專利名稱：利心康的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種心肌細(xì)胞生長刺激肽(CMGSP)，臨床應(yīng)用于心肌炎和心臟外科手術(shù)后的恢復(fù)治療。
現(xiàn)有技術(shù)中具有刺激心肌細(xì)胞DNA和蛋白的合成，促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖的刺激因子，主要是從自發(fā)性高血壓大鼠或?qū)嶒炐愿哐獕簞游锏男募≈刑崛?，生物活性較低。
本發(fā)明的目的在于提供一種從健康幼年哺乳類動物的心肌中提取出的具有較高生物活性的心肌細(xì)胞生長刺激肽(CMGSP)，供臨床上用于治療心肌疾病和心臟外科手術(shù)后的恢復(fù)治療。可口服和肌肉注射，或與其它藥物配伍靜脈。
本發(fā)明利心康藥物是一種穩(wěn)定的心肌細(xì)胞生長刺激肽(CMGSP)，具有如下特征(1)在PH2-9范圍內(nèi)穩(wěn)定;
(2)加熱95-100℃10分鐘，60-70℃30分鐘條件下生物活性不改變;
(3)在多種蛋白水解酶，37℃，2小時條件下生物活性喪失;
(4)在水溶液22-30℃條件下可形成聚合體，但生物活性改變不明顯;
(5)在加入3-8%甘露醇凍干密封條件下，室溫貯存1.5年，4℃貯存2年，-20℃貯存3年，生物活性不改變;
(6)在HPLC分析條件下，由4個組份組成，各組份相對峰面積為峰110.4%，峰26.4%，峰336.3%，峰47.3%，各峰保留時間分別為峰12.88分，峰23.93分，峰35.09分，峰47.41分。每個組份單獨實驗，均有生物活性;
(7)經(jīng)SDS-PAGE分析，顯示2條帶，其分子量分別為8500Da，10800Da，經(jīng)HPLC分析，CMGSP的數(shù)均分子量為9800Da，重均分子量為10500Da，2個組份均有生物活性。
經(jīng)紫外掃描光譜圖為，在195±2nm及255±2nm處有兩個特征性的吸收峰。
利心康是為一類具有刺激原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的DNA合成和蛋白質(zhì)合成，促進(jìn)心肌細(xì)胞的分裂增殖及保護(hù)心肌細(xì)胞膜的分子量為5000-12000Da的小分子多肽混合物。
其分成四個組份，單一組份或二種及多組份組合使用均有效。
附

圖1為本發(fā)明HPLC分析本發(fā)明藥物生物活性表現(xiàn)方法實例取SD胚胎鼠(孕12-16天)，無菌分離心臟，胰蛋白酶分離心肌細(xì)胞，用DMEM培養(yǎng)基洗滌3次后，用含10%小牛血清的DME/F12培養(yǎng)基配制2-5×105個細(xì)胞/ml，置96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔0.15ml，37℃，5%CO2條件下孵育24小時。用無血清DME/F12培養(yǎng)基換液后，實驗孔加入5-40μg/孔的CMGSP，對照孔僅加DME/F12培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時，每孔加入5μlMTT(1.5mg/ml，DME培養(yǎng)基配制)，繼續(xù)培養(yǎng)4-6小時，每孔加入二甲基亞砜100μl終止反應(yīng)置酶標(biāo)儀570nm條件下測OD值，以實驗孔/對照孔＞1.7倍為有活性。測定結(jié)果如下CMGSP對培養(yǎng)中心肌細(xì)胞線粒體脫氫酶活力的影響nOD倍數(shù)P值對照組80.108±0.01實驗組(μg)540.143±0.021.3>0.051040.233±0.032.2<0.012040.243±0.022.3<0.014040.195±0.041.8<0.05本發(fā)明藥物的藥理作用實現(xiàn)如下取SD大鼠，雌雄不限，每kg體重注射異丙腎上腺素2mg，24小時后，用CMGSP治療，每只大鼠給CMGSP4mg，每日一次，連續(xù)三天。用生理鹽水作對照，3天后殺鼠，取心臟做
TYPE:AREAPERCENTRUNNUMBER:1INDEX:1WAVELENGTH:254nmPEAK#AREA%RTAREABC10.0610.281285370220.1210.982575300231.0152.692150812024①10.3562.88219437000251.8443.1439084760261.0413.3522058080270.8743.671851837028②6.4313.93136292700891.5334.5132482450610③36.3375.097699944108110.1235.6926168406120.1826.1638514906130.2046.3643254506140.3296.756962580615④7.2667.411539811206162.3338.29494281806170.6678.75141468506181.3879.09293804006190.2410.1950831106201.35211.15286467806210.80411.22170574906225.53712.011173131506233.61712.13342658806240.34812.2773776506 280.63217.01134020106290.08917.1118888206300.06917.1414629606310.79917.37169218006320.31119.6665951007TOTAL100211906886
病理切片，觀察治療組與對照組的病變差異。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)對照組的病理改變主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞變性(水泡樣變?yōu)橹?，嚴(yán)重的壞死多見小A周圍，心肌橫紋變淺，心肌細(xì)胞之間有斷裂現(xiàn)象，淋巴細(xì)胞浸潤程度明顯。而CMGSP組心肌細(xì)胞變性壞死的程度均較對照組為輕，壞死細(xì)胞的數(shù)量也較少，淋巴細(xì)胞浸潤程度輕，心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰。
本發(fā)明藥物可單獨使用，亦可與其它促進(jìn)心肌代謝、修復(fù)心肌損傷，改善心肌血液循環(huán)的中西藥單方或復(fù)方合用。
權(quán)利要求
1.一種心肌炎治療藥，心肌細(xì)胞生長刺激肽(CMGSP)，是從健康幼年哺乳類動物心肌中制備提取，其特征是(1)在PH2-9范圍內(nèi)穩(wěn)定；(2)加熱95-100℃10分鐘，60-70℃30分鐘條件下生物活性不改變；(3)在多種蛋白水解酶，37℃2小時條件下生物活性喪失；(4)在水溶液22-30℃條件下可形成聚合體但生物活性改變不明顯；(5)在加入3-8%甘露醇凍干密封條件下，室溫貯存1.5年，4℃貯存2年，-20℃貯存3年，生物活性不改變；(6)在HPLC分析條件下，由4個組份組成，各組份相對峰面積為峰110.4%，峰26.4%，峰336.3%，峰47.3%，各峰保留時間分別為峰12.88分，峰23.93分，峰35.09分，峰47.41分。每個組分單獨實驗，均有生物活性；(7)經(jīng)SDS--PAGE分析，顯示2條帶，其分子量分別為8500Da，10800Da，經(jīng)HPLC分析，CMGSP的數(shù)均分子量為9800Da，重均分子量為10500Da，2個組分均有生物活性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取CMGSP，其特征是紫外掃描光譜圖為，在195±2nm及255±2nm處有2個特征性的吸收峰。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取的GMGSP，其特征是為一類是刺激原化培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的DNA合成和蛋白質(zhì)合成，促進(jìn)心肌細(xì)胞的分裂增殖及保護(hù)心肌細(xì)胞膜的分子量為5000-12000Da的小分子多肽混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取的GMGSP，其特征是可分成4個組份，單一組份或二種及多種組份組合使用均有效。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是一種治療心肌疾病的藥物—利心康，它是從健康幼年哺乳動物如乳豬、牛等心臟提取的心肌細(xì)胞生長刺激肽(CMGSP)，分子量為5000—12000Da，它實際上是一種多肽混合物，生物活性穩(wěn)定，能刺激原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞DNA及蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)心肌細(xì)胞分裂增殖及保護(hù)心肌細(xì)胞膜，臨床應(yīng)用時可采用口服和肌肉注射，也可與其它藥物配伍靜脈滴入，在治療心肌疾病方面顯示出很好的效果。
文檔編號A61K38/02GK1108540SQ94102799
公開日1995年9月20日 申請日期1994年3月15日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月15日
發(fā)明者孔祥平, 鄒清雁, 張宜俊, 鄭國池, 張曉坤 申請人:中國人民解放軍第458醫(yī)院