僅是為了闡明某些已知的模板。
表ⅠAdir et CompagnieFR 928004,June 30,1992,Fauchere,et al.
EP 0578535,June 29,1993,Fauchere,et al.
CA 2128560,Jan.24,1995,Godfroid,et al.
Asahi Breweries,Ltd.
JP 05239030,Sep.17,1993.
Asahi GlassWO 90/02751,Ohba,et al.,Sept.8,1989.
WO 90/115950,Mar.22,1990,Ohba,et al.
EP 0406428,Jan.9,1991.
WO 92/09627.Isoai,A.et al.,Nov.29,1991.
Cassella AGDE 4207254,(Der 93-289298/37) Mar.7,1992,Zoller,et al.
EP 93904010,Feb.24,1993.
EP 0565896,Mar.18,1993,Klinger,et al.EP 0566919,(Der 93-338002/43)Apr.3,1993,Zoller,et al.EP 580008,(Der 94-027663/04)July 6,1993,Zoller,et al.DE 224414,July 6,1993.Zoller,et al.EP 584694,(Der 94-067259/09)Apr.2,1994.DE 4301747,(Der 94-235891/29)Jul.28,1994,Zoller,et al.DE 4308034,(Der 94-286666/36)Sept.15,1994,Klinger,O.et al.DE 4309867,Sept.29,1994,Klingler,et al.ChironWO 93/07169,(Der 93-134382/16),Mar.15,1993,Devlin,et al.Ciba GeigyEP 0452210,(Der 91-305246/42)Apr,5,1990，描述氨基鏈烷酰基-GDF類似物EP 0452257,Mar.26,1991,Allen,et al.描述氨基鏈烷?；鵄sp-Phe類似物COR TherapeuticsWO 90/15620,June 15,1990.EP 0477295,Apr.1,1992,Scarborough,et al.WO 92/08472,May 29,1992,Scarborough,et al.WO 93/223356,April 27,1993,Swift,et al.EP 0557442,Sept.1,1993,Scarborough,et al.Scarborough,et al.,J.Biol.Chem.,266,9359,1991.Daiichi Pharm Co Ltd.JP 05078344-A,(Der 93-140339/17)Mar,30,1993.DuPont MerckWO 93/07170,Apr.15,1993.WO 94/11398,May 26,1994:Wells,et al.IL 109237,Jul.31,1994.WO 94/22909,(Der 94-333113/41)Oct.13,1994,DeGrado,et al.WO 94/22910,(Der 94-333114/41 Oct.13,1994:DeGrado,et al.WO 94/22494,(Der 94-332838/41)Oct.13,1994:DeGrado,et al.EP625164,Nov.23,1994,Degrado,et al.Mousa,et al,Circulation,89,3,1994.Jackson,J.Amer.Chem.Soc.,116,3220,1994.Ellem Ind Farma SpaGB 2207922,Aug,3,1988.Farmitalia Erba SRL CarloEP 611765(Der 94-265375/33),Aug 24,1994:Cozzi,et al.Fuji Photo FilmJP 04208296-A(Der.92-303598/38),Nov.30,1990.JP 04213311-A(Der.92-305482/38),Nov.27,1990.JP 04217693-A,(Der 92-312284/38),Oct.23,1990.JP 04221394-A(Der.92-313678/38),Oct.26,1990.JP 04221395-A(Der.92-313679/38),Oct.26,1990.JP 04221396-A(Der.92-313680/38),Oct.26,1990.JP 04221397-A(Der.92-313681/38),Dec.20,1990.EP 0482649 A2,April 29,1992,Kojima,et al..EP 0488258A2,June 3,1992,Komazawa,et al..EP 503301-A2,Feb.14,1991,Kitaguchi,et al..JP 05222092,May 21,1993,Nishikawa,et al..JP 06239885,(Der 94-313705/39),Aug 30,1993,Nishikawa,et al.WO 9324448,(Der 93-405663/50),Dec.9,1993,Nishikawa,et al.JP 06228189,(Der 94-299801/37),Aug.16,1994.EP 619118,(Der 94-311647/39),Oct.12,1994,Nishikawa,et al..FujisawaEP 0513675,May 8,1992,Umekita,et al.WO 9409030-Al,Apr.28,1994,Takasugi,et al.EP 0513675,(Der 92-383589/47).WO 9500502,Jan,5,1995,Oku,et al.FR 144633:Thromb Haem.69,706,1993.Cox,et al.,Thromb.Haem.,69,707,1993.GenentechWO 90/15072(Der 91007159.WO 91/01331(Der 91058116),July 5,1990,Barker,et al.WO 91/04247,Sept.24,1990,Webb.WO 91/11458(Der 91252610),Jan.28,1991,Barker,et al.WO 92/07870,Oct.24,1991,Burnier,et al.WO 92/17492,Oct.15,1992,Bumier,et al.CA 2106314,Oct.6,1992,Bumier,et al.WO 93/08174,Oct.15,1991,Blaekbum,et al.CA 2106314,Oct.6,1992,Bumier,et al.EP 0555328,Aug.18,1993,Bumier,et al.WO 95/04057,Feb.9,1995,Blackbum,et al.Scarborough,et al.,J.Biol.Chem.268,1066,1993.Dennis,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87,2471,1989.Barker,et al.,J.Med Chem.,35,2040,1992.McDowell；Gadek,T.R.,J.Amer.Chem.Soc.,114,9245,1992.GlaxoEP 537980,Oct.13,1992,Porter,et al.EO 0542363,Nov.10,1992,Porter,et al.WO 93/22303,Jan.11,1993,Middlemiss,et al.WO 93/22303,Jan.11,1993,Middlemiss,et al.WO 93/14077,Jan.15,1993,Porter,et al.EP 609282 Al,Aug.10,1994,Porter,et al.EP 612313,Aug.31,1994,Porter,et al.EP 93911769,Apr.20,1994,Midlemiss,et al.EP 637304 Al,Feb.8,1995,Middlemiss,et al.Hann,et al.,“含ARG-GLY-ASP環(huán)肽和抑制人血小板聚集的蛇毒肽生物活性構(gòu)象的研究”In Molecular Recognition,Chemical and BiochemicalProblems Ⅱ”,S.M.Roberts,Ed.,The Royal Society of Chemistry,Cambridge,1992.Ross,B.C.,“非肽纖維蛋白原受體拮抗劑”In Seventh RSC-SCIMedicinal Chemistry Symposium,The Royal Society of Chemistry FineChemicals and Medicinals Group and SCI Fine Chemicals Group,ChurchillCollege,Cambridge,1993,L20.Pike,et al.,Thromb.Haem.,69,1071,1993.HoechstDE 4009506,Mar.24,1990,Konig,et al.Hoffmann-La RocheAU 9344935,(Der94-118783/15),Mar.10,1994.EP 0592791,Apr.20,1994,Bannwarth.et al.Kogyo GijutsuinJP 06179696,June 28,1994.Kyowa Hakko Kogyo KKJP 05078244-A,Mar.30,1993.Laboratoire ChauvinWO 9401456,Jan.20,1994,Regnouf,et al.La Jolla Cancer Res.FndnWO 9500544,Jan.5,1994,Pierschbacher,et al.US 079441,Jan 5,1994,Pierschbacher,et al.Lilly/COR TherapeuticsEP 0635492,Jan.25,1995,Fisher,et al.Medical University of South CarolinaEP 587770,Mar.23,1994,Halushka,et al.MerckEP 0368486(Der 90-149427/20),Nov.10,1988.EP 0382451(Der 90248531).EP 0382538(Der 90248420).EP 0410537,July 23,1990,Nutt,et al..EP 0410539,July 25,1990,Nutt,et al..EP 0410540,July 25,1990,Nutt,et al..EP 0410541,July 25,1990,Nutt,et al.EP 0410767,July 26,1990,Nutt,et al.EP 0411833,July 26,1990,Nutt,et al.EP 0422937,Oct.11,1990,Nutt,et al.EP 0422938,Oct.11,1990,Nutt,et al.EP 0487238,Octover 13,1991,Connolly,et al.EP 0437367(Der 91209968),Sato et al.EP 576898,Jan.5,1994,Jonczyk,et al.WO 9409029,Apr.28,1994,Nutt,et al.EP 618225,(Der 94-304404/38)Oct.5,1994.DE 4310643,(Der 94-311172/39),Oct.6,1994,Jonczyk,et al.,描述環(huán)RGD類似物作為抗轉(zhuǎn)移劑NO 9404093,Oct.27,1994,Jonczyk,et al.EP 0632053,Jan.4,1995,Jonezyk,et al.EP 0479481,Sept.25,1991,Duggan et al.EP 0478328,Sept.26,1991,Egbertson,et al.EP 0478362,Sept.27,1991,Duggan et al.EP 0478363,Sept.27,1991,Laswell,et al.EP 0512829,May,7,1992,Duggan,et al.EP 0512831,May,7,1992,Duggan,et al.EP 0528586,August 5,1992,Egbertson,et al.EP 0528587,August 5,1992,Egtertson,et al.EP 0540334,October 29,1992,Hartman,et al.US 5227490,Feb.21,1992,Hartman,et al.CA 2088518,Feb.10,1993,Egbertson,et al.US 5206373-A,(Der 93-151790/18)Apr.27,1993,Chung,et al.WO 9316994,(Der 93-288324/36),Sep.2,1993,Chung,et al.US 5264420-A,Nov.23,1993.US 5272158,Dec.21,1993,Hartman,et al.US 5281585,Jan.25,1994,Ihle,et al.GB 945317 A,Mar.17,1994.GB 2271567 A,Apr.20,1994,Hartman,et al.US 5294616,(Der 94-09156l/11)Mar.15,1994,Egoertson,et al.US 5292756,(Der 94-082364)Apr.8,1994,Hartman,et al.WO 9408577,Apr.28,1994,Hartman,et al.WO 9408962,Apr.28,1994,Hartman,et al.WO 9409029,(Der 94-151241/18)Apr.28,1994,Hartman,et al.US 5312923,May 17,1994,Chung,et al.HU 9400249,May 30,1994,Gante,et al.WO 9412181,(Der 94-199942/24),Jun.9,1994,Egbertson,et al.US 5321034,June 14,1994,Duggan,et al.US 5334596,Aug.2,1994,Hartman,et al.EP 0608759 A,Aug.3,1994,Gante,et al.WO 9418981,(Der 94-293975/36)Sep.1,1994,Claremon,et al.GB 2276384,(Der 94-287743/36)Sep.28,1994,Claremon,et al.WO 9422825,Oct.13,1994,Claremon,et al.EP 0623615A,Nov.9,1994,Raddatz,et al.WO 9504531,Feb.16,1995,Hartman,et al.Nutt,et al.,用作有效抗血栓劑的新的、高選擇性纖維蛋白原受體拮抗劑的開發(fā)。
In Peptides,Chemistry and Biology,Proc.12th Amer.Peptide Symp.,J.
A.Smith and J.E.Rivier,Ed.,ESCOM,Leiden,1992；914.Hartman,et al.,J.Med.Chem.,35,4640,1992.Gould,et al.,Thromb.Haem.,69,539,1993.Merrell DowWO 93/24520,May 14,1993,Harbeson.,et al.WO 9324520,Dec.9,1993,Harbeson,et al.WO 9429349,Dec.22,1994,Harbeson,et al.Nippon Steel CorpWO 9405696,Mar.17,1993,Sato.,et al,.EP 628571,Dec.14,1994,Sato,et al.WO 9501371,Jan.12,1995,Sato,et al.ONO PharmaceuticalsJP 05286922(Der 93-383035/48).RocheEP 038,362,Feb.19,1990,Muller,et al..EP 0372486,June,13,1990,Allig,et al.EP 0381033,July,8,1990,Allig,et al.EP 0384362,August 29,1990,Allig,et al.EP 0445796,Sept.11,1991,Allig,et al.EP 0505868,Sept.30,1992,Allig,et al.US 5273982-A,(Der 94-006713/01)Dec.28,1993Alig,et al.,J.Med.Chem.,35,4393,1992.Rhone-Poulenc RorerUS 4952562,Sept.29,1989,Klein et al.US 5064814,(Der 91-353169/48)Apr.5,1990WO 9104746,Sept.25,1990,Klein et al.WO 91/05562,Oct.10,1989,Klein et al.WO 91/07976,(Der 91-192965)Nov.28,1990,Klein et al.WO 91/04746,Klein et al.WO 92/18117,Apr.11,1991,Klein et al.US 5086069,(Der 92-064426/08)Apr.2,1992.WO 92/17196,Mar.30,1992.Klein et al.US 5328900,(Der 94-221950/27)Jul.12,1992.US 5332726,(Der 94-241043/29)Jul.26,1994.WO 93/11759,Dec.7,1992,Klein et al.EP 0577775,Jan 12,1994,Klein,et al.CA 2107088,Sept.29,1992,Klein,et al.SandozEP 0560730,Mar.8,1993,Kottirisch,et al,Kottirisch,et al.,Biorg.Mea.Chem.Lett 3,1675-1680,1993.Schering AGEP 530937,Mar.10,1993,Noeski-Jungblut,et al.Searle/MonsantoEP 0319506,(Der 89-3195506)Dec.2,1988,Adams,et al.EP 0462,960,June,19.1991,Tjoeng,et al.US 4857508,Adams,et al.EP 0502536,(Der 92-301855)Mar.3,1991,Garland,et al.EP 0319506,Dec.2,1988,Adams et al.US 4992463,Aug.18,1989.US 5037808,Apr.23,1990.EP 0454651 A2,Oct.30,1991,Tjoeng,et al..US 4879313,July,20,1988.WO 93/12074,Nov.19,1991,Abood,et al.WO 93/12103,Dec.11,1991,Bovy,et al.US 5091396,Feb.25,1992,Tjoeng,et al.WO 92/15607,Mar.5,1992,Garland,et al.WO 93/07867,Apr.29,1993,Bovy,et al.US 888686,May 22,1992,Bovy,et al.CA 2099994,Sept.7,1992,Garland,et al.US 5254573,Oct.6,1992,Bovy,et al.(PF54C06),EP 0539343,Oct.14,1992,Bovy et al.WO 93/12074,Nov.27,1992,Abood,et al.WO 93/12103,Dec.11,1992,Bovy et al.EP 0 539343,Apr.28,1993,Bovy,et al.EP 0542708,May,19,1993,Bovy,et al.WO 94/00424,June 23,1993,Abood,et al.WO 93/16038,Aug.16,1993,Miyano,et al.WO 93US7975,Aug.17,1993,Zablocki,et al.WO 93/18058,Sept.16,1993,Bovy,et al.US 5254573,Oct.19,1993,Bovy,et al.US,5272162,Dec.21,1993,Tjoeng,et al.EP 0574545,Dec.22,1993,Garland,et al.WO 9401396,Jan.20,1994,Tjoeng,et al.WO 9405694,(Der 94-101119/12)Mar.17,1994,Zablocki,et al.US 5314902,May 24,1994,Adams,et al.WO 9418162,Aug,18,1994,Adams,et al.WO 9419341,Sept.1,1994,Tjoeng,et al.US 5344837,(Der 94-285503/35),Sept.6,1994,Zablocki,et al.EP 614360,Sept.14,1994,Bovy,et al.WO 9420457,(Der 94-302907/37)Sep:15,1994,Tjoeng,et al.WO 9421602,(Der 94-316876/39),Sept.29,1994,Tjoeng,et al.WO 9422820,Oct.13,1994,Abood,et al.EP 630366,Dec.28,1994,Bovy,et al.US 5378727,Jan.3,1995,Bovy,et al.Fok,et al.,Int J.Peptide Prot.Res.,38,124-130,1991.Zablocki,et al.,J.Med.Chem.,35,4914-4917,1992.Tjoeng,et al.,RGD順序的肽模擬物，In Peptides,Chem.and Biol.
Proc.12th Amer.Peptide Symp.,J.A.Smith and J.E.Rivier,Ed.,ESCOM,Leiden,1992；752.Nicholson,et al.,Thromb.Haem.,69,975,1993.SmithKline BeechamEP 341 915,Ali,et al.EP 425 212,Ali,et al.EP 557 406 Callahan,et al.WO 93/09133,Callahan,et al.WO 93/00095,Bondinell,et al.WO 94/14776,Boindinell,et al.WO 95/18619,Bondinell,et al.WO 94/12478,Keenan,et.al.WO 94/12478,Callahan,et.al.WO 94/12478,Callahan,et.alWO 94/12478,Samanen,et.al.Sumitomo Pharm.Co.Ltd.WO 9501336,June 6,1994,Ikeda,et al.Sumitomo Seiyaku KKJP 06025290,(Der 94-077374/10)Feb.1,1994.Taisho Pharm.(Teijin,Ltd)JP 05230009,(Der 93-317431/40,Feb.24,1992.JP 9235479,Feb.24,1992.WO 94/17804,Aug.18,1994,Mizushima.EP 634171,Jan.18,1995,NizushimaTakedaEP 0529858,Apr.3,1993,H.Sugihara,et al.EP 606881,Jul.20,1994.EP 614664,Sept.14,1994,Miyake,et al.TanabeWO 89/07609,Lobl,et al.WO 92/00995,July 9,1991,Lobl,et al.WO 93/08823,Nov.6,1991,McKenzieCA 2087021,Jan 10,1991,Lobl,et al.WO 92/08464,Nov.15,1991,McKenzie,et al.Telios/La Jolia Cancer ResearchUS.4578079,Nov.22,1983,Ruoslahti,et al.US.4614517,June 17,1985,Ruoslahti,et al.US.4792,525,June 17,1985,Ruoslahti,et al.US 4879237,(Der 90-154405/20)May,24,1985WO 91/15515,(Der 91-325173/44)Apr.6,1990US.5041380,1991,Ruoslahti,et al.WO 95/00544 Jan.5,1995,Craig,et.al.Cheng,et al.,J.Medicin.Chem.,37,1,1994.Collen,et al.,71,95,1994.Temple UniversityWO 9409036(Der 94-151248/18),Apr.28,1994.Terumo KKJP 6279389,Oct.4,1994,Obama,et al.Karl Thomae/Boehringer IngelheimEP 0483667,May 6,1992,Himmelsbach,et al.EP 0496378,Jan.22,1992,Himmelsbach,et al.EP 0503548,Sep.16,1992,Himmelsbach,et al.AU A-86926/91,May 7,1992,Himmelsbach,et al.EP 0528369,Feb.24,1993,Austel,et al.EP 0537696,Apr.21,1993 Linz,et al.DE 4124942,Jan.28,1993,Himmelsbach,et al.DE 4129603,Mar,11,1993,Pieper,et al.EP 0547517 Al,(Der 93-198544)June 23,1993,Soyka,et al.EP 0567966,Nov.3,1993,Himmelsbach,et al.EP 0567967,Nov.3 1993,Weisenberger,et al.EP 0567968,Nov.3,1993,Linz,et al.EP 0574808,June 11,1993,Pieper,et al.Der 93-406657/51,Austel,et al.EP 587134,(Der 94-085077/11)Mar.16,1994,Himmerlsbach,et al.EP 589874,Apr.6,1994,Grell,et al.(P534005),DE 4234295,Apr.14,1994,Pieper,et al.EP 0592949,Apr.20,1994,Pieper,et al.EP 596326,May,11,1994,Maier,et al.DE 4241632,June 15,1994,Himmelsbach,et al.EP 0604800 A,Jul.6,1994,Himmelsbach,et al.DE 4302051,(Der 94-235999/29)July,28,1994.EP 0608858 A,Aug,3,1994,Linz,et al.DE 4304650,(Der 94-256165/32),Aug,18,1994,Austel,et al.EP 611660,Aug,24,1994,Austel,et al.DE 4305388,(Der 94-264904/33),Aug.25,1994,Himmelsbach,et al.(P5D4005),EP 612741,(Der 94-265886/33),Aug.31,1994,Himmelsbach,et al.EP 0639575 A,Feb.22,1995,Linz,et al.DE 4324580,Jan.26,1995,Linz,et al.EP 0638553,Feb.15,1995,Himmelsbach,et al.Hiummelsbach,et al.,in ⅩⅡth Int.Symp.on Med.Chem.Basel,Book of Abstracts,47,1992.Austel,et al.,Natl.Mtg.Amer.Chem.Soc.Book of Abstracts,Denver,Div.Med.Chem.,1993.Muller,et al.,BIBUl04，一種非肽纖維蛋白原受體拮抗劑BIBU52的前藥，在鼠和猴中的口服活性,Thromb.Haem.,69,975,1993.Univ.CaliforniaWO 94/14848,July,7,1994,Zanetti.Univ.New YorkWO 94/00144,June 29,1993,Ojima,et al.Yeda Res.and Dev.Co.WO 93/09795,(Der 93-182236/22),Lido,et al.ZenecaWO 9422834,Oct.13,1994,Wayne,et al.WO 9422835,Oct.13,1994,Wayne,et al.EP 632016,Jan.4,1995,Brewster,et al.EP 632019,Jan.4,1995,Brown,et al.EP 632020,Jar.4,1995,Brown,et al.
在一個(gè)特定的實(shí)施例中,纖維蛋白原受體拮抗劑模板A為Bondinell等(世界專利號93/00095，
公開日為1993年1月7日)所定義的稠合的6/7元環(huán)的雙環(huán)結(jié)構(gòu)，如亞式(Ⅵ)所定義或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中A1至A5形成一種易取代的7元環(huán)，它可以是飽和的或不飽和的，可選含有多至兩個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，其中S和N任選被氧化；
D1至D4形成一個(gè)易取代的六元環(huán)，任選含有多至兩個(gè)氮原子；R至少為一個(gè)選自R7、或Q-C1-4烷基，Q-C2-4鏈烯基、Q-C2-4炔基的取代基，任選被一個(gè)或多個(gè)=O、R11或R7取代；R*為H、Q-C1-6烷基、Q-C1-6氧代烷基、Q-C2-6鏈烯基、Q-C3-4氧代鏈烯基、Q-C3-4氧代炔基、Q-C2-4炔基、C3-6環(huán)烷基、Ar或Het，任選為一個(gè)或多個(gè)R11取代；Q為H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-B(OR’)2、-NO2和Tet；R8為-OR’、-NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’、-OCR’2C(O)OR’、-OCR’2OC(O)-R’、-OCR’2C(O)NR’2、CF3或AA1；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、S(O)mNR’2、-C(O)R’C(O)NR’2或-CO2R’；R11為H、鹵素、-OR12、-CN、-NR’R12、-NO2、-CF3、CF3S(O)r、-CO2R’、-CONR’2、Q-C0-6烷基、Q-C1-6氧代烷基-、Q-C2-6鏈烯基、Q-C2-6炔基、Q-C0-6烷氧基、Q-C0-6烷基氨基-或Q-C0-6烷基-S(O)r-；R12為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、-C(O)OR15、-S(O)mR’或S(O)mNR’2；R13為R’、-CF3、-SR’或-OR’；R14為R’、-C(O)R’、CN、NO2、SO2R’或C(O)OR15；R15為H、C1-6烷基或Ar-C0-4烷基；R’為H、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-4烷基或Ar-C0-4烷基；R”為R’、-C(O)R’或-C(O)OR15；R”’為R”或AA2；AA1為通過其氨基連接的氨基酸并且它的羧基可任選被保護(hù)，而AA2為通過其羧基連接的氨基酸，并且有它的氨基可任選被保護(hù)；m為1或2；
n為0至3；p為0或1；和t為0至2。
至于式(Ⅱ)，適宜地，A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S(O)x；A2為CR2R2’、CR2、NR2；A3為CR3R3’、CR3、NR3、N、O或S(O)x；A4為CR4R4’、CR4、NR4或N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N、O或S(O)x；D1-D4為CR11、CR6或N；R1和R1’為R*或R，或者一起為=O；R2和R2’為R*、R或=O；R3和R3’為R*、R或=O；R4和R4’為R*、R或=O；R5和R5’為R*、R或=O；和x為0至2。
更適合，A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S；A2為CR2R2’、NR2或CR2；A3為CR3R3’；A4為CR4R4’、CR4、NR4或N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N、O；D1-D4為CH；R2或R4為R；R3、R3’和R5、R5’為=O或R*、H。
優(yōu)選，A1為CHR1、CR1、NR”、N或S；A2為CR2或CR2R2’；A3為CR2R3’；A4為CR4R4’或NR4；A5為CR5R5’和D1-D4為CH。
在一個(gè)實(shí)施方案中，A1為CR1，A2為CR2，A3為C=O，A4為NR4和A5為CHR5。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，A1為NR1，A2為CHCR2，A3為CR3R3’，A4為NR4和A5為C=O。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，A1和A4為C=O，A2為NR2，A3為CHR3’和A5為NR5。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，A1為NR1，A2為CHR2，A3為C=O，A4為NR’和A5為CHR5。
代表性的亞式(Ⅱ)由下列(Ⅱa)至(Ⅱi)給出
優(yōu)選的模板如式(Ⅲ)給出
其中A1-A2為NR1-CH、NC(O)R3-CH、N=C、CR1=C、CHR1CH、O-CH或S-CH；R1為H，C1-6烷基或芐基；R2為(CH2)qCO2H；
R4為H，C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；和q為1、2或3。優(yōu)選A1-A2為NH-CH和R2為CH2CO2H。適宜地，R3為甲基和W(如式(Ⅰ)所定義)為CH2NR’CO。Ri適合為NHR1、CN、CO2H、生物素苯丙咪唑或任選取代的苯基。
使用這種模板的玻連蛋白拮抗劑的特殊實(shí)例為(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[1-氧代-2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(苯基乙基)-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[2-[2-(6-甲基-吡啶基]氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(嘧啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[2-[(6-甲基-3-噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；和(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[2-[3-(噠嗪基氨基)乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸。
優(yōu)選的化合物為(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸。
苯并二氮雜纖維蛋白原受體模板A的另一實(shí)施方案由亞式(Ⅳ)的1,4-苯并二氮雜2,5-二酮代表
其中Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf、或NHC(O)Rf；和Rh為(CH2)qCO2Rf。
Rh適宜為CH2CH2CO2H。
表Ⅱ(Ⅴ)-(ⅩⅤ)概括了其它一些包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的說明性纖維蛋白原受體模板表Ⅱ
其中R21和R22獨(dú)立為H或Z-CO2Rf或Z-CON(Rf)2(以R21或R22之一為Z-CO2Rf或Z-CON(Rf)2為條件)Z為-CH2-、-O(CH2)q-、-NRf(CH2)q、-S(CH2)q、-CH2CH2-、-CH(CH3)CH2、-(CH2)3、-CH=CH-、-C(CH3)=CH-、CH2-CH=CH或CH=CHCH2；和Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基或Z-CORf，由Alig等公開，歐洲專利號0381033，
公開日為1990年8月8日。
其中R6為芳基、C1-10烷基、C3-6環(huán)烷基、C4-10芳烷基、C1-10烷氧基烷基、C1-10烷芳基、C1-10烷基硫代烷基、C1-10烷氧基硫代烷基、C1- 10烷基氨基、C4-10芳烷基氨基、C1-10鏈烷酰基氨基、C4-10芳烷酰基氨基、C1-10鏈烷?；?、C4-10芳烷酰基、或C1-10羧基烷基；和Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf，由Egbertson等公開，歐洲專利號0478328，
公開日為1992年4月1日。
其中M1為CH或N；M2為CH或N，以當(dāng)M1為CH時(shí)，M2是N為條件；和G1為N或NR11，由Eldred等公開，歐洲專利0542363，
公開日為1993年5月19日。
其中M1為CH或N；M2為CH或N，以當(dāng)M1為CH時(shí)，M2為N，由Porter等公開(歐洲專利號0537980，
公開日為1993年4月21日)。
其中M1為CH或N；Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf；D3為CH2或C=O；和Rh為(CH2)qCO2Rf。由Klinnick等公開(歐洲專利號0635492，
公開日1995年1月25日)。
其中Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf。
Rh為(CH2)qCO2Rf；B為
，或
由Blackburn等公開(世界專利號95/04057，
公開日1995年2月9日)。
其中L*為-C(O)NRg-(CH2)-、-C(O)-(CH2)q-、NRg-(CH2)q-、-O-(CH2)q-、或S(O)k-(CH2)q-由Hartman等公開(歐洲專利號0540331，
公開日1993年5月5日)。
由Sugihara等公開(歐洲專利號0529858，
公開日1993年3月3日)。
其中Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf。
由Himmeisbach等公開(歐洲專利號0483667，
公開日1992年5月6日)。
由Linz等公開(歐洲專利號0567968，
公開日1993年11月3日)。
其中Rd為Het-C0-6烷基；和Z”、Z”’獨(dú)立為氫、C1-4烷基、鹵素、ORf、CN、S(O)kRf、CO2Rf或OH，由Bovy等公開(歐洲專利號0539343，
公開日1993年4月28日)。
對用于本發(fā)明的纖維蛋白原受體模板的以上描述摘自未決的公開的專利申請。應(yīng)參照這些專利的全公開，包括各種這類模板的可能的變化及其制備所述模板的方法，這類專利申請的全面公開被結(jié)合在此作為參考。
在本發(fā)明的化合物可以有一個(gè)或多個(gè)手性中心的情況下，除非特別指明，本發(fā)明包括用常規(guī)技術(shù)合成和拆分為各自單一的非外消旋化合物。如果這些化合物具有不飽和的碳-碳雙鍵，則順式(Z)和反式(E)兩種異構(gòu)體均在本發(fā)明范圍內(nèi)。在任何情況下任何取代基的含義不受其本身的含義或在任何情況下任何其它取代基含義的限制。
本文使用一些在肽和化學(xué)領(lǐng)域內(nèi)普遍使用的一些縮略語和符號來描述本發(fā)明化合物。一般來說，氨基酸的縮寫遵循Eur.J.Biochem.,158,9(1984)描述的IUPAC-IUB聯(lián)合會有關(guān)生物化學(xué)命名法則。
本文所使用的C1-4烷基意指任選取代的1至4個(gè)碳原子的烷基，包括甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、異丁基和叔-丁基。C1-6烷基另外還包括戊基、正-戊基、異戊基、新戊基和己基以及它們的簡單脂肪族異構(gòu)體。C0-4烷基和C0-6烷基另外表明不需存在烷基基團(tuán)(例如存在共價(jià)鍵)、任何C1-4烷基或C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基或C1-6氧代烷基任選被Rx基團(tuán)取代，這種取代可以在產(chǎn)生一種穩(wěn)定結(jié)構(gòu)并可通過常規(guī)合成技術(shù)完成此過程的任何碳原子上。合適的Rx基團(tuán)為C1-4烷基、OR’、SR、C1-4烷基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基硫氧基(sulfoxyl)、CN、N(R’)2、CH2N(R’)2、-NO2、-CF3、-CO2R’、-CO(R’)2、-COR’、-NR’C(O)R’、OH、F、Cl、Br、I、N3或CF3S(O)r，其中r為0至2和R’如有關(guān)式(Ⅱ)所定義。
本文使用的Ar或aryl意指苯基或萘基，或苯基或萘基為一個(gè)至3個(gè)取代基，例如上文定義的烷基，尤其是C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、CO2H、N3、三氟烷基、OH、F、Cl、Br或I所取代。
Het或雜環(huán)基意指含有選自氮、氧和硫基團(tuán)的一至3個(gè)雜原子的任選取代的5至6元單環(huán)，或一個(gè)9或10元雙環(huán)，它是穩(wěn)定的并可用常規(guī)化學(xué)合成獲得。雜環(huán)基的例子有苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并吡喃、苯并噻吩、生物素、呋喃、咪唑、二氫吲哚、嗎啉、哌啶、哌嗪吡咯、吡咯烷、四氫吡啶、吡啶、噻唑、噻吩、喹啉、異喹啉及四和全氫喹啉和異喹啉。雜環(huán)上多達(dá)3個(gè)取代基的任何可獲得的組合(例如可通過化學(xué)合成獲得的且穩(wěn)定的如上所定義的烷基)都在本發(fā)明范圍內(nèi)。
C3-7環(huán)烷基系指任選取代的3至7個(gè)碳原子的碳環(huán)系統(tǒng)，它可以含有多達(dá)2個(gè)不飽和碳-碳鍵。典型的C3-7環(huán)烷基有環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基和環(huán)庚基。環(huán)烷基環(huán)上多達(dá)3個(gè)取代基(如上所定義的烷基)的可通過常規(guī)化學(xué)合成獲得并且是穩(wěn)定的任何組合均在本發(fā)明范圍內(nèi)。
由代表的環(huán)為至少含有一個(gè)氮原子的六元環(huán)，該環(huán)2位可由一個(gè)氮原子取代。所述環(huán)的環(huán)上任選有一個(gè)另外的氮原子，因而可以為吡嗪、噠嗪或嘧啶。取代基Ry可以在形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)Q1-Q4的任何位置上。很明顯，當(dāng)u為1時(shí)，所述化合物為N-氧化物，而當(dāng)u為0時(shí)，則氮上為無氧取代基。吡啶環(huán)為優(yōu)選的。
本文中的一些基團(tuán)為縮略式。t-Bu為叔丁基，Boc系指叔丁氧基羰基，F(xiàn)moc指芴基甲氧基羰基，Ph指苯基，Cbz指芐氧基羰基，BrZ指鄰-溴代芐氧基羰基，CIZ指鄰-氯代芐氧基羰基，Bzl指芐基，4-MBzl指4-甲基芐基，Me指甲基，Et指乙基，Ac指乙?；?，Alk指C1-4烷基，Nph指1-或2-萘基和cHex指環(huán)己基，Tet指5-四唑基。
部分試劑在此也用縮略式。DCC指二環(huán)己基碳二亞胺，DMAP指二甲基氨基吡啶，DIEA指二異丙基乙胺，DEC指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，鹽酸鹽。HOBt指1-羥基苯并三唑，THF指四氫呋喃，DIEA指二異丙基乙胺，DME指二甲氧基乙烷，DMF指二甲基甲酰胺，NBS指N-溴代琥珀酰亞胺，Pd/C指鈀炭催化劑，PPA指1-丙基膦酸環(huán)酐，DPPA指二苯基磷?；B氮化物，BOP指苯丙三唑-1-基氧基-三(二甲基-氨基)6氟磷酸鏻，HF指氫氟酸，TEA指三乙胺，TFA指三氟乙酸，PCC指氯鉻酸吡啶翁。
式(Ⅰ)化合物一般通過該領(lǐng)域熟知的方法使式(ⅩⅥ)化合物與式(ⅩⅦ)化合物反應(yīng)而制得，其中L1和L2為可以反應(yīng)在W部分以形成共價(jià)鍵的基團(tuán)。
典型的方法包括偶合形成酰胺鍵，親核置換反應(yīng)和鈀催化偶合。
例如，當(dāng)W含有醚鍵或胺鍵時(shí)，則該鍵可通過置換反應(yīng)形成，并且L1和L2中的一個(gè)將含有氨基或羥基，而另一個(gè)將含有可取代的基團(tuán)，如氯、溴或碘。當(dāng)W含有酰胺鍵時(shí)，一般L1和L2中的一個(gè)含有氨基而另一個(gè)含有羧基。另一條途徑是L1可以是芳基或雜芳基溴化物，雜芳基碘化物或三氟甲基磺酰氧基衍生物和L2可以含有氨基，并可通過鈀-催化的氨基羰基化作用與一氧化碳在合適的溶劑如二甲基甲酰胺或甲苯中形成酰胺鍵。
很明顯，L1和L2的準(zhǔn)確的身份將取決于鍵形成的部位。已有制備鍵-(CHR”)r-U-(CHR”)s-V-的一般方法的描述如在歐洲專利申請?zhí)?372486和申請?zhí)朅0381033及申請?zhí)朅0478363中，結(jié)合在此作為參考。
例如，如果V為CONH，L1可以是-NH2，L2可以為OH(如在酸中)或Cl(如在酰氯中)。例如，(吡啶-2-基)氨基甲基(CH2)a-COCl可以與合適的胺反應(yīng)。當(dāng)L2為OH時(shí)，使用一種偶合劑。
類似地，如V為NHCO，L1可以是-CO2H或CO-Cl，L2可以是-NH2。例如，(吡啶-2-基)氨基甲基(CH2)a-NHR1可以與合適的羧酸反應(yīng)。
在V為NHSO2時(shí)，L1可以是SO2Cl，L2可以是-NH2(如上)。在V為SO2NH時(shí)，L1可以是-NH2和L2可以是SO2Cl。制備此類磺酰氯的方法已有公開，如在J.Org.Chem.,23,1257(1958)中。
如果V為CH=CH，L1可以是-CHO，L2可以是CH=P-Ph3?；蛘週1可以是CH=P-Ph3和L2可以是CHO。例如，(吡啶-2-基)氨基甲基(CH2)a-CHO可以與合適的正膦反應(yīng)。
在V為CH2CH2時(shí)，可通過還原適當(dāng)保護(hù)的化合物(其中V為CH=CH)而獲得。
在V為CH2O，CH2N或C≡C時(shí)，L1可以分別是-OH，-NH或-C≡CH；L2可以是-Br或-I。類似地，在U或V為OCH2，NR1CH2或C≡C時(shí)，L1可以是CH2Br和L2可以分別是-OH，-NH或-C≡CH。例如，(吡啶-2-基)氨基甲基(CH2)a-Br可以與合適的胺、醇鹽或乙炔反應(yīng)?；蛘弋?dāng)U或V為C≡C時(shí)，L1可以為Br、I或CF3SO3，L2可以是C≡CH，可通過鈀和堿催化該偶合過程。
其中V為CHOHCH2的化合物可按在J.Org.Chem.,54,1354(1989)公開的方法由其中V為CH=CH的適合保護(hù)的化合物來獲得。
其中V為CH2CHOH的化合物可按照在Tet.Lett.,31,231(1990)公開的硼氫化反應(yīng)和堿性氧化反應(yīng)由其中V為CH=CH的化合物獲得。
式Ⅱ核心6-7稠合環(huán)纖維蛋白原模板可以通過該領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的方法(例如Hynes等J.Het.Chem.,1988,25,1173；Muller等Helv.Chim.Acta.,1982,65,2118；Mori等Heterocycles,1981,16,1491)來制備。類似地，制備苯并氮雜1,4-苯并硫氮雜(benzothiazepines)，1,4-苯并氧氮雜(benzoxazepines)和1,4-苯并二氮雜的方法已為眾所周知并公開，例如在Bondinell等(國際專利申請?zhí)朩O 93/00095)中。
代表性的纖維蛋白原拮抗劑模板可根據(jù)下文圖式A-CC來制備。
圖式A描述了制備Blackbum等(WO 93/08174)中所述的示范性的纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式A
a)COCl2，碳酸鈉，甲苯；b)對甲苯磺酸β-氨基丙酸芐酯，DMAP，吡啶；c)CH3I,2,6-二甲基吡啶，DMF；d)α-溴乙酰溴，Et3N,CH2Cl2；e)NaH,DMF；f)Pd(OAC)2,dppf,CO,DMSO,65℃,18小時(shí)；g)N-(2-吡啶基)乙二胺，EDC,HOBt·H2O,DIEA,CH3CN；h)H2,10％Pd/C,EtOH。
圖式B描述了制備Blackbum等(WO 95/04057)所述的示范性纖維蛋白原受體模板的方法。
a)COCl2，碳酸氫鈉，甲苯；b)鹽酸β-氨基丙酸乙酯，DMAP，吡啶；c)α-溴乙酰溴，Et3N,CH2Cl2；d)NaH,DMF；e)Lswesson’s試劑，THF,50℃,2小時(shí)；f)CH3I，氫氧化鈉，(n-Bu)4N.HSO4,CH2Cl2/H2O,RT,2小時(shí)；g)炔丙胺，甲苯，鹽酸吡啶，回流，6小時(shí)；h)Pd(OAC)2,dppf,CO,DMSO,65℃，18小時(shí)；i)N-(2-吡啶基)乙二胺，EDC,HOBt·H2O,DIEA-CH3CN；j)LiOH,H2O,THF,18小時(shí)。
圖式C描述了制備Porter等(EP 0542363)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。圖式C
a)NaBH3CN,HCl,CH3OH；b)HCl,二噁烷，CH2Cl2；c)1-氯代-3-[(2-吡啶基)氨基]丙烷，DIEA,THF；d)氫氧化鈉，H2O,CH3OH。
圖式D描述了制備Porter等(EP 0537980)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式D
a)1-氯代-3-[(2-吡啶基)氨基]丙烷，DIEA,TH-F；b)NaOH，水，甲醇。
D-1經(jīng)1-氯-3-[(2-吡啶基)氨基]丙烷與DIEA在THF中烷基化，生成的酯經(jīng)在甲醇水溶液的氫氧化鈉皂化得到D-2。也可用TFA或HCl在適合的溶劑如CH2Cl2或二噁烷中裂解叔-丁基酯作為備選方法。
圖式E描述了制備Porter等(EP 0542363)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式E
a)NaBH3CN、HCl、CH3OH、EtOH、分子篩；b)TFA、CH2Cl2；c)2-氯吡啶-N-氧化物、NaHCO3、丁醇；d)HCO2K、10％Pd/C、CH3OH；e)1N NaOH、CH3OH。
采用在甲醇和乙醇中的NaBH3CN、HCl和分子篩用E-2使E-1還原氨化，接著用在CH2Cl2中的TFA處理產(chǎn)生E-3。用2-氯代吡啶-N-氧化物和碳酸氫鈉在加熱的丁醇溶液中處理E-3，然后用在CH3OH中的HCO2K和10％Pd/C還原N-氧化物，再用在CH3OH中的1NNaOH皂化乙酯產(chǎn)生E-4。
圖式F描述了制備Porter等(EP 0537980)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式F
a)NaBH3CN、HCl、CH3OH、EtOH、分子篩；b)TFA、CH2Cl2；c)2-氯吡啶-N-氧化物、NaHCO3、丁醇；d)HCO2K、10％Pd/C、CH3OH；e)1N NaOH、CH3OH。
采用在CH3OH和EtOH中的NaBH3CN、HCl和分子篩用F-2使F-1還原氨化，接著用在CH2Cl2中的TFA處理產(chǎn)生F-3。用2-氯代吡啶-N-氧化物和NaHCO3在加熱的丁醇溶液中處理E-3，隨后用在甲醇中的HCO2K和10％Pd/C還原N-氧化物，再用在甲醇溶液中的1NNaOH皂化乙酯產(chǎn)生F-4。
圖式G描述了制備Beavers等(WO 95/25091)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。圖式G
a)N-[2-(吡啶基)氨基]丁酸、BOP-Cl、NMM、CH2Cl2；b)LiOH、H2O、THF；c)β-氨基丙酸芐酯、EDC、HOBT、NMM、CH2Cl2；d)H2、10％Pd/C、AcOH、THF、H2O。
遵照Beavers等(WO 95/25091)在實(shí)例1中的方法，但用N-[2-(吡啶基)氨基]丁酸替代Nα-Boc-D-lys(Cbz)-OH，產(chǎn)生F-4。
圖式H描述了制備Hartman等(EP 0540334)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式H
a)N-(2-吡啶基)乙二胺、Et3N、苯；b)1.0N LiOH、H2O、CH3OH；e)β-氨基丙酸乙酯、BOP、Et3N、CH3CN；d)LiOH、H2O、THF、CH3OH。
在Hartman等(EP 0450334)描述的用于2,3-二氫-N-(2-羧基-乙基)-2-[2-(哌啶基)乙基]-3-氧代-1H-異吲哚-5-甲酰胺的一般條件下，用合適的官能化胺如N-(2-吡啶基)乙二胺處理4-(溴甲基)苯-1,3-二羧酸二甲酯(H-1)產(chǎn)生H-4。
圖式I描述了制備Egbertson(EP 0478363)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。Scheme I
a)4-[(2-吡啶基)氨基]丁醇，Ph3P、DEAD、CH2Cl2、苯；b)1.0N LiOH、THF、H2O。
N-(n-丁基磺?；?-L-酪氨酸甲酯(I-1)經(jīng)適當(dāng)官能化的醇如4-[(2-吡啶基)氨基]丁醇處理產(chǎn)生了I-3。
圖式J描述了制備Duggan等(J.Med.Chem.1995,38,3332)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式J
a)新戊酰氯、Et3N、THF,(S)-4-芐基-2-噁唑烷二酮(oxazolidinone)；b)Ti(O-i-Pr)Cl2、丙烯腈、DIEA、CH2Cl2；c)H2、PtO2、CH3OH、CHCl3；d)NaHCO3、CH3CN；e)NaHMDS、溴乙酸乙酯；f)1N NaOH、CH3OH；g)鹽酸3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯、EDC、HOBT、Et3N、DMF；h)1N NaOH、CH3OH。
激活一種適當(dāng)?shù)墓倌芑聂人?，?-[(吡啶-2-基)氨基]戊酸(J-1)并使之與手性輔料如(S)-4-芐基-2-噁唑烷二酮反應(yīng)以形成手性Evans試劑。用丙烯腈使烯醇化鈦烷基化，隨后經(jīng)腈還原和形成內(nèi)酰胺得到內(nèi)酰胺J-2。內(nèi)酰胺經(jīng)試劑如溴乙酸乙酯烷基化，隨后對酯皂化產(chǎn)生羧酸J-3。使用例如EDC和HOBt，或SOCl2將生成羧酸衍生物J-3轉(zhuǎn)化成該羧酸的活化形式，然后使該活化形式在適合的溶液如DMF、CH2Cl2或CH3CN中與適宜的胺如3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯反應(yīng)。根據(jù)是否需要中和酸，可以加入堿如DIEA或吡啶。已知有許多其它可將羧酸轉(zhuǎn)化酰胺的方法，這些方法在標(biāo)準(zhǔn)參考書，如‘Compendium ofOrganic Synthetic Methods”,Vol.Ⅰ-Ⅵ(由Wiley-Interscience出版)或Bodansky,“The Practice of Peptide Synthesis”(由Springer-Verlag出版)可被發(fā)現(xiàn)。根據(jù)J-2轉(zhuǎn)化為J-3中描述的一般條件可使乙酸乙酯水解提供羰酸J-4。通過該領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法也可分離中間體羧酸鹽，必要時(shí)也可制備游離羧酸的羧酸鹽。
圖式K描述了制備WO 93/07867所述實(shí)例性化合物纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式K
a)鹽酸2-氯吡啶-N-氧化物、NaHCO3、叔-戊醇；b)HCO2NH4、Pd/C、EtOH；c)TsCl、NaH、THF；d)對-TsOH.H2O、丙酮、H2O；e)NH-H2OH.HCl、NaOAc、CH3OH；f)NCS、DMF；g)丁烯酸叔-丁酯、Et3N；h)4M HCl、二噁烷、CH2Cl2；i)3-氨基丁酸乙酯、EDC、HOBt·H2O、DIEA、CH3CN；j)1.0N LiOH、THF、H2O。
根據(jù)Misra,Bioorg(Med.Chem.Lett.1994,4,2165-2170)描述的一般方法使容易獲得的2-(3-氨基丙基)-1,3-二氧戊環(huán)，即K-I(Chem.Pharm.Bull.1982,30,909-914)轉(zhuǎn)化成吡啶基衍生物K-2。在適合的堿，通常為NaH或堿金屬氫氧化物水溶液存在下，K-2氨基吡啶部分的氮原子的保護(hù)可通過與磺酰氯，例如對-甲苯磺酰氯在惰性溶劑(優(yōu)選THF)中反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)，并得到K-3。也可采用該領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員已知的另外的保護(hù)基團(tuán)，只要它們與隨后的化學(xué)處理相容并且在必要時(shí)能夠除去。Greene在“Protective Groups in Organic Synthesis”(由Wiley-Interscience出版)中描述了這類保護(hù)基團(tuán)。在弱酸性條件下，例如對-甲苯磺酸，在適宜的溶劑中(優(yōu)選丙酮水溶液)可以很方便地實(shí)現(xiàn)除去K-3二氧戊環(huán)基保護(hù)基團(tuán)以得到醛K-4。通過該領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員周知的標(biāo)準(zhǔn)方法將該醛轉(zhuǎn)化為醛肟K-5，通過WO 95/14682和WO95/14683中描述的方法將這種醛肟氧化成肟酰衍生物K-6。在合適的堿，例如Et3N或DIEA存在下，根據(jù)WO95/14682和WO 95/14683中描述的方法，使K-6在惰性溶液如苯或甲苯中與烯烴例如3-丁烯酸叔-丁酯(Tet.Lett.1985,26,381-384)反應(yīng)產(chǎn)生環(huán)加合物K-7。在標(biāo)準(zhǔn)酸性條件下(通常為TFA在CH2Cl2中或HCl在二噁烷中)除去K-7的叔-丁酯以產(chǎn)生羧酸K-8。使用例如EDC和HOBt或SOCl2活化該羧酸，隨后使活化的羧酸與適宜的胺例如β-氨基丙酸的適宜的衍生物在中性溶劑，例如DMF、CH2Cl2或CH3CN中反應(yīng)以提供K-9。根據(jù)是否需要中和酸，可以使用堿如DIEA或吡啶。已知有許多其它的將羧酸轉(zhuǎn)變?yōu)轷０返姆椒?，這些方法在標(biāo)準(zhǔn)參考書，例如“Compendinmof Organic Synthetic Methods”VolⅠ-Ⅵ由Wiley-Interscience出版)，或Bodansky,“The Practice of Peptide Synthesis(由Springer-Verlag出版)中可以發(fā)現(xiàn)。采用該領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員周知的各種方法可以容易獲得外消旋型或光學(xué)純型的β-氨基丙酸衍生物。WO 93/07867中描述了一個(gè)代表性的方法。采用堿的水溶液，例如LiOH(在THF水溶液中)或NaOH(在CH3OH或EtOH水溶液中)可除去K-9的乙酯和磺?；Ｗo(hù)基團(tuán)。用適當(dāng)?shù)乃?，例如TFA或HCl酸化中間體羧酸鹽以提供羧酸K-10。作為選擇也可通過本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員周知的方法可分離該中間體羧酸鹽，必要時(shí)，制備游離羧酸的羧酸鹽。
圖式L描述了制備Alig等(EP 0372486)所述的實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式L
a)N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC、DIEA、DMF；b)NaOH、H2O、CH3OH。
在EDC和DIEA的存在下，使L-1(按Alig等在EP 0372486中所述制備)在適合的溶劑如DMF或CH3CN中與適當(dāng)取代的羧酸如N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸縮合產(chǎn)生L-2，已知有許多可將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的其它方法，這些方法在標(biāo)準(zhǔn)參考書如“Compendium of OrganicSynthesis”Vol.Ⅰ-Ⅵ(由Springer-Velag出版)中可以發(fā)現(xiàn)。L-2的酯的水解可以在適宜的溶劑如CH3OH水溶液中通過用適當(dāng)?shù)脑噭?，例如NaOH進(jìn)行皂化反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。也可選擇在適當(dāng)?shù)娜軇┤鏑H3OH、EtOH或AcOH中通過用氫和適當(dāng)?shù)拇呋瘎?，如Pd/C處理使L-2的芐酯轉(zhuǎn)化為酸。
圖式M描述了制備Alig等(EP 0505868)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式M
a)N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC、DIEA、DMF；b)CF3CO2H,CH2Cl2。
在EDC和DIEA的存在下，使M-1(按Alig，等在EP 0505868中所述制備)在適當(dāng)?shù)娜軇┤鏒MF或CH3CN中與適當(dāng)取代的羧酸，如N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸縮合以提供M-2，已知有許多可將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的其它方法，這些方法在標(biāo)準(zhǔn)參考書如“Compendium ofOrganic Synthesis”Vol.Ⅰ-Ⅵ(由Springer-Velag出版)中可以發(fā)現(xiàn)。用三氟乙酸或鹽酸水解M-2的酯產(chǎn)生M-3。作為選擇，用適當(dāng)?shù)脑噭?，例?N NaOH在適當(dāng)?shù)娜軇┤鏑H3OH中使M-2的酯皂化。
圖式N描述了制備(WO 93/07867所述)實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式N
a)3-(羰基甲氧基)丙酰氯、DIEA、CH2Cl2；b)1.0N NaOH、CH3OH；c)3-氨基-4-戊炔酸乙酯、EDC、HOBt·H2O、DIEA、CH3CN；d)1.0N LiOH、THF、H2O。
在適宜的酸清除劑如Et3N、DIEA或吡啶存在下，使適當(dāng)官能化的胺例如2-[(3-氨基丙-1-基)氨基]吡啶在中性溶劑(通常為CH2Cl2)中與3-(羰基甲氧基)丙酰氯反應(yīng)以提供N-2。使用堿的水溶液例如LiOH在THF水溶液中，或NaOH在CH3OH或EtOH水溶液水解N-2的甲酯，并用適宜的酸例如TFA或HCl酸化該中間體羧酸鹽以提供羧酸N-3。也可選擇在適宜的堿例如Et3N、DIEA或吡啶的存在下，使N-1在中性溶劑(通常為CH2Cl2)中與琥珀酐反應(yīng)以直接提供N-3。使用例如EDC和HOBt或SOCl2可使生成的羧酸衍生物N-3轉(zhuǎn)化成羧酸的活化形式，隨后使該活化的形式在適宜的溶劑例如DMF。CH2Cl2或CH3CN中與適合的胺，例如已知的3-氨基-4-戊炔酸乙酯(EP93/07867)反應(yīng)以提供N-4。根據(jù)是否需要中和酸，可以使用堿如DIEA或吡啶。已知有許多其它的轉(zhuǎn)化羧酸為酰胺的方法，這些方法在標(biāo)準(zhǔn)參考書，例如“Compendium of Organic Synthesis Methods”Vol.Ⅰ-Ⅵ(由Wiley-Interscience出版)，或Bodansky,“The Practice of PeptideSythesis”(由Springer-Verlag出版)中可以發(fā)現(xiàn)。根據(jù)用于轉(zhuǎn)化N-2為N-3中所述的一般條件可實(shí)現(xiàn)對N-4的乙酯的水解以提供羧酸N-5。作為選擇，可通過本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員熟知的方法，以也可分離中間體羧酸鹽，必要時(shí)制備游離羧酸的羧酸鹽。
圖式O描述了制備Sugihara等(EP 0529858)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式O
a)N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC、DIEA、DMF；b)CF3CO2H,CH2Cl2。
使O-1(按Sugihara等在EP 0529858中所述制備)與適當(dāng)取代的羧酸如N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸縮合產(chǎn)生O-2，按照Sugihara等在實(shí)例59中的一般方法用TFA裂解叔-丁酯產(chǎn)生O-3。已知有許多其它的轉(zhuǎn)化羧酸為酰胺的方法，這些方法在標(biāo)準(zhǔn)參考書，例如“Compendium ofOrganic Synthesis”Vol.Ⅰ-Ⅵ(由Springer-Verlag出版)可以發(fā)現(xiàn)。
圖式P描述了制備Himmelsbach等(AU-A-86926/91)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式P
a)4-[(6-氨基-2-吡啶基)甲基]苯酚、Cs2CO3、DMF；b)1NNaOH、CH3OH。
按照Himmelsbach等在實(shí)例3(51)中的通常方法使化合物P-1(按Himmelsbach等在AU-A-86926/91所述制備，實(shí)施例Ⅵ(28))經(jīng)適當(dāng)取代酚的處理以產(chǎn)生P-2。用1N NaOH在CH3OH中水解P-2的叔-丁酯產(chǎn)生P-3。也可選擇用TFA或HCl在適合的溶劑如CH2Cl2中裂解叔-丁酯。
圖式Q描述了制備Linz等(EP 0567986)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式Q
a)N-(2-吡啶基)乙二胺、Ph2POCl、Et3N、DMAP、THF；b)NaH、BrCH2CO2CH3、DMF；c)KOtBu、CH3I、DMF；e)LiOH、H2O、THF。
按照Linz等(EP 0567968)的方法(除了用N-(2-吡啶基)乙二胺取代4-氰苯胺外)產(chǎn)生Q-5。
圖式R描述了制備Wayne等(WO 94/22834)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
a)N-甲基-N’-(2-吡啶基)乙二胺、CH3CN；b)1N NaOH、CH3OH。
根據(jù)Wayne等(WO 94/22834)在實(shí)例1-2中的方法(除了用N-甲基-N’-(2-吡啶基)乙二胺替代1-(4-吡啶基)哌嗪基產(chǎn)生R-3。
圖式5描述了制備Wayne等(WO 94/22834)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式S
a)N-甲基-N’-(2-吡啶基)乙二胺、CH3CN；b)1N NaOH、CH3OH。
按照Wayne等(WO 94/22834)的方法(除了用N-甲基-N’-(2-吡啶基)乙二胺替代1-(4-吡啶基)哌嗪外)產(chǎn)生S-3。
圖式T描述了制備Alig等(EP 0381033)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式T
a)(Boc)2O、NaOH、二噁烷、H2O；b)BrCH2CO2Bn、K2CO3、丙酮；c)4M HCl、二噁烷；d)N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC、DIEA、DMF；e)1N NaOH、CH3OH。
用在二噁烷水溶液中的碳酸氫二叔丁酯和氫氧化鈉處理T-1以提供T-2，用在丙酮中的溴乙酸芐酯和碳酸鉀使T-2在酚基氧上烷基化產(chǎn)生T-3。用在二噁烷中的氯化氫除去T-3的Boc基團(tuán)，用在DMF中的N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC和DIEA使生成的T-4在氮原子上?；?。T-5的芐酯經(jīng)皂化產(chǎn)生T-6。也可選擇通過用H2和適合的催化劑如Pd/C在適當(dāng)?shù)娜軇┲腥鏑H3OH，EtOH或AcOH中處理來裂解芐酯。
圖式U描述了制備Alig等(EP 0381033)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式U
a)(Boc)2O、NaOH、二噁烷、H2O；b)BrCH2CO2CH3、K2CO3、丙酮；c)4M HCl、二噁烷；d)N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC、DIEA、DMF；e)1N NaOH、CH3OH。
用在二噁烷水溶液中的碳酸氫二叔丁酯和氫氧化鈉處理U-1以提供U-2，用在丙酮中的溴乙酸甲酯和碳酸鉀使U-2在酚氧上烷基化產(chǎn)生U-3。用在二噁烷中的氯化氫除去U-3的Boc基團(tuán)，再用在DMF中的N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC和DIEA使生成的U-4在氮上酰化產(chǎn)生U-5。用在CH3OH中的1M NaOH處理來裂解U-5中的甲酯產(chǎn)生U-6。
圖式Ⅴ描述了制備Himmelsbach等(EP 0587134)所述實(shí)例性纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式V
a)乙醇醛二聚物、NaBH3CN、H2O、CH3CN、pH6-7；b)N-(2-吡啶基)乙二胺、COCl2；c)CH3SO2Cl、Et3N、CH3Cl2；d)NaI、KN(TMS)2THF、丙酮，回流；e)NH2NH2H2O；f)1N NaOH、EtOH。
圖式V提供了制備2-氧代-咪唑烷化合物，如V-5的一種方法。其中乙醇醛二聚物和氰基氫硼化鈉使胺如V-1還原氨化產(chǎn)生仲胺如V-2。用光氣處理伯胺如N-(2-吡啶基)乙二胺所代表產(chǎn)生異氰酸酯，不經(jīng)分離，使其與仲羥乙胺反應(yīng)生成如化合物V-3所例證的羥基乙脲。所述羥基基團(tuán)可轉(zhuǎn)化成離去基團(tuán)，如甲烷磺酸鹽或碘化物，或可環(huán)化成2-氧代-咪唑烷，即V-4，采用的方法為本領(lǐng)域內(nèi)所周知(Himmelsbach等EP 0587134)，例如用三氟磺酰氯和Et3N處理羥基乙脲4，接著用NaI，然后用二(三甲基甲硅烷基)疊氮化鉀(如Himmelshach所述，EP 0587134，實(shí)例Ⅲ)處理。用肼處理V-4并使酯皂化產(chǎn)生V-5。
圖式W提供了制備1,2,3,4-四氫異喹啉化合物作為示范性纖維蛋白原拮抗劑的方法(如M.J.Fisher等EP 0635492中所述)。
a)ClCH2CO2Et、Et3N、DMF；b)BBr3、CH2Cl2；c)(CF3SO2)2O、吡啶；d)CO、Pd(OAc)2、PPh3、DIEA、NMP、碳酸氫銨、水；e)N-(2-吡啶基)乙二胺、EDC、HOBt、DIEA、DMF；f)N-(2-吡啶基)乙二胺、CO、Pd(OAc)2、PPh3、DIEA、NMP、碳酸氫銨、水；g)1N NaOH、EtOH。
相應(yīng)地，6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉如化合物W-1可按D.J.Sall和G.L.Grunewald(J.Med.Chem.1987,30,2208-2216)所述方法制備。在叔胺存在下用鹵代乙酸酯處理所述異喹啉得到2-乙酸酯，如化合物W-2實(shí)例所說明的。通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的方法，例如使用BBr3使6-甲氧基化合物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的6-羥基化合物，再用三氟磺酸酐將其轉(zhuǎn)化為三氟甲磺酸酯。經(jīng)鈀-催化的羰基化反應(yīng)提供6-羧基化合物如化合物W-5，然后采用標(biāo)準(zhǔn)酰胺鍵形成劑使W-5與胺(如N-(2-吡啶基)乙二胺實(shí)例所說明)縮合產(chǎn)生所需的酯胺如W-6。皂化后提供實(shí)施例W的目標(biāo)化合物，即W-7。作為選擇，與三氟甲磺酸酯(如化合物W-4實(shí)例說明的)鈀催化羰基化反應(yīng)也可用N-(2-吡啶基)乙二胺進(jìn)行，皂化后得到W-7。
圖式X提供了制備作為示范性纖維蛋白原受體拮抗劑的3,4-二氫異喹啉-1-酮化合物的一種方法(如M.J.Fisher等在EP 0635492中所述)。
圖式X
a)1.LiN(TMS)2、2.ClCH2CO2Et、DMF；b)BBr3、CH2Cl2；c)(CF3SO2)2O、吡啶；d)CO、Pd(OAc)2、PPh3、DIEA、NMP、碳酸氫銨、水；e)N-(2-吡啶基)乙二胺、EDC、HOBt、DIEA、DMF；f)N-(2-吡啶基)乙二胺、CO、Pd(OAc)2、PPh3、DIEA、NMP、碳酸氫銨、水；g)1N NaOH、EtOH。
相應(yīng)地，按D.J.Sall和G.L.Grunewald(J.Med.Chem.1987,30,2208-2216)所述方法制備的1-氧代化合物X-1經(jīng)堿如LiN(TMS)2，以及鹵代乙酸酯處理以產(chǎn)生2-乙酸酯，如化合物X-2所例證。然后將1-氧代化合物用于圖式U所示一系列類似的反應(yīng)中，取代相應(yīng)的1-氧代類似物(如圖示U所示)以提供實(shí)施例X目標(biāo)化合物，即X-7。如在圖式U中，也可選擇用三氟甲磺酸酸酯的鈀催化羰基化反應(yīng)(如化合物X-4所例證)處理胺(如N-(2-吡啶基)乙二胺所例證)提供(經(jīng)皂化后)實(shí)施例X目標(biāo)化合物所說明的酰胺，即X-7。
圖式Y(jié)提供制備6-酰氨基四氫化萘化合物作為示范性纖維蛋白原受體拮抗劑的一種方法(如M.J.Fisher等EP 0635492中所述)。
圖式Y(jié)
a)N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸、EDC、HOBt、DIEA、DMF；b)TFA、CH2Cl2。
相應(yīng)地，使根據(jù)M.J.Fisher等EP 0635492所述方法制備6-氨基-2-叔丁氧基羰基四氫萘-1-酮(為化合物Y-1所例證)與獲得的N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸的羧酸的活化衍生物縮合提供(經(jīng)脫脂化作用后)酰胺Y-2。
圖式Z提供了制備6-氨基酰基四氫化萘化合物作為示范性纖維蛋白原受體拮抗劑的一種方法(如M.J.Fisher等EP 0635492中所述)。
圖式Z
a)(CF3SO2)O，吡啶；b)CO,Pd(OAc)2,PPh3, DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；c)N-(2-吡啶基；)乙二胺 ,EDC,HOBt,DIEA,DMF；d) N-(2-吡啶基)乙二胺,CO,Pd(OAc)2,PPh3, DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；e)1NNaOH,EtOH.
相應(yīng)地，根據(jù)M.J.Fisher等(EP 0635492)所述方法制備的乙氧基羰基甲基-6-羥基-四氫萘-1-酮(如化合物Z-1所例證9經(jīng)三氟甲磺酸酐處理提供三氟甲磺酯(如化合物Z-2所例證)，將其用于鈀催化的羰基化反應(yīng)以提供羧酸如化合物Z-3，然后使之與胺如N-(2-吡啶基)乙二胺縮合并經(jīng)脫酯后提供6-氨基?；衔?如實(shí)例Z所例證)，即Z-5。作為選擇用三氟甲磺酸酯(如化合物Z-2所例證)進(jìn)行的鈀-催化羰基化反應(yīng)可以與N-(2-吡啶基)乙二胺反應(yīng)以提供(經(jīng)皂化后)相應(yīng)的6-氨基?；衔?如實(shí)例Z所例證)，即Z-5。
圖式AA提供了制備作為示范性纖維蛋白原受體拮抗劑的5-酰基氨基苯并呋喃和5-?；被浔讲⑦秽衔锏囊环N方法(如M.L.Denney等在EP 0655439中所述)。
圖式AA
a)BrCH2CO2Et,K2CO3,NaI,THF；b)1.DBU,EtOH,2.HCl,EtOH；c)DiBAL,-78C,THF；d)NaH,THF；e)H2,10％Pd/C,EtOH；f)N-(2-吡啶基)-β-丙氨酸,EDC,HOBT,Et3N。DMF；g)1N NaOH,CH3OH.
相應(yīng)地，用鹵代乙酸酯處理5-硝基水楊醛(如化合物AA-1所例證)產(chǎn)生苯氧基乙酸酯(為化合物AA-2所例證)。通過用堿如DBU來處理所述醛獲得2-烷氧基羰基呋喃(如化合物AA-3所例證)。例如可用DiBAL使2-烷氧基羰基還原成醛。Wittig反應(yīng)提供2-丙烯酸酯(為化合物AA-5所例證)。將其還原成苯并呋喃-2-丙酸酯(為化合物AA-6所例證)和二氫苯并呋喃-2-丙酸酯(為化合物AA-7所例證)。然后使胺AA-6與羧酸的活化衍生物如N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸縮合，并經(jīng)脫酯后提供實(shí)施例AA的目標(biāo)化合物所例證的酰胺，即AA-8。作為備選方法，也可用羧酸的活化衍生物如N-(2-吡啶基)-β-氨基丙酸與胺AA-7縮合，并經(jīng)脫酯作用后提供AA-9所例證的酰胺。
圖式BB-1,BB-2和BB-3提供了制備作為示范性纖維蛋白原受體拮抗劑的5-氨基酰基苯并呋喃和5-氨基?；浔讲⑦秽衔锏囊环N方法(如M.L.Denney等在EP 0655439中所述)。
圖式BB-1
a)TBDMS-Cl，咪唑，THF；b)DiBAL,-78℃,THF；c)NaH,THF；d)H2,5％Pd/C,EtOH；e)Et4NF,THF.
圖式BB-2
a)(CF3SO2)2O，吡啶；b)CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；c)N-((2-吡啶基)乙二胺,EDC,HOBt,DOBA,DMF；d)N-(2-吡啶基)乙二胺,CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2Oe)1NNaOH,EtOH.
圖式BB-3
a)(CF3SO2)2O,吡啶；b)CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；c)N-(2-吡啶基)乙二胺,EDC,HOBt,DIEA,DMF；d)N-(2-吡啶基)乙二胺,CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；e)1NNaOH,EtOH.
按M.L.Denney等(ED 0655439)的方法制備的5-羥基苯并呋喃-2-羧酸酯如化合物BB-1經(jīng)TBDMS-Cl處理后提供該酯的TBDMS衍生物BB-1-2。將該酯還原成醛如化合物BB-1-3。Wittig反應(yīng)提供丙烯酸酯(如化合物BB-1-5所例證)。催化還原反應(yīng)提供苯并呋喃-2-乙酸酯和二氫苯并呋喃-2-乙酸酯。通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的方法裂解每種酯的甲硅烷基醚基團(tuán)提供苯并呋喃-2-乙酸酯(如化合物BB-1-6所例證)和二氫苯并呋喃-2-乙酸酯(如化合物BB-1-7所例證)。
如圖式BB-2和BB-3所示，通過鈀-催化的羰基化作用可使每種酚轉(zhuǎn)化成羧酸，如化合物BB-2-9和BB-3-13，然后使之與胺如N-(2-吡啶基)乙二胺縮合，并經(jīng)脫酯后提供實(shí)施例CC(BB-2-11)或DD(BB-3-15)的目標(biāo)化合物的酰胺。作為選擇，經(jīng)三氟甲磺酸酯(為化合物BB-2-8或BB-3-12所例證)的鈀-催化羰基化反應(yīng)可與N-(2-吡啶基)乙二胺反應(yīng)以提供(經(jīng)脫酯作用后)相應(yīng)的6-氨基酰基化合物，即實(shí)施例CC(BB-2-11)或DD(BB-3-15)。
圖式CC描述了制備更具示范性的纖維蛋白原受體模板的方法。
圖式CC
a)Boc-Gly,EDC,HOBT,DIEA,CH3CN；b)TFA,CH2Cl2；c)5-吡啶-2-基)氨基]戊酸，EDC,HOBT,DIEA,DMF；d)1N LiOH,THF,CH3CN。
中間體CC-2制備起始于在標(biāo)準(zhǔn)肽鍵形成條件(在先前參考的Bondansky出版物中有描述)下使已知的3-氨基-4-戊炔酸乙酯(EP93/07867與市售的叔-丁氧基羰基甘氨酸(Boc-Gly)偶合。該反應(yīng)的產(chǎn)物在已知可影響B(tài)oc保護(hù)基團(tuán)的除去的酸性條件下去保護(hù)為CC-2。這些條件在先前參考的Bodansky和Greene出版物中已有描述。使兩種中間體CC-2和5-[(吡啶-2-基)氨基]戊酸在標(biāo)準(zhǔn)肽偶合條件下偶合產(chǎn)生CC-3，然后在THF和CH3CN水溶液中用氫氧化鋰水解CC-3或CC-4。
在適合的溶劑中，按標(biāo)準(zhǔn)方法以由母體化合物和一種過量的酸)例如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、琥珀酸或甲磺酸制備所述化合物的酸加成鹽。這類化合物中有些形成可以接受的內(nèi)鹽或兩性離子。用過量含有適當(dāng)陽離子的堿試劑如氫氧化物、碳酸鹽或醇鹽；或用適合的有機(jī)胺處理母體化合物以制備陽離子鹽。陽離子如Li+、Na+、K+、Ca++、Mg++、和NH+4為存在于藥學(xué)上可接受的鹽類中的陽離子的特殊例子。
本發(fā)明也提供藥用組合物，包含根據(jù)式(Ⅰ)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。因此，式(Ⅰ)化合物也用在藥物的生產(chǎn)中。如上所述制備的式(Ⅰ)化合物的藥用組合物可以配成用于胃腸外給藥的溶液或凍干粉針劑。粉針劑在使用前通過加入適當(dāng)?shù)南♂寗┗蚱渌帉W(xué)上可接受的載體而復(fù)制。液體配方可以是一種緩沖，等滲的水溶液。適當(dāng)?shù)南♂寗┑膶?shí)例為生理鹽水溶液，標(biāo)準(zhǔn)的5％右旋糖水溶液或緩沖的乙酸鈉和乙酸銨溶液。這類配方特別適于胃腸外給藥，但也可用于口服給藥或包含于定量劑量的吸入器或噴霧器?？赡苄枰尤胼o料如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉或檸檬酸鈉。
可選擇的，這些化合物可以裝入膠囊、壓成片劑或制成乳劑或糖漿劑用于口服給藥。可加入藥學(xué)上可接受的固體或液體載體以增加或穩(wěn)定液組合物或使組合物容易制備。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣二水合物、白陶土、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石粉、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水或水。載體也包括緩釋成份如單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯，單獨(dú)使用或加上蠟。固體載體的量是變化的，但優(yōu)選在每個(gè)劑量單位約20mg到約1g之間。依據(jù)藥劑學(xué)上傳統(tǒng)工藝來制備，對于片劑，如果需要時(shí)，包括研磨、混合、制粒和壓片；或者對于硬膠囊包括研磨、混合或填充、當(dāng)使用液體載體時(shí)，制備的形式為糖漿劑、酏劑、乳劑或水溶液性或非水溶液性的混懸液。這樣一種液體形式可以直接口服給藥或填裝進(jìn)軟明膠膠囊。
對于直腸給藥，本發(fā)明的化合物也可以與輔料如可可油、甘油、明膠或聚乙二醇結(jié)合，塑制成栓劑。
此處所述的化合物是玻體蛋白受體拮抗劑，可用于治療其病理學(xué)歸因于配體或細(xì)胞玻連蛋白受體相互作用的疾病。例如，這些化合物用于治療其中骨基質(zhì)丟失產(chǎn)生病理的疾病。所以，這些化合物可用于治療骨質(zhì)疏松、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)、Paget’s疾病、噁性高鈣血癥、骨轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的溶骨損害。由于固定術(shù)或性激素缺乏而導(dǎo)致的骨丟失。本發(fā)明的化合物相信也有以下用途抗腫瘤劑、抗炎劑、抗血管生成劑及抗轉(zhuǎn)移劑，所以可用于動脈粥樣硬化癥和再狹窄的治療。
該肽可以口服或注射給病人用藥，在這種情況下，藥物的濃度應(yīng)足夠于抑制骨的重吸收或其它的此類適應(yīng)癥。含有此肽的藥學(xué)組合物給藥的口服劑量為大約0.1到大約50mg/kg之間，應(yīng)以與病人疾病一致的方式。優(yōu)選口服劑量為大約0.5到大約20mg/kg。對于急性治療，應(yīng)優(yōu)選腸道外給藥。在5％葡萄糖水或生理鹽水或適當(dāng)賦形劑的相似組方中的所述肽的靜脈輸液是最有效的，盡管肌肉內(nèi)團(tuán)塊(bolus)藥物注射也是有用的。典型地，胃腸外劑量為大約0.01到大約100mg/kg；優(yōu)選在0.1到20mg/kg之間?；衔锩刻旖o藥一到四次，以達(dá)到日總劑量大約0.4到大約400mg/kg/天的水平。通過比較試劑的血液水平與產(chǎn)生治療效果所需的濃度，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以較易確定化合物給藥的精確水平和方法。
化合物可以通過幾個(gè)生物學(xué)檢驗(yàn)中的一個(gè)實(shí)驗(yàn)以確定要求達(dá)到預(yù)定藥理作用的化合物濃度。
玻連蛋白結(jié)合抑制試驗(yàn)固相[3H]-SK&F-107260與αvβ3之結(jié)合用含有1mMCaCl2、1mMMnCl2、1mM MgCl2(緩沖液A)和0.05％NaN3的緩沖液T稀釋在緩沖液T(含有2mM CaCl2和1％辛基葡萄糖苷)中的人胎盤或人血小板αvβ3(0.1-0.3mg/ml)，然后以每孔0.1ml立即加到96孔ELISA平板(Corning,New York,NY)中，每孔加入0.1-0.2μg的αvβ3。該平板于4℃過夜孵育。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用緩沖液A洗滌孔眼一次，用在同樣緩沖液中的3.5％牛血清白蛋白0.1ml在室溫下孵育1小時(shí)。孵育后的孔內(nèi)容物被完全抽出，用0.2ml緩沖液A洗滌兩次。
化合物溶于100％DMSO得到2mM的儲備液，將其用結(jié)合緩沖液(15mM Tris-HCl(pH 7.4),100mM NaCl,1mM CaCl2,1mMMnCl2,1mM MgCl2)稀釋使最后化合物的濃度為100μM。該溶液然后稀釋至所需要的化合物最終濃度。未標(biāo)記的拮抗劑的各種濃度(0.001-100μM)分別以三份加入孔眼中，然后加入5.0mM的[3H]-SK&F-107260(65-86Ci/mmol)。
平血在室溫下孵育1小時(shí)。孵育后孔內(nèi)容物被完全抽出，以孔到孔的方式用0.2ml冰冷的緩沖液A洗滌一次。用0.1ml的1％SDS溶解受體，加入3ml Ready Safe到Beckman LS Liquid ScintillationCounter中，以40％的效率通過液體閃爍計(jì)數(shù)計(jì)算結(jié)合的[3H]-SK&F-107260。在2μM SK&F-107260存在時(shí)測定[3H]-SK&F-107260的非特殊結(jié)合，應(yīng)一致性的少于總放射性配體輸入的1％。通過由LUNDON-2程序所改進(jìn)的非線性、最小二乘圖解法程序測定IC50(抑制[3H]-SK&F-107260 50％結(jié)合的拮抗劑的濃度)。根據(jù)下列方程計(jì)算Ki(拮抗劑的解離常數(shù))Ki=IC50/(1+L/Kd)，其中L和Kd分別是[3H]-SK&F-107260的濃度和解離常數(shù)。
在濃度范圍大約為0.01到25微摩爾時(shí)，本發(fā)明的化合物可以抑制玻連蛋白與SK&F-107260的結(jié)合。優(yōu)選的化合物在低于1微摩的濃度抑制玻連蛋白結(jié)合。
以本領(lǐng)域中的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)也可以對本發(fā)明的化合物進(jìn)行體內(nèi)和體外骨重吸收的實(shí)驗(yàn)，用于評價(jià)骨形成的抑制，例如公開于EP 528587的凹痕形成檢驗(yàn)，也可以用人的破骨細(xì)胞代替大鼠的破骨細(xì)胞和用卵巢切除術(shù)的大鼠模型完成實(shí)驗(yàn)(Wronski等發(fā)表于Cell and Materials1991,Sup.1,69-74)。甲狀旁腺切除術(shù)大鼠模型每一實(shí)驗(yàn)組包括5-6只雄性Sprague-Dawley大鼠。使用前7天將這些大鼠進(jìn)行甲狀旁腺切除(由賣主進(jìn)行，Taconic Farms)。使用前24小時(shí)(即尾靜脈取血后置于肝素抗凝試管中后)立即測定全部血中循環(huán)的離子鈣的濃度。選擇包括那些離子鈣水平(Cika-Corningmodel 634鈣pH分析儀測定)是1.2mM/E的大鼠。然后大鼠的飲食為不含鈣的食物和去離子水。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，大鼠的體重為大約100g。測定基礎(chǔ)鈣水平，然后大鼠以單次靜脈(尾靜脈)藥團(tuán)塊注射的方式給以對照載體(鹽水)或化合物(溶解于鹽水中)，然后立即單次皮下注射入甲狀旁腺激素1-34肽(hPTH1-34，劑量為0.2mg/kg在鹽水中/0.1％牛血清白蛋白，Bachem,Ca)或PTH載體?；衔?PTH給藥后2小時(shí)測定血鈣對PTH的響應(yīng)(和化合物對這種響應(yīng)的任何效果)。大鼠尺骨漂移模型實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，每一實(shí)驗(yàn)組包括8-10只雄性的體重大約為30-40g的Sprague-Dawley或Wistar大鼠。被試驗(yàn)的試劑以適當(dāng)?shù)耐緩浇o藥7天，日劑量單次或多次給藥。第一次劑量給藥之前，給予大鼠單次劑量的熒光標(biāo)記物(四環(huán)素25mg/kg，或鈣黃綠素10mg/kg)，用以標(biāo)記在當(dāng)時(shí)的時(shí)間點(diǎn)骨形成表面的位置?；衔锝o藥完成后，殺死大鼠和在肘處切掉兩前肢，在踝關(guān)節(jié)處切掉腳，剝除皮膚。冷凍樣品且將其垂直安放于切片機(jī)卡盤上。在恒冷切片機(jī)上將尺骨中間部位的交叉部分切片。在皮質(zhì)骨的中-背部位以形態(tài)測定法測定骨重吸收的比率。測定方法如下骨膜表面骨被重吸收的量等于骨膜表面向標(biāo)記處移動的距離，標(biāo)記處與第0天內(nèi)膜骨形成表面相合并。通過從第0天的寬度減去骨內(nèi)膜表面和標(biāo)記處之間骨的寬度計(jì)算該距離；將結(jié)果除以7即為每天以微米計(jì)的重吸收比率。人體破骨細(xì)胞重吸收檢驗(yàn)(“PIT檢驗(yàn)”)·從液氮儲存器中取出破骨細(xì)胞瘤衍生的細(xì)胞懸浮液的可分量，迅速于37℃升溫，在PRMI-1640介質(zhì)中離心洗滌一次(1000rpm,5min,4℃)?！こ槌鼋橘|(zhì)，用鼠的抗-HLA-DR抗體代替，該抗體用RPMI-1640以1∶3稀釋。在冰上孵育30分鐘，且不時(shí)攪拌細(xì)胞混懸液?！ぜ?xì)胞用冷的RPMI-1640通過離心(1000rpm,5min,4℃)洗滌兩次，細(xì)胞被轉(zhuǎn)移至已消毒的15ml離心管中。在改良的Neubauer計(jì)數(shù)室中數(shù)出單核細(xì)胞的數(shù)量?！膬Υ嫫恐腥〕鲆匝虻目?鼠IgG包被的足夠的磁珠(5/單核細(xì)胞)，置入5ml新鮮介質(zhì)中(除去可能存在的有毒的疊氮化物)。將磁珠固定在磁鐵上以除去介質(zhì)，再用新鮮介質(zhì)替換?！ご胖榕c細(xì)胞混合，混懸液于冰上孵育30分鐘，不斷攪拌混懸液。·包被磁珠的細(xì)胞被固定在磁鐵上，剩余的細(xì)胞(破骨細(xì)胞豐富部分)被倒入已消毒的50ml離心管中?！⑿迈r介質(zhì)加入包被磁珠的細(xì)胞中以使被吸附的破骨細(xì)胞脫離。該洗滌過程重復(fù)10次。包被珠子的細(xì)胞被棄掉?！な褂靡淮罂椎囊淮涡缘乃芰螾asteur來放置裝有樣品的室箱，在計(jì)數(shù)室中數(shù)出破骨細(xì)胞?！ねㄟ^離心使細(xì)胞成小丸，在EMEM介質(zhì)將破骨細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)為1.5×144ml，用10％胎牛血清和1.7g/l的碳酸氫鈉補(bǔ)充?！ぜ?xì)胞混懸液(每次處理)的每份量3ml被倒入15ml離心管中。通過離心將細(xì)胞成小丸?！そ?jīng)適當(dāng)處理的3ml加到每一管中(在EMEM介質(zhì)中稀釋至50μM)。也包括適當(dāng)?shù)妮d體對照、陽性對照(87MEM1介質(zhì)中稀釋至100μg/ml)和一種同型對照(IgG2a稀釋至100μg/ml)。37℃孵育30分鐘。·細(xì)胞的每分量0.5ml接種到無菌的48-孔平板的牙質(zhì)薄片上，在37℃孵育2小時(shí)。每次處理都監(jiān)測為一式四份。·經(jīng)六次更換的溫PBS(在六孔平板中10ml/孔)洗滌薄片，然后置于新的處理或?qū)φ铡?7℃孵育48小時(shí)?？咕剖猁}的酸性磷酸酯酶(TRAP)方法(破骨細(xì)胞譜系的細(xì)胞選擇性著色劑)?！ぴ诹姿猁}緩沖鹽水中洗滌薄片，在2％的gluteraldehyde(戊二醛)(在0.2M的二甲基胂酸鈉中)中固定5分鐘?！に邢礈焖鼈?，在37℃時(shí)TRAP緩沖液中孵育5分鐘?！だ渌邢礈旌螅瑢⑵溆?℃在冷乙酸鹽緩沖液/堅(jiān)牢紅garnet中孵育5分鐘?！み^量的緩沖液被抽干，薄片經(jīng)水洗滌后空氣干燥?！び昧羺^(qū)顯微鏡計(jì)數(shù)TRAP陽性破骨細(xì)胞，然后用超聲處理從牙質(zhì)表面除去破骨細(xì)胞?！び肗ikon/Lasertec ILM21W同焦點(diǎn)顯微鏡測定凹痕體積。RGD-介導(dǎo)的GPⅡb-Ⅲa結(jié)合的抑制GPⅡb-Ⅲa的純化在3％的辛基葡萄糖苷、20mM Tris-HCl,pH 7.4 140mM NaCl,2mM CaCl2中，在4℃時(shí)輕輕攪拌2小時(shí)，將10單位的過時(shí)的已洗滌的人血小板(得自Red Cross)溶解。溶解產(chǎn)物以100000g離心1小時(shí)。所得上清液被加到5ml的經(jīng)20mM Tris-HCl,pH 7.4 140mM NaCl,2mM CaCl21％辛基葡萄糖苷(緩沖液A)的預(yù)平衡的小扁豆植物凝血素瓊脂凝膠4B柱(E.Y.Labs)。2小時(shí)孵育后，用50ml冷緩沖液A洗滌柱子，用含有10％葡萄糖的緩沖液A洗脫保留植物凝血素GPⅡb-Ⅲa。所有過程都在4℃進(jìn)行。根據(jù)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳所示，所得到的GPⅡb-Ⅲa純度＞95％。脂質(zhì)體中GPⅡb-Ⅲa的結(jié)合在氮?dú)饬飨拢瑢⒘柞ヵ＝z氨酸(70％)和卵磷脂(30％)(AvantiPolar Lipids)的混合物干燥在玻璃管管壁上。將純化的GPⅡb-Ⅲa被稀釋到最終濃度為0.5mg/ml，且以蛋白磷脂的比例為1∶3(w∶w)與磷脂混合。混合物重新混懸，且在超聲溶中超聲處理5分鐘。使用12000-14000分子量的截?cái)嗤肝龉?，將混合物?000倍過量的50mMTris-HCl,pH7.4,100mM NaCl,2mM CaCl2(更換2次)過夜透析。含有GPⅡb-Ⅲa的脂質(zhì)體以12000g離心15分鐘，且再混懸于透析緩沖液中，最終蛋白質(zhì)的濃度為大約1mg/ml。脂質(zhì)體貯存于-70℃直至需要時(shí)。與GPⅡb-Ⅲa的競爭結(jié)合使用[3H]-SK&F-107260作為RGD-類型的配體，以間接競爭結(jié)合的方法檢測與纖維蛋白原受體(GPⅡb-Ⅲa)的結(jié)合。使用0.22μm的親水性微孔膜，在96孔過濾平板裝置(Millipore Corporation,Bedfbrd,MA)中完成結(jié)合檢測。孔眼在室溫下用0.2ml的10μg/ml聚賴氨酸(SigmaChemical Co.,St.Louis,MO)預(yù)包被1小時(shí)以阻斷非特異性的結(jié)合。未標(biāo)記的苯并二氮雜的各種濃度一式四份加到孔眼中。[3H]-SK&F-107260以最終濃度4.5nM加到每一孔眼中，然后加入1μg的GPⅡb-Ⅲa的含有純化的血小板脂質(zhì)體?；旌衔镌谑覝叵路跤?小時(shí)。通過使用Mullipore過濾多支管過濾，將GPⅡb-Ⅲa-結(jié)合[3H]-SK&F-10726與未結(jié)合的分離，然后用冰冷的緩沖液洗滌(2次，每次0.2ml)。在1.5mlReady Solve(Beckman Instruments,Fullerton,CA于Beckman液體閃爍計(jì)數(shù)器(Model LS 6800)中以40％的效率計(jì)數(shù)仍然保留于濾器上的結(jié)合的放射活性。在2μM未標(biāo)記的SK&F-107260中測定非特異性結(jié)合，應(yīng)保持一致的小于加到樣品中總放射性的0.14％。所有的數(shù)據(jù)點(diǎn)都是四份測定值的平均值。
競爭性結(jié)合資料通過非線性最小二乘圖解法來分析。該方法確定所述拮抗劑的IC50(在平衡時(shí)拮抗劑抑制[3H]-SK&F-107260的特異性結(jié)合達(dá)50％時(shí)的濃度)根據(jù)Cheng和Prusoff方程Ki=IC50/(HL/Kd)、其中L為用于競爭性測定的[3H]-SK&F-107260的濃度(4.5nM)，Kd為[3H]-SK&F-107260的解離常數(shù)，IC50與拮抗劑的平衡解離常數(shù)(Ki)有關(guān)，它經(jīng)Scatchard分析法測定為4.5nM。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物對玻連蛋白受體的親和力相對于纖維蛋白原受體來說大于4∶1。更優(yōu)選化合物具有大于10∶1的活性比率。血管平滑肌細(xì)胞遷移檢測測定本發(fā)明化合物抑制動脈或靜脈平滑肌組織的移行和增生的能力是為了評價(jià)其預(yù)防動脈再狹窄的能力，這種再狹窄是一般發(fā)生在血管成形術(shù)后。
使用大鼠和人的主動脈平滑肌細(xì)胞。在Transwell細(xì)胞孵育室中通過使用一種有8μm孔(Costar)的聚碳酸酯膜來監(jiān)測細(xì)胞遷移。濾器較低的表面用玻連蛋白包被。細(xì)胞以2.5-5.0×106個(gè)細(xì)胞/ml的濃度懸浮于補(bǔ)充有0.2％牛血清白蛋白的DMEM中，且在20℃時(shí)先用各種濃度的實(shí)驗(yàn)化合物預(yù)處理20分鐘。單獨(dú)的溶劑用做對照。0.2ml細(xì)胞懸浮液被置于孵育室上層。下層含有以0.2％牛血清白蛋白補(bǔ)充的0.6ml DMEM。孵育于37℃在95％空氣/5％CO2氣體中進(jìn)行24小時(shí)。孵育后，輕輕刮去濾器上表面上的未遷移細(xì)胞。然后將濾器定置于甲醇中，用10％Giemsa著色劑染色?？赏ㄟ^a)數(shù)出已適移到濾器下表面的細(xì)胞數(shù)或通過b)用10％乙酸提取已染色細(xì)胞，然后于600nm測定吸收度兩種方法測定遷移。
實(shí)施例用Bruker AM 250或Bruker AC 400分光計(jì)分別在250或400MHz處記錄核磁共振譜。CDCl3是氘氯仿，DMSO-d6是6氘二甲基亞砜，及CD3OD是4氘甲醇?；瘜W(xué)位移按自內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷向低場偏離的百分之幾(δ)表示。關(guān)于NMR數(shù)據(jù)的縮寫如下S=單峰、d=雙峰、t=三重峰、q=四重峰、m=多重峰、dd=雙二重峰、dt=雙三重峰、app=明顯的、br=寬峰。J表明用Hertz測量的NMR偶合常數(shù)。紅外(IR)光譜在Perkin-Elmer 683紅外線分光計(jì)按發(fā)射模式記錄。IR帶的位置以波數(shù)倒數(shù)(cm-1)表示。質(zhì)譜在VG70EF,PE SyxAPIⅢ或VG ZAB HF設(shè)備上采用快速原子轟擊(FAB)或電子噴射離子化技術(shù)進(jìn)行。元素分析采用Perkin-Elmer 240C元素分析儀獲得。熔點(diǎn)在Thomas-Hoover熔點(diǎn)儀上測得且是未加校正的。所有溫度均以攝氏溫度記錄。
Analtech Silica Gel GF和E.Merck Silica Gel 60 F-254薄層板用于薄層層析?？焖俸椭亓游龇ň贓.Merck Kieselger 60(230-400目)硅膠上進(jìn)行。分析和制備性的HPLC在Rainin或Beckman色譜儀上進(jìn)行。ODS系指十八甲硅烷基衍生的硅膠色譜載體。5μApex-ODS指為具有公制5μ粒徑的顆粒十八甲硅烷衍生的硅膠色譜載體(由JonesChromatography,Littleton,Colorado.YMC Co.Ltd.Kyoto,Japan制造)。YMCODS-AQ為ODS層析支持物并以YMC.Co.Ltd.Kyoto,Japan商標(biāo)注冊。RPR-1是一種聚合的(苯乙烯-二乙烯基苯)色譜載體，且是Hamilton Co.,(Reno,Neveda)的注冊商標(biāo)。Celite為由酸洗過的硅藻土組成的助濾劑，且是Manville Corp(Denver,Colorado)的注冊商標(biāo)。
(±)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯和(±)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-苯乙基-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯通過Bondinell等(EP 93/00095)的方法制備。3-(溴甲基)-4-氟苯甲酸叔-丁酯和(S)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯通過Bondinell等(WO 95/18619)的方法制備。中間體化合物的制備制備A3-[3,4-二氫-8-羧基-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜]-1,4-丙酸芐酯的制備a)4-碘代-2-氨基苯甲酸根據(jù)Sasson等(J.Org.Chem.1986,51,2880-83)所述使4-碘代-2-硝基甲苯氧化產(chǎn)生4-碘代-2-硝基苯甲酸，然后用鐵和乙酸還原硝基產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)7-碘靛紅酸酐通過加液漏斗將1.93M COCl2在甲苯(80ml)中的溶液緩慢加入到機(jī)械攪拌的制備A(a)的化合物(26.3g,0.1mol),Na2CO3(10.6g,0.1mol)和水(250ml)的冰冷溶液中。2小時(shí)后，過濾分離沉淀產(chǎn)物，用水(200ml)1∶1的EtOH∶Et2O的混合液(300ml)和Et2O(200ml)連續(xù)洗滌該固體，真空干燥產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)N-(2-氨基-4-碘代苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯于80℃將制備A(b)化合物(5.0g,0.0173mol)，對甲苯磺酸β-丙氨酸芐酯(5.85g,0.0173mol)，和DMAP(0.5g,0.0041mol)在吡啶(35ml)中的磁力攪拌溶液加熱2小時(shí)。使該反應(yīng)混合物冷至室溫并濃縮。生成的殘留物溶于EtOAc(100ml)，并用10％硫酸銅(2×50ml)，飽和NaHCO3(1×50ml)和鹽水(1×50ml)連續(xù)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮，層析后(硅膠，1∶1EtOAc/己烷)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
d)N-(2-甲基氨基-4-碘代苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯于50℃將制備A(c)化合物(2.0mmol),2,6-盧剔啶(0.35ml,3.0mmol)和CH3I(0.19g,3.0mmol)在DMF(15ml)中的磁力攪拌的溶液加熱15小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。使生成的殘留物溶于EtOAc(75ml)，用10％檸檬酸(1×50ml)，飽和NaHCO3(1×50ml)和鹽水(1×50ml)連續(xù)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，層析后提供目標(biāo)化合物(硅膠，梯度35-65％EtOAc/己烷)。
e)3-[3,4-二氫-8-碘代-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜]-4-丙酸芐酯在氬氣下，將在CH2Cl2(2ml)中的α-溴乙酰溴(0.09ml,1.04mmol)溶液緩慢加入制備A(d)化合物(0.305g,0.69mmol),Et3N(0.144g,1.04mmol)在CH2Cl2(3ml)中的磁力攪拌的冷(-30℃)溶液中。使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭嚢?小時(shí)。該混合物經(jīng)CH2Cl2(4ml)稀釋并用10％檸檬酸(1×50ml)，飽和碳酸氫鈉(1×50ml)連續(xù)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮。生成的殘留物溶于DMF(3ml)并通過加液漏斗加入到在DMF(2ml)中的NaH(25mg,1.04mmol)的淤漿中(冷卻至0℃)。攪拌2小時(shí)后，將該混合物注入10％檸檬酸(50ml)的冰冷溶液中并用EtOAc(3×40ml)提取。用飽和NaHCO3(1×50ml)洗滌合并的提取物，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮并經(jīng)層析后提供目標(biāo)化合物(硅膠，梯度40-70％EtOAc/己烷)。
f)3-[3,4-二氫-8-羧基-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜]-4-丙酸芐酯在一氮化碳?xì)饽夜臍庀?，將制備A(e)化合物(3.2mmol)、Pd(OAC)2(0.16mmol)，及1,1’-雙(二苯膦)二茂鐵(0.64mmol)在DMSO(20ml)的溶液加熱至65℃18小時(shí)。用水稀釋該反應(yīng)混合物，用1N HCl酸化并用CH2Cl2提取。用水洗滌合并的有機(jī)提取物，干燥(硫酸鈉)，過濾，濃縮和層析(硅膠)后提供目標(biāo)化合物。
制備B3-[4H-咪唑[1,2-a][1,4]苯并二氮雜-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-羧基]-5-丙酸乙酯a)N-(2-氨基-4-碘苯甲?；?-β-丙氨酸乙酯于80℃將制備A(b)化合物(0.0173mol)、鹽酸β-丙氨酸乙酯(0.0173mol)及DMAP(0.5g,0.0041mol)在吡啶(35ml)中的磁攪拌溶液加熱2小時(shí)。使該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。使生成的殘留物溶于EtOAc(100ml),用10％硫酸銅(2×50ml)，飽和NaHCO3(1×50ml)和鹽水(1×50ml)連續(xù)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮，層析(硅膠，1∶1EtOAc/己烷)后提供目標(biāo)化合物。
b)3-[3,4-二氫-8-碘代-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜]-4-丙酸乙酯在氬氣中，將α-溴乙酰溴(0.09ml,1.04mmol)在CH2Cl2(2ml)的溶液緩慢加入到制備B(a)化合物(0.69mmol)及Et3N(0.144g,1.04mmol)在CH2Cl2(3ml)的磁攪拌的冷(-30℃)溶液中。使該反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭嚢?小時(shí)。用CH2Cl2(4ml)稀釋該混合物并用10％檸檬酸(1×50ml)，飽和NaHCO3(1×50ml)連續(xù)洗滌，干燥(Na2S04)，過濾并濃縮。生成的殘留物溶于DMF(3ml)并通過加液漏斗加入到NaH(25mg,1.O4mmol)在DMF(2ml)的淤漿中(冷卻至0℃)。攪拌2小時(shí)后，將該混合物注入10％檸檬酸(50ml)的冰冷溶液中并用EtOAc(3×40ml)提取。用飽和NaHCO3(1×50ml)洗滌合并的提取物，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮并經(jīng)層析(硅膠)提供目標(biāo)化合物。
c)3-[3,4-二氫-8-碘代-2-硫代-5-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜]-4-丙酸乙酯于室溫下氮?dú)庵?，將Lawesson’s試劑(1.0g)加入制備B(b)化合物(1.0g,249mmol)在THF(10ml)溶液中并于50℃加熱該反應(yīng)物2小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。經(jīng)層析(硅膠，梯度40-60％EtOAc/己烷)純化產(chǎn)生的殘留物得到目標(biāo)化合物。
d)3-[4H-咪唑[1,2-a][1,4]苯并二氮雜-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-碘代]-5-丙酸乙酯于室溫下，將2N NaOH(1.2ml)加入制備B(c)(0.95g,2.27mmol),CH3I(0.2g)和催化量的硫酸氫四丁銨在CH2Cl2(10ml)和水(10ml)的劇烈攪拌的雙相溶液中。2小時(shí)后，分離各層并用CH2Cl2(2×25ml)洗滌水層。用Na2SO4干燥合并的有機(jī)提取物，過濾，并濃縮。生成的殘留物溶于甲苯(10ml)并使之與丙炔胺(0.64ml)和鹽酸吡啶(0.23g)反應(yīng)加熱反應(yīng)物至回流6小時(shí)，并冷卻至室溫，濃縮并層析后(硅膠，EtOAc)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
e)3-[4H-咪唑[1,2-a][1,4]苯并二氮雜-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-羧基]-5-丙酸乙酯在一氧化碳?xì)饽夜臍庀?，將制備B(d)化合物(3.2mmol)Pd(OAc)2(0.16mmol)，及1,1’-雙(二苯膦)二茂鐵(0.64mmol)在DMSO(20ml)的溶液于65℃加熱18小時(shí)。用水稀釋該反應(yīng)混合物，用1N HCl酸化并用CH2Cl2(3X)提取。用水洗滌合并的有機(jī)提取物，干燥(Na2SO4)，過濾，濃縮并經(jīng)層析(硅膠)純化后提供目標(biāo)化合物。
制備C4-(1-哌嗪基)-1-哌啶乙酸乙酯的制備a)4-[(4-叔-丁氧基羰基)-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯根據(jù)Porter等(EP 0542363 A2)的方法通過NaBH3的還原氨化由1-哌嗪羧酸叔-丁酯(Aldrich)和4-氧代-1-哌啶乙酸乙酯制備目標(biāo)化合物(Porter等EP 0542363 A2)。
b)4-(1-哌嗪基)-1-哌啶乙酸乙酯于室溫下將制備C(a)和4M HCl在二噁烷/CH2Cl2中的溶液攪拌18小時(shí)。濃縮所述反應(yīng)混合物產(chǎn)生為鹽酸鹽目標(biāo)化合物。
制備D3-氯代-1-(2-吡啶基)丙胺a)3-[(1-氧代-2-吡啶)氨基]-1-丙醇將3-氨基-1-丙醇，鹽酸2-氯吡啶-N-氧化物和NaHCO3在正丁醇中的混合物加熱至100℃18小時(shí)。過濾并濃縮混合物，使其在NaHCO3水溶液和EtOAc中分配。用EtOAc提取水相，干燥，濃縮，并純化產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)3-(2-吡啶基)氨基-1-丙醇在氬氣中將制備D(a)化合物，甲酸鉀和10％Pd/C在CH3OH中的混合物加熱至回流48小時(shí)。該混合物經(jīng)過濾，濃縮及層析純化產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)3-氯代-1-(2-吡啶基)丙胺用在CH2Cl2中的亞硫酰氯將制備D(b)處理18小時(shí)。濃縮該混合物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備E4-[4-(2-氨基乙基)-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯的制備a)4-[4-[2-(丁氧基羰基氨基)乙基]-1-[哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯按照Porter等(EP 0542363 A2)的一般方法，除了用4-[2-(丁氧基羰基氨基)乙基]-1-哌嗪取代1-芐基哌嗪和用4-氧代-1-哌啶乙酸乙酯取代4-氧代-1-哌啶乙酸1,1-二甲基乙酯外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)4-[4-[2-(氨基乙基)-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯用在CH2Cl2中的TFA處理制備E(a)化合物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備F1-羥基-4-[4-(2-氨基乙基)-1-哌嗪基]環(huán)己烷乙酸乙酯的制備按照制備E的方法，除了用1-(羥基)環(huán)己烷乙酸乙酯取代4-氧代-1-哌啶乙酸乙酯外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備GN-[2-(吡啶基)氨基]丁酸的制備按照制備V(c)的步驟，除了用N-(1-氧代-2-吡啶基)氨基丁酸(Tortorella等Gazz.Chim.Ital.,1967,97,85-95)代替制備V(b)化合物，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備H2-(4-羥基丁-1-基氨基]吡啶的制備a)2-(4-羥基-1-基氨基)吡啶-N-氧化物在氬氣中，在回流下加熱4-氨基-1-丁醇(1.76g,20mmol)、鹽酸2-氯吡啶N-氧化物(3.98g,24mmol)，及NaHCO3(8.40g,100mmol)在叔-戊醇(50ml)中的混合物。48小時(shí)后，使反應(yīng)物冷卻，用EtOH稀釋，過濾，并濃縮。從甲苯中再濃縮殘留物，并層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)2-(4-羥基丁-1-基氨基)吡啶于40℃將制備H(a)化合物(1.82g,10mmol),甲酸銨(3.15g,50mmol)和10％Pd/C(10.64g,10mmol)在無水EtOH(50ml)的快速攪動的混合物加熱過夜，然后冷卻至室溫，并通過Celite過濾。濃縮濾液，殘留物在H2O(50ml)和CHCl3(50ml)中分配。分離各層，用CHCl3提取水層。干燥合并的有機(jī)層(Na2SO4)，濃縮，殘留物經(jīng)層析(硅膠)后產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備I5-[(吡啶-2-基)氨基]戊酸的制備a)5-[(吡啶-2-基)氨基]戊酸乙酯N-氧化物在氬氣中，在回流下加熱5-氨基戊酸乙酯(2.9g,20mmol)，鹽酸2-氯吡啶N-氧化物(3.98g,24mmol)和NaHCO3(8.40g,100mmol)在叔-戊醇(50ml)中的混合物。48小時(shí)后，使反應(yīng)物冷卻，用EtOH稀釋。過濾，并濃縮。從甲苯中再濃縮殘留物，并層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)5-[(吡啶-2-基)氨基]戊酸乙酯于40℃將制備I(a)化合物(2.38g,10mmol)，甲酸銨(3.15g,50mmol)和10％Pd/C(10.64g,10mmol)在無水EtOH(50ml)的快速攪拌的混合物加熱過夜，然后冷卻至室溫，并通過Celite過濾。濃縮濾液，殘留物在H2O(50ml)和CHCl3(50ml)中分配。分離各層，用CHCl3提取水層。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并濃縮，層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)5-[(吡啶-2-基)氨基]戊酸于室溫下將制備I(b)化合物(444mg,2.0mmopl)、1.0N LiOH(3.0ml,3.0mmol),THF(10ml)及水(7ml)的混合液攪拌過夜，然后濃縮。使殘留物溶解于水(5ml)中并用1.0N HCl中和。收集沉淀物并真空干燥產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備J4-[N-吡啶-2-基-N-(甲苯磺?；?氨基]正丁醛肟的制備a)2-[3-(吡啶-2-基)氨基丙-1-基]-1,3-二氧戊環(huán)N-氧化物在氬氣中，在回流下加熱2-(3-氨基丙基)-1,3-二氧戊環(huán)(100mmol)，鹽酸2-氯吡啶N-氧化物(120mmol)及NaHCO3(500mmol)在叔-戊醇(250ml)中的混合物。反應(yīng)完成后，用EtOH稀釋。過濾，并濃縮。從甲苯中再濃縮殘留物，并層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)2-[3-(吡啶-2-基)氨基丙-1-基]-1,3-二氧戊環(huán)于40℃將制備J(a)化合物(60mmol)，甲酸銨(300mmol)和10％Pd/C(60mmol)在無水EtOH(300ml)的快速攪拌的混合物加熱過夜，再冷卻至室溫，并通過Celite過濾。濃縮濾液，殘留物在H2O和CHCl3中分配。分離各層，用CHCl3提取水層。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并濃縮，層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)2-[3-(N-吡啶-2-基]-N-(甲苯磺?；?氨基]丙-1-基]-1,3-二氧戊環(huán)將氫化鈉(55mmol)小心加入制備J(b)化合物(50mmol)和4-甲苯磺酰氯(55mmol)在干燥THF(200ml)的溶液中。在室溫下攪拌所述反應(yīng)物直至反應(yīng)完成，然后用飽和NH4Cl(200ml)使反應(yīng)物驟冷，用EtOAc提取所述混合物。干燥(Na2SO4)和濃縮合并的有機(jī)層，經(jīng)層析(硅膠)提純殘留物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
d)4-[N-吡啶-2-基-N-(甲苯磺?；?氨基]丁醛于室溫下攪拌制備J(c)化合物(40mmol)和對-TsOH·H2O(4mmol)在丙酮(180ml)和水(20ml)的溶液。當(dāng)反應(yīng)完成后，用Et2O稀釋反應(yīng)物，隨后順序用5％NaHCO3和飽和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)，濃縮及層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
e)4-[N-吡啶-2-基-N-(甲基磺?；?氨基]丁醛肟于0℃將鹽酸胺(33mmol)加入制備J(d)的化合物(30mmol)和無水NaOAc(66mmol)在CH3OH(150ml)的溶液中。于0℃攪拌直至反應(yīng)完全，然后濃縮，使殘留物在水和EtOAc中分配。分離各層，并用EtOAc提取水層。隨后順序用5％碳酸氫鈉和飽和鹽水洗滌合并的有機(jī)層，干燥(MgSO4)并濃縮提供目標(biāo)化合物。
制備K2-[(3-氨基丙-1-基]氨基]吡啶二鹽酸鹽a)2-[3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]丙-1-基氨基]吡啶-N-氧化物在氬氣中，回流加熱N-Boc-1,3-二氨基丙烷(3.48g,20mmol)，鹽酸2-氯吡啶N-氧化物(3.98g,24mmol)及NaHCO3(8.40g,100mmol)在叔-戊醇(50ml)中的混合物。48小時(shí)后，使反應(yīng)物冷卻，用EtOH稀釋。過濾，并濃縮。從甲苯中再濃縮殘留物，并層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)2-[3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]丙-1-基氨基]吡啶于40℃將制備K(a)化合物(2.67g,10mmol)，甲酸銨(3.15g,50mmol)和10％Pd/C(10.64g,10mmol)在無水EtOH(50ml)中的快速攪拌的混合物加熱過夜，然后冷卻至室溫，并通過Celite過濾。濃縮濾液，殘留物在H2O(50ml)和CHCl3(50ml)中分配。分離各層，用CHCl3提取水層。干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)層并濃縮，層析(硅膠)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)2-[(3-氨基丙-1-基)氨基吡啶二鹽酸鹽于0℃將在二噁烷(25ml,100mmol)中的4M HCl加入制備K(b)的化合物(1.26g,5.0mmol)在無水CH2Cl2(25ml)的溶液中。于室溫下將反應(yīng)物攪拌過夜并濃縮以提供目標(biāo)化合物。
制備L4-[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]苯酚的制備按照制備V(a)和(c)的步驟，除了用4-(2-氨基乙基)苯酚代替N-(乙酰基)乙二胺外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物制備M鹽酸4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠苯氧基乙酸芐酯的制備a)4-[2-(Boc-甲基氨基)乙酰基]苯酚于0℃將碳酸氫二叔-丁酯(5.96g,27.3mmol)在1,4-二噁烷(25ml)中的溶液滴加到鹽酸4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠苯酚(5.0g,24.8mmol)，1,4-二噁烷(30ml)，水(25ml)和1.0 N NaOH(25ml,25mmol)的混合物中。24小時(shí)后，溫?zé)岱磻?yīng)物至室溫并攪拌1.5小時(shí)。再加入另外的1.0N NaOH(25ml,25mmol)的混合物中。于室溫下再攪拌反應(yīng)物0.5小時(shí)并濃縮。用EtOAc(80ml)稀釋殘留物并用1.0 M NaHSO4酸化該混合物至pH2。用EtOAc提取生成的混合物，用水洗滌合并的有機(jī)層并干燥(Na2SO4)。過濾并濃縮產(chǎn)生目標(biāo)化合物(6.49g,99％)1HNMR(250 MHz,CDCl3)δ6.70-8.05(m,4H),4.53(s,2H),2.98(s,3H),1.50(s,9H).
b)4-[2-(Boc-甲基氨基)乙?；鵠苯氧基乙酸芐酯在氬氣中，在回流下將制備L(a)化合物(5.04g,19.0mmol)和K2CO3(2.63g,19.0mmol)在丙酮(100ml)中的混合物攪拌1小時(shí)。使該混合物冷卻至室溫和加入溴乙酸芐酯(5.23g,22.8mmol)。在回流下將反應(yīng)物加熱18小時(shí)，然后冷卻并過濾。用丙酮洗滌濾餅，并濃縮濾液。使殘留物溶于CH2Cl2(300ml)中，隨后順序用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。干燥(Na2SO4)，濃縮并經(jīng)快速層析(硅膠，1∶3 EtOAc/己烷)產(chǎn)生目標(biāo)化合物(7.28g,93％)1H NMR(250 MHz,CDCl3)δ6.85-7.95(m,9H),5.23(s,2H),4.71(s,2H),4.55(d,2H),2.95(d,3H),1.45(d,9H).
c)鹽酸4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠苯氧基乙酸芐酯于室溫下將制備L(b)化合物(7.26g,17.57mmol)和4M HCl在1,4-二噁烷(150ml)中的混合物攪拌1小時(shí)。濃縮和用Et2O研制提供白色粉末狀目標(biāo)化合物(5.93g,97％)1H NMR(250MHHz.CD3OD)δ7.05-8.00(m,9H),5.23(s,2H),4.88(s,2H),4.65(s,2H),2.80(s,3H).
制備N鹽酸4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸二甲酯的制備a)4-[2-(Boc-甲基氨基)乙?；鵠-1,2-二羥基苯按照制備L(a)的步驟，除了用鹽酸腎上腺酮(5.0g,23.0mmol)代替鹽酸4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠苯酚，然后用快速層析(硅膠，1∶1EtOAc/己烷)制備目標(biāo)化合物(1.2g,19％):MS(ES)m/e 282.2[M+H]+。
b)4-[2-(Boc-甲基氨基)乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸二甲酯按照制備L(b)的步驟，除了用制備M(a)化合物(0.9g,3.2mmol)代替制備L(a)化合物和用溴乙酸甲酯(1.23g,8.0mmol)代替溴乙酸芐酯外，制備目標(biāo)化合物(1.11g,81％):MS(ES)m/e 426.2[M+H]+。
c)鹽酸4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸二甲酯按照制備L(c)的步驟，除了用制備M(b)化合物(1.11g,2.6mmol)代替制備L(b)化合物外，制備目標(biāo)化合物(1.1g，定量分析):MS(ES)m/e326.0[M+H]+。
制備O(6-羧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)乙酸乙酯的制備a)(6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)乙酸乙酯將6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉(Sall和Grunewald,J.Med.Chem.1987,30,2208-2216,(1.1mmol),氯乙酸乙酯(1.17mmol)和K2CO3(1.17mmol)在CH3CN(10ml)的溶液攪拌18小時(shí)。在EtOAc和H2O中分配該混合物。濃縮有機(jī)相成油狀物，并經(jīng)層析(硅膠，梯度，20-80％EtOAc/己烷)純化提供目標(biāo)化合物。
b)(6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)乙酸乙酯將制備O(a)化合物(0.249g,1.0mmol),1M BBr3在CH2Cl2(1.0ml,1.0mmol)的溶液于-70℃攪拌2小時(shí)，然后再于室溫下攪拌12小時(shí)。濃縮該溶液，經(jīng)水，5％NaHCO3和水洗滌生成的油在EtOAc中的溶液干燥(Mg2SO4)，過濾，并濃縮成油狀提供目標(biāo)化合物(0.223g,95％)。
c)[6-(三氟甲磺酰氧基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基]乙酸乙酯將制備O(b)化合物(0.235g,1.0mmol)，三氟磺酸酐(0.23ml,1.1mmol)和Et3N(0.32ml,1.5mmol)在CH2Cl2(5ml)的溶液攪拌8小時(shí)。濃縮該溶液成油狀，將其溶于EtOAc。用5％NaHCO3和水洗滌有機(jī)層。干燥(Mg2SO4)有機(jī)相，過濾，濃縮提供目標(biāo)化合物(0.300g,82％)。
d)(6-羧基-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)乙酸乙酯在CO氣流中，將制備O(c)化合物(0.367g,1.0mmol)，Pd(OAc)2(0.022g,0.1mmol),Ph3P(0.262g,1.0mmol)，二異丙胺(0.34ml,2.5mmol)及NMP(5ml)在10％NH4CO3中的溶液攪拌8小時(shí)。濃縮溶液成油狀并經(jīng)層析(硅膠，梯度，10-33％CH3OH/CH2Cl2)純化提供目標(biāo)化合物(0.19g,72％)。
制備P(6-羧基-1,2,3,4-四氫-1-氧代-異喹啉-2-基)乙酸乙酯的制備a)(6-甲氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)乙酸乙酯將6-甲氧基-1,2,3,4-四氫-1-氧代-異喹啉(Sall和Grunewald.J.Med.Chem.,1987,30,2208-2216)(0.39mmol)和NaH(0.17g,0.43mmol)60％油的分散液在THF(5ml)中的混合液加熱至回流1小時(shí)，然后冷卻至室溫。加入氯乙酸乙酯(0.43mmol)并攪拌該混合物1小時(shí)。用水(10ml)使該混合物驟冷并用EtOAc洗滌。合并有機(jī)層，用水(10ml)洗滌并濃縮成油狀，經(jīng)提純(硅膠，梯度，10-33％CH3OH/CH2Cl2)提供目標(biāo)化合物。
b)(6-羥基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)乙酸乙酯于-70℃將制備P(a)化合物(0.263g,1.0mmol)和1M BBr3在CH2Cl2(1.1ml)中的溶液攪拌2小時(shí)，然后在室溫下攪拌4小時(shí)。濃縮該溶液成油狀并用EtOAc溶解。用水，5％NaHCO3，水洗滌該有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過濾，并濃縮提供目標(biāo)化合物(0.20g,80％)。
c)[6-(三氟甲基磺酰氧基)-1,2,3,4-四氫-1-氧代-異喹啉-2-基]乙酸乙酯將制備P(b)化合物(3.4mmol)和三氟磺酸酐(3.4mmol,ml)在吡啶(5ml)中的溶液于0℃冷卻并升溫至室溫1小時(shí)。用水(5ml)使混合物驟冷并用EtOAc洗滌。合并有機(jī)層，用H2O(7ml)洗滌并濃縮成油狀。層析(硅膠，梯度，14-75％EtOAc/己烷)提純該殘留物提供目標(biāo)化合物。
d)(6-羧基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基]乙酸乙酯在CO氣流下，攪拌制備P(c)化合物(0.23g,1.0mmol)、Pd(OAc)2(0.026g,0.1mmol),Ph3P(0.262g,1.0mmol)，二異丙胺(0.23ml,2.0mmol)和NMP(7ml)在10％NH4CO3中的溶液攪拌8小時(shí)。濃縮溶液成油狀并經(jīng)層析(硅膠，梯度，25-75％CH3OH/CH2Cl2)純化提供目標(biāo)化合物(0.31g,70％)。
制備Q(6-羧基-四氫化萘-2-基)乙酸乙酯的制備a)[6-(三氟甲基磺酰氧基)-四氫化萘-2-基]乙酸乙酯按照制備O(c)的步驟，除了用(6-羥基-四氫化萘-2-基)乙酸乙酯(Fisher，等，EP 0635492，圖式6和實(shí)施例20,A-D部分)取代制備O(b)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)6-羧基-四氫化萘-2-基)乙酸乙酯按照制備O(d)的步驟，除了用制備Q(a)化合物取代制備O(c)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備R(5-氨基苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯和(5-氨基-2,3-二氫-苯并呋喃-2-基]丙酸乙酯的制備a)2-(乙氧基羰基)甲氧基-5-硝基苯甲醛將5-硝基水楊醛(Aldrich)(0.167g,1.0mmol)，溴乙酸乙酯(0.166g,1.0mmol),K2CO3(0.276g,2.0mmol)和NaI(0.015g,0.1mmol)在THF(10ml)中的溶液加熱至80℃24小時(shí)。濃縮該溶液，殘留物經(jīng)層析(硅膠，梯度，5-20％CH3OH在CH2Cl2中)純化提供目標(biāo)化合物(0.20g,87％)。
b)(5-硝基苯并呋喃-2-基)羧酸乙酯于室溫下攪拌制備R(a)化合物(0.229g,1.0mmol)和DBU(0.152g,1.0mmol)在EtOH(10ml)中的溶液18小時(shí)。濃縮該溶液并用EtOH(10ml)處理殘留物。向該溶液通入氯化氫氣體2分鐘并回流5小時(shí)。濃縮該溶液并用EtOAc處理殘留物。用水，5％檸檬酸，水，5％NaHCO3及水洗滌有機(jī)相。濃縮有機(jī)相提供目標(biāo)化合物(0.19g,81％)。
c)乙基(5-硝基苯并呋喃-2-基)甲醛用在THF(1.0ml,1.0mmol)中的1M DiBAL處理制備R(b)化合物(0.235g,1.0mmol)在THF(5ml)中的冷溶液(-78℃)。于-78℃下攪拌該溶液30分鐘和室溫下攪拌3小時(shí)。用CH3CO2H(3ml)接著用H2O(2ml)處理該溶液。濃縮該溶液，殘留物經(jīng)甲苯處理共沸去除乙酸。真空干燥提供目標(biāo)化合物(0.100g,52％)。
d)(5-硝基苯并呋喃-2-基)丙烯酸乙酯于0℃用NaH(在礦物油中的60％懸浮液0.04g,1.0mmol)處理膦?；宜崛阴?0.224g,1.0mmol)在THF(5ml)中的溶液。將制備R(c)化合物(0.235g,1.0mmol)加入該溶液中。于室溫下攪拌該溶液18小時(shí)，濃縮，經(jīng)層析(硅膠，梯度，5-20％EtOAc/己烷)(EtOAc/己烷0.5∶9至4∶1)純化殘留物提供目標(biāo)化合物(0.2g,77％)。
e)(5-氨基苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯在45psi氣壓下，使制備R(d)化合物(O.261g,1.0mmol)在含有10％Pd/C(0.026g)的EtOH(5ml)中的溶液氫化1小時(shí)。通過硅藻土過濾該溶液，濾液經(jīng)濃縮和層析(硅膠，梯度，25-75％EtOAc/己烷)提供目標(biāo)化合物。
制備S(5-羧基-苯丙呋喃-2-基)丙酸乙酯的制備a)[5-(叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)苯并呋喃-2-基]羧酸乙酯將[5-(羥基)苯并呋喃-2-基]羧酸乙酯(Denny等，EP 0655439)(0.206g,1.0mmol)，叔-(丁基)二甲基甲硅烷基氯(0.23ml,1.0mmol)和咪唑(0.34g,1.0mmol)在THF中的溶液攪拌4小時(shí)。濃縮該溶液并用EtOAc處理殘留物。用H2O洗滌有機(jī)相，干燥(Na2SO4)，并濃縮提供目標(biāo)化合物(0.35g,90％)。
b)[5-(叔-(丁基)二甲基甲硅烷氧基]苯并呋喃-2-基]丙烯酸乙酯按照制備R(c)和(d)的方法，除了用制備S(a)化合物取代制備R(b)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)[5-(羥基)苯并呋喃-2-基]丙酸乙酯和[5-羥基-2,3-二氫苯并呋喃-2-基]丙酸乙酯于50psi下使制備S(b)(0.234g,1.2mmol)和10％Pd/C(0.023g,10％wt)在EtOH(5ml)中的混合物氫化1小時(shí)。通過硅藻土過濾該混合物并濃縮。于室溫下攪拌殘留物(0.34g,1.0mmol)和Et4NF(0.149g,1.0mmol)在THF(10ml)中的溶液18小時(shí)。該溶液經(jīng)濃縮和層析(硅膠)純化產(chǎn)生目標(biāo)化合物(0.25g,57％)。
d)[5-三氟甲基磺酰氧基)苯并呋喃-2-基]丙酸乙酯按照制備O(c)的方法，除了用制備S(c)的[5-(羥基)苯并呋喃-2-基]丙酸乙酯代替制備O(b)的化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
e)(5-羧基-苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯按照制備O(d)的方法，除了用制備S(d)化合物取代制備O(c)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備T(5-羧基-2,3-二氫-苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯的制備a)[5-(三氟甲基磺酰氧基)-2,3-二氫-苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯按照制備S(d)的方法，除了用制備S(c)的[5-羥基-2,3,-二氫-苯并呋喃-2-基]丙酸乙酯代替制備S(c)的[5-(羥基)苯并呋喃-2-基]丙酸乙酯外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)(5-羧基-2,3-二氫-苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯按照制備S(e)的方法，除了用制備T(a)化合物取代制備S(d)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
制備U(±)3-[(甘氨酰)氨基]-4-戊炔酸乙酯三氟乙酸鹽的制備a)(±)3-[[(N-叔-丁氧基羰基)甘氨酰]氨基]-4-戊酸乙酯于室溫下將DIEA(0.92ml,5.32mmol)加入(±)-3-氨基-4-戊炔酸乙酯(0.3g,2.13mmol),Boc-Gly(0.56g,3.19mmol),HOBt·H2O(0.43g,3.19mmol)和EDC(0.61g,3.19mmol)在無水CH3CN(15ml)中的攪拌溶液中。34小時(shí)后，濃縮反應(yīng)混合物，用CH2Cl2(70ml)稀釋，隨后用5％NaHCO3(2×15ml)和鹽水(15ml)洗滌。干燥(MgSO4)濃縮及層析(硅膠，1∶1 EtOAc/己烷)產(chǎn)生無色油狀目標(biāo)化合物(0.5g,79％):MS(ES)m/e299.2(M+H)+。
b)(±)3-[(甘氨酰)氨基]-4-戊炔酸乙酯三氟乙酸鹽于室溫下將TFA(5ml)和CH2Cl2(15ml)一次全部加入制備S(a)(0.5g,1.68mmol)化合物中。30分鐘后濃縮溶液，從甲苯中再濃縮殘留物(除去殘留的TFA)提供淺黃色糖漿狀目標(biāo)化合物(0.55g,106％):MS(ES)m/e 199.2(M+H)+。
制備VN-(2-吡啶基)乙二胺的制備a)N-乙?；?N’-(1-氧代-2-吡啶基)乙二胺將N-(乙酰基)乙二胺(0.5g,5mmol)，鹽酸2-氯吡啶-N-氧化物(1.6g,10mmol),NaHCO3(1.6g,19mmol)，及正-丁醇(5ml)的混合液加熱至100℃18小時(shí)。然后使混合物冷卻，然后過夜并濃縮濾液。生成的殘留物經(jīng)層析(硅膠，梯度法，2％-10％CH3OH/CH2Cl2)純化產(chǎn)生淡黃色固狀目標(biāo)化合物(0.40g,45％):MS(ES)m/e 196(M+H)+。
b)N-(1-氧代-2-吡啶)乙二胺將制備V(a)化合物(0.4g)和濃鹽酸(50ml)的混合物加熱至90℃4天，濃縮，使殘留物重結(jié)晶(CH3OH∶CHCl3)產(chǎn)生灰-白色針狀目標(biāo)化合物(3.2g,82％):MS(ES)m/e 154.2(M+H)+。
c)N-(2-吡啶)乙二胺在氬氣下，將制備V(b)化合物(1.0g,5mmol)甲酸鉀(2.2g,25mmol)，10％Pd/C(0.30g)及CH3OH(20ml)的混合液加熱至回流48小時(shí)。過濾該混合物，濃縮濾液，經(jīng)層析(硅膠，10％CH3OH/CH2Cl2)提純殘留物產(chǎn)生琥珀色油狀目標(biāo)化合物(0.30g,41％):MS(ES)m/e138.1(M+H)+。
制備W(S)-2,3,4,5-四氫-7- 碘代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯的制備a)(R)-蘋果酸-O-三氟甲磺酸二甲酯在氬氣中于0℃將(R)-蘋果酸二甲酯(12.96g,80mmol)和吡啶(6.8ml,84mmol)在CH2Cl2(50ml)中的溶液滴加到在直火干燥的燒瓶中的三氟甲磺酸酐在干燥CH2Cl2(40ml)中的溶液中。將生成的黃橙色混合物在0℃攪拌30分鐘，然后再于室溫下攪拌4小時(shí)。加水(50ml)使反應(yīng)驟停并用水和鹽水洗滌有機(jī)相3次，干燥(MgSO4)并濃縮產(chǎn)生灰白色固狀目標(biāo)化合物(22.45g,95％):MS(ES)m/e295.0(M+H)+。
b)N-[2(氰基)苯基]-(S)-天門天冬氨酸二甲酯在氬氣中于0℃將制備W(a)化合物(22.4g,76.2mmol)在1∶1CH3Cl/己烷(80ml)中的溶液加入在直火干燥的燒瓶中的2-氨基芐腈(9.0g,76.2mmol)和2,6-二-叔-丁基吡啶(14.5g,76.2mmol)在1∶1 CH3Cl/己烷(100ml)中的溶液中。于0℃攪拌生成的混合物30分鐘，然后于室溫下攪拌3天。濃縮生成的混合物，殘留物溶于EtOAc，用5％HCl和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。濃縮生成的混合物，用快速層析(硅膠，12％EtOAc/己烷)提純殘留物產(chǎn)生澄清油狀目標(biāo)化合物(12.3g,62％):MS(ES)m/e 263.3(M+H)+。
c)(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯在室溫下，在氫氣球鼓氣中將制備W(b)化合物(12g,45.7mmol)，Et3N(7.64ml,54.84mmol)和Raney鎳(46g，用CH3OH預(yù)先洗過)在CH3OH(200ml)中的混合液攪拌2天。過濾混合物，用CH3OH洗滌催化劑3次。濃縮濾液，用快速層析(硅膠，逐步梯度，0-5％CH3OH/CH2Cl2)提純殘留物產(chǎn)生白色固體狀目標(biāo)化合物(7.39g,74％)MS(ES)m/e 235.3(M+H)+。經(jīng)NMR表明該目標(biāo)化合物含有大約23％的(R)-對映體。
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-碘代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯吡啶ICI復(fù)合物將1M一氯化碘在CH2Cl2(100ml)緩慢加入吡啶(8.5ml,105mmol)在CH2Cl2(20ml)的溶液中，在氬氣攪拌和預(yù)冷至5℃，以便維持內(nèi)溫在10-15℃之間。于5-10℃攪拌該溶液20分鐘。加入己烷(50ml)，并在冷浴中再攪拌該混合物30分鐘。過濾收集形成的固體，用己烷和石油醚洗滌，干燥產(chǎn)生黃色固狀吡啶-ICI復(fù)合物(22.5g)，無需進(jìn)一步純化而直接使用。
將吡啶ICI復(fù)合物(1.27g,5.28mmol)分批加入制備W(c)化合物(1.18g,4.8mmol)在1∶1 CH2Cl2/CH3OH(40ml)中的溶液中。將生成的混合物在室溫下攪拌40分鐘，用1M NaHSO3(20ml)處理，過濾收集生成的固體，用Et2O洗滌，干燥產(chǎn)生灰白色固狀目標(biāo)化合物(1.72g，定量分析):MS(ES)m/e 361.2(M+H)+。
制備X(S)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯的制備a)4-氟代-3-[(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]苯甲酸叔-丁酯于室溫下氬氣中將3-溴甲基-4-氟苯甲酸叔-丁酯(14g,48mmol)和2,2,2-三氟乙胺(25g,250mmol)在THF(300ml)中的混合物4天，濃縮，使殘留物在Et2O和10％K2CO3之間分配。用10％K2CO3和鹽水洗滌有機(jī)相，干燥并濃縮。用層析(硅膠梯度，0-8％乙酸乙酯/己烷)純化殘留物產(chǎn)生淡黃色油狀目標(biāo)化合物(10.7,72％):MS(ES)m/e308.3(M+H)+。
b)(S)-4-氟代-3-[[[2-(芐氧基羰基)氨基-1,4-二氧代-4-甲氧基-1-丁基](2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基]苯甲酸叔-丁酯于室溫下氬氣中將氰尿酰氯(2.8ml,36mmol)滴加到Cbz-L-天門冬氨酸-β-甲酯(10g,36mmol)和吡啶(2.8ml,36mmol)在CH2Cl2(100ml)中的攪拌溶液中。于室溫下攪拌生成的混和物過夜，用CH2Cl2(100ml)稀釋，用水(100ml)驟冷。過濾混合物，分離各相，干燥(MgSO4)和濃縮有機(jī)相提供Cbz-L-天門冬氨酸-β-甲酯酰氟。使酰氟溶于CH2Cl2(50ml)并于0℃氬氣中滴加于制備Ⅹ(a)化合物(5g,16mmol)在CH2Cl2(200ml)和吡啶(3ml,37mmol)中的溶液中。滴加完成后，于室溫下攪拌生成的溶液過夜，用水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。用層析(硅膠，CH2Cl2)純化殘留物產(chǎn)生無色糖漿狀目標(biāo)化合物(10g,100％):MS(ES)m/e 571.2(M+H)+。
c)(S)-4-氟-3-[[[2-氨基-1,4-二氧代-4-甲氧基-1-丁基](2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基]苯甲酸叔-丁酯使制備Ⅹ(b)化合物(10g)和10％Pd/C(2g)在CH3OH(200ml)中的混合液在氫氣(45psi)振蕩2小時(shí)。過濾混合物，濃縮濾液，用層析(硅膠，梯度，0-2％CH3OH/CH2Cl2)提純殘留物產(chǎn)生無色糖漿狀目標(biāo)化合物(6g,78％):MS(ES)m/e 436.9(M+H)+。
d)(S)-7-(t-丁氧基羰基)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯在氬氣中將制備X(c)化合物(5.8g)在DMSO(60ml)的溶液加熱至125℃6小時(shí)。使該混合物冷卻，并注入冰水中，用EtOAc提取3次，用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，干燥(MgSO4)并濃縮。用層析(硅膠，梯度，0-5％CH3OH/CH2Cl2)提純殘留物產(chǎn)生白色泡沫狀目標(biāo)化合物(3g,50％)
NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(d,J=8.4Hz,1H),7.59(s,1H),6.53(d,J=8.4Hz,1H),5.49(d,J=16.7Hz,1H),5.15(m,1H),4.57(d,J=6Hz,1H),4.31(m,1H),3.99(d,J=16.7Hz,1H),3.80(m 1H),3.75(s,3H),3.00(dd,J=16.2,6.5Hz,1H),2.72(dd,J=16,6.4Hz,1H),1.57(s,9H).
e)(S)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯于0℃氬氣中將苯甲醚(1.56g,14mmol)在加入攪動中的TFA(25ml)中，隨后將在CH2Cl2(25ml)中的制備X(d)化合物(3g,7mmol)的溶液滴加入上述溶液中。滴加完成后，使溶液升溫至室溫并攪拌2小時(shí)。濃縮該混合物并使殘留物溶于EtOAc中。用濃NH4OH提取有機(jī)相以使水相的pH值為10。用EtOAc洗滌水層兩次，用3N HCl使pH值為4，并用EtOAc提取。有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，并濃縮產(chǎn)生灰-白色固狀目標(biāo)化合物(2.1g,81％):MS(ES)m/e361.1(M+H)+。
制備YN-(6-甲基-2-吡啶基)乙二胺的制備按照制備Ⅴ的方法，除了用6-甲基-2-氯吡啶-N-氧化物取代2-氯吡啶-N-氧化物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物MS(ES)m/e 152(M+H)+。
制備ZN-甲基-N’-(2-吡啶基)乙二胺的制備a)N-Boc-N-甲基-N’-(1-氧代-2-吡啶基)乙二胺在氬氣中，回流加熱N-Boc-N-(甲基)乙二胺(Synth.Commun,1993,23,2443-2449)(849.2mg,4.87mmol),鹽酸2-氯吡啶N-氧化物(970mg,5.84mmol)，及NaHCO3(2.05g,24.4mmol)在叔-戊醇(12ml)中的混合物。41.5小時(shí)后，冷卻反應(yīng)物，用EtOH稀釋，過濾和濃縮。從甲苯再濃縮殘留物并層析(硅膠，5％CH3OH/CHCl3)產(chǎn)生黃色粘性油狀目標(biāo)化合物(863.1mg,66％)，可不經(jīng)進(jìn)一步純化而直接使用MS(ES)m/e268(M+H)+。
b)N-Boc-N-甲基-N’-(2-吡啶基)乙二胺回流加熱制備Z(a)化合物(863.1mg,3.23mmol)，甲酸銨(1.02g,16.2mmol)及10％Pd/C(344mg,0.32mmol)在無水EtOH(16ml)中的快速攪拌的混合物。8小時(shí)后，使該反應(yīng)冷卻至室溫，并加入更多的甲酸銨(2.04g,32.4mmol)和10％Pd/C(3.44g,3.23mmol)。于40℃攪拌該反應(yīng)物14.5小時(shí)，冷卻至室溫，并通過Celite過濾。濃縮濾液，在H2O(20ml)和CHCl3(20ml)中分配殘留物。分離各相，用CHCl3(2×20ml)提取水相，并干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)相和濃縮。生成的黃色油狀經(jīng)層析(硅膠，5％CH3OH在1∶1 EtOAc/CHCl3)提純產(chǎn)生淡黃色油狀物的目標(biāo)化合物(267.4mg,33％):MS(ES)m/e 252(M+H)+。
c)二鹽酸N-甲基-N’-(2-吡啶基)乙二胺于0℃將在二噁烷(5.3ml,21.2mmol)中的4M HCl成細(xì)流狀加入制備Z(b)化合物(267.4mg,1.06mmol)在無水CH2Cl2(5.3ml)的溶液中。于室溫下攪拌該反應(yīng)物16小時(shí)并濃縮提供吸潮的黃色固狀目標(biāo)化合物(229.4mg,97％):MS(ES)m/e 152(M+H)+。
制備AAN-(2-嘧啶基)乙二胺的制備a)N-Boc-N’-(2-嘧啶)乙二胺使N-Boc乙二胺(0.80g,5.0mmol)(Syn.Commun.1990,20,255-264)溶于1-丙醇(12ml)中并用K2CO3(1.2g,9.0mmol)，接著用2-氯嘧啶(0.91g,8.0mmol)處理，加熱該混合液至回流24小時(shí)。將反應(yīng)混合物注入水(30ml)中并用EtOAc(3×30ml)提取，干燥(MgSO4)并濃縮合并的有機(jī)部分產(chǎn)生黃色固狀目標(biāo)化合物(1.6g):MS(ES)m/e 238.9(M+H)+。
b)鹽酸N-(2-嘧啶基)乙二胺使制備AA(a)化合物(1.6g,6.7mmol)溶于CH2Cl2(6ml)中并用在二噁烷(16.7ml)中的4M HCl處理。攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，濃縮，并與CH2Cl2(3×10ml)共沸產(chǎn)生黃色鹽的目標(biāo)化合物(1.2g,100％):MS(ES)m/e 139.0(M+H)+。
制備BBN-(6-甲基-3-噠嗪基)乙二胺的制備a)N-乙?；?N’-(6-甲基-3-噠嗪基)乙二胺在氬氣中回流加熱3-氯-6-甲基噠嗪(1.29g,10mmol),N-(乙?；?乙二胺(6.38mg,6.25mmol)和NaHCO3(1.6g)在干燥DMF(10ml)中的混合物20小時(shí)。過濾該混合物，濃縮濾液，使殘留物溶于CH2Cl2中，并經(jīng)快速層析(硅膠，梯度0-8％CH3OH/CH2Cl2)純化產(chǎn)生黃色固體狀目標(biāo)化合物(700mg,44％):MS(ES)m/e195.0(M+H)+。
b)N-(6-甲基-3-噠嗪基)乙二胺將制備BB(a)化合物(700mg,3.6mmol)和濃鹽酸(10ml)的混合物加熱至90℃48小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物并用Et2O研磨產(chǎn)生紫色固體狀目標(biāo)化合物(691mg):MS(ES)m/e 152.9(M+H)+。
制備CCN-(3-噠嗪基)乙二胺的制備a)3-氯噠嗪將3-(2H)-噠嗪酮(1g,10.4mmol)于90℃經(jīng)磷酰氯(10ml)處理4小時(shí)。把該混合液注入冰(100g)中，用50％NaOH堿化，用CH2Cl2(3×150ml)提取。干燥(MgSO4)和濃縮合并的有機(jī)提取物產(chǎn)生黃色固狀目標(biāo)化合物(750mg,63％):MS(ES)m/e 115(M+H)+。
b)N-乙?；?N’-(3-噠嗪基)乙二胺在氬氣中使制備CC(a)化合物(750mg,6.6mmol),N-(乙酰基)乙二胺(673mg,6.6mmol)，及NaHCO3(2g)在干燥DMF(10ml)中的混合物回流20小時(shí)。過濾該混合物，濃縮濾液，使殘留物溶于CH2Cl2中，經(jīng)快速層析(硅膠，梯度，0-8％CH3OH/CH2Cl2)純化產(chǎn)生黃色固狀目標(biāo)化合物(710mg,60％):MS(ES)m/e 180.8(M+H)+。
c)N-(3-噠嗪基)乙二胺使制備CC(b)化合物(700mg,3.9mmol)和濃鹽酸(10ml)的混合物加熱至90℃72小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物并用Et2O研磨產(chǎn)生黃色固狀目標(biāo)化合物MS(ES)m/e 138.1(M+H)+。
實(shí)施例實(shí)施例1(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯于室溫下將制備Ⅴ(c)化合物(0.15g,1.1mmol)、(S)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯(0.325g,1.1mmol),HOBt(0.19g,1.3mmol),EDC(0.27g,1.3mmol)及DIEA(1.6ml,9mmol)在CH3CN(5ml)中的混合物攪拌4天。濃縮該混合物，使殘留物在EtOAc和H2O中分配。用EtOAc提取水層兩次并用鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，干燥(MgSO4)并濃縮。殘留物經(jīng)層析(硅膠，逐步梯度，2％-5％CH3OH/CH2Cl2)純化產(chǎn)生無色泡沫體狀目標(biāo)化合物(0.175g,39％):MS(ES)m/e 412.4(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸將實(shí)施例Ⅰ(a)化合物(0.175,0.42mmol),LiOH·H2O(0.027g,0.65mmol)、THF(5ml)及水(5ml)的溶液于室溫下攪拌過夜。濃縮混合物并使殘留物溶于水中。用EtOAc提取水溶液并用3N HCl調(diào)至pH5。使溶液稍稍加熱并靜置過夜。過濾收集生成的晶體，干燥后產(chǎn)生白色固體狀目標(biāo)化合物(0.13g,77％):MS(ES)m/e 398.4(M+H)+。
MS(ES)m/e 398.4[M+H]+.計(jì)算值C20H23N5O4·5/8H2O:C,58.78；H,5.98；N,17.14.實(shí)測值C,58.65；H,6.03；N,16.96.
實(shí)施例2(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[(1-氧代-2-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[(1-氧代-2-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯按照實(shí)施例1(a)的方法，除了用制備Ⅴ(b)化合物取代Ⅴ(c)化合物外，產(chǎn)生無色泡沫狀目標(biāo)化合物MS(ES)m/e 428.4(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[(1-氧代-2-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸按照實(shí)施例1(b)的方法，除了用實(shí)施例2(a)化合物代替實(shí)施例1(a)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物MS(ES)m/e414.5[M+H]+.計(jì)算值C20H23N5O5·5H2O:C,56.86；H,5.73；N,16.58.實(shí)測值C.56.63；H,5.67；N,16.32.
實(shí)施例3(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯在CO氣球鼓氣下，將制備W(d)化合物(720mg,2mmol)，制備Ⅴ(c)化合物(672mg,3mmol),DIEA(1.8ml,10mmol)及(Ph3P)2PdCl2(140mg,0.2mmol)在N-甲基-2-吡咯烷二酮(20ml)的混合物加熱至110℃3小時(shí)。濃縮混合物并用快速層析(硅膠，逐步梯度，0-7％CH3OH/CH2Cl2)純化殘留物產(chǎn)生淡黃色半固體目標(biāo)化合物MS(ES)m/e398.2(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸于室溫下將1M LiOH(3.8ml,3.8mmol)滴加到實(shí)施例3(a)化合物(1g,2.5mmol)在1∶1CH3OH/THF(20ml)中的溶液中。將生成的混合物攪拌20小時(shí)并濃縮。使殘留物溶于H2O中，用TFA(20％)酸化，并經(jīng)層析(ODS,6％CH3CN/H2O·0.1％TFA)純化。收集含有所需產(chǎn)物的部分并濃縮，冷凍干燥產(chǎn)生淡黃粉末狀目標(biāo)化合物(可能含有約23％的R對映體，參看制備W(c))MS(ES)m/e 384.2[M+H]+；計(jì)算值C19H21N5O4·2.5TFA:C,41.87；H,3.44；N,10.17.實(shí)測值C,42.01；H,3.62；N,10.15.
實(shí)施例4(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用制備X(e)化合物代替(S)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯得到為白色泡沫狀的目標(biāo)化合物MS(ES)m/e 479.7(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用實(shí)施例4(a)化合物代替實(shí)施例1(a)化合物得到為白色固體的目標(biāo)化合物MS(ES)m/e466.1[M+H]+.計(jì)算值C21H22F3N5O4·0.8H2O:C,52.56；H,4.96；N,14.60.實(shí)測值C,52.88；H,5.00；N,14.10.
實(shí)施例5(±)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(苯基乙基)-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(苯基乙基)-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯****將(±)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-苯基乙基-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯(2mmol),EDC(0.38g,2mmol),HOBt·H2O和制備Ⅴ(c)化合物(1.65mmol)合并在室溫下攪拌過夜。濃縮混合物，用5％Na2CO3處理殘留物并用CH2Cl2提取。用H2O洗滌合并的有機(jī)提取物，干燥(MgSO4)和濃縮。層析純化殘留物產(chǎn)生白色泡沫狀目標(biāo)化合物MS(ES)m/e 502(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(苯基乙基)-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸使實(shí)施例5(a)化合物(0.16g,0.4mmol)溶于CH3OH(10ml)和THF(1ml)中，并用1N NaOH(0.5ml)處理。攪拌該混合物過夜，濃縮，使殘留物溶于水中并用CH2Cl2提取。用稀鹽酸將水相pH調(diào)至5.5-6，過濾形成的固體，用水和Et2O洗滌，干燥產(chǎn)生目標(biāo)化合物MS(ES)m/e488[M+H]+.計(jì)算值C27H29N5O4·0.625H2O:C,65.01；H,6.11；N,14.04.實(shí)測值C,64.95；H,5.92；N,13.94.
實(shí)施例6(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[2-[2-(6-甲基-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[2-[2-(6-甲基-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯按照實(shí)施例5(a)的方法，除了用制備Y化合物代替制備V(c)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物MS(ES)m/e426(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[2-[2-(6-甲基-吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸按照實(shí)施例5(b)的步驟，除了用實(shí)施例6(a)化合物取代實(shí)施例5(a)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物MS(ES)m/e412[M+H]+計(jì)算值 C21H25N5O4·0.5H2O:C,59.99；H,6.23；N,16.66.實(shí)測值C,59.69；H,6.15；N,16.37.
實(shí)施例7(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯產(chǎn)二氮雜-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯產(chǎn)二氮雜-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(195.5mg,1.02mmol)加入(S)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯(248.4mg,0.85mmol)，制備Z(c)化合物(229.4mg,1.02mmol),HOBt·H2O(137.8g,1.02mmol)及DIEA(0.74ml,4.25mmol)在無水CH3CN(4.3ml)的溶液中。21小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物并層析(硅膠10％CH3OH/CHCl3)純化殘留物提供淡黃色泡沫狀目標(biāo)化合物(353.8mg,98％):MS(ES)m/e 426(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯于室溫下將1N LiOH(1.0ml,1.0mmol)一次全部加入實(shí)施例7(a)化合物(353.8mg,0.83mmol)在THF(4.2ml)和H2O(3.2ml)的溶液中。0.5小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物至干燥并將殘留物溶于H2O(4ml)中。用EtOAc(2×4ml)提取該溶液并棄去EtOAc層。用0.1N HCl酸化水溶液至pH6并于5℃靜置過夜。層析(ODS,12％CH3CN/H2O-0.1％TFA)純化該溶液并收集含有所需化合物的部分，濃縮并冷凍干燥產(chǎn)生無色粉末狀的目標(biāo)化合物(399.7mg,81％):MS(ES)m/e412(M+H)+。計(jì)算值 C21H25N5O4·1.5TFA·0.75H2O:C,48.37；H,4.74；N,11.75.實(shí)測值C,48.25；H,4.89；N,11.86.
實(shí)施例8(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[-2-[2-(嘧啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[(2-嘧啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯將制備AA(b)化合物(1.2g,6.7mmol),(±)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯(1.8g,6.1mmol),EDC(1.79g,9.2mmol)及DIEA(3.7ml,21.4mmol)溶于DMF(35ml)并于室溫下攪拌該混合物24小時(shí)。將該混合物注入5％NaHCO3(50ml)中并用EtOAc(3×30ml)提取。用水(4×50ml)洗滌合并的有機(jī)提取物，干燥(MgSO4)濃縮。殘留物經(jīng)層析(硅膠，3％CH3OH/CH2Cl2)純化產(chǎn)生目標(biāo)化合物(300mg,12％)。通過制備性的HPLC(ODS-AQ,50×250mm,80ml/min,14％CH3CH/H2O-0.1％TFA,在220nmUV檢測處可獲得進(jìn)一步純化MS(ES)m/e 412.9(M+H)+。
1H NMR(400 MHz DMSO-d6)δ8.28(d,J=2Hz,2H),8.18(bt,1H),7.51(m,2H),7.19(bt,1H),6.57(t,J=9.3Hz,1H),6.53(d,J=8Hz,1H),6.32(d,J=2Hz,1H),5.50(d,J=16Hz,1H),5.14(m,1H),3.84(d,J=16Hz,1H),3.38(s,4H),2.81(dd,J=16.9Hz,1H),2.67(dd,J=17.4Hz,1H).計(jì)算值C20H24N6O4·1.5TFA:C.47.34；H,4.40；N,14.40實(shí)測值C,47.21；H,4.49；N,14.13.
b)(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[(2-嘧啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸將實(shí)施例8(a)化合物溶于含有1N NaOH(3.4ml)和水(2ml)的CH3OH(5ml)中并攪拌混合液，濃縮并經(jīng)制備性的HPLC(ODS-AQ,50×250mm,80ml/min,14％CH3CN/H2O-0.1％TFA在220nm處UV測定)純化產(chǎn)生白色固狀目標(biāo)化合物(80mg,35％):MS(ES)m/e 399.1(M+H)+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J=3Hz,2H),8.15(bt,1H),7.50(m,2H),7.23(bt,1H),6.57(t,J=7.3Hz,1H),6.52(d,J=8Hz,1H),6.30(d,J=3Hz,1H),5.49(d,J=18Hz,1H),5.08(m,1H),3.84(d,J=19Hz,1H),3.43(s,4H),2.81(d,J=19.9Hz,1H),2.55(d,1H).計(jì)算值C19H22N6O4:C,57.28；H,5.57:N,21.09.實(shí)測值C,57.59；H,5.43；N,20.97實(shí)施例9(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[2-[(6-甲基-3-噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備(SB 240375)a)(±)-7-[[[2-[(6-甲基-3-噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(759mg,3.96mmol)加入到制備BB(b)化合物(3.6mmol),(±)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯(1.05g,3.6mmol),HOBt·H2O(535mg,3.96mmol)和DIEA(2.07ml,11.88mmol)在無水DMF的溶液中。20小時(shí)后，濃縮所述反應(yīng)物，使殘留物溶于CH2Cl2中并用層析(硅膠，逐步梯度0-10％,CH3OH/CH2Cl2)純化產(chǎn)生淡黃色固體狀目標(biāo)化合物(960mg,63％)MS(ES)m/e427(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[2-[(6-甲基-3-噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸于室溫下將1M NaOH(4.0ml,4.0mmol)滴加到實(shí)施例9(a)化合物(800mg,1.94mmol)在1∶1 CH3OH∶THF(200ml)的溶液中。攪拌生成的溫合物20小時(shí)，濃縮，使殘留物溶于水中，用20％TFA酸化，并經(jīng)層析(ODS逐步梯度，5-7％CH3CN/H2O-0.1％TFA)純化產(chǎn)生白色粉末狀目標(biāo)化合物MS(ES)m/e413.2[M+H]+.
計(jì)算值C20H24N6O4·1.5TFA·0.75 H2O:C,46.27；H,4.56；N,14.08.實(shí)測值C,46.04；H,4.27；N,13.78.
實(shí)施例10(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[2-[3-(噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[3-(噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸甲酯按照實(shí)施例9(a)的方法，除了用制備CC(c)化合物代替制備BB(b)化合物外，產(chǎn)生淡黃色固狀目標(biāo)化合物(1.12g,76％)。將200mg樣品經(jīng)層析(ODS,10％CH3CN/H2O-0.1％TFA)進(jìn)一步純化MS(ES)m/e 413.2[M+H]+.計(jì)算值C20H24N6O4·1.5TFA·0.5H2O:C,46.63；H,4.51；N,14.18.實(shí)測值C,46.54；H,4.65；N,14.46.
b)(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[3-(噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸按照實(shí)施例9(b)的方法，除了用實(shí)施例10(a)化合物代替實(shí)施例9(a)化合物外，產(chǎn)生白色粉末狀目標(biāo)化合物MS(ES)m/e 399.2[M+H]+.計(jì)算值C19H22N6O4·1.5 TFA·H2O:C,44.98；H,4.37；N,14.31.實(shí)測值C,44.82；H,4.3；N,14.31.
實(shí)施例113-[3,4-二氫-8-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-4-丙酸的制備a)3-[3,4-二氫-8-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-4-丙酸芐酯于室溫下將EDC(0.25g,1.3mmol)加入制備A(f)化合物(1.1mmol)，制備V(c)化合物(1.1mmol),HOBt·H2O(170mg,1.3mmol)和DIEA(0.9ml,4.4mmol)在無水CH3CN(5ml)的溶液中。21小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物并用層析(硅膠)純化殘留物提供目標(biāo)化合物。
b)3-[3,4-二氫-8-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-4-丙酸在氫氣(50psi)中使實(shí)施例11(a)化合物(2mmol)和10％Pd/C(0.02g)在EtOH(100ml)中的混合物氫化6小時(shí)。過濾除去催化劑，濃縮濾液提供目標(biāo)化合物。
實(shí)施例123-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-5-丙酸的制備a)3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-5-丙酸乙酯于室溫下將EDC(0.25g,1.3mmol)加入到制備B(e)化合物(1.1mmol)，制備V(c)化合物(1.1mmol),HOBt·H2O(170mg,1.3mmol)和DIEA(0.9ml,4.4mmol)在無水CH3CN(5ml)的溶液中。21小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物并用層析(硅膠)純化殘留物提供目標(biāo)化合物。
b)3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-5-丙酸于室溫下將實(shí)施例12(a)化合物(54mmol)LiOH·H2O(0.79mmol)和H2O(2ml)的溶液攪拌過夜。濃縮殘留物和使殘留物溶于水中。用3NHCl使生成的溶液調(diào)至pH5以提供目標(biāo)化合物。
實(shí)施例134-[4-[3-(2-吡啶基)氨基]丙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸的制備
a)4-[4-[3-(2-吡啶基)氨基]丙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯將制備C(b)化合物，制備D(c)化合物及DIEA在THF中的混合物于室溫下攪拌4小時(shí)。用NaHCO3水溶液稀釋該混合物并用EtOAc提取。干燥(Na2SO4)并濃縮有機(jī)相產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)4-[4-[3-(2-吡啶基)氨基]丙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸于室溫下攪拌實(shí)施例13(a)的化合物和NaOH水溶液在CH3OH中的溶液。18小時(shí)后，用HOAc中和該混合物，通過XAD-2柱脫鹽，并冷凍產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例141-羥基-4-[4-[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]-1-哌嗪基環(huán)己烷乙酸的制備按照實(shí)施例13的一般步驟，除了用1-羥基-4-(1-哌嗪基)環(huán)己烷乙酸-1,1-二甲基乙酯取代制備C(b)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例154-[4-[2-(2-吡啶基)氨基]乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸的制備a)4-[4-[2-(1-氧代-2-吡啶基)氨基]乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯加熱在丁醇中的制備E(b)化合物，2-氯吡啶-N-氧化物和NaHCO3。使該混合物冷卻，過濾，并濃縮濾液。使殘留物在水和EtOAc中分配，干燥(Na2SO4)有機(jī)相并濃縮。用層析(硅膠)純化殘留物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)4-[4-[2-(2-吡啶基)氨基]乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯加熱實(shí)施例15(a)化合物，甲酸鉀，10％Pd/C和CH3OH，冷卻，過濾和濃縮。層析純化(硅膠)殘留物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)4-[4-[2-(2-吡啶基)氨基]乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸攪拌在CH3OH中的實(shí)施例15(b)化合物和1N NaOH用稀鹽酸調(diào)節(jié)該混合物至pH5并濃縮產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例161-羥基-4-[4-[2-(2-吡啶基)氨基]乙基]-1-哌嗪基]環(huán)己烷乙酸的制備按照實(shí)施例15的步驟，除了用制備F化合物代替制備E(b)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例17N-[3-[1-[[[(2-吡啶基)氨基]丙基]羰基]-3-哌啶基]羰基]-β-丙氨酸的制備按照Beavers等(WO 95/25091，實(shí)施例1)的方法，除了用制備G化合物代替Na-Boc-D-lys(Cbz)-OH外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例185-[2-(羧基-乙基)氨基]羰基]-2-[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]-2,3-二氫-3-氧代-1H-異吲哚的制備按照Hartman等(EP 0540334 A1)制備1-12中制備2,3-二氫-N-(2-羧基-乙基)-2-[2-(哌啶基)乙基]-3-氧代-1H-異吲哚-5-甲酰胺的方法，除了用制備V(c)化合物取代N-Boc-4-哌啶-2-乙胺外，制備目標(biāo)化合物。
實(shí)施例19(S)-2-(丁基磺?；被?-3-[4-[4-(N-吡啶-2-基氨基)]丁氧基苯丙酸的制備按照Egbertson等(EP 0478363 A2)制備(S)-2-(丁基磺?；被?3-[4-(N-芐氧基羰基哌啶-4-基]-2,2-二甲基]丁氧基苯丙酸的方法，除了用制備H(b)化合物取代4-[4-(N-芐氧基羰基哌啶-4-基]-2-甲基]戊-2-醇外，制備目標(biāo)化合物。
實(shí)施例20N-[3(R)-[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]-2-氧代-1-哌啶基]乙?；鵠-3(R)-甲基-β-丙氨酸的制備按照Duggan等(J.Med.Chem.,1995,38,3332)的方法，除了用制備I(c)化合物代替(N-Boc-哌啶-4-基)丁酸外，制備目標(biāo)化合物。
實(shí)施例213-[[3-[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙?；鵠氨基-3(R,S)-甲基丙酸的制備a)4-[N-吡啶-2-基-N-(甲苯磺?；?氨基]丁肟酰氯按照WO 95/14682(實(shí)施例1(b)的方法，除了用制備J(e)化合物取代4-氰基苯并肟外，制備目標(biāo)化合物。
b)[3-[3-[N-吡啶-2-基-N-(甲苯磺酰基)氨基]丙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙酸叔-丁酯按照WO 95/14682(實(shí)施例1(d)的方法，除了用實(shí)施例21(a)化合物取代4-氰基苯并肟酰氯和用3-丁烯酸叔-丁酯取代3-丁烯酸甲酯外，制備目標(biāo)化合物。
c)[3-[3-[N-吡啶-2-基-N-(甲苯磺?；?氨基]丙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙酸于0℃將在二噁烷中的4M HCl(10ml)加入實(shí)施例21(b)化合物(5mmol)在CH2Cl2(40ml)的溶液中于室溫下攪拌直至反應(yīng)完全，濃縮提供目標(biāo)化合物。
d)3-[[3-[3-[N-吡啶-2-基-N-(甲苯磺酰基)]氨基]丙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙酰基]氨基-3(R,S)-甲基丙酸乙酯于室溫下將EDC(1.2mmol)加入實(shí)施例21(c)化合物(1mmol),3-(R,S)-氨基丁酸乙酯(1.2mmol),HOBt·H2O(1.2mmol)及DIEA(4mmol)在無水CH3CN(5ml)的溶液中。于室溫下攪拌直至反應(yīng)完全并濃縮。用層析(硅膠)純化殘留物提供目標(biāo)化合物。
e)3-[[3-[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙?；鵠氨基-3(R,S)-甲基丙酸將1.0N LiOH(2.5mmol)加入實(shí)施例21(d)化合物在THF(2.5ml)的溶液中。于室溫下攪拌直至反應(yīng)完全，然后用1.0N HCl中和。濃縮該溶液并用反相層析純化殘留物提供目標(biāo)化合物。
實(shí)施例22N-[3-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]羰基]氨基]苯甲?；鵠-β-丙氨酸的制備a)N-[3-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]羰基]氨基]苯甲酰基]-β-丙氨酸芐酯的制備于室溫下攪拌N-(3-氨基苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯(Alig等EP0372486)(1mmol)、N-(2-吡啶基)-β-丙氨酸(Chowdhary等，Indian J.Chem.,1990,29A,280-284)(1mmol)EDC(1.5mmol)和DIEA(3mmol)在DMF(25ml)的混合物。將該混合液注入5％NaHCO3中并用EtOAc提取。用水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(MgSO4)和濃縮。層析(硅膠)殘留物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)N-[3-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]羰基]氨基]苯甲?；鵠-β-丙氨酸將實(shí)施例22(a)化合物(1mmol)和1N NaOH(1.5ml)在CH3OH(20ml)的混合物攪拌并濃縮。使殘留物溶于水中，用CH2Cl2提取，用稀HCl調(diào)節(jié)該水相至pH5產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例23[[1-[N-[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]酪氨?；鵠-4-哌啶基]氧基]乙酸的制備a)[[1-[N-[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]酪氨?；鵠-4-哌啶基]氧基]乙酸叔-丁酯將[(1-酪氨酰基-4-哌啶基)氧基]乙酸叔-丁酯(Alig等，EP372486(1mmol)),N-(2-吡啶基)-β-丙氨酸(Chowdhary等Indian.J.Chem.,1990,29A,280-284)(1mmol)、EDC(1.5mmol)和DIEA(3mmol)在DMF(25ml)的混合物于室溫下攪拌。將該混合液注入5％NaHCO3中并用EtOAc提取。用水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(MgSO4)和濃縮。層析(硅膠)殘留物產(chǎn)生的目標(biāo)化合物。
b)[[1-[N-[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]酪氨?；鵠-4-哌啶基]氧基]乙酸酯攪拌和濃縮實(shí)施例23(a)(1mmol)和CF3CO2H在CH2Cl2中的混合物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例24(±)-3-[[[[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]氨基]琥珀?；鵠氨基]-4-戊炔酸的制備a)4-[[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]氨基]-4-氧代丁酸甲酯于0℃將3-羰基甲氧基丙酰氯(0.74ml,6.0mmol)加入制備K(c)的化合物(5.0mmol)和DIEA(4.4ml,25mmol)在干燥CH2Cl2(50ml)中的攪拌溶液中。于室溫下攪拌1.5小時(shí)后，用CH2Cl2(50ml)稀釋反應(yīng)混合物，隨后順序用水(25ml)和5％NaHCO3(25ml)洗滌。干燥(MgSO4)有機(jī)層，濃縮，從甲苯中再濃縮。層析(硅膠)產(chǎn)生的目標(biāo)化合物。
b)4-[[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]氨基]-4-氧代丁酸于室溫下將實(shí)施例24(a)化合物(530.6mg,2.0mmol)、1.0NLiOH(3.0ml,3.0mmol),THF(10ml)和水(7ml)的混合物攪拌過夜，然后濃縮。用水(5ml)溶解殘留物并用1.0N HCl中和。收集沉淀物并真空干燥產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)(±)-3-[[[[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]氨基]琥珀?；鵠氨基]-4-戊炔酸乙酯于室溫下將EDC(230mg,1.2mmol)加入實(shí)施例24(b)化合物(203.3mg,1.0mmol),(±)-3-氨基-4-戊炔酸乙酯(WO 93/07867)(169.4mg,1.2mmol)HOBt·H2O(162.2mg,1.2mmol)及DIEA(0.70ml,4mmol)在無水CH3CN(5ml)中的溶液中。于室溫下攪拌該反應(yīng)物過夜并濃縮。經(jīng)層析(硅膠)殘留物產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
d)(±)-3-[[[[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]氨基]琥珀酰基]氨基]-4-戊炔酸于室溫下將實(shí)施例24(c)化合物(187.2mg,0.5mmol),1.0NLiOH(0.75ml,0.75mmol),THF(2.5ml)及水(1.7ml)的混合物攪拌過夜，然后濃縮。用水(2ml)溶解殘留物并用TFA酸化。經(jīng)ODS層析，然后冷凍純化的物質(zhì)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例25(S)-4-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]羰基]甘氨酰]-3-甲氧基]羰基甲基]-2-氧代哌嗪-1-乙酸按照Sugihara等(EP 0529858，實(shí)施例59)的方法，除了用N-(2-吡啶基)-β-丙氨酸(Chowdhary等Indian.J Chem.,1990,29A,280-284)取代鹽酸4-脒基苯甲酸外，產(chǎn)生的目標(biāo)化合物。
實(shí)施例26(3S,5S)-3-羰基甲基-5-[[4-[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]苯基]氧甲基]-2-吡咯烷二酮的制備a)(3S,5S)-3-[(叔-丁氧基羰基)甲基]-5-[[4-[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]苯基]氧基甲基]-2-吡咯烷二酮根據(jù)Himmelsbach等(AU-A-86926/91，實(shí)施例3(51))的方法，除了用制備L的化合物取代4’-氰基-3’-氟代-4-(羥基)聯(lián)苯基外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)(3S,5S)-3-羧基甲基-5-[[4-[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]苯基]氧甲基]-2-吡咯烷二酮基]-2-吡咯烷二酮根據(jù)Himmelsbach等(AU-A-86926/91，實(shí)施例7(93))的方法，除了用實(shí)施例26(a)的化合物取代(3S,5S)-3-[(叔-丁氧基羰基)甲基]-5-[(4’脒基-3’-氟代-4-聯(lián)苯基基)氧基甲基]-2-吡咯烷二酮，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例271-[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]-3-[4-(2-羧基乙基)苯基]-4-甲氧基-3-吡咯烷-2-酮的制備根據(jù)Linz等(EP 0567968)的方法，除了用制備V(c)化合物取代4-氰基苯胺外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例284-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸的制備a)4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸甲酯根據(jù)Wayne等(WO 94/22834，實(shí)施例1)的方法，除了用制備Z(c)化合物(1mmol)代替1-(4-吡啶基)哌嗪外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸根據(jù)Wayne等(WO 94/22834，實(shí)施例2)的方法，除了用制備28(a)化合物代替4-[2-[4-(4-吡啶基)哌嗪-1-基]乙?；鵠苯氧基乙酸甲酯外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例S2,2’-[[4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯基]二(氧基)]二-乙酸的制備a)2,2’-[[4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙酰基]-1,2-亞苯基]二(氯基)]二-乙酸二甲酯根據(jù)Wayne等(WO 94/22834，實(shí)施例3)的方法，除了用制備Z(c)化合物代替1-(4-吡啶基)哌嗪外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)2,2’-[[4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙酰基]-1,2-亞苯基]二(氧基)]二-乙酸根據(jù)Wayne等(WO 94/22834，實(shí)施例4)的方法，除了實(shí)施例S(a)化合物取代2,2’-[4-[2-[4-(4-吡啶基)哌嗪-1-基)乙?；鵠亞苯基-1,2-二氧基]二乙酸二甲酯外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例294-[[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸的制備a)4-[[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸甲酯于室溫下攪拌制備M(c)化合物(1mmol),N-(2-吡啶基)-β-丙氨酸(Chowdhary等Indian.J.Chem.,1990,29A,280-284)(1mmol)EDC(1.5mmol)和DIEA(3mmol)在DMF(25ml)中的混合物。將該混合液注入5％NaHCO3中并用EtOAc提取。用水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(MgSO4)和濃縮。層析(硅膠)殘留物產(chǎn)生的目標(biāo)化合物。
b)4-[[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸攪拌和濃縮在CH3OH(20ml)中的實(shí)施例29(a)化合物(1mmol)和1N NaOH(1.5ml)。使殘留物溶于水中，用CH2Cl2提取，用稀HCl調(diào)整水相至pH5產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例304-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸的制備a)4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙酰基]-1,2-亞苯二氧基二乙酸二甲酯按照實(shí)施例29(a)的方法，除了用制備N(c)化合物代替制備M(c)
b)4-[[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸按照實(shí)施例29(b)的方法，除了用實(shí)施例30(a)化合物代替實(shí)施例30(b)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例311-[2-[(2-(吡啶基)氨基]乙基]-3-[4-[2-(羧基)乙基]苯基]-3-氧代-咪唑烷的制備a)2-[4-(2-羥基乙基氨基)苯基]丙酸乙酯按照Himmelsbach等(EP 0587134，實(shí)施例V)的方法，將乙醇醛二聚物(Aldrich)(1mmol)加入2-(4-氨基苯基)丙酸甲酯(1mmol)在CH3CN(pH6-7)(10ml)的水溶液中，隨后加入NaBH3CN(1.2mmol)，攪拌混合物1小時(shí)。濃縮該混合物成油狀，使殘留物溶于冰水和EtOAc的混合液中。用4N NaOH中和水層并用EtOAc洗滌。濃縮有機(jī)相成油狀。使該油狀物在EtOAc中的溶液層析(硅膠，梯度，5-30％CH3OH/CH2Cl2-0.1％HOAc)純化。合并和濃縮含該產(chǎn)物的部分產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)N-[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]-N’-羥乙基]-N’-[4-[2-(乙氧基羰基)乙基]苯基-脲按照Himmelsbach等(EP 0587134，和EP 0612741)的方法，將制備V(c)化合物(1mmol)和COCl2在THF(10ml)中的溶液于-20℃攪拌20分鐘。20分鐘后，將實(shí)施例31(a)化合物(1mmol)加入該溶液中并將生成的混合物攪拌18小時(shí)。濃縮生成的溶液，用5％檸檬酸接著又用水洗滌殘留物在EtOAc中的溶液。濃縮有機(jī)相并使生成的油狀物在EtOAc中的溶液經(jīng)層析(硅膠，梯度5-30％CH3OH/CH2Cl2-0.1％HOAc)純化。合并和濃縮含該產(chǎn)物的部分產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
c)N’-[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]-N3-[4-[2-(乙氧基羰基)乙基)苯基]-2-氧代-咪唑烷按照Himmelsbach等(EP 0587134，實(shí)施例Ⅲ和EP 0612741)的方法，將實(shí)施例30(b)化合物(1mmol)，甲磺酰氯(1.1mmol)和Et3N(1.1mmol)在CH2Cl2(10ml)中的溶液于0℃攪拌1小時(shí)。使混合物在H2O和CH2Cl2之間分配。合并有機(jī)相，干燥(Na2SO4)和濃縮。將該殘留物和NaI(1.1mmol)在丙酮(1ml)中的溶液加熱至回流3小時(shí)并濃縮成油狀。將雙(三甲基甲硅烷疊氮化鉀(1.1mmol)加入該殘留物在DMF(5ml)中的溶液中，冷卻至0℃。用30分鐘，使該溶液溫?zé)嶂潦覝?，然后濃縮成油狀。使殘留物在水和二氯甲烷間分配。合并有機(jī)相，干燥(Na2SO4)并濃縮。使該油狀物在EtOAc中的溶液經(jīng)層析(硅膠，梯度5-30％CH3OH/CH2Cl2-0.1％HOAc)純化。合并和濃縮含有所述產(chǎn)物的組分產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
d)N’-[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]-N3-[4-[2-(羧基)乙基]苯基]-2-氧代-咪唑烷按照Himmelsbach等(EP 0587134，實(shí)施例Ⅲ和EP 0612741)的方法，將實(shí)施例31(c)化合物(1mmol)和1N NaOH(1.2ml,1.2mmol)的溶液攪拌18小時(shí)。用濃HCl中和所述混合物并經(jīng)層析(硅膠，梯度，5-30％CH3OH/CH2Cl2-0.1％HOAc)純化。合并和濃縮含有所述產(chǎn)物的組分產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例32[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基]乙酸的制備a)[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基]乙酸乙酯將制備O(d)化合物(0.263g,1.0mmol)制備V化合物(0.32g,1.0mmol),EDC(0.191g,1.0mmol),HOBt(0.151g,1.0mmol)及Et3N(0.235ml,2.0mmol)在DMF(7ml)中的溶液攪拌8小時(shí)。濃縮所述溶液和層析(硅膠，梯度，10-50％CH3OH/CH2Cl2)提純殘留物提供目標(biāo)化合物(0.32g,68％)b)[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基]乙酸將實(shí)施例32(a)化合物(0.40g,1.0mmol)在1NaOH(1.5ml,1.5mmol)和EtOH(8ml)的水溶液攪拌8小時(shí)。濃縮該溶液并經(jīng)層析(硅膠，梯度，25-73％CH3OH/CH2Cl2)提純殘留物提供目標(biāo)化合物(0.32g,69％)。
實(shí)施例33[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1,2,3,4-四氫-1-氧代-異喹啉-2-基]乙酸的制備按照實(shí)施例32(a)的方法，除了用制備P(d)化合物代替制備O(d)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例34[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]羰基]氨基]四氫化萘-2-基]乙酸的制備a)[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]羰基]氨基]四氫化萘-2-基]乙酸叔-丁酯按照實(shí)施例32(a)的方法，除以用(6-氨基-四氫化萘-2-基)乙酸叔-丁酯(Fisher等EP 0635492，圖式12和實(shí)施例28,A-D部分)取代制備O(d)化合物和用N-(2-吡啶基)-β-丙氨酸(Chowdhary等，Indian J.Chem.,1990,29A,280-284)代替制備V化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]羰基]氨基]四氫化萘-2-基]乙酸將實(shí)施例34(a)化合物(0.20g,0.85mmol)和TFA(3ml)在CH2Cl2(3ml)中的溶液攪拌1小時(shí)。濃縮溶液成油狀并用Et2O處理。過濾和真空干燥提供目標(biāo)化合物(0.173g,74％)。
實(shí)施例35[6-[[[-2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]四氫化萘-2-基]乙酸的制備a)[6-[[[-2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]四氫化萘-2-基]乙酸按照實(shí)施例32(a)的方法，除了用實(shí)施例27(b)化合物代替實(shí)施例25(d)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
作為選擇，也可在CO氣體中將制備Q(a)(0.31g,1.0mmol)，制備V化合物(0.32g,1.0mmol)、Pd(OAc)2(0.023g,0.1mmol),Ph3P(0.263g,1.0mmol)，二異丙胺(0.23ml,2.1mmol)及NMP(8ml)在10％NH4CO3中的溶液攪拌8小時(shí)。濃縮溶液并用層析(硅膠，梯度，10-66％CH3OH/CH2Cl2)8∶1至1∶2純化殘留物產(chǎn)生目標(biāo)化合物(0.28g,50％)。
b)[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]四氫化萘-2-基]乙酸按照實(shí)施例32(b)的方法，除了用實(shí)施例35(a)化合物代替32(a)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例36[5-[[[[(6-氨基-2-吡啶基)甲基]羰基]氨基]苯并呋喃-2-基]丙酸的制備按照實(shí)施例32的方法，除了用來自制備R(e)的(5-氨基苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯代替制備O(d)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例37[5-[[[[2-[(吡啶-2-基)氨基乙基]羰基]氨基]-2,3-二氫苯并呋喃-2-基]丙酸的制備按照實(shí)施例32的方法，除了用來自制備R(c)的(5-氨基-2,3-二氫-苯并呋喃-2-基)丙酸乙酯代替制備O(d)化合物外，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例38[5-[[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]甲基]氨基]羰基]苯并呋喃-2-基]丙酸的制備按照實(shí)施例35的方法，除了用來自制備S(d)或(e)化合物代替制備Q(a)或(b)化合物，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例39[5-[[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基]-2,3-二氫苯并呋喃-2-基]丙酸的制備按照實(shí)施例35的方法，除了用來自制備T(a)或(b)化合物代替制備Q(a)或(b)化合物，產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
實(shí)施例40(±)-3-[[[5-[(吡啶-2-基)氨基]戊酰基]甘?；鵠氨基]-4-戊炔酸的制備a)(±)-3-[[[5-[(吡啶-2-基)氨基]丙?；鵠甘?；鵠氨基]-4-戊炔酸乙酯于室溫下將DIEA(5.43mmol)加入制備U(b)化合物(1.76mmol)，制備I(c)化合物(1.55mmol)，HOBt·H2O(2.33mmol)及EDC(2.33mmol)在無水CH3CN(15ml)的攪拌溶液中。攪拌反應(yīng)混合物，濃縮，用CH2Cl2(100ml)稀釋，隨后順序用5％NaHCO3和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)，濃縮并經(jīng)層析(硅膠，CH3OH/CH2Cl2)產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
b)(±)-3-[[[5-[(吡啶-2-基)氨基]丙酰基]甘?；鵠氨基]-4-戊炔酸于室溫下將l.0N LiOH(0.71mmol)滴加到制備EE(a)化合物(0.285mmol)在THF(5ml)，水(5ml)和CH3CN(1ml)的混合物中。攪拌混合物，濃縮成很小的體積，在用1.0N AcOH(0.70ml)中和之前先在冰浴中冷卻。溶液經(jīng)凍干后使殘留物經(jīng)層析(ODS,CH3CN/H2O-0.1％TFA)提純產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
以上描述全面公開了如何制作和利用本發(fā)明化合物。然而本發(fā)明并不限于上文描述的特定實(shí)施例，而是包括下文權(quán)利要求范圍內(nèi)的所有修改。本文所引用的雜志、專利和其它出版物的各種參考文獻(xiàn)包括對本領(lǐng)域的闡述并結(jié)合在此作為全面闡述的參考。
權(quán)利要求
1．根據(jù)式(Ⅰ)的化合物或藥學(xué)上可接受的鹽
A是一種纖維蛋白原拮抗劑模板；W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-V-形式的連接部分；Q1、Q2、Q3和Q4獨(dú)立為N或C-Ry，只要Q1、Q2、Q3、Q4不超過一個(gè)為N；R1為H或C1-6烷基，C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rg為H或C1-6烷基，Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg,-C(O)Rg或-C(O)RgRi為H、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基-U’-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基-U’-C1-6烷基或Ar-C0-6烷基-U’-C1-6烷基；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、-CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRRg2或可選為鹵素、-ORg、-SRg、-CN、-NRgR、-NO2、-CF3、R’S(O)3、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2取代的C1-6烷基；U和V不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)c、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、NRgCRg2、CRg2O、OCRg2、CRg=CRg、C≡C、Ar或Het；a為0、1、2或3；b為0、1或2；c為0、1或2；r為0、1或2；u為0或1。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Q1、Q2、Q3和Q4各為CH，和u為0。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是H。
4．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中W為-(CHRg)a-CONR1-或(CHRg)a-NR1CO-。
5．根據(jù)式(Ⅰ)化合物，其中A為選自
且該化合物在吡啶環(huán)的酸性部分和第一個(gè)N之間有13至14個(gè)共價(jià)鍵。
6．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為
其中A1-A2為NR1-CH,NC(O)R3-CH,N=C,CR1=C,CHR1-CH,O-CH或S-CH；R1為H，C1-6烷基或芐基；R2為(CH2)qCO2H；R4為H，C1-6烷基，Ar-C0-6烷基，Het-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；和q是1、2或3。
7．根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中A1-A2為NH-CH和R2為CH2CO2H。
8．根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中W為-(CHRg)a-CONRi-或(CHRg)a-NRiCO-。
9．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，該化合物為3-[3,4-二氫-8-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜]-4-丙酸；3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(2-吡啶基)-2-氨基乙基]氨基]羰基]-5-丙酸；4-[4-[3-(2-吡啶基)氨基]丙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸；1-羥基4-[4-[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]-1-哌嗪基]環(huán)己烷乙酸；4-[4-[2-(2-吡啶基)氨基]乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸；1-羥基4-[4-[2-(2-吡啶基)氨基]乙基]-1-哌啶基]環(huán)己烷乙酸；N-[3-1-[[[(2-吡啶基)氨基]丙基]羰基]-3-哌嗪基]羰基]-b-丙氨酸；5-[2-(羧基-乙基)氨基]羰基]-2-[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]-2,3-二氫-3-氧代-1H-異吲哚；(S)-2-(丁磺酰氨基)-3-[4-[4-(N-吡啶-2-基氨基)]]丁氧基苯基丙酸；N-[3(R)-[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]-2-氧代-1-哌啶基]乙酰基]-3(R)-甲基-b-丙氨酸；3-[[3-[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙?；鵠氨基-3(R,S)-甲基丙酸；N-[3-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]羰基]氨基]苯甲?；鵠-b-丙氨酸；[[1-[N-[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]酪氨酰基]-4-哌啶基]氧基]乙酸；(±)-3-[[[[3-[(2-吡啶基)氨基]丙基]氨基]琥珀?；鵠氨基]-4-戊炔酸(S)-4-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]羰基]甘氨酰基]-3-甲氧基羰基甲基]-2-氧代哌嗪-1-乙酸；(3S,5S)-3-羰基甲基-5-[[4-[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]苯基]氧基甲基]-2-吡咯烷二酮；1-[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]-3-[4-(2-羧基乙基)苯基]-4-甲氧基-3-吡咯烷-2-酮；4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸；2,2’-[[4-[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯基]二(氧基)二-乙酸的制備；4-[[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸；4-[[[[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]甲基氨基]乙酰基]-1,2-亞苯二氧基二乙酸的制備；1-[2-[(2-吡啶基)氨基]乙基]-3-[4-[2-(羧基)乙基)]苯基]-3-氧代-咪唑烷；[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基]乙酸；[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1,2,3,4-四氫-1-氧代-異喹啉-2-基]乙酸；[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]羰基]氨基]四氫化萘-2-基]乙酸；[6-[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]羰基]四氫化萘-2-基]乙酸；[5-[[[[(6-氨基-2-吡啶基)甲基]羰基]氨基]苯并呋喃-2-基]丙酸；[5-[[[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]羰基]氨基]-2,3-二氫-苯并呋喃-2-基]丙酸；[5-[[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基]苯并呋喃-2-基]丙酸；[5-[[[[2-[(吡啶-2-基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基]-2,3-二氫-苯并呋喃-2-基]-丙酸；或(±)-3-[[[5-[(吡啶-2-基)氨基]戊?；鵠甘氨酰基]氨基-4-戊炔酸。
10．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它是(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[(1-氧代-2-吡啶基)氨基]乙基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-7-[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(苯基乙基)-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[2-[2-(6-甲基-吡啶基]氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(吡啶基)氨基]乙基]甲基氨基]羰基-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[2-[2-(嘧啶基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[2-[(6-甲基-3-噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸；或(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[2-[3-(噠嗪基)氨基]乙基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜-2-乙酸。
11．藥用組合物，它包含根據(jù)權(quán)利要求1-10中任何一項(xiàng)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
12．一種治療涉及玻連蛋白受體拮抗作用的疾病狀態(tài)的方法，該方法包括給予根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。
13．根據(jù)權(quán)利要求12用于抑制血管生成或治療動脈粥樣硬化、再狹窄、炎癥、癌或骨質(zhì)巰松的方法。
14．根據(jù)權(quán)利要求1至10中的任何一項(xiàng)的化合物在藥物生產(chǎn)中的用途。
15．根據(jù)權(quán)利要求1至10中的任何一項(xiàng)的化合物在需要的哺乳動物中抑制玻連白蛋受體的藥物生產(chǎn)中的用途。
16．根據(jù)權(quán)利要求1至10中的任何一項(xiàng)的化合物在用于治療動脈粥樣硬化、再狹窄、炎癥、癌或骨質(zhì)巰松的藥劑生產(chǎn)中的用途。
17．制備如權(quán)利要求1所定義的式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括使式(ⅩⅥ)化合物與式(ⅩⅦ)
起反應(yīng)，并且隨后去除保護(hù)基團(tuán)，任選形成藥學(xué)上可接受的鹽，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Ry、R、u和A如式(Ⅰ)所定義，帶有任何被保護(hù)的活性官能團(tuán)；和L1和L2為可在如式(Ⅰ)所定義的W部分經(jīng)反應(yīng)形成共價(jià)鍵的基團(tuán)。
全文摘要
公開式(Ⅰ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽:其中:A是纖維蛋白原拮抗劑模板;W為－(CHR
文檔編號A61P7/02GK1209063SQ96180114
公開日1999年2月24日 申請日期1996年12月20日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月29日
發(fā)明者F·E·阿利, W·E·邦迪內(nèi)爾, R·M·克南, T·W·F·庫, W·H·米勒, J·薩馬仁 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司